JP6979397B2 - ソルチリンに結合し、プログラニュリンの結合を阻害する抗体 - Google Patents

ソルチリンに結合し、プログラニュリンの結合を阻害する抗体 Download PDF

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Description

本発明は、不十分なレベルのプログラニュリン（ＰＧＲＮ）を修正するのに有用なモノクローナル抗ソルチリン抗体に関する。特に、これらの抗体は、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に使用され得る。さらに、モノクローナル抗体はまた、アルツハイマー病（ＡＤ）などの神経変性疾患を治療するのに有用であり得ることが予測される。
配列表の参照：
本出願は、米国特許法施行規則（３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．）第１．８２１条に従う１つまたは複数の配列表（以下参照）を含み、これは、コンピュータ可読媒体（ファイル名：０９９３＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１６年６月２２日に作成され、１４４ｋＢのサイズを有する）で開示され、このファイルは、全体が参照により本明細書に援用される。
ソルチリンは、プロニューロトロフィンのアポトーシス促進効果を仲介し、ニューロトロフィン受容体の輸送およびソーティングを仲介することが報告されている受容体である（Ｎｙｋｊａｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１２；３５（４）：２６１−７０；Ｇｌｅｒｕｐ ｅｔ ａｌ，Ｈａｎｄｂ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１４；２２０：１６５−８９、Ｃａｒｌｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ（Ｂｅｒｌ）．２０１４ Ｓｅｐ；９２（９）：９０５−１１）。ニューロテンシンを含むいくつかのソルチリンリガンドが同定されており、ニューロテンシンに対する高親和性結合部位が、Ｘ線結晶構造解析によって、ソルチリン分子中のβプロペラトンネルの内部にあることが突き止められた（Ｑｕｉｓｔｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９ Ｊａｎ；１６（１）：９６−８；Ｑｕｉｓｔｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２０１４，Ｓｅｐ；２３（９）：１２９１−３００）。さらに最近では、ソルチリンは、成長因子プログラニュリンの高親和性受容体として機能することが示された（ＰＧＲＮ、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ．２０１０ Ｎｏｖ １８；６８（４）：６５４−６７。
ＰＧＲＮ（（プロエピセリン、グラニュリン−エピセリン前駆体、ＰＣ細胞誘導成長因子、アクログラニン））は、抗炎症性および神経栄養性作用を有する分泌型グリコシル化タンパク質である（最近の報告については、Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．２０１３ Ｄｅｃ；２４（１２）：５９７−６０６を参照）。ＰＧＲＮは、グラニュリンへとタンパク質分解的に切断されるが、ＰＧＲＮおよびグラニュリンの生理学的役割ならびにそれらの受容体の特性に関して、まだ分かっていないことが多くある。ＰＧＲＮは、細胞周期調節および細胞運動性（Ｈｅ，Ｚ．＆ Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．５７：６００−６１２（２００３）；Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（５（５：７１０３−７１１０（２００６））、創傷修復、炎症（Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ７７７：８６７−８７８（２００２））、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などの成長因子の誘導（Ｔａｎｇｋｅａｎｇｓｉπｓｉｎ，Ｗ．＆ Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２５．１５８７−１５９２（２００４））、および腫瘍発生（Ｈｅ，Ｚ．＆ Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：６００−６１２（２００３）、Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（５（５：７１０３−７１１０（２００６）；Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．５０５−４０９−４１３（２００３）、Ｌｕ，Ｒ ＆ Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．ＳＡ ９８ １４２−１４７（２００１）；Ｌｉａｕ，Ｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：１３５３−１３６０（２０００））を含むいくつかの細胞機能に関与している。ＰＧＲＮは、ＴＮＦ受容体に結合することが報告されている（Ｔａｎｇ Ｗ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１１，３３２（６０２８）：４７８−８４）が、この観察は、他の者によっても試みられた（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１３，３３（２１）：９２０２−９２１３）。
ソルチリンへのＰＧＲＮの結合は、ニューロテンシン部位にマッピングされ、ニューロテンシンと同様に、ＰＧＲＮのＣ末端ドメインのみを介して仲介されることが報告されており（Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１１；６（６）：ｅ２１０２３；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０１３）、したがって、ニューロテンシンは、ＰＧＲＮおよび他のリガンドとのソルチリンの相互作用をブロックすることが示された。結合すると直ぐに、ソルチリンは、ＰＧＲＮのリソソームクリアランスを仲介し、それによって、細胞外ＰＧＲＮレベルを調節する（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．２０１０）。したがって、ソルチリンのノックダウンまたは過剰発現が、細胞培養物中の細胞外ＰＧＲＮレベルを調節することが示され（Ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０１０ Ｄｅｃ １０；８７（６）：８９０−７）、マウスにおいて、ソルチリン欠乏は、ＰＧＲＮレベルを増加させ、ＰＧＲＮ＋／−マウスにおける血漿および脳ＰＧＲＮレベルを回復させることが報告された（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．２０１０）。興味深いことに、ソルチリンに近い一塩基ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）が、血漿ＰＧＲＮの減少およびソルチリンｍＲＮＡレベルの増加に関連していた（Ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０１０ Ｄｅｃ １０；８７（６）：８９０−７）。これらの観察は、ソルチリンが、細胞外ＰＧＲＮの主要調節因子であることを示唆している。
ＰＧＲＮは、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）、行動および意味の変化によって特徴付けられる進行性認知症、ならびに前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）およびＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質−４３（ＴＤＰ−４３）またはタウ封入体を含有する神経封入体に関連付けられている（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ，２００６，Ｎａｔｕｒｅ．２００６ Ａｕｇ ２４；４４２（７１０５）：９１６−９；Ｃｒｕｔｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ４４２：９２０−９２４（２００６）；Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０１０ Ｄｅｃ １０；８７（６）：８９０−７、Ｍ ｅｔ ａｌ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２４：１８６−１９４（２００８））。散発性および家族性ＦＴＤの事例の大部分は、ＡＬＳと同様にＴＤＰ−４３病変を示し（約５０％）、ＦＴＤ−ＴＤＰ４３およびＡＬＳは、共通の病理および遺伝因子および症状のいくらかの重複のため、疾患スペクトラムを成すものと一部の人々に見なされている（Ｉｔｏ Ｄ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２０１１ Ｏｃｔ ２５；７７（１７）：１６３６−４３；Ｂｏｘｅｒ ＡＬ ｅｔ ａｌ，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｅｍｅｎｔ．２０１３ Ｍａｒ；９（２）：１７６−８８；Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１２ Ａｕｇｕｓｔ；８（８）：４２３−４３４）。ＦＴＤに使用可能な疾患修飾治療選択肢はない。ＴＤＰ−４３病変を有する前頭側頭認知症患者の一部は、ＰＧＲＮハプロ不全をもたらすグラニュリン遺伝子（ＧＲＮ）の機能喪失突然変異を有する。これまで、グラニュリン遺伝子の６９の異なる突然変異（全て、ＰＧＲＮレベルおよび／または機能の低下をもたらす）が、ＦＴＤと関連付けられ、血漿および脳中の増加する細胞外ＰＧＲＮが、疾患過程を抑え得るものと考えられる。
ＰＧＲＮ突然変異はまた、アルツハイマー病（ＡＤ）と関連付けられており（Ｓｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅ．２０１４ Ｊｕｎ １；５４２（２）：１４１−５；Ｂｒｏｕｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００８ Ａｕｇ ２６；７１（９）：６５６−６４）、これは、ＰＧＲＮ欠乏が、ＡＤ発症に重要な役割を果たし得ることを示唆している。さらに、マウスＡＤモデルにおけるＰＧＲＮの神経保護的効果が観察されており（Ｍｉｎａｍｉ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１４ Ｏｃｔ；２０（１０）：１１５７−６４）、これは、ＰＧＲＮの増強が、ＡＤおよびおそらく他の神経変性疾患に有益であり得るという考えに裏付けを与える。
本出願は、細胞モデルおよびマウスにおいてＰＧＲＮを調節し得る抗ヒトソルチリン抗体の生成および同定を記載している。それらの抗体は、ソルチリンにおける、既に報告されたプログラニュリン結合部位、いわゆるニューロテンシン部位と離れた領域に意外にも結合し、さらに、ソルチリン−ＰＧＲＮ相互作用を阻害し、それによって、細胞外ＰＧＲＮを増加させることが可能である。
本発明者らは、６つのソルチリン結合領域を規定し、最も有効な抗体が、ある領域（「領域Ｄ」）に結合することを意外にも確認した。ＰＧＲＮは、神経保護および抗炎症性効果を有するため、本発明者らの発見は、ソルチリンを標的にするこのような抗体が、ＦＴＤ／ＦＴＬＤを含む様々な神経変性疾患に有益な効果を有する可能性が高いことを示す。これらの患者のサブグループは、ハプロ不全をもたらす、ＰＧＲＮをコードする遺伝子の突然変異を有する。したがって、ソルチリン抗体は、ＰＧＲＮレベルがＴＤＰ４３の機能および病変（ＡＬＳおよびＡＤを含む）に影響を与え得る他のＴＤＰ−４３タンパク質症および疾患に罹患している患者に同様の治療効果を与える可能性が高い。
本発明の発明者らは、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合を阻害することができ、配列番号１７０で定義される「Ｄ領域」と示される新規なソルチリン領域に意外にも結合するモノクローナル抗体を生成した。本発明者らによって同定された、いくつかの抗体は、Ｄ領域抗体と類似した特性を有し、実験的根拠により、それらもＤ領域内に結合することが示され、それらの抗体は、本明細書においてＤ＋抗体と呼ばれる。したがって、一態様において、本発明は、このような抗体、このような抗体を含む組成物および／またはキット、ならびにその方法および使用に関する。
本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防または治療する方法であって、有効投与量の、ソルチリンのＤ領域に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む方法にも関する。これらの疾患としては、特に、ＦＴＤ、ＡＬＳおよびＴＤＰ４３タンパク質症（ＡＤなど）が挙げられる。
ソルチリン領域結合に基づいたヒト抗体の領域割り当ての作製、ＰＧＲＮ結合およびＰＧＲＮレベルおよび抗体間のクロスブロッキングに対する影響の概略を提供する。 ソルチリン結合抗体を選択し、配列がタンパク質の選択された領域内のテトラオドンソルチリン配列に対応していたシャッフル構築物への結合に基づいて領域Ａ〜Ｅに割り当てた（実施例１、図２）。 （ＨＴＲＦ分析によって測定した際に）ソルチリン−ＰＧＲＮ結合を阻害した２０の抗体を選択した（実施例１０、図５および図６を参照）。これらの抗体のうちの１５がＤ領域抗体であった一方、３つがＤ＋抗体であった（図６）。その後のクロスブロッキング分析は、１８のＤ領域およびＤ＋抗体（Ｄ＋抗体は、シャッフル構築物に対する、Ｄ領域抗体と異なる結合パターンを有する。それにもかかわらず、Ｄ＋抗体は、上に概説される結合領域Ａ〜Ｅに確実に割り当てられ得ないが、Ｄ領域抗体と類似した機能特性（細胞アッセイなど）を共有していた）が全て、互いにクロスブロックしたことを示し、これは、それらが同じソルチリン領域と相互作用したことを裏付ける（実施例９、図７）。他の領域クラスのソルチリン抗体を、ＨＴＲＦソルチリン−ＰＧＲＮ結合アッセイにおいて試験した場合、４１の抗体のうちの２つのみが、阻害効果を示した。これらの２つの抗体のうちの一方が、ＤおよびＤ＋とクロスブロックしたが、非典型的なシャッフル構築物結合パターンを有していた一方（それがｈＢ０１〜０５領域に結合したことを除いてＤと類似していた）、他方の抗体は、ＰＧＲＮ−ソルチリン結合を阻害した他方の抗体とクロスブロックせず、したがって、これは、それが別のソルチリン領域に結合するという結論を裏付ける。 これらの観察は、Ｄ領域によって画定されるソルチリン中の領域への抗体結合が、ソルチリン−ＰＧＲＮ結合を阻害する可能性を有することを示す。 １９のクロスブロッキング抗体（そのうちの１８がＤ領域およびＤ＋抗体である）が、細胞アッセイにおいて細胞外ＰＧＲＮを増加させた（実施例１３、図１０および図１１）。これらの抗体のうちの３つを、インビボで試験したところ、血漿ＰＧＲＮを増加させることが分かった（図１３、実施例１５）。 図１におけるボックスは、抗体の選択における工程を示す。Ａ〜Ｅは、それぞれのソルチリン結合抗体を、実施例１および配列番号１７１〜１７９に記載されるようにシャッフル構築物に基づいて割り当てた領域を指す。「その他」は、１つの領域に割り当てることができず、Ａ領域とＢ領域との間の境界で結合し得る抗体を指す。Ｔｅｔは、テトラオドン−ソルチリンにも結合する抗体を指す。 示されるヒト抗体に加えて、一連のマウス抗ヒトソルチリン抗体を生成し、同様に特性評価した。これらの抗体のうちの２つが、Ｄ領域に割り当てられ、ヒトＤ領域およびＤ＋抗体とクロスブロックし、ソルチリン−ＰＧＲＮ結合を阻害し、細胞外ＰＧＲＮを増加させることが示された（図４を参照）。 ソルチリンシャッフル構築物への結合に基づいた抗体の領域割り当てを示す。 パネルＡは、実施例１に記載されているように抗体の領域割り当てに使用されるシャッフル構築物の線形図を示す。アミノ酸残基をテトラオドンソルチリン配列（黒色で示される）（配列番号１７３）に由来する対応するアミノ酸に交換したヒトソルチリン配列（配列番号１６９）（灰色で示される部分）に基づいて、ソルチリンシャッフル構築物を生成した（実施例１〜３）。 パネルＢは、Ａにおいて線形に示されるシャッフル構築物の予測される構造を示す。暗色の残基は、シャッフル構築物における対応するテトラオドン配列に変更された残基を示す。 パネルＣは、それぞれＤ領域およびＥ領域クラスに割り当てられた抗体の結合パターンを示す。「＋」は、所与のシャッフル構築物への結合を示し、「−」は、結合がないことを示す。異なるシャッフル構築物への結合パターンに基づいて、抗体を領域に割り当てた。得られる抗体領域クラスは、Ａ〜Ｅによって示される。示されるＤおよびＥ領域抗体では、「＋」によって示されるように両方がヒト配列に結合し（全て灰色）、「−」によって示されるようにいずれもテトラオドン配列に結合しない（全て黒色）が、Ｅ領域抗体は、ｈＢ４５６７８シャッフル構築物に結合した一方、Ｄ領域抗体は、結合せず、パネルＡに示されるように結合の局在化をもたらした。Ｄ領域抗体については、以下のシャッフル領域への結合が観察された：ｈｓｏｒｔ、ｈＢ０６−１０、Ｂ１２３９０。抗体は、ｈＢ０１−０５、Ｂ４５６７８、ｔｅｔに結合しなかった。Ｄ＋抗体については、以下のシャッフル領域への結合が観察された：ｈｓｏｒｔ、Ｂ１２３９０。抗体は、ｈＢ０１−０５、ｈＢ０６−１０、Ｂ４５６７８、ｔｅｔに結合しなかった。Ｆ結合パターンは、ｈＢ０６−１０への結合がＤ＋抗体について観察されなかったことを除いて、Ｄ結合パターンに類似していた。 抗体は、２つを除いて、完全テトラオドンソルチリンタンパク質に結合しなかった。テトラオドン配列に結合することが可能な２つの抗体が、「ｔｅｔ」と示された。「その他」は、１つの領域に割り当てることができなかった抗体を指す。 ヒトＤ領域およびＤ＋抗体の結合親和性を示す。実施例８に記載されるようにＯｃｔｅｔ ３８４ＲＥＤ（ＥＣ５０、ｎｇ／ｍｌ）を用いたバイオレイヤー干渉法によるソルチリンシャッフル構築物に対する結合親和性。シェーディングなしは、０．１〜１０ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を示し、薄い灰色のシェーディングは、ＥＣ５０＞１０ｎｇ／ｍｌを示し、灰色のシェーディングは、結合なし（ＮＢ）を示す。領域割り当ては、図２に示される結合パターンに基づいて行った。シャッフル構築物は、図２に示され、配列は、配列番号１７１〜１７９に示される。ｍＡｂ＝モノクローナル抗体。 実施例８に記載されるようにＯｃｔｅｔ ３８４ＲＥＤ（ＥＣ５０、ｎｇ／ｍｌ）を用いたバイオレイヤー干渉法によって得られるソルチリンシャッフル構築物に対するマウス抗ヒト抗体の結合親和性を示す。シェーディングなしは、結合を示し、灰色のシェーディングは、結合なし（ＮＢ）を示す。結合パターンに基づいた領域割り当てが、図２に示される。 ソルチリンＰＧＲＮ結合に対するソルチリン抗体の効果を示す。Ｄ領域ソルチリンヒトモノクローナル（ｈｕｍＡｂ）抗体４５（黒丸）は、結合を妨げなかった対照ソルチリンＥ領域抗体（黒三角）およびＩｇＧ対照、ＩｇＧ１−ｂ１２（白三角）と対照的に、ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を防いだ。抗体の結合を、均一性時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）（実施例１０）を用いたソルチリンへのＰＧＲＮ結合の移動を測定することによって決定した。抗体の用量反応評価を、３倍希釈曲線において５０ｐＭ〜１μＭをカバーする１０の濃度で行った。半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を、ＸＬｆｉｔ ４（ＩＤＢＳ，ＵＫ）においてＳ字形濃度反応（可変の傾き）を用いた非線形回帰によって計算した。 図５に示される均一性時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）分析によって決定されるソルチリン−ＰＧＲＮ結合に対する抗体の効果の概要。合計で６２個の抗体を試験した−１５個のＤ領域抗体および３個のＤ＋抗体が、ソルチリン−ＰＧＲＮ結合を阻害することが分かり、ＩＣ５０値を決定した。２つのさらなる抗体（Ｅおよび他の領域）について、阻害効果が観察された。全ての残りの抗体は、試験において陰性であった。＊抗体は、用量反応曲線に適合するには弱すぎる。１μＭにおける６％の阻害。＊＊対照（ｃｔｒｌ）抗体は、用量反応曲線に適合するには弱すぎる。１μＭにおける３７％の阻害。 これらの観察は、それらのＤ領域またはＤ＋割り当てによって特徴付けられるソルチリン抗体が、ＰＧＲＮへのソルチリンの結合を直接阻害し、ソルチリン−ＰＧＲＮ結合を阻害することが可能であることを示す。 抗体間のクロスブロッキングを示す。ヒト抗体およびマウス抗体を全て、単一の実験において試験し、ここで、各抗体が、ヒト野生型（ＷＴ）ソルチリンに結合された（図７）。続いて、全ての他の抗体を、予め形成されたソルチリン：抗体複合体への結合について試験した（実施例９）。（ＨＴＲＦ ＰＧＲＮ−ソルチリンアッセイにおけるそれらの効果に基づいて、選択された１５個のＤ領域および３個のＤ＋ヒト抗体（図５および図６）および２個のマウスＤ領域抗体は全て、ヒトＷＴソルチリンへの互いの結合を阻害した。 抗体は、１つのクロスブロッキングＡ領域抗体、１つの不明な領域割り当てを有する抗体（「その他」）およびＤ＋抗体５４８についての部分的なブロックを除いて、他の領域クラスに指定された抗体（表中でそれぞれＡｂＡ１−ｘ、ＡｂＥ１−ｘおよびＡｂｔｅｔと番号付けられた抗体を認識するＡ領域、Ｅ領域およびテトラオドンについて示されるように）とクロスブロックしなかった。これらのデータは、ＨＴＲＦアッセイにおいてソルチリン−ＰＧＲＮ結合を阻害することが可能なＤ領域およびＤ＋抗体が全て、ソルチリンにおいて同じ領域と相互作用することを裏付ける。 同じかまたは異なる領域（図２に示されるシャッフル構築物への結合に基づいた領域）からのソルチリン抗体間のクロスブロッキングを、抗体−ソルチリン結合の阻害を分析することによって決定した。ソルチリン−ＥＣＤ−Ｈｉｓへの抗体の結合を、Ｏｃｔｅｔ ３８４ＲＥＤ（実施例９）を用いたバイオレイヤー干渉法によって測定した。左列は、一次（固定化）抗体を示し、上行は、二次抗体（固定化抗体に対して試験される抗体）を示す。ソルチリン−ＥＣＤ−Ｈｉｓへの一次および二次抗体の両方の結合は、０．１より高い反応値をもたらし、両方の抗体が、タンパク質の異なる領域に結合していたことを示し得る。０．１未満の反応値は、二次抗体の結合がないことおよび固定化（一次）抗体による有効なクロスブロッキングを示し、これは、両方の抗体が、ソルチリンの同じ領域に結合することを示唆する。 ソルチリンへの選択的小分子リガンドＡＦ３８４６９の結合に対するＤ領域およびＤ＋ソルチリン抗体の効果を示す。ＡＦ３８４６９の結合部位は、ニューロテンシンの結合部位に類似していることが示され、Ｘ線結晶構造解析によって特性評価された（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．２０１４ Ｊａｎ １；２４（１）：１７７−８０）。ＰＧＲＮは、同じ部位に結合することが報告されており（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０１３）、Ｄ領域、およびＤ＋にそれぞれ結合する抗体４５および６８は、ソルチリンへのＡＦ３８４６９の結合を阻害しなかった。このデータは、これらの抗体が、ＡＦ３８４６９の結合部位と異なる、ソルチリンの結合部位を有することを示唆する。したがって、抗体４５および６８は、ソルチリンにおけるこれまでに推定されたＰＧＲＮ結合部位と異なる結合部位を介してＰＧＲＮ−ソルチリン結合を阻害する。 ＰＧＲＮの細胞結合およびエンドサイトーシスに対する抗体４５および６８の効果（実施例１２）。抗体４５および６８は、ソルチリン過剰発現細胞によるＰＧＲＮの結合および／またはエンドサイトーシスを阻害した。ニューロテンシン（ＮＴ、１０ｕＭ）の添加が、予想通り減少された蛍光に反映されるようにＰＧＲＮの結合またはエンドサイトーシスを同様に減少させた一方、アイソタイプ対照抗体Ｂ１２は、ＰＧＲＮ蛍光レベルに影響を与えなかった。 試験される抗体（１００ｎＭ）を、４時間にわたる組み換えＰＧＲＮの添加の３０分前にＳ１８細胞に加えた。次に、細胞を固定し、ＰＧＲＮについて染色し、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓによって分析した。ＰＧＲＮ蛍光を、細胞当たりの平均蛍光として測定した。データは、平均±ＳＤとして示される。データを、一元配置Ａｎｏｖａ、続いてダネットの分析によって分析し、全ての群をＰＧＲＮと比較した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。 ソルチリン過剰発現ＨＥＫ細胞（Ｓ１８）の培養物からの培地におけるＥＬＩＳＡによって推定される細胞外ＰＧＲＮレベル。ソルチリンＤ領域（４５、８１１）およびＤ＋（６８）抗体は、ＰＧＲＮレベルを増加させ、ソルチリンリガンドニューロテンシンの同様の効果が観察された一方、対照抗体Ｂ１２は効果を有さなかった。これらの観察は、Ｄ領域およびＤ＋ソルチリン抗体が、ＰＧＲＮのソルチリンに仲介されるクリアランスを阻害し、それによって、細胞外ＰＧＲＮを増加させることが可能であったことを示す。全ての抗体を１００ｎＭで試験した。ニューロテンシンを１０ｕＭで試験した。ＰＧＲＮレベルを対照に対して正規化した。データは、平均±ＳＤとして示される。データを、一元配置Ａｎｏｖａ、続いてダネットの分析によって分析し、全ての群を対照（ＣＴＲＬ）と比較した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１（実施例１３）。 実施例１３に記載されるようにＥＬＩＳＡによって測定されるヒトソルチリン過剰発現ＨＥＫ細胞における細胞外ＰＧＲＮに対する抗体の効果を示す。全ての選択されたＤ領域抗体および３個の選択されたＤ＋抗体が、細胞外ＰＧＲＮを増加させた。ＰＧＲＮレベルを上記と同じように分析した。ＰＧＲＮレベルを非処理の対照に対して正規化し、％で示す。２つの抗体が、マウスにおいてヒトソルチリン（１Ｆ２Ｆ４および５Ｅ１Ｆ６）に対して誘導され、残りがヒト抗体である。Ａｂ＝モノクローナル抗体。 （上側および下側パネル）は、神経分化ｉＰＳＣ細胞における細胞外ＰＧＲＮに対するソルチリン抗体の効果を示す（実施例１４）。ソルチリンＤ領域抗体４５およびＤ＋抗体６８は、ＰＧＲＮレベルを増加させた一方、対照抗体Ｂ１２および抗ＨＥＬは効果を有さなかった。 神経分化ｉＰＳＣ細胞を、９６ウェルプレートへと平板培養した。１週間後、抗体を細胞に加えた。細胞からの培地を、４８時間または９６時間の時点で収集し、ヒトＰＧＲＮ ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって分析し、試料を製造業者の指示にしたがって分析した。ソルチリンヒト抗体４５および６８は、両方の時点で培地におけるＰＧＲＮレベルを増加させた。対照アイソタイプ抗体Ｂ１２および抗Ｈｅｌ（陰性対照）は、細胞外ＰＧＲＮを変化させなかった。データは、平均±ＳＤとして示される。データを、一元配置Ａｎｏｖａ、続いてダネットの分析によって分析した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１（実施例１４）。 （パネルＡ〜Ｃ）は、ソルチリンヒト抗体で処理されたヒトソルチリン発現ノックイン（ＫＩ）マウスにおける血漿ＰＧＲＮレベルを示す（実施例１５）。ソルチリン抗体４５が、血漿ＰＧＲＮレベルを増加させた一方、対照抗体は効果を有さなかった。 経時的試験：ＰＧＲＮの増加した血漿中レベルが、抗体４５（Ｄ領域）の注入後に観察された。マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下に（ｓｃ）４５（ｎ＝５）または対照（ｎ＝３）抗体を注入した。各群を、異なる時点で殺処分した。対照抗体（抗Ｈｅｌ）で処理されたマウスでは、血漿ＰＧＲＮの変化がなかった一方、４５で処理されたマウスでは、ＰＧＲＮレベルの漸増があった。効果は、２４〜４８時間の間にピークになるように見え、４〜７日目までに徐々に減少した。 Ｂ 亜慢性試験：マウスを、１０ｍｇ／ｋｇの４５および対照抗体（抗Ｈｅｌ）で週に２回処理した。試料を、週に１回、頬の血液から採取した。血漿ＰＧＲＮは、１週目の時点で高く、対照抗体（ｎ＝２０）で処理された動物と比較して、試験全体を通してほぼ同じレベルのままであった。 Ｃ 用量反応試験：異なる用量（４つの用量：０．１、０．４、２および１０ｍｇ／ｋｇ）のソルチリン（４５）および対照抗体（抗Ｈｅｌ）を注入し、マウスを２日目に殺処分した。血漿ＰＧＲＮは、４５（１０および２ｍｇ／ｋｇ）で処理されたマウスにおいて高かった。より低い用量（０．４および０．１ｍｇ／ｋｇ）は、血漿ＰＧＲＮに対する効果がなかった。データは、平均±ＳＤとして示される。データを、二元配置Ａｎｏｖａ、続いてボンフェローニ分析によって分析した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１（実施例１５）。 予測されるソルチリン構造に与えられる、ソルチリンシャッフル構築物に基づいたソルチリン領域の図を提供する。この領域は、ヒト配列からテトラオドン配列への選択されたアミノ酸残基の変化が、その領域クラスの抗体に対する結合を阻害したソルチリンタンパク質の部分である。矢印は、ニューロテンシンおよびＰＧＲＮの報告される高親和性結合部位を示す（Ｑｕｉｓｔｇａａｒｄ Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９ Ｊａｎ；１６（１）：９６−８，Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０１３）。 図１５ａ（パネル１〜６）および１５ｂ（パネル１〜３）は、抗体４５、６８および８１１の立体配座エピトープをカバーする代表的なペプチドを示す。示されるペプチドの全ては、ペプチド１１５〜１２５を除いて、０．５Ｄより大きい交換からの保護を示す。ペプチド１１５〜１２５は、抗体４５、６８または８１１の存在によって影響されず、それによって、立体配座結合エピトープの一部でないペプチドの例である（実施例１６）。 図１６ａ（パネル１〜６）および１６ｂ（パネル１〜３）は、抗体３０の立体配座エピトープをカバーする代表的なペプチドを示す。示されるペプチドの全ては、ペプチド５６３〜５７２、ペプチド６４６〜６５６およびペプチド７０４〜７１４を除いて、０．５Ｄより大きい交換からの保護を示す。これらの３つのペプチドは、抗体３０の存在によって影響されず、それによって、立体配座結合の一部でないペプチドの例である（実施例１６）。 微小透析の手順についての図を示す。 経時変化：自由行動ｈＳＯＲＴ１マウスの海馬におけるＰＲＧＮのレベルに対する、微小透析実験の２４時間前の抗体４５またはＰＢＳの全身投与（５０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋｇ、皮下（ｓ．ｃ．））の経時的な（２４時間）効果を示す（実施例１７）。 プールされた２４時間透析の結果：プッシュプル微小透析によって評価した際の、それぞれ３．３±０．３ｎｇ／ｍｌおよび１．１±０．１ｎｇ／ｍｌのｍａｂ＃４５−およびＰＢＳで処理されたマウスにおける、自由行動ｈＳＯＲＴ１マウスの海馬における基底ＰＲＧＮを示す（実施例１７）。 動物をｍａｂ＃４５（ｎ＝１０）またはＰＢＳ（ｎ＝８）で処理した１日後に、２４時間の間に２時間置きに測定された自由行動ｈＳＯＲＴ１マウスの海馬におけるＰＲＧＮレベル（平均±ＳＥＭ）を示す表を示す（実施例１７）。
本明細書において使用される際、「ソルチリン」という用語は、ソルチリンタンパク質（例えばＱ９９５２３、１および２としてＵｎｉＰｒｏｔにおいて同定される）と同義である。ソルチリンのアミノ酸の番号付けは、以下に示されるように配列番号１６９に対して示され、Ｍｅｔは、アミノ酸１である：
Figure 0006979397
本明細書において使用される際、「Ｄ領域」という用語は、以下に示される配列番号１７０：
Figure 0006979397
 におけるアミノ酸からなるソルチリンの領域（配列番号１６９の残基５２３〜６１０に対応する）を指すことが意図される。
Ｄ領域抗体については、以下のシャッフル領域への結合が観察された：ｈｓｏｒｔ、ｈＢ０６−１０、Ｂ１２３９０。抗体は、ｈＢ０１−０５、Ｂ４５６７８、ｔｅｔに結合しなかった。Ｄ＋抗体については、以下のシャッフル領域への結合が観察された：ｈｓｏｒｔ、Ｂ１２３９０。抗体は、ｈＢ０１−０５、ｈＢ０６−１０、Ｂ４５６７８、ｔｅｔに結合しなかった。「Ｄ＋」と呼ばれる抗体については、ｈＢ０６−１０への結合がＤ＋抗体では観察されなかったことを除いて、「Ｄ」領域抗体と同様の結合パターンが観察された。シャッフル構築物への異なる結合パターンにもかかわらず、Ｄ＋抗体は、Ｄ領域抗体と機能特性（細胞アッセイなど）を共有していた。
特定のＤおよびＤ＋結合抗体は、配列番号１８５、１８６または１８７に定義される特定の領域に結合する。したがって、本発明は、特定の実施形態において、配列番号１７０のＤ領域配列に、およびその配列番号１８５、１８６または１８７領域内に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。結合することによって、これらの抗体または抗原結合フラグメントは、ＰＧＲＮレベルに影響を与え、したがって、ＦＴＤ、ＡＬＳおよびＡＤなどの、ＰＧＲＮに関連する疾患を治療するのに使用され得る。
本発明のＤおよびＤ＋抗体の結合をさらに分析することによって、隣接する領域（Ａ領域）への部分的な結合が、抗体のいくつかについて同定された。この領域は、配列番号１８０および以下：
Figure 0006979397
 に示されるように、配列番号１６９のアミノ酸７８〜２５４に対応する。この領域には、「Ａ領域」という用語が与えられた。
したがって、特定の実施形態において、本発明は、上記および配列番号１７０、１８５、１８６または１８７に定義されるＤ領域に結合し、配列番号１８０において同定されるＡ領域に対する親和性をさらに有する抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。Ａ領域内では、特定の抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１８１、１８２、１８３または１８４において同定されるＡ領域アミノ酸に対する親和性を有する。
ＰＧＲＮ（プロエピセリン、グラニュリン−エピセリン前駆体、ＰＣ細胞誘導成長因子、アクログラニン）は、前駆体ＰＧＲＮからタンパク質分解的に切断され得る、６〜２５ｋＤａの範囲のより小さいグラニュリンモチーフの７．５の反復を有する６８．５ｋＤａ分泌型糖タンパク質をコードする（Ｈｅ，Ｚ．＆ Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：６００−６Ｘ２（２００３））。非神経細胞において、ＰＧＲＮは、細胞周期調節および細胞運動性（Ｈｅ，Ｚ．＆ Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．５７：６００−６１２（２００３）；Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｈ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（５（５：７１０３−７１１０（２００６））、創傷修復、炎症（Ｚｈｕ，Ｊ．，ｅｔ ａｈ，Ｃｅｌｌ ７７７：８６７−８７８（２００２））、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などの成長因子の誘導（Ｔａｎｇｋｅａｎｇｓｉπｓｉｎ，Ｗ．＆ Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２５．１５８７−１５９２（２００４））、および腫瘍発生（Ｈｅ，Ｚ．＆ Ｂａｔｅｍａｎ，Ａ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｍｅｄ．８１：６００−６１２（２００３）、Ｍｏｎａｍｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（５（５：７１０３−７１１０（２００６）；Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．５０５−４０９−４１３（２００３）、Ｌｕ，Ｒ ＆ Ｓｅｒｒｅｒｏ，Ｇ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓａ Ｕ．ＳＡ ９８ １４２−１４７（２００１）；Ｌｉａｕ，Ｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：１３５３−１３６０（２０００））などの様々な事象に関連付けられている。
ＰＧＲＮ突然変異は、ハプロ不全をもたらし（Ｂａｋｅｒ，Ｍ．，ｅｔ ａｈ，Ｎａｔｕｒｅ ４４２：９１６−９１９（２００６）；Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．，ｅｔ ａｈ，Ｎａｔｕｒｅ ４４２：９２０−９２４（２００６））、家族性ＦＴＤの事例のほぼ５０％に存在することが知られており、ＰＧＲＮ突然変異は、ＦＴＤの主な遺伝的要因とされている（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆ Ｖａｎ Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６−１９４（２００８）；Ｌｅ Ｂｅｒ，Ｉ．，ｅｔ ａｈ，Ｂｒａｉｎ １２９：３０５１−３０６５（２００６））。ＰＧＲＮ突然変異の機能喪失ヘテロ接合特性は、健常個体において、ＰＧＲＮ発現が、ＦＴＤの発症から健常個体を保護するのに、用量依存的な重要な役割を果たすことを示唆する。
本発明の文脈における「抗体」（Ａｂ）という用語は、分子（「抗原」）のエピトープに結合する能力を有する、免疫グロブリン分子、または本発明のある実施形態によれば、免疫グロブリン分子のフラグメントを指す。天然抗体は、典型的に、通常、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および少なくとも２つの軽（Ｌ）鎖から構成される四量体を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）および、３つの領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）から構成される重鎖定常領域から構成される。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２サブタイプ）、ＩｇＭおよびＩｇＥを含む任意のアイソタイプのものであり得る。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記される）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。軽鎖は、κ鎖およびλ鎖を含む。重鎖および軽鎖可変領域が、典型的に、抗原認識に関与する一方、重鎖および軽鎖定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または宿主因子への免疫グロブリンの結合を仲介し得る。ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存される配列の領域が散在する「相補性決定領域」と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域から構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含有する。特に関連があるのは、自然界に存在し得るものと異なる物理的環境中で存在するように「単離され」ているか、またはアミノ酸配列中の天然抗体と異なるように修飾された抗体およびそれらの抗原結合フラグメントである。
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的結合が可能な抗原決定基を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の表面基（ｓｕｒｆａｃｅ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）からなり、通常、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。立体配座エピトープおよび線状エピトープは、後者ではなく、前者への結合が、変性溶媒の存在下で常に失われる点で区別される。エピトープは、特異的抗原結合ペプチドによって有効に遮断されるアミノ酸残基（言い換えると、アミノ酸残基は、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にある）などの、結合に直接関与するアミノ酸残基および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。
本明細書において使用される際、「抗体の抗原結合フラグメント」という用語は、エピトープに結合することが可能な抗体のフラグメント、部分、領域（ｒｅｇｉｏｎ）または領域（ｄｏｍａｉｎ）（それがどのように産生されるかにかかわらず（例えば、切断により、組み換えにより、合成的になど））を意味し、したがって、「抗原結合」という用語は、例えば、「抗体の抗原結合フラグメント」が「抗体のエピトープ結合フラグメント」と同じであることが意図されるように、「エピトープ結合」と同じことを意味することが意図される。抗原結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の１、２、３、４、５または６つ全てを含有してもよく、このようなエピトープに結合することが可能であるが、このような抗体のものと異なるこのようなエピトープに対して特異性、親和性または選択性を示し得る。しかしながら、好ましくは、抗原結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の６つ全てを含有するであろう。抗体の抗原結合フラグメントは、単一のポリペプチド鎖（例えば、ｓｃＦｖ）の一部であるか、もしくはそれを含んでもよく、またはアミノ末端およびカルボキシル末端（例えば、二重特異性抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメントなど）をそれぞれ有する２つ以上のポリペプチド鎖の一部であるか、もしくはそれを含んでもよい。抗原結合能力を示す抗体のフラグメントは、例えば、無傷の抗体のプロテアーゼ切断によって得られる。より好ましくは、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬおよびＶＨが、別個の遺伝子によって天然にコードされるが、またはこのような遺伝子配列をコードするポリヌクレオチド（例えば、それらのコードｃＤＮＡ）が、ＶＬおよびＶＨ領域が結合して一価抗原結合分子を形成する単一のタンパク質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：５８７９−５８８３を参照）としてそれらが作製されるのを可能にするフレキシブルリンカーによって、組み換え方法を用いて結合され得る。あるいは、単一のポリペプチド鎖のＶＬおよびＶＨ領域が一緒に結合するのを可能にするには短すぎるフレキシブルリンカー（例えば、約９個未満の残基）を用いることによって、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、または同様の分子（２つのこのようなポリペプチド鎖が一緒に結合して、二価抗原結合分子を形成する）を形成することができる（二重特異性抗体の説明については、例えばＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０（１４），６４４４−８（１９９３）を参照）。本発明の範囲内に包含される抗原結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂ’またはＦａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１領域からなる一価フラグメント、または国際公開第２００７０５９７８２号パンフレットに記載されている一価抗体；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１領域から本質的になるＦｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＬおよびＶＨ領域から本質的になるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨ領域から本質的になり、ドメイン抗体（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ；２ｉ（ｌｌ）：４８４−９０）とも呼ばれるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４−５４６（１９８９））；（ｖｉ）ラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）またはナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ；５＿（ｌ）：ｌ ｌｌ−２４）および（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬおよびＶＨが、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域が組み合わされて、一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単一鎖抗体または単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている、例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３−４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９−５８８３（１９８８）を参照）としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって、組み換え方法を用いて結合され得る。本発明の文脈におけるこれらのおよび他の有用な抗体フラグメントは、本明細書においてさらに説明される。抗体という用語は、特に規定されない限り、キメラ抗体およびヒト化抗体などの抗体様ポリペプチド、ならびに酵素的切断、ペプチド合成、および組み換え技術などの任意の公知の技術によって提供される、抗原（抗原結合フラグメント）に結合する能力を保持する抗体フラグメントも含むことも理解されるべきである。生成される抗体は、任意のアイソタイプを有し得る。本明細書において使用される際、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリンクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を指す。このような抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ；所望のエピトープに結合することが可能な好適なフラグメントは、無傷の抗体と同じように有用性について容易にスクリーニングされ得る。
「二重特異性抗体」という用語は、それぞれ独立した標的を標的にする２つの独立した抗原結合フラグメントを含有する抗体を指す。これらの標的は、異なるタンパク質上に存在するエピトープ、または同じ標的上に存在する異なるエピトープであり得る。二重特異性抗体分子は、親単一特異性二価抗体分子のＨＣの定常領域における補償的アミノ酸改変を用いて作製され得る。得られるヘテロ二量体抗体は、２つの異なる親単一特異性抗体から与えられる１つのＦａｂを含有する。Ｆｃ領域におけるアミノ酸改変は、時間を経ても安定した二重特異性を有するヘテロ二量体抗体の向上した安定性をもたらす（Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９，６１７−６２１（１９９６）、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２８５，１９６３７−１（２０１０）、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ３：６ ５４６−５５７（２０１１）、Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．，ＪＭＢ ４２０，２０４−２１９（２０１２）、Ｍｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２５：１０ ５７１−５８０（２０１２）、Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０：１１３，５１４５−５１５０（２０１３）、Ｓｐｒｅｔｅｒ Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ５：５ ６４６−６５４（２０１３））。二重特異性抗体は、ＳｃＦｖ融合を用いて生成される分子も含み得る。次に、２つの単一特異性ｓｃｆｖは、独立して、単一の二重特異性分子を生成するために安定したヘテロ二量体を形成することが可能なＦｃ領域に結合される（Ｍａｂｒｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＥＤＳ ２３：３ １１５−１２７（２０１０）。二重特異性分子は、二重の結合能を有する。
「抗ソルチリン抗体」または「ソルチリン抗体」（記載される文脈に応じて、本明細書において同義的に使用される）は、ソルチリン、特に、ソルチリンＤ領域、配列番号１７０に特異的に結合する抗体その抗原結合フラグメントである。ソルチリンＤ領域に結合する抗ソルチリン抗体は、通常、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭまたは５ｎＭ〜１ｎＭで親和性（ＩＣ５０）を有するＤ領域（例えば配列番号１８５、１８６または１８７）内の３、４、５、６または７連続アミノ酸の立体配座エピトープまたは線状エピトープに結合するであろう。ある実施形態によれば、抗ソルチリン抗体は、Ａ領域（配列番号１８０、１８１、１８２、１８３または１８４）にも結合し得るが、それらの主な生物学的機能は、Ｄ領域への結合によって達成されるものと考えられることが強調される。
同定される結合部位は、例えばソルチリンへの選択的小分子リガンドＡＦ３８４６９の結合を有して示されるようにかなり独特である。ＡＦ３８４６９の結合部位は、ニューロテンシンの結合部位に類似していることが示され、Ｘ線結晶構造解析によって特性評価された（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．２０１４ Ｊａｎ １；２４（１）：１７７−８０）。ＰＧＲＮは、同じ部位に結合することが報告されている（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０１３）。Ｄ領域、およびＤ＋にそれぞれ結合する抗体４５および６８は、ソルチリンへのＡＦ３８４６９の結合を阻害しなかった。このデータは、これらの抗体が、ＡＦ３８４６９およびニューロテンシンの結合部位と異なる、ソルチリンの結合部位を有することを示唆する。したがって、特定の実施形態において、本発明は、ソルチリンに特異的に結合し、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合を阻害することが可能であるが、結合が、ソルチリンへのニューロテンシンまたはＡＦ３８４６９の結合を阻害しないかまたは実質的に阻害しない、抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。これは、例えば、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を用いて、ソルチリンへの結合の移動を用いて示され得る（実施例１１）。この発見を説明する１つの方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントが、ソルチリンの表面領域に結合している一方、ニューロテンシンのような小分子が、結合ポケットの内部に結合していることであり得る。
本明細書において使用される際の「ヒト抗体」という用語（「ｈｕｍＡｂ」または「ＨｕＭａｂ」と略記され得る）は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異によって、または遺伝子再構成中に、または体細胞突然変異によって誘発される突然変異）。
本明細書において使用される際の「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。従来のモノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、２つ以上のＦａｂ領域から構成され得、それによって、２つ以上の標的に対する特異性を高める。「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、任意の特定の産生方法（例えば、組み換え、トランスジェニック、ハイブリドーマなど）によって限定されることは意図されていない。
本発明の抗体、およびそのソルチリン抗原結合フラグメントは、好ましくは、ヒトまたは、例えばマウス抗体（１Ｆ２、５Ｅ１と示される）であり、特に治療目的に用いられる場合、「ヒト化」される。「ヒト化」という用語は、一般に組み換え技術を用いて調製される、非ヒト種に由来する免疫グロブリンから得られる抗原結合部位、およびヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた残りの免疫グロブリン構造を有する分子を指す。抗原結合部位は、ヒト定常領域に融合された完全な非ヒト抗体可変領域、またはヒト可変領域の適切なヒトフレームワーク領域に移植されたこのような可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含み得る。このようなヒト化分子のフレームワーク残基は、野生型（例えば、完全ヒト）であってもよく、またはそれらは、配列がヒト化のための基盤として機能したヒト抗体に見られない１つまたは複数のアミノ酸置換を含むように修飾され得る。ヒト化は、分子の定常領域がヒト個体における免疫原として働く可能性を低下させるかまたはなくすが、外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）“Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｍａｎ：Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８６：４２２０−４２２４）。別の手法は、ヒト由来の定常領域を提供することだけでなく、可変領域を改変して、それらをヒト型にできる限り近くなるように再形成することにも焦点を当てている。重鎖および軽鎖の両方の可変領域が、該当する抗原に対する応答が異なり、結合能を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらの相補性決定領域（ＣＤＲ）には、所与の種において比較的保存され、かつＣＤＲの足場を提供すると考えられる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接することが知られている。非ヒト抗体が、特定の抗原に対して調製される場合、可変領域は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを、改変されるヒト抗体中に存在するＦＲに移植することによって、「再形成」または「ヒト化」され得る。様々な抗体に対するこの手法の適用は、Ｓａｔｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３：８５１−８５６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｇｒａｆｔｉｎｇ Ａｎ Ａｎｔｉｌｙｓｏｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｙ ＣＤＲ−Ｇｒａｆｔｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ Ｏｆ Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ Ｏｎ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３−３７８３；Ｍａｅｄａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ｒｅｓｈａｐｅｄ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ ＨＩＶ−Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：１２４−１３４；Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＣＤ４ Ａｎｔｉｂｏｄｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：４１８１−４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｏ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ”，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１；Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：２８６９−２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎ Ａｎｔｉ−ｐ１８５ｈｅｒ２ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８９：４２８５−４２８９；およびＣｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅ ＣＤ３３ Ａｎｔｉｇｅｎ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４によって報告されている。ある実施形態において、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体に由来する全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保存する。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体に対して改変された１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有し、これらは、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。抗原をヒト化する能力は周知である（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，８５９，２０５号明細書；同第６，４０７，２１３号明細書；同第６，８８１，５５７号明細書を参照）。
「抗体「ＸＸ」という用語は、そのそれぞれの配列番号によって定義される軽鎖、軽鎖可変領域、または軽鎖可変領域ＣＤＲ１〜３、およびそのそれぞれの配列番号によって定義される重鎖、重鎖可変領域、または重鎖可変領域ＣＤＲ１〜３を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメント（例えば抗体「５Ｅ１」）を示すことが意図される。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、それらの配列番号によって定義されて含まれるそれらの全重鎖可変領域およびそれらの配列番号によって定義されるそれらの軽鎖可変領域によって定義される。
この領域中のアミノ酸残基の番号付けは、ＩＭＧＴ（登録商標）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（登録商標）または、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎｎ，Ｋ．Ｓ．＆ Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１−３２４２、米国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．（１９８７）．Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｌｉｎｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１−９１７にしたがって行われる。
本明細書において使用される際、抗体またはその抗原結合フラグメントは、別のエピトープと比べてそのエピトープと、より高頻度で、より迅速に、より長い期間および／またはより高い親和性または結合活性で反応または会合する場合、別の分子（すなわち、エピトープ）の領域に「特異的に」結合するといわれる。一実施形態において、本発明の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、別の分子よりその標的（ソルチリン）に少なくとも１０倍強く；好ましくは、少なくとも５０倍強く、より好ましくは、少なくとも１００倍強く結合する。好ましくは、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、生理学的条件下で、例えば、生体内で結合する。したがって、「ソルチリンに特異的に結合する」とは、このような特異性でおよび／またはこのような条件下でソルチリンに結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントの能力を包含する。このような結合を決定するのに好適な方法が、当業者に公知であり、例示的な方法が、添付の実施例に記載されている。本明細書において使用される際、所定の抗原への抗体の結合の文脈における「結合」という用語は、典型的に、抗原をリガンドとしておよび抗体を検体として用いてＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００またはＴ２００機器のいずれかにおいて例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定した際の約１０−７Ｍ以下、例えば約１０−８Ｍ以下、例えば約１０−９Ｍ以下のＫＤに対応する親和性での結合を指し、所定の抗原または密接に関連している抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に対するその親和性より少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも１００倍低い、例えば少なくとも１，０００倍低い、例えば少なくとも１０，０００倍低い、例えば少なくとも１００，０００倍低いＫＤに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性がより低くなる量は、抗体のＫＤに依存するため、抗体のＫＤが非常に低い（すなわち、抗体が非常に特異的である）場合、抗原に対する親和性が、非特異的抗原に対する親和性より低くなる量は、少なくとも１０，０００倍であり得る。特に、本発明は、例えば、Ｏｃｔｅｔ ３８４ＲＥＤ（実施例８）を用いたバイオレイヤー干渉法によって決定されるとき、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭまたは５ｎＭ〜１ｎＭに対応する結合親和性を示す抗ソルチリン抗体に関する。
本発明の特定の実施形態において、本発明は、ソルチリンへの結合についてｈｕｍＡｂ抗体４５またはｈｕｍＡｂ抗体６８と競合することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。別の実施形態において、本発明は、配列番号１７０に定義されるソルチリンのＤ領域への結合について抗体４５と競合することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。このような競合的な結合の阻害は、当該技術分野において周知のアッセイおよび方法を用いて、例えば固定化ヒトソルチリンとともにＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）チップを用いて、試験される抗体ポリペプチドを用いておよび用いずに対照抗体（抗体「４５」または「６８」など）とともにインキュベートして決定され得る。あるいは、ペアワイズマッピング手法が使用され得、この手法では、対照抗体（抗体「４５」または「６８」など）が、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）チップの表面に固定され、ヒトソルチリン抗原が固定化抗体に結合され、次に、二次抗体がヒトソルチリンに対する同時結合能力について試験される（開示内容が参照により本明細書に援用される‘ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ’，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２９−０１９４−００ ＡＡ ０５／２０１２を参照）。
本明細書において使用される際の「ｋｄ」（秒−１または１／秒）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を指す。前記値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
本明細書において使用される際の「ｋａ」（Ｍ−１×秒−１または１／Ｍ秒）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度定数を指す。
本明細書において使用される際の「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指し、ｋｄをｋａで除算することによって得られる。
本明細書において使用される際の「ＫＡ」（Ｍ−１または１／Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の結合平衡定数を指し、ｋａをｋｄで除算することによって得られる。
一実施形態において、本発明は、以下の特性：
（ｉ）０．５〜１０ｎＭ、例えば１〜５ｎＭまたは１〜２ｎＭのソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力
の１つまたは複数を示す抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
「ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力」という用語は、実施例１０に開示される時間分解蛍光アッセイ（ＨＴＦＲ）を用いて、５０ｎＭ未満であるが、好ましくは、１０ｎＭ〜０．２ｎＭのＩＣ５０でＰＧＲＮへの結合を阻害する能力を有する抗体を含む。
「ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力」という用語は、実施例１３に開示されるＥＬＩＳＡアッセイによって測定した際に、少なくとも２５％、例えば２５％〜５００％、２５％〜４００％または２５％〜２００％だけ培地中のＰＧＲＮの濃度を増加させる能力を含む。
「ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力」は、実施例１２に開示されるセロミクスベースのアッセイによって測定した際に少なくとも１０％であるが、好ましくは、２０〜１００％だけＰＧＲＮの細胞内濃度を減少させる能力を含む。
「ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力」は、実施例１５に開示されるＥＬＩＳＡアッセイによって測定した際に少なくとも２５％であるが、好ましくは、５０〜５００パーセントだけ血漿中のＰＧＲＮの濃度を増加させる能力を含む。
脳内のＰＧＲＮを増加させる能力がまた、例えば微小透析によって測定され得ることが想定される。したがって、「脳内のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力」とは、微小透析によって測定した際に少なくとも２５％であるが、好ましくは、５０〜５００パーセントだけ脳内のＰＧＲＮの濃度を増加させる能力を含む。
いくつかの抗体において、ＣＤＲのごく一部、すなわち、ＳＤＲと呼ばれる、結合に必要とされるＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体において結合を保持するのに必要とされる。関連するエピトープに接触せず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基が、過去の研究に基づいて（例えばＣＤＲ Ｈ２中の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、必要とされないことが多い）、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループの外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照）、分子モデリングによっておよび／または実験により、またはＧｏｎｚａｌｅｓ，Ｎ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００４）“ＳＤＲ Ｇｒａｆｔｉｎｇ Ｏｆ Ａ Ｍｕｒｉｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｒｍｌｉｎｅ Ｔｅｍｐｌａｔｅｓ Ｔｏ Ｍｉｎｉｍｉｚｅ Ｉｔｓ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３−８７２に記載されるように特定され得る。１つまたは複数のドナーＣＤＲ残基が存在しないかまたは全ドナーＣＤＲが省略される位置におけるこのようなヒト化抗体において、この位置を占めるアミノ酸は、受容体抗体配列において（Ｋａｂａｔ番号付けによって）対応する位置を占めるアミノ酸であり得る。含まれるＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対する受容体のこのような置換の数は、競合する考慮事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、結果として、潜在的な免疫原性を低下させるのに潜在的に有利である。しかしながら、置換は、親和性の変化も引き起こすことがあり、親和性の著しい低下は回避されるのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸も、実験により選択され得る。
ＣＤＲ残基の単一のアミノ酸改変が、機能的結合の喪失をもたらし得るということ（Ｒｕｄｉｋｏｆｆ，Ｓ．ｅｔｃ．（１９８２）“Ｓｉｎｇｌｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ａｌｔｅｒｉｎｇ Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９（６）：１９７９−１９８３）は、別の機能的ＣＤＲ配列を系統的に同定するための手段を提供する。このような変異体ＣＤＲを得るための１つの好ましい方法において、ＣＤＲをコードするポリヌクレオチドが突然変異を起こされて（例えばランダム突然変異によって、または部位特異的方法（例えば、突然変異遺伝子座をコードするプライマーによるポリメラーゼ連鎖媒介性増幅）によって）、置換アミノ酸残基を有するＣＤＲを生成する。元の（機能的）ＣＤＲ配列中の関連する残基の同一性を、置換される（非機能的）変異体ＣＤＲ配列の同一性と比較することによって、その置換についてのＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアが特定され得る。ＢＬＯＳＵＭシステムは、信頼できるアラインメントについて配列のデータベースを分析することによって作成されるアミノ酸置換のマトリックスを提供する（Ｅｄｄｙ，Ｓ．Ｒ．（２００４）“Ｗｈｅｒｅ Ｄｉｄ Ｔｈｅ ＢＬＯＳＵＭ６２ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｃｏｒｅ Ｍａｔｒｉｘ Ｃｏｍｅ Ｆｒｏｍ？”，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（８）：１０３５−１０３６；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ．（１９９２）“Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｒｏｍ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｌｏｃｋｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８９：１０９１５−１０９１９；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）“Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ Ｔｈｅ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ Ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｆｅａｔｕｒｅｓ Ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｃｈｅｍｅｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８７：２２６４−２２６８；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９１）“Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ｍａｔｒｉｃｅｓ Ｆｒｏｍ Ａｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９，５５５−５６５。現在、最先端のＢＬＯＳＵＭデータベースは、ＢＬＯＳＵＭ６２データベース（ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ）である。表１は、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアを示す（スコアが高くなるほど、置換がより保存的になり、ひいては置換が機能に影響を与えない可能性が高くなる）。得られるＣＤＲを含む抗原結合フラグメントが、ソルチリンに結合できない場合、例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは、不十分に保存的であると見なされ、より高い置換スコアを有する新たな置換候補が選択され、生成される。したがって、例えば、元の残基がグルタミン酸塩（Ｅ）であり、非機能的置換残基がヒスチジン（Ｈ）である場合、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは０であり、より保存的な変化（アスパラギン酸塩、アスパラギン、グルタミン、またはリジンなどへの）が好ましい。
Figure 0006979397
したがって、本発明は、改良されたＣＤＲを同定するためのランダム突然変異の使用を想定している。本発明の文脈において、保存的置換は、以下の３つの表の１つまたは複数に反映されているアミノ酸の種類の範囲内の置換によって定義され得る。
Figure 0006979397
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より保存的な置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）としては、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、およびアスパラギン−グルタミンが挙げられる。
アミノ酸のさらなる基は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（２ｄ Ｅｄ．１９９３），Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている原理を用いて配合され得る。
ファージディスプレイ技術が、ＣＤＲ親和性を増加させる（または低下させる）のに代わりに使用され得る。親和性成熟と呼ばれるこの技術は、突然変異または「ＣＤＲウォーキング（ｗａｌｋｉｎｇ）」を用い、再選択（ｒｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）は、標的抗原またはその抗原性の抗原結合フラグメントを使用して、初期抗体または親抗体と比較した際に、抗原に対するより高い（またはより低い）親和性で結合するＣＤＲを有する抗体を同定する（例えばＧｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９：３９０３を参照）。単一のヌクレオチドではなくコドン全体の突然変異誘発は、アミノ酸突然変異の半ランダム化レパートリーをもたらす。変異体クローンのプールからなるライブラリーが構築され得、変異体クローンのそれぞれが、単一のＣＤＲ中の単一のアミノ酸改変により異なり、各ＣＤＲ残基に対して各可能なアミノ酸置換を提示する変異体を含む。抗原に対する増加した（または低下した）結合親和性を有する突然変異体は、固定化突然変異体を標識抗原と接触させることによってスクリーニングされ得る。当該技術分野において公知の任意のスクリーニング方法が、抗原に対する増加したまたは低下した親和性を有する突然変異体抗体を同定するのに使用され得る（例えば、ＥＬＩＳＡ）（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）９５：６０３７；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５５：１９９４を参照）。軽鎖をランダム化するＣＤＲウォーキングが、使用され得る（Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２６３：５５１を参照）。
このような親和性成熟を達成するための方法は、例えば：Ｋｒａｕｓｅ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）“Ａｎ Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｔｈａｔ Ｄｉｓｔｏｒｔｓ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ”，ＭＢｉｏ．２（１）ｐｉｉ：ｅ００３４５−１０．ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００３４５−１０；Ｋｕａｎ，Ｃ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ−Ｍａｔｕｒｅｄ Ａｎｔｉ−Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＭＢ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｇｌｉｏｍａｓ Ａｎｄ Ｍｅｌａｎｏｍａｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０．１００２／ｉｊｃ．２５６４５；Ｈａｃｋｅｌ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ａｎｄ ＣＤＲ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｂｉａｓｅｓ Ｅｎｒｉｃｈ Ｂｉｎｄｅｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ Ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０１（１）：８４−９６；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｇａｉｎｓｔ ＨＩＶ−１ ｇｐ４１”，ＭＡｂｓ １（５）：４６２−４７４；Ｇｕｓｔｃｈｉｎａ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅ ＣＤＲ−Ｈ２ Ｌｏｏｐ Ｏｆ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｆａｂ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｆｒｏｍ Ａ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｎａｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｉｂｒａｒｙ Ａｎｄ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ａｇａｉｎｓｔ Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｔｒｉｍｅｒｉｃ Ｃｏｉｌｅｄ−Ｃｏｉｌ Ｏｆ Ｇｐ４１ Ｙｉｅｌｄｓ Ａ Ｓｅｔ Ｏｆ Ｆａｂｓ Ｗｉｔｈ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＨＩＶ−１ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｐｏｔｅｎｃｙ Ａｎｄ Ｂｒｅａｄｔｈ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３９３（１）：１１２−１１９；最後に、Ｗ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｒａｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒ Ａｎｔｉ−ＲＡＧＥ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｒｅｖｅａｌｓ Ａ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｏｆ Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ Ｂｏｔｈ Ｉｎｓｉｄｅ Ａｎｄ Ｏｕｔｓｉｄｅ Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８８（３）：５４１−５５８；Ｂｏｓｔｒｏｍ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５２５：３５３−３７６；Ｓｔｅｉｄｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＧＭ−ＣＳＦ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｂｙ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ＣＤＲ−Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（１）：１３５−１４４；およびＢａｒｄｅｒａｓ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｂｙ Ｉｎ Ｓｉｌｉｃｏ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０５（２６）：９０２９−９０３４に記載されている。
したがって、包含される抗体またはそれらの抗原結合フラグメントのＣＤＲ変異体の配列は、置換によって；例えば置換される４つのアミノ酸残基、３つのアミノ酸残基、２つのアミノ酸残基または１つのアミノ酸残基によって、親抗体のＣＤＲの配列と異なり得る。本発明の一実施形態によれば、ＣＤＲ領域中のアミノ酸が、以下の３つの表において定義されるように、保存的置換で置換され得ることがさらに想定される。
「トランスジェニック非ヒト動物」という用語は、１つまたは複数のヒト重鎖および／または軽鎖導入遺伝子または導入染色体（ｔｒａｎｓ−ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）（動物の天然ゲノムＤＮＡへと統合されるかまたは非統合のいずれか）を含み、完全ヒト抗体を発現することが可能なゲノムを有する非ヒト動物を指す。例えば、トランスジェニックマウスは、マウスが、ソルチリン抗原および／またはソルチリンを発現する細胞で免疫されるときにヒト抗ソルチリン抗体を産生するように、ヒト軽鎖導入遺伝子およびヒト重鎖導入遺伝子またはヒト重鎖導入染色体のいずれかを有し得る。ヒト重鎖導入遺伝子は、トランスジェニックマウス、例えばＨｕＭＡｂマウス（ＨＣｏ７またはＨＣｏ１２マウスなど）の場合と同様に、マウスの染色体ＤＮＡへと統合され得、またはヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されるように、導入染色体ＫＭマウスの場合と同様に、染色体過剰に（ｅｘｔｒａ−ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｌｙ）維持され得る。このようなトランスジェニックおよび導入染色体マウス（本明細書においてまとめて「トランスジェニックマウス」と呼ばれる）は、Ｖ−Ｄ−Ｊ組み換えおよびアイソタイプスイッチングを行うことによって、所与の抗原（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよび／またはＩｇＥなど）に対するヒトモノクローナル抗体の複数のアイソタイプを産生することが可能である。
トランスジェニック、非ヒト動物も、特定の抗体をコードする遺伝子を導入することによって、例えば動物の乳汁中で発現される遺伝子間を作動可能に連結することによって、特定の抗原に対する抗体の産生に使用され得る。
本明細書において使用される際の「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、疾患または障害の進行または重症度を改善し、遅らせ、軽減し、または抑制すること、またはこのような疾患または障害の１つまたは複数の症状または副作用を改善し、遅らせ、軽減し、または抑制することを意味する。本発明の趣旨では、「治療」または「治療すること」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るための手法をさらに意味し、ここで、「有益なまたは所望の臨床結果」としては、限定はされないが、部分的であるかまたは全体的であるか、検出可能かまたは検出不可能かにかかわらず、症状の軽減、障害または疾患の程度の減少、安定した（すなわち、悪化していない）疾患または障害状態、疾患または障害状態の進行の遅延または緩徐化、疾患または障害状態の改善または緩和、および疾患または障害の寛解が挙げられる。
「有効量」は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに適用される場合、意図される生物学的効果または所望の治療結果（限定はされないが臨床結果を含む）を達成するのに、必要な投与量および期間にわたる、十分な量を指す。「治療的に有効な量」という語句は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに適用される場合、障害もしくは疾患の状態の進行、または障害もしくは疾患の症状の進行を改善し、緩和し、安定させ、抑制し、遅らせ、軽減し、または遅延させるのに十分な、抗体、またはその抗原結合フラグメントの量を表すことが意図される。一実施形態において、本発明の方法は、他の化合物と組み合わせた、抗体、またはその抗原結合フラグメントの投与を提供する。このような場合、「有効量」は、意図される生物学的効果を引き起こすのに十分な組合せの量である。
本発明の抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメントの治療的に有効な量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメントが個体における所望の応答を引き起こす能力などの要因に応じて変化し得る。治療的に有効な量はまた、抗体または抗体部分の何らかの毒性または有害作用を、治療的に有益な効果が上回る量である。
抗体は、好ましくは、ヒトまたはヒト化抗体である。
この領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、ＩＭＧＴ（登録商標）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（登録商標）または、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎｎ，Ｋ．Ｓ．＆ Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１−３２４２、米国保健福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．（１９８７）．Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｒｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｌｉｎｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１−９１７にしたがう。
抗体５Ｅ１：
したがって、本発明は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号８の重鎖可変領域および配列番号７の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体１Ｆ２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１６の重鎖可変領域および配列番号１５の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体０６８：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号２４の重鎖可変領域および配列番号２３の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体１３２０：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号３２の重鎖可変領域および配列番号３１の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体９３−０５：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号４０の重鎖可変領域および配列番号３９の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体９３−０１：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号４８の重鎖可変領域および配列番号４７の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体９２４：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号５６の重鎖可変領域および配列番号５５の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体１２７６：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号５７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号６４の重鎖可変領域および配列番号６３の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体８４９：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号６５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号７２の重鎖可変領域および配列番号７１の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体５３１−０２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号８０の重鎖可変領域および配列番号７９の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体５４８−０１：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号８４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号８５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号８８の重鎖可変領域および配列番号８７の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体５４８−０２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号９２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号９３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号９４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号９６の重鎖可変領域および配列番号９５の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体１２８９−０２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１００のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１０２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１０４の重鎖可変領域および配列番号１０３の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体８１１−０２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１０８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１０９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１１２の重鎖可変領域および配列番号１１１の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体５６６−０１：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１１７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２０の重鎖可変領域および配列番号１１９の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体５６２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１２３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１２４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１２６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１２８の重鎖可変領域および配列番号１２７の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体１９３：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１２９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１３０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１３２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１３３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１３４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１３６の重鎖可変領域および配列番号１３５の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体８８：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１３９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１４２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１４４の重鎖可変領域および配列番号１４３の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体０４５：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１４５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１４６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１４７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１４８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１４９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１５０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１５２の重鎖可変領域および配列番号１５１の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体０４４：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１５３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１５４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１５５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１５７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１５８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１６０の重鎖可変領域および配列番号１５９の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
抗体００２：
別の実施形態によれば、本発明は、
（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１６２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号１６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含むかまたはそれからなる抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
好ましくは、モノクローナル抗体は、配列番号１６８の重鎖可変領域および配列番号１６７の軽鎖可変領域を含むかまたはそれからなり得る。
上述される抗体は、一実施形態によれば、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３（ＶＨおよび／またはＶＬ）配列からの、４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有する変異体をさらに含み得る。
さらに、抗体は、薬学的に許容できる担体と一緒に組成物中にあり得る。本発明の抗体は、治療に使用され得る。特に、本発明の抗体は、ＦＴＤまたはＡＬＳまたはＴＤＰ４３タンパク質症（アルツハイマー病（ＡＤ）など）を治療するのに使用され得る。
本発明によって想定される治療は、長期であってもよく、患者は、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上治療され得る。
本発明の抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５（１９７５）によって最初に記載されているハイブリドーマ方法によって産生されるモノクローナル抗体であってもよく、または組み換えＤＮＡもしくは他の方法によって産生されるモノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２，６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２２，５８１−５９７（１９９１）に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。モノクローナル抗体は、任意の好適な源から得られる。したがって、例えば、モノクローナル抗体は、例えば、表面において抗原を発現する細胞、または該当する抗原をコードする核酸の形態で、該当する抗原で免疫されたマウスから得られるマウス脾臓Ｂリンパ球細胞から調製されるハイブリドーマから得られる。モノクローナル抗体はまた、免疫されたヒトまたは非ヒト哺乳動物（ラット、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、霊長類など）の抗体発現細胞に由来するハイブリドーマから得られる。
一実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体である。ソルチリンに対するヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を有するトランスジェニックまたは染色体導入マウスを用いて生成され得る。このようなトランスジェニックおよび染色体導入マウスは、本明細書においてそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと呼ばれるマウスを含む。
ＨｕＭＡｂマウスは、内因性μおよびＫ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異と一緒に、再配列されていないヒト重鎖可変および定常（μおよびＹ）ならびに軽鎖可変および定常（κ）鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）を含む（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８５６−８５９（１９９４））。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはＫの減少した発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子が、クラススイッチおよび体細胞突然変異を起こして、高親和性ヒトＩｇＧ、ｋモノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）、上記参照；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３，４９−１０１（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３ ６５−９３（１９９５）およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ７６４ ５３６−５４６（１９９５）に概説されている）。ＨｕＭＡｂマウスの作製は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０，６２８７−６２９５（１９９２）、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５，６４７−６５６（１９９３）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２９１２−２９２０（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６，５７９−５９１（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５−８５１（１９９６）に詳細に記載されている。米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，７８９，６５０号明細書、米国特許第５，８７７，３９７号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，８１４，３１８号明細書、米国特許第５，８７４，２９９号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号明細書、米国特許第５，５４５，８０７号明細書、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９３／１２２７号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／０３９１８号パンフレットおよび国際公開第０１／０９１８７号パンフレットも参照されたい。
ＨＣｏ７、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７およびＨＣｏ２０マウスは、それらの内因性軽鎖（κ）遺伝子におけるＪＫＤ破壊（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１−８２０（１９９３）に記載されているように）、それらの内因性重鎖遺伝子におけるＣＭＤ破壊（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例１に記載されているように）、およびＫＣｏ５ヒトκ軽鎖導入遺伝子（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５−８５１（１９９６）に記載されているように）を有する。さらに、ＨＣｏ７マウスは、ＨＣｏ７ヒト重鎖導入遺伝子（米国特許第５，７７０，４２９号明細書に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１２マウスは、ＨＣｏ１２ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１７マウスは、ＨＣｏ１７ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ２０マウスは、ＨＣｏ２０ヒト重鎖導入遺伝子を有する。得られるマウスは、内因性マウス重鎖およびκ軽鎖遺伝子座の破壊のためにバックグラウンドのホモ接合体においてヒト免疫グロブリン重鎖およびκ軽鎖導入遺伝子を発現する。
ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１−８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５−８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。ＨＣｏ１２−Ｂａｌｂ／ｃ、ＨＣｏ１７−Ｂａｌｂ／ｃおよびＨＣｏ２０−Ｂａｌｂ／ｃマウスは、国際公開第０９／０９７００６号パンフレットに記載されているように、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７およびＨＣｏ２０を、ＫＣｏ５［Ｊ／Ｋ］（Ｂａｌｂ）に交差させることによって生成され得る。
ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１−８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５−８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４抗原結合フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。
これらのトランスジェニックマウスに由来する脾細胞は、周知の技術にしたがって、ヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを生成するのに使用され得る。本発明のヒトモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、または他の種に由来する本発明の抗体はまた、該当する免疫グロブリン重鎖および軽鎖配列についてトランスジェニックな別の非ヒト哺乳動物または植物の生成、および回収可能な形態での抗体の産生によって遺伝子導入的に生成され得る。哺乳動物におけるトランスジェニック産生に関連して、抗体は、ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物の乳汁中で産生され、それから回収され得る。例えば米国特許第５，８２７，６９０号明細書、米国特許第５，７５６，６８７号明細書、米国特許第５，７５０，１７２号明細書および米国特許第５，７４１，９５７号明細書を参照されたい。
本発明の抗体は、任意のアイソタイプのものであり得る。アイソタイプの選択は、典型的に、ＡＤＣＣ誘導などの所望のエフェクター機能によって導かれる。例示的なアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域、κまたはλのいずれかが使用され得る。必要に応じて、本発明の抗ソルチリン抗体のクラスは、公知の方法によってスイッチされ得る。例えば、元はＩｇＭであった本発明の抗体は、本発明のＩｇＧ抗体にクラススイッチされ得る。さらに、クラススイッチ技術は、あるＩｇＧサブクラスを別のＩｇＧサブクラスに、例えばＩｇＧｌからＩｇＧ２に変換するのに使用され得る。したがって、本発明の抗体のエフェクター機能は、様々な治療的使用のために、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体へのアイソタイプスイッチによって変更され得る。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体、例えばＩｇＧ１、ｋである。抗体は、そのアミノ酸配列が、他のアイソタイプと比べてそのアイソタイプに最も相同性が高い場合、特定のアイソタイプのものであるといわれる。
一実施形態において、本発明の抗体は、完全長抗体、好ましくは、ＩｇＧ抗体、特に、ＩｇＧ１、ｋ抗体である。別の実施形態において、本発明の抗体は、抗体抗原結合フラグメントまたは一本鎖抗体である。
抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば従来の技術を用いた抗原結合断片化によって得られ、抗原結合フラグメントは、全抗体について本明細書に記載されるのと同じように有用性についてスクリーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって生成され得る。得られるＦ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントは、ジスルフィド架橋を還元するように処理されて、Ｆａｂ’抗原結合フラグメントを生成し得る。Ｆａｂ抗原結合フラグメントはＩｇＧ抗体をパパインで処理することによって得られ；Ｆａｂ’抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ抗体のペプシン消化により得られる。Ｆ（ａｂ’）抗原結合フラグメントはまた、チオエーテル結合またはジスルフィド結合により、以下に記載されるＦａｂ’を結合することによって生成され得る。Ｆａｂ’抗原結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することによって得られる抗体抗原結合フラグメントである。Ｆａｂ’−抗原結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントを、ジチオスレイトールなどの還元剤で処理することによって得られる。抗体抗原結合フラグメントはまた、組み換え細胞におけるこのような抗原結合フラグメントをコードする核酸の発現によって生成され得る（例えばＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１８４、１２３−３８（１９９５）を参照）。例えば、Ｆ（ａｂ’）２抗原結合フラグメントの一部をコードするキメラ遺伝子は、このような切断された抗体抗原結合フラグメント分子を生成するために、Ｈ鎖のＣＨ１領域およびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、続いて翻訳停止コドンを含み得る。
一実施形態において、抗ソルチリン抗体は、一価抗体、好ましくは、ヒンジ領域の欠失を有する国際公開第２００７０５９７８２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されている一価抗体である。したがって、一実施形態において、抗体は、一価抗体であり、前記抗ソルチリン抗体は、ｉ）前記一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗ソルチリン抗体のＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列およびＩｇの定常ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、選択された抗原特異的抗体のＶＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列およびＩｇのＣＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結され、ＩｇＧ１サブタイプの場合、ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列は、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下でまたは動物もしくはヒトに投与されるとき、ＣＬ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとともにジスルフィド結合または共有結合を形成することが可能なアミノ酸をＣＬ領域が含まないように修飾されている工程と；ｉｉ）前記一価抗体の重鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列およびヒトＩｇの定常ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列は、ヒンジ領域に対応する領域および、Ｉｇサブタイプによって必要とされるように、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下でまたは動物ヒトに投与されるとき、ヒトＩｇのＣＨ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとともに、ジスルフィド結合または共有結合または安定した非共有重鎖間結合の形成に関与するアミノ酸残基を含まないように修飾されており、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域をコードする前記ヌクレオチド配列および前記ＩｇのＣＨ領域をコードする前記ヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結される工程と；ｉｉｉ）前記一価抗体を生成するために細胞発現系を提供する工程と；ｉｖ）（ｉｉｉ）の細胞発現系の細胞内で（ｉ）および（ｉｉ）の核酸構築物を共発現することによって、前記一価抗体を生成する工程とを含む方法によって構築される。
同様に、一実施形態において、抗ソルチリン抗体は、
（ｉ）本明細書に記載される本発明の抗体の可変領域または前記領域の抗原結合部分、および
（ｉｉ）免疫グロブリンのＣＨ領域またはＣＨ２およびＣＨ３領域を含むその領域
を含む一価抗体であり、ここで、ＣＨ領域またはその領域は、ヒンジ領域に対応する領域および、免疫グロブリンがＩｇＧ４サブタイプでない場合、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で、同一のＣＨ領域とともにジスルフィド結合を形成するか、または同一のＣＨ領域とともに他の共有結合または安定した非共有重鎖間結合を形成することが可能なアミノ酸残基を含まないように修飾されている。
さらなる実施形態において、一価抗体の重鎖は、ヒンジ領域全体が欠失しているように修飾されている。
別のさらなる実施形態において、前記一価抗体の配列は、それがＮ結合型グリコシル化のための受容体部位を含まないように修飾されている。
本発明は、抗ソルチリン結合領域（例えば、抗ソルチリンモノクローナル抗体のソルチリン結合領域）が、２つ以上のエピトープを標的にする二価または多価二重特異性骨格の一部である「二重特異性抗体」も含む（例えば、第２のエピトープは、二重特異性抗体が、血液脳関門などの生物学的障壁を越える改良されたトランスサイトーシスを示し得るように、活性な輸送受容体のエピトープを含み得る）。したがって、別のさらなる実施形態において、抗ソルチリン抗体の一価Ｆａｂは、異なるタンパク質を標的にするさらなるＦａｂまたはｓｃｆｖに結合されて、二重特異性抗体を生成し得る。二重特異性抗体は、二重機能、例えば抗ソルチリン結合領域によって与えられる治療機能、および血液脳関門などの生物学的障壁を越える輸送を促進するために受容体分子に結合し得る輸送機能を有し得る。
本発明の抗体、およびその抗原結合フラグメントは、一本鎖抗体も含む。一本鎖抗体は、重鎖および軽鎖Ｆｖ領域が結合されたペプチドである。一実施形態において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体のＦｖにおける重鎖および軽鎖が、ペプチド一本鎖において（典型的に、約１０、１２、１５つまたはそれ以上のアミノ酸残基の）フレキシブルペプチドリンカーと結合される一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を提供する。このような抗体を産生する方法が、例えば米国特許第４，９４６，７７８号明細書、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３−４２６（１９８８）、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９−５８８３（１９８８）およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８，５５２−５５４（１９９０）に記載されている。一本鎖抗体は、単一のＶＨおよびＶＬのみが使用される場合、一価であり、２つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、二価であり、または３つ以上のＶＨおよびＶＬが使用される場合、多価であり得る。
本明細書に記載される抗体およびその抗原結合フラグメントは、任意の好適な数の修飾アミノ酸の包含および／またはこのような共役置換基との結合によって修飾され得る。これに関連する適合性は、一般に、非誘導体化親抗ソルチリン抗体に関連するソルチリン選択性および／またはソルチリン特異性を少なくとも実質的に保持する能力によって決定される。１つまたは複数の修飾アミノ酸の包含は、例えば、ポリペプチド血清半減期を増加させ、ポリペプチド抗原性を低下させ、またはポリペプチド貯蔵安定性を増加させるのに有利であり得る。アミノ酸は、例えば、組み換え産生の際に翻訳と同時に（ｃｏ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ）もしくは翻訳後に（ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ）修飾されるか（例えば、哺乳類細胞における発現の際のＮ−Ｘ−Ｓ／ＴモチーフにおけるＮ結合型グリコシル化）または合成手段によって修飾される。修飾アミノ酸の非限定的な例としては、グリコシル化アミノ酸、硫酸化アミノ酸、プレニル化（例えば、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化）アミノ酸、アセチル化アミノ酸、アシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、カルボキシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸などが挙げられる。アミノ酸の修飾の当業者の指針となるのに十分な言及は、文献全体を通して十分にある。例のプロトコルが、Ｗａｌｋｅｒ（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｏｎ ＣＤ−Ｒｏｍ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪに見られる。修飾アミノ酸は、例えば、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲートされたアミノ酸、または有機誘導化剤にコンジュゲートされたアミノ酸から選択され得る。
本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、例えばそれらの血中半減期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によって化学修飾され得る。例示的なポリマー、およびそれらをペプチドに結合するための方法が、例えば米国特許第４，７６６，１０６号明細書、米国特許第４，１７９，３３７号明細書、米国特許第４，４９５，２８５号明細書および米国特許第４，６０９，５４６号明細書に示されている。さらなる例示的なポリマーとしては、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、約１，０００〜約４０，０００、例えば約２，０００〜約２０，０００、例えば、約３，０００〜１２，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するＰＥＧ）が挙げられる。
本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、診断法においてまたは画像診断用リガンドとしてさらに使用され得る。
一実施形態において、１つまたは複数の放射性標識アミノ酸を含む本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントが提供される。放射性標識抗ソルチリン抗体は、診断および治療目的の両方に使用され得る（放射性標識分子への結合は、別の考えられる特徴である）。このような標識の非限定的な例としては、限定はされないが、ビスマス（２１３Ｂｉ）、炭素（１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ、６０Ｃｏ）、銅（６４Ｃｕ）、ジスプロシウム（１６５Ｄｙ）、エルビウム（１６９Ｅｒ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、金（１９８Ａｕ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、水素（３Ｈ）、インジウム（１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１５Ｉｎ）、ヨウ素（１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、イリジウム（１９２Ｉｒ）、鉄（５９Ｆｅ）、クリプトン（８１ｍＫｒ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、窒素（１３Ｎ、１５Ｎ）、酸素（１５Ｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、カリウム（４２Ｋ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルビジウム（８１Ｒｂ、８２Ｒｂ）、ルテニウム（８２Ｒｕ、９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、ナトリウム（２４Ｎａ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ、８９Ｓｒ、９２Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｌ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）および亜鉛（６５Ｚｎ）が挙げられる。放射性標識アミノ酸および関連するペプチド誘導体を調製するための方法は、当該技術分野において公知である（例えばＪｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６５５−６８６（２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｒａｖｅｎ（１９９６））ならびに米国特許第４，６８１，５８１号明細書、米国特許第４，７３５，２１０号明細書、米国特許第５，１０１，８２７号明細書、米国特許第５，１０２，９９０号明細書（米国再発行特許第３５，５００号明細書）、米国特許第５，６４８，４７１号明細書および米国特許第５，６９７，９０２号明細書を参照。例えば、放射性同位体が、クロラミンＴ法によって結合され得る（Ｌｉｎｄｅｇｒｅｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）“Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ−Ｔ Ｉｎ Ｈｉｇｈ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｔａｎｎｙｌ）Ｂｅｎｚｏａｔｅ Ａｓ Ａｎ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ”，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５（７）：６５９−６６５；Ｋｕｒｔｈ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）“Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ Ｐｈｅｎｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ Ｔｏ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｔｕｍｏｒ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６（９）：１２５５−１２６１；Ｒｅａ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）“Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（３ Ｓｕｐｐｌ）：８５７ｓ−８６１ｓ）。
本発明は、蛍光標識（希土類キレート（例えば、ユウロピウムキレート）など）、フルオレセイン型標識（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、５−カルボキシフルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン）、ローダミン型標識（例えば、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）５６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＴＡＭＲＡ（登録商標）またはダンシルクロリド）、ＶＩＶＯＴＡＧ ６８０ ＸＬ ＦＬＵＯＲＯＣＨＲＯＭＥ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）、フィコエリトリン；ウンベリフェロン、Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ；シアニン；フィコエリトリン、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ−ＳＥ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）またはそれらの類似体（これらは全て、光学的検出に好適である）を用いて検出可能に標識される抗ソルチリン抗体およびその抗原結合フラグメントも提供する。化学発光標識が、用いられてもよい（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびイクオリン）。このような診断および検出はまた、本発明の診断用分子を、限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素を含む検出可能な物質に、または限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによって行われ得る。
化学発光標識が、用いられてもよい（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびイクオリン）。このような診断および検出はまた、本発明の診断用分子を、限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む酵素を含む検出可能な物質に、または限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによって行われ得る。常磁性標識も用いられ得、好ましくは、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）または単一光子放射コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出される。このような常磁性標識としては、限定はされないが、アルミニウム（Ａｌ）、バリウム（Ｂａ）、カルシウム（Ｃａ）、セリウム（Ｃｅ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、エルビウム（Ｅｒ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、ホルミウム（Ｈｏ）、イリジウム（Ｉｒ）、リチウム（Ｌｉ）、マグネシウム（Ｍｇ）、マンガン（Ｍｎ）、モリブデン（Ｍ）、ネオジム（Ｎｄ）、オスミウム（Ｏｓ）、酸素（Ｏ）、パラジウム（Ｐｄ）、白金（Ｐｔ）、ロジウム（Ｒｈ）、ルテニウム（Ｒｕ）、サマリウム（Ｓｍ）、ナトリウム（Ｎａ）、ストロンチウム（Ｓｒ）、テルビウム（Ｔｂ）、ツリウム（Ｔｍ）、スズ（Ｓｎ）、チタン（Ｔｉ）、タングステン（Ｗ）、およびジルコニウム（Ｚｉ）、特に、Ｃｏ＋２、ＣＲ＋２、Ｃｒ＋３、Ｃｕ＋２、Ｆｅ＋２、Ｆｅ＋３、Ｇａ＋３、Ｍｎ＋３、Ｎｉ＋２、Ｔｉ＋３、Ｖ＋３、およびＶ＋４の常磁性イオン、様々なポジトロン放出型断層撮影法を用いたポジトロン放出金属、および非放射性常磁性金属イオンを含有する化合物が挙げられる。
したがって、一実施形態において、本発明の抗ソルチリン抗体またはそのソルチリン結合フラグメントは、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識、放射性同位体標識または酵素標識で標識され得る。フラグメントの標識抗体は、被験体の脳における前記ソルチリンの存在または量を検出または測定するのに使用され得る。この方法は、前記ソルチリンに結合された抗ソルチリン抗体またはソルチリン結合フラグメントのインビボイメージングの検出または測定を含んでもよく、このようなソルチリンに結合された前記抗ソルチリン抗体またはソルチリン結合フラグメントのエクスビボイメージングを含み得る。
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの１つまたは複数のポリペプチド鎖をコードする発現ベクターに関する。このような発現ベクターは、本発明の抗体および抗原結合フラグメントの組み換え産生に使用され得る。
本発明の文脈における発現ベクターは、染色体ベクター、非染色体ベクター、および合成核酸ベクター（好適な組の発現制御要素を含む核酸配列）を含む、任意の好適なＤＮＡまたはＲＮＡベクターであり得る。このようなベクターの例としては、ＳＶ４０の誘導体、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドおよびファージＤＮＡの組合せに由来するベクター、およびウイルス核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）ベクターが挙げられる。一実施形態において、抗ソルチリン抗体コード核酸は、例えば、線形発現要素（ｌｉｎｅａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）（例えば、Ｓｙｋｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ １２，３５５−５９（１９９７）に記載されているように）、圧縮（ｃｏｍｐａｃｔｅｄ）核酸ベクター（例えば米国特許第６，０７７，８３５号明細書および／または国際公開第００／７００８７号パンフレットに記載されているように）、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ １９／１８、またはｐＵＣ １１８／１１９、「ミッジ（ｍｉｄｇｅ）」最小サイズ核酸ベクターなどのプラスミドベクター（例えば、Ｓｃｈａｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＭｏＩ Ｔｈｅｒ ３，７９３−８００（２００１）に記載されているように）を含む裸のＤＮＡまたはＲＮＡベクターにおいて、またはＣａＰＯ４沈殿構築物などの沈殿核酸ベクター構築物（例えば、国際公開第００／４６１４７号パンフレット、Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｈｅｆ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８３，９５５１−５５（１９８６）、Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １４，７２５（１９７８）、およびＣｏｒａｒｏ ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２，６０３（１９８１）に記載されているように）として含まれる。このような核酸ベクターおよびその使用法は、当該技術分野において周知である（例えば米国特許第５，５８９，４６６号明細書および米国特許第５，９７３，９７２号明細書を参照）。
一実施形態において、ベクターは、細菌細胞における抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメントの発現に好適である。このようなベクターの例としては、ＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＩＮベクター（Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６４，５５０３−５５０９（１９８９）、ｐＥＴベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）など）などの発現ベクターが挙げられる。
発現ベクターは、さらにまたは代わりに、酵母系における発現に好適なベクターであり得る。酵母系における発現に好適な任意のベクターが用いられてもよい。好適なベクターとしては、例えば、α因子、アルコールオキシダーゼおよびＰＧＨなどの構成的または誘導性プロモータを含むベクターが挙げられる（Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）、Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ １５３，５１６−５４４（１９８７）、Ｍａｔｔａｎｏｖｉｃｈ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８２４，３２９−３５８（２０１２）、Ｃｅｌｉｋ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．３０（５），１１０８−１１１８（２０１２）、Ｌｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４２（２），１０５−１２４（２００７）、Ｂｏｅｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（３），５１３−５２３（２００７）、ｖａｎ ｄｅｒ Ｖａａｒｔ，Ｊ．Ｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３５９−３６６（２００２）、およびＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３４９−３５７（２００２）に概説されている）。
本発明の発現ベクターにおいて、抗ソルチリン抗体コード核酸は、任意の好適なプロモータ、エンハンサー、および他の発現促進要素を含むかまたはそれらと結合され得る。このような要素の例としては、強力な発現プロモータ（例えば、ヒトＣＭＶ ＩＥプロモータ／エンハンサーならびにＲＳＶ、ＳＶ４０、ＳＬ３−３、ＭＭＴＶ、およびＨＩＶ ＬＴＲプロモータ）、有効なポリ（Ａ）終止配列、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるプラスミド産物の複製起点、選択可能なマーカーとしての抗生物質抵抗性遺伝子、および／または好都合なクローニング部位（例えば、ポリリンカー）が挙げられる。核酸は、ＣＭＶ ＩＥなどの構成的プロモータとは対照的に誘導性プロモータも含み得る（当業者は、このような用語が、実際に、特定の条件下における遺伝子発現の程度の記述語であることを認識するであろう）。
さらに他の態様において、本発明は、本明細書に定義される本発明の抗体、またはその抗原結合フラグメントまたは本明細書に定義される本発明の二重特異性分子を産生するトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）などの、組み換え真核生物または原核生物宿主細胞に関する。宿主細胞の例としては、酵母、細菌、および哺乳類細胞（ＣＨＯまたはＨＥＫ細胞など）が挙げられる。例えば、一実施形態において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメントの発現のための配列コードを含む細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸を含む細胞を提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメントの発現のための配列コードを含む、プラスミド、コスミド、ファージミド、または線形発現要素などの、融合されていない核酸を含む細胞を提供する。
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗ソルチリン抗体を産生するための方法であって、ａ）本明細書において上述されるように本発明のハイブリドーマまたは宿主細胞を培養する工程と、ｂ）培地から本発明の抗体を精製する工程とを含む方法に関する。
一実施形態において、本発明は、調製物であって、このような用語が本明細書において使用される際、本明細書に定義される抗ソルチリン抗体を含み、ソルチリンに結合することが可能でないかまたは調製物の抗ソルチリン機能性を実質的に変更しない自然発生する抗体を実質的に含まない調製物に関する。したがって、このような調製物は、自然発生する血清、またはこのような血清の精製誘導体を包含せず、抗ソルチリン抗体と、調製物の抗ソルチリン抗体の機能性を変更しない別の抗体との混合物を含み、ここで、このような機能性は、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力；脳内のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力および／または
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を提供する能力
である。
本発明は、特に、天然抗ソルチリン抗体の構造と比べてそのアミノ酸配列の構造変化を（そのＣＤＲ、可変領域、フレームワーク残基および／または定常領域のいずれかに）有するこのような抗ソルチリン抗体の調製物であって、前記構造変化により、抗ソルチリン抗体モノクローナル抗体が、前記天然抗ソルチリン抗体によって示される機能性と比べて著しく変化した機能性（すなわち、機能性の２０％超の相違、４０％超の相違、６０％超の相違、８０％超の相違、１００％超の相違、１５０％超の相違、２倍超の相違、４倍超の相違、５倍超の相違、または１０倍超の相違）を示し；ここで、このような機能性は：
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｖｉ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力；
（ｖｉｉ）脳内のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力および／または
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および／またはアルツハイマー病（ＡＤ）の治療を提供する能力
であり、特に、このような変化した機能性が構造変化の結果であり、したがってそれと切り離すことができない調製物に関する。
自然発生する抗体を「実質的に含まない」という用語は、このような調製物におけるこのような自然発生する抗体の、または調製物のソルチリン結合特性を実質的に変更しないこのような調製物におけるある濃度のこのような自然発生する抗体の包含の完全な非存在を指す。抗体は、それが自然発生する対応物を有さないか、またはそれを自然に伴う成分から分離もしくは精製されている場合、「単離」されているといわれる。
「自然発生する抗体」という用語は、それがこのような調製物に関する場合、生きたヒトまたは他の動物内で、それらの免疫系の機能の自然な結果として誘発される抗体（自然発生する自己抗体を含む）を指す。
したがって、本発明の調製物は、抗ソルチリン抗体、およびソルチリンによって保有されないエピトープに結合することが可能な意図的に加えられるさらなる抗体を含有するこのような調製物を除外せず、実際は明確にそれを包含する。このような調製物は、特に、調製物が、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療する際に向上した有効性を示すその実施形態を含む。
本発明のその抗原結合フラグメントの抗体は、様々な細胞株、例えばヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、および昆虫細胞株、例えばＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ−２１細胞株、マウス細胞株（骨髄腫細胞株など）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ−１１細胞株、ＣＡＰ細胞株およびＨｕＨ−７ヒト細胞株において生産され得る（内容が参照により本明細書に援用される、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｓｅｐ １８：１−１３．）。
さらに他の態様において、本発明は、
（ｉ）本明細書に定義される抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメント、または調製物であって、このような用語が本明細書において定義される際、このような抗ソルチリン抗体またはその抗原結合フラグメントを含む調製物、および
（ｉｉ）薬学的に許容できる担体
を含む医薬組成物に関する。
医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，２０１３に開示されているものなどの従来の技術にしたがって、薬学的に許容できる担体または希釈剤ならびに任意の他の公知の補助剤および賦形剤とともに製剤化され得る。
薬学的に許容できる担体または希釈剤ならびに任意の他の公知の補助剤および賦形剤は、本発明の選択された化合物および選択された投与方法に好適であるべきである。医薬組成物の担体および他の成分のための適合性は、本発明の選択された化合物または医薬組成物の所望の生物学的特性に対する大きな悪影響がないことに基づいて決定される（例えば、エピトープ結合に対するそれほど大きくない影響（１０％以下の相対的阻害、５％以下の相対的阻害など））。
本発明の医薬組成物は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０またはＴｗｅｅｎ−８０などの非イオン性洗浄剤）、安定剤（例えば、糖またはタンパク質を含まないアミノ酸）、防腐剤、組織固定剤、可溶化剤、および／または医薬組成物に含めるのに好適な他の材料も含み得る。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、およびハンクス溶液である。さらに、医薬組成物または製剤は、他の担体、または非毒性の、非治療的、非免疫原性安定剤なども含み得る。組成物は、タンパク質、キトサンのような多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（例えば、ラテックス機能化（ｌａｔｅｘ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）セファロース、アガロース、セルロースなど）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）などの、大型のゆっくりと代謝される高分子も含み得る。
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物、および投与方法に対する所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化され得る。選択された投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物の活性、またはそのアミド、投与経路、投与時期、用いられる特定の化合物の排せつ速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、病態、全体的な健康および過去の病歴、ならびに医療分野において周知の同様の要因を含む様々な薬物動態学的要因に応じて決まる。
医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のための非経口、局所、経口または経鼻手段を含む、任意の好適な経路および方法によって投与され得る。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、非経口的に投与される。本明細書において使用される際の「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、通常、注射による、腸内および局所投与以外の投与方法を意味し、表皮、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含む。インビボおよびインビトロで本発明の化合物を投与するさらなる好適な経路が、当該技術分野において周知であり、当業者によって選択され得る。一実施形態において、その医薬組成物は、静脈内または皮下注射または注入によって投与される。
薬学的に許容できる担体としては、本発明の化合物と生理学的に適合性の、あらゆる好適な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤、酸化防止剤および吸収遅延剤などが挙げられる。
本発明の医薬組成物に用いられ得る好適な水性および非水性担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、エタノール、デキストロース、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、およびゴマ油などの植物油、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、トラガカントガムおよび注射可能な有機酸エステル（オレイン酸エチルなど）、および／または様々な緩衝液が挙げられる。他の担体が、医薬品分野において周知である。
薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液または分散体の即時調製用の滅菌水溶液または分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。
適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散体の場合、所要の粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる酸化防止剤、例えば（１）水溶性酸化防止剤（アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；（２）油溶性酸化防止剤（パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど）；および（３）金属キレート剤（クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）も含み得る。
本発明の医薬組成物は、組成物中に糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール、グリセロールなど）または塩化ナトリウムなどの等張剤も含み得る。
本発明の医薬組成物は、医薬組成物の保存可能期間または有効性を向上させ得る、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、防腐剤または緩衝液などの、選択された投与経路に適切な１つまたは複数の補助剤も含有し得る。本発明の化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤などの速放性から化合物を保護する担体とともに調製され得る。このような担体は、ゼラチン、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、生分解性、生体適合性ポリマー（エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸など）を単独でまたはワックスまたは当該技術分野において周知の他の材料とともに含み得る。このような製剤の調製のための方法は、一般に、当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
一実施形態において、本発明の化合物は、インビボでの適切な分配を確実にするように製剤化され得る。非経口投与用の薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液または分散体の即時調製用の滅菌水溶液または分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。補助的な活性化合物も、組成物に組み込まれ得る。
注射用の医薬組成物は、典型的に、製造および貯蔵の条件下で、滅菌性かつ安定性でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬剤濃度に好適な他の規則構造として製剤化され得る。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、および注射可能な有機酸エステル（オレイン酸エチルなど）を含有する、水性または非水性溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合、所要の粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール（グリセロール、マンニトール、ソルビトールなど）、または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の持続的吸収が、抗体の吸収を遅らせる物質、例えば、一ステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含むことによってもたらされ得る。滅菌注射用溶液は、例えば上に列挙されるような成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒および例えば上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
滅菌注射用溶液は、上に列挙されるような成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒および上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
治療の上記の方法および本明細書に記載される使用における投与計画は、最適な望ましい反応（例えば、治療反応）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割量が、時間をかけて投与されてもよく、または用量が、治療状況の要件によって示されるように比例的に減少または増加されてもよい。非経口組成物は、投与のしやすさおよび投与の均一性のために単位剤形で製剤化され得る。本明細書において使用される際の単位剤形は、治療される被験体のための統一された投与量として適した物理的に別個の単位を指し；各単位は、所要の医薬担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特性および得られる具体的な治療効果、ならびに（ｂ）個体における敏感性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）の治療のためのこのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限に左右され、それらに直接依存する。
抗ソルチリン抗体の有効投与量および投与計画は、治療される疾患または病態に応じて決まり、当業者によって決定され得る。治療的に有効な量の本発明の抗体の例示的な非限定的な範囲は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ／体重、例えば約０．１５、約０．２、約０．５、約１、約１．５または約２ｍｇ／ｋｇ／体重である。
当該技術分野において通常の技能を有する医師または獣医は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医は、医薬組成物に用いられる抗ソルチリン抗体の用量を、所望の治療効果を得るために必要とされるより少ないレベルから開始し、所望の効果が得られるまで投与量を徐々に増加し得る。一般に、本発明の組成物の好適な１日用量は、治療効果を生じるのに有効な最低用量である化合物の量であろう。このような有効用量は、一般に、上述される要因に応じて決まる。投与は、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下であり得、例えば標的の部位の近位で投与され得る。必要に応じて、医薬組成物の有効１日用量は、任意選択的に単位剤形で、１日を通して適切な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回またはそれ以上の分割用量として投与され得る。本発明の化合物は、単独で投与されることが可能であるが、上述されるように医薬組成物として化合物を投与するのが好ましい。
本発明の標識抗体またはその抗原結合フラグメントは、疾患または障害を検出、診断、または監視するために、診断目的で使用され得る。本発明は、限定はされないが、ＦＴＤ、ＡＬＳまたはＴＤＰ４３タンパク質症（アルツハイマー病（ＡＤ）などの）を含む、神経変性または認知疾患または障害の検出または診断を提供し、（ａ）ソルチリンに特異的に結合する１つまたは複数の抗体を用いて、被験体の細胞または組織試料内のピログルタミルＡβフラグメントの存在を測定する工程と；（ｂ）抗原のレベルを、制御レベル、例えば正常な組織試料におけるレベルと比較し、それによって、抗原の制御レベルと比較した、抗原の測定レベルの増加が、疾患または障害を示すか、または疾患または障害の重症度を示す工程とを含む。
本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、当該技術分野において周知の免疫組織化学法を用いて、生物学的試料内のソルチリンまたはソルチリンの抗原結合フラグメントを測定するのに使用され得る。タンパク質を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法アッセイ（ＲＩＡ）およびメソスケールディスカバリープラットフォーム（ｍｅｓｏｓｃａｌｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｐｌａｔｆｏｒｍ）ベースのアッセイ（ＭＳＤ）などの免疫測定法が挙げられる。好適な抗体標識が、このようなキットおよび方法に使用され得、当該技術分野において公知の標識としては、酵素標識（アルカリホスファターゼおよびグルコースオキシダーゼなど）；放射性同位体標識（ヨウ素（１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９ｍＴｃ）など）；および発光標識（ルミノールおよびルシフェラーゼなど）；および蛍光標識（フルオレセインおよびローダミンなど）が挙げられる。
標識抗ソルチリン抗体またはそれらのソルチリン結合フラグメントの存在は、診断目的で、インビボで検出され得る。一実施形態において、診断は、ａ）有効量のこのような標識分子を被験体に投与する工程；ｂ）投与後、所定の時間間隔にわたって待機して、標識分子を、Ａβ堆積の部位（もしあれば）で濃縮させ、非結合標識分子が、バックグラウンドレベルになるまで除去されるのを可能にする工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；およびｄ）バックグラウンドレベルを超える標識分子の検出が、被験体が疾患または障害に罹患していることを示すか、または疾患または障害の重症度を示すように、被験体中の標識分子を検出する工程を含む。このような実施形態によれば、分子は、当業者に公知の特定のイメージングシステムを用いた検出に好適なイメージング部分で標識される。バックグラウンドレベルは、検出された標識抗体の量を、特定のイメージングシステムのために予め決定された標準値と比較することを含む、当該技術分野において公知の様々な方法によって決定され得る。本発明の診断法に使用され得る方法およびシステムとしては、限定はされないが、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）などの全身スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波検査法が挙げられる。
さらなる態様において、本発明は、医療に使用するための、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
さらなる態様において、本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するのに使用するための、本発明の抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。
さらなる態様において、本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための薬剤の製造における、本発明の抗体、またはその抗原結合フラグメントの使用に関する。
さらなる態様において、本発明は、患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防または治療する方法であって、有効投与量の、本発明の抗体、またはその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む方法に関する。
本発明のそれらの態様の使用および方法において、疾患は、ＦＴＤ；ＡＬＳ；またはＴＤＰ４３タンパク質症（ＡＤなど）であるのが好ましい。
好ましくは、本発明のそれらの態様の使用および方法において、治療は、長期であり、好ましくは、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上にわたる。
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗体、またはその抗原結合フラグメントを含むキットを提供する。
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以前に公開されたようである文献の本明細書における列挙または説明は、文献が従来技術の一部であるかまたは普通の一般知識であることの確認として必ずしも解釈されるものではない。
実施形態
本文および実施例から明らかであろうように、本発明はさらに、以下の実施形態に関する。
１．ソルチリンに特異的に結合し、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合を阻害することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２．抗体が、無傷の抗体を含むかまたはそれからなる、実施形態１に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
３．抗原結合フラグメントが、Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖまたはジスルフィド結合Ｆｖ）；Ｆａｂ様フラグメント（例えばＦａｂフラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメント）；およびドメイン抗体（例えば単一のＶＨ可変領域またはＶＬ可変領域）からなる群から選択される抗原結合フラグメントを含むかまたはそれからなる、実施形態１または２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
４．抗体が、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の抗体からなる群から選択される、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
５．前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１７０に定義されるソルチリンのＤ領域に特異的に結合する、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
６．前記抗体またはそのフラグメントが、配列番号１７０に定義されるソルチリンのＤ領域の少なくとも３連続アミノ酸、例えば４、５、６または７連続アミノ酸に特異的に結合する、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
７．抗体または抗原結合フラグメントが、以下の特性：
（ｉ）０．５〜１０ｎＭ、例えば１〜５ｎＭまたは１〜２ｎＭのソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）、
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力
の１つまたは複数を示す、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
８．ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させる抗体またはそのフラグメントの能力が、ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を１０％以上だけ；例えば、２０％以上だけ；または３０％以上だけ減少させることを含む、実施形態７に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
９．ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する前記抗体またはそのフラグメント、抗体またはそのフラグメントの能力が、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、または１０ｎＭ〜１ｎＭ、または５ｎＭ〜１ｎＭのＩＣ５０で、ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害することを含む、実施形態７または８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１０．ヒトまたはヒト化抗体である、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１１．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＣＤＲ１〜３軽鎖の１つまたは複数を含む軽鎖可変領域、または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１２．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＣＤＲ１〜３軽鎖を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１１に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１３．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるアミノ酸配列ＶＬを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む、実施形態１１または１２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１４．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＬのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖を含む、実施形態１１〜１３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１５．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙される１つまたは複数のＣＤＲ１〜３重鎖、または４つ以下のアミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以下のアミノ酸差を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１６．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＣＤＲ１〜３重鎖を含む重鎖可変領域を含む、実施形態１５に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１７．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＨのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域を含む、実施形態１５または１６に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１８．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるアミノ酸配列ＶＬを含むかまたはそれからなる重鎖を含む、実施形態１５〜１７のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
１９．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＬのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域、および表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＨのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２０．表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＬのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖、および表５に定義される抗体のそれぞれについて列挙されるＶＨのアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２１．前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ソルチリンへの結合について、実施形態２０に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントと競合する、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２２．抗体または抗原結合フラグメントが、Ｆｃ領域を含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２３．抗体または抗原結合フラグメントが、生体内半減期を増加させるための部分をさらに含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２４．生体内半減期を増加させるための部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒト血清アルブミン、グリコシル化基、脂肪酸およびデキストランからなる群から選択される、実施形態２２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
２５．抗体または抗原結合フラグメントが、検出可能な部分をさらに含む、いずれかの先行する実施形態に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２６．検出可能な部分が、蛍光標識；化学発光標識；常磁性標識；放射性同位体標識；または酵素標識からなる群から選択される、実施形態２５に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
２７．検出可能な部分が、放射性同位体を含むかまたはそれからなる、実施形態２５または２６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
２８．放射性同位体が、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ，８９Ｚｒ、１２３Ｉおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、実施形態２６または２７に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
２９．検出可能な部分が、常磁性同位体を含むかまたはそれからなる、実施形態２５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
３０．常磁性同位体が、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、１６２Ｄｙ、５２Ｃｒおよび５６Ｆｅからなる群から選択される、実施形態２９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
３１．検出可能な部分が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波イメージングなどのイメージング技術によって検出可能である、実施形態２５〜３０のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
３２．検出可能な部分が、結合部分を介して、間接的に抗体またはその抗原結合フラグメントに結合される、実施形態２５〜３１のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
３３．結合部分が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０，四酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ−２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体および１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体からなる群から選択される、実施形態３２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
３４．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸分子。
３５．分子がｃＤＮＡ分子である、実施形態３４に記載の核酸分子。
３６．実施形態３４または３５に記載の核酸分子を含むベクター。
３７．実施形態３４〜３６のいずれかに記載の核酸分子を含む組み換え宿主細胞。
３８．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントを産生するための方法であって、コードされた抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で、実施形態３７に記載の宿主細胞を培養する工程を含む方法。
３９．先行する実施形態のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む調製物であって、前記調製物が、ソルチリンに結合することが可能でないかまたは調製物の抗ソルチリン機能性を実質的に変更しない自然発生する抗体を実質的に含まず、前記機能性が、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力；および／または
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を提供する能力
からなる群から選択される調製物。
４０．先行する実施形態のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む調製物であって、前記モノクローナル抗体が、天然抗ソルチリン抗体の構造と比べて、そのアミノ酸配列の構造変化を有し、前記構造変化により、前記モノクローナル抗体が、前記天然抗ソルチリン抗体によって示される機能性と比べて変化した機能性を示し、前記機能性が、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（ＫＤ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力；および／または
（ｖｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療を提供する能力
である調製物。
４１．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、または実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物、および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
４２．医療に使用するための、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、または実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物。
４３．患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防および／または治療するのに使用するための、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、または実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物。
４４．患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防および／または治療するための薬剤の製造における、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、または実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物の使用。
４５．疾患が、ＦＴＤ；ＡＬＳ；ＴＤＰ４３タンパク質症（ＡＤなど）からなる群から選択される、実施形態４３に記載の使用のための抗体、またはその抗原結合フラグメント、または実施形態４４に記載の使用。
４６．患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防または治療する方法であって、有効投与量の、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体またはそのフラグメント、実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態４１に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
４７．疾患が、ＦＴＤ；ＡＬＳ；またはＴＤＰ４３タンパク質症（ＡＤなど）からなる群から選択される、実施形態４３に記載の使用のための抗体、またはその抗原結合フラグメント、または実施形態４４に記載の使用、または実施形態４６に記載の方法。
４８．治療が長期である、実施形態４６または４７に記載の使用のための抗体、またはその抗原結合フラグメント；または使用；または方法。
４９．長期治療が、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上にわたる、実施形態４８に記載の使用のための抗体、またはその抗原結合フラグメント；または使用；または方法。
５０．ソルチリンに特異的に結合し、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合を阻害することが可能であるが、結合が、ソルチリンへのニューロテンシンまたはＡＦ３８４６９の結合を阻害しないかまたは実質的に阻害しない、実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態４１に記載の医薬組成物。
５１．実施形態１〜３３のいずれかに記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、実施形態３９〜４０のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態４１に記載の医薬組成物を含むキット。
これより、本発明の特定の態様を実施する好ましい非限定的な実施例が、添付の図を参照して説明される。
実施例１〜３は、ソルチリン構築物の生成を説明する
実施例１は、シャッフル構築物を開示する。実施例２は、ソルチリン構築物の発現を開示する。実施例３は、ソルチリン構築物の精製を開示する。
実施例４〜７は、ソルチリン抗体の生成を説明する
実施例４は、免疫化およびハイブリドーマを開示する。実施例５は、配列分析を開示する。実施例６は、抗体の精製を開示する。実施例７は、マウス抗体の生成を開示する。
実施例８〜１７は、ソルチリン抗体の特性評価を説明する
実施例８は、ソルチリンへの結合を開示する。実施例９は、ソルチリン抗体のクロスブロッキング能力を開示する。実施例１０は、ＨＴＲＦ ＰＧＲＮ−ソルチリン結合を開示する。実施例１１は、ＮＴＳ結合を開示する。実施例１２は、細胞ＰＧＲＮ結合およびエンドサイトーシスを開示する。実施例１３は、細胞外ＰＧＲＮレベルを開示する。実施例１４は、ｉＰＳＣ ＰＧＲＮレベルを開示する。実施例１５は、血漿ＰＧＲＮレベルを開示する。実施例１６は、ＨＤＸによるエピトープマッピングを開示する。実施例１７は、脳内のＰＧＲＮの微小透析を開示する。
実施例１
ハイブリドーマスクリーニングプロセスおよび抗体のパネルの多様化の両方に使用するために、いわゆる「シャッフル構築物」を設計し、構築し、産生し、ヒトソルチリンおよび著しく低い配列相同性を有する遠縁の種（テトラオドン）の両方に由来するアミノ酸配列を含有する一連のキメラソルチリン分子を作製した。特定のキメラ構築物への抗体の結合の喪失を除いて、これらのキメラ構築物のソルチリン構造全体および機能性が保持され得るという原理は、特定の交換された領域の結合の改善を示すであろう。可溶性細胞外領域（ＥＣＤ、ａａ １−７５５）構築物を、ＢＡＰタグ（ビオチンアクセプタペプチド）のいずれかで標識し、ビオチンリガーゼまたはＨｉｓタグの共発現によってタンパク質の「インビトロ」ビオチン化を可能にして、容易な精製を可能にした。以下のタンパク質をコードする発現ベクターを調製した：ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ０１−０５、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ０６−１０、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ１２３９０、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｈＢ４５６７８、ＳＯＲＴ−ＥＣＤＢＡＰ−ｔｅｔｒａ、ＳＯＲＴ、ＳＯＲＴ−ｔｅｔｒａ。
ソルチリン配列は、配列番号１６９〜１８０において見られ、図２は、ソルチリンシャッフル構築物への結合に基づいた抗体の領域割り当ての概略図を示す。
実施例２
抗体の発現の場合、実施例４、５および６に記載されるような、適切な重鎖および軽鎖ベクターを、ＨＥＫ−２９３Ｆ細胞において共発現させた。
実施例３：Ｈｉｓタグ化ソルチリンの精製
ＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓを、ＨＥＫ−２９３Ｆ細胞において発現させた。タンパク質中のＨｉｓ−タグは、固定化金属親和性クロマトグラフィーによる精製を可能にする。このプロセスにおいて、ＮｉＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｑｉａｇｅｎ）を、５０ｍＭのＮＡＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌおよび１０ｍＭのイミダゾールｐＨ８．０で平衡化する。カラムに、１分間の滞留時間で、Ｈｉｓタグ化タンパク質を充填する。カラムを、５０ｍＭのＮＡＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌおよび２０ｍＭのイミダゾールｐＨ８．０で洗浄する。タンパク質を、５０ｍＭのＮＡＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌおよび２５０ｍＭのイミダゾールｐＨ８．０で溶離する。続いて、タンパク質を、１０．０００ｍｗｃｏのカットオフを有するＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＰＢＳへと透析する。透析の後、タンパク質を、０．２ミクロンのＳＦＣＡフィルタ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて滅菌ろ過する。
ＨＥＫ２９３細胞を、ヒト野生型（ＷＴ）ソルチリン発現ベクターでトランスフェクトすることによって、Ｓ１８−ＨＥＫ細胞株を生成した。安定したトランスフェクトされた細胞が、選択薬剤の存在下における通過後に得られた。個々のクローンを、希釈クローニングによって選択した。クローンを、ＱＰＣＲを用いて、ソルチリンｍＲＮＡ発現について特性評価した。次に、最も高い発現クローンを、抗ソルチリンポリクローナル抗体（ポリクローナルヤギソルチリンビオチン化Ａｂ、Ｃａｔ．Ｎｏ：ＢＡＦ２９３４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ））を用いてＦＡＣＳ（Ｇｕａｖａ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって分析して、ソルチリンの表面発現レベルを決定した。
実施例４
Ａ−トランスジェニックマウスの免疫化手順
抗体ＨｕＭａｂソルチリンは、ＨｕＭＡｂマウス株ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７、ＨＣｏ２０、ＨＣｏ１２−ＢＡＬＢ／ｃ、ＨＣｏ１７−ＢＡＬＢ／ｃおよびＨＣｏ２０−ＢＡＬＢ／ｃ（ヒトモノクローナル抗体；Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）の免疫化から得られた。これらのマウスは、マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖およびマウスκ軽鎖をダブルノックアウトされ、これは、完全マウスの抗体の発現を実質的に不活性化する。様々なマウス株を、ヒトＩｇ重鎖およびヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の挿入によってトランスジェニックにし、これは、ヒトＶＨ（重鎖の可変領域）およびＶＬ（軽鎖の可変領域）遺伝子の数が異なる。ＨＣｏ１２−ＢＡＬＢ／ｃマウスは、ＫＣｏ５−ＢＡＬＢ／ｃ（κ軽鎖トランスジェニック）マウスとの異種交配によって得られた。
４８匹のマウスを、１４日間の間隔を空けて、２０μｇのＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓ（配列番号１７９）で腹腔内に（ＩＰ）および同じタンパク質で皮下に（ＳＣ、尾基底に）交互に免疫した。４回のＩＰおよび４回のＳＣで、最大で８回の免疫化を行った。
１つのプロトコルにおいて、第１の免疫化を、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ，ＵＳＡ）中のＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓで行い、次の免疫化を不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中で行った。第２のプロトコルは、全ての免疫化工程における補助剤としてＳＡＳを使用した。血清抗体価が十分であることが分かった（１／５０以下の血清の希釈物が、少なくとも２回連続の、隔週のスクリーニング事象において、抗原特異的スクリーニングアッセイにおいて陽性であることが分かった）とき、マウスに、融合の４および３日前に、１００μＬのＰＢＳ中の１０μｇのＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓタンパク質を静脈内に（ＩＶ）２回さらに投与した（ｂｏｏｓｔ）。
Ｂ−ＨｕＭａｂハイブリドーマ−生成
上に定義されるような十分な抗原特異的抗体価発現を有するＨｕＭＡｂマウスを殺処分し、腹部大動脈および大静脈に隣接する脾臓およびリンパ節を採取した。マウス骨髄腫細胞株との脾細胞およびリンパ節細胞の融合は、基本的に製造業者の指示にしたがって、ＣＥＥＦ ５０ Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｔｏ Ｐｕｌｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いた電気融合によって行った。融合細胞を、ＨｙＱ ｍＡＤＣＦ−Ｍａｂ（Ｐｅｒｂｉｏ）中の１０％のＦｅｔａｌ Ｃｌｏｎｅ Ｉ Ｂｏｖｉｎｅ血清（Ｐｅｒｂｉｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｃａｍｂｒｅｘ）、０．５Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．５Ｕ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｃａｍｂｒｅｘ）、５０μＭの２−メルカプトエタノール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、６００ｎｇ／ｍＬのインターロイキン６（ＩＬ−６）（Ｓｔｒａｔｈｍａｎｎ）、１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ）および０．５ｍｇ／ｍＬのカナマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する融合培地に播種した。１０日後、上清を収集し、細胞を、ＨｙＱ ｍＡＤＣＦ−Ｍａｂ中の１０％のＦｅｔａｌ Ｃｌｏｎｅ Ｉ Ｂｏｖｉｎｅ血清、０．５Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．５Ｕ／ｍＬのストレプトマイシン、６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６および１×ｐｒｏＨＴ（Ｃａｍｂｒｅｘ）を含有する収集培地で洗浄した。ハイブリドーマ培養物の上清を、一次スクリーニングアッセイおよびＳＯＲＴＥＣＤＢＡＰ（配列番号１７１）、ＳＯＲＴＥＣＤＢＡＰｈＢ０６−１０（配列番号１７６）、ＳＯＲＴＥＣＤＢＡＰｈＢ１２３９０（配列番号１７７）に結合されたストレプトアビジンビーズによってスクリーニングして、ハイブリドーマ産生ヒト（またはキメラ）抗ソルチリン抗体を検出した。最も良好な一次ウェルからのハイブリドーマ細胞を、４０％のＣｌｏｎｅＭｅｄｉａ（Ｇｅｎｅｔｉｘ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）および６０％のＨｙＱ ２×完全培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）から作製された半固形培地に播種した。各一次ウェルについて、Ｇｅｎｅｔｉｘ黒色６ウェルプレートのウェルを播種した。各ウェルから、ＣｌｏｎｅＰｉｘ ｓｙｓｔｅｍ（Ｇｅｎｅｔｉｘ）を用いて２５個のサブクローンを採取した。サブクローンを収集培地中に採取した。７日後、サブクローンの上清を、ソルチリン特異的ヒトＩｇＧ結合について再度スクリーニングし、ヒトＩｇＧ濃度を、Ｏｃｔｅｔ ３８４ｒｅｄ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて測定した。各一次ウェルから、最も良好なサブクローンを選択し、６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６、０．５Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．５Ｕ／ｍＬのストレプトマイシンおよび１×ｐｒｏＨＴのみを含有する展開培地（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）中で展開させた。このサブクローンを、１つの９６ウェルプレートウェルから１つの２４ウェルプレートウェルへ、４つの２４ウェルプレートウェルへ、６つの６ウェルプレートウェルへと展開させた。このプロセスによって得られたクローンを、初代クローン（ＰＣ）と表した。
本発明の抗ソルチリンＨｕＭａｂ抗体を同定し、配列分析を行った。
実施例５：ソルチリン特異的ＨｕＭａｂ可変領域の配列分析および発現ベクターにおけるクローニング
製造業者の指示にしたがって、ＳＭＡＲＴ ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、全ＲＮＡを、０．２〜５×１０６個のハイブリドーマ細胞から調製し、５’−ＲＡＣＥ−相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を、１００ｎｇの全ＲＮＡから調製した。ＶＨおよびＶＬコード領域を、ＰＣＲによって増幅させ、ライゲーション非依存クローニング（Ａｓｌａｎｉｄｉｓ，Ｃ．ａｎｄ Ｐ．Ｊ．ｄｅ Ｊｏｎｇ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １９９０；１８（２０）：６０６９−７４）によって、ｐ３３Ｇ１ｆおよびｐ３３κ発現ベクター（ヒトＩｇＧ１／κ定常領域コード配列を含む）中で、フレーム内で、直接クローニングした。各抗体について、１６個のＶＬクローンおよび１６個のＶＨクローンをシークエンシングした。適切なオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するクローンを、さらなる研究および発現のために選択した。重鎖および軽鎖の全ての組合せのベクターを、２９３ｆｅｃｔｉｎを用いて、ＦｒｅｅｓｔｙｌｅＴＭ ２９３−Ｆ細胞中で一時的に共発現させた。
得られた配列は、本明細書において配列表（配列番号１〜１６８）に示される。ＣＤＲ配列は、公開されている指針にしたがって定義された。
実施例６：抗体の精製
培養物の上清を、０．２μｍのデッドエンドフィルタ上でろ過し、５ｍＬのタンパク質Ａカラム（ｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ ＦＦ，Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に充填し、０．１Ｍのクエン酸−ＮａＯＨ、ｐＨ３で溶離した。溶出液を、２Ｍのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ９で直ちに中和し、１２．６ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４（Ｂ．Ｂｒａｕｎ）に対してＯ／Ｎ（一晩）透析した。透析の後、試料を、０．２μｍのデッドエンドフィルタ上で滅菌ろ過した。純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定し、濃度を比濁法および２８０ｎｍでの吸光度によって測定した。精製された抗体を分割し、−８０℃で貯蔵した。解凍してから、精製された抗体アリコートを４℃に保持した。質量分析法を行って、ハイブリドーマによって発現される抗体重鎖および軽鎖の分子量を特定した。
実施例７：マウス抗体（１Ｆ２および５Ｅ１）の生成
免疫原
キメラ免疫原ｈソルチリン−ＦＣ、（配列番号１６９からのヒトソルチリンＡＡ（７８−７５６））および配列番号１６９からのヒトＩｇＧ１−ＦＣ ＡＡ（１０４−３３０）をコードする合成遺伝子を、ｐｃＤＮＡ３．１へとクローニングし、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のｆｒｅｅｓｔｙｌｅシステムを用いた発現に使用した。抗原を、ヒト抗体について上述される抗体精製のための標準的な手順を用いたタンパク質−Ａ親和性クロマトグラフィーによって、細胞培養物上清から精製した。
ハイブリドーマ生成
ｈソルチリン−ＦＣを免疫原として使用し、５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。十分な免疫応答を有するマウスを、細胞融合およびハイブリドーマ生成のために選択した。ハイブリドーマ上清を、コーティング抗原としてｈソルチリン−ＥＣＤを用いたＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。９個の親クローンから得られた合計で１８個のハイブリドーマ細胞株を生成した。
発現
ハイブリドーマを、完全増殖培地、１０％のＦＢＳ＋抗生物質を含むＤＭＥＭ中で最初に増殖させ、続いて、発現実験のためのＣＤハイブリドーマ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に適応させた。
精製
マウスモノクローナル抗体を、供給業者（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって推奨される標準的な手順にしたがって、タンパク質−Ｇセファロースによってハイブリドーマ細胞培養物上清から精製した。
実施例８：ソルチリンの組み換え細胞外領域に対するソルチリン特異的ＨｕＭａｂおよびマウス抗体の親和性
ソルチリンへの抗ソルチリンＨｕＭａｂ抗体の結合反応速度を、Ｏｃｔｅｔ ３８４ＲＥＤ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて決定した。２μｇ／ｍｌのＨｕＭａｂ溶液を、試料希釈剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．Ｎｏ．１８−５０２８）中での希釈によって作製した。Ｐｒｏｔ Ａセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．ｎｏ．１８−０００４）を、少なくとも６００秒間にわたってキネティクス緩衝液（ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒ）（ＰＢＳ中１：１０の試料希釈剤）で予め湿らせた。続いて、センサーを、６００秒間にわたってＨｕＭａｂ溶液で固定した。ベースライン反応は、１２０秒間にわたってキネティクス緩衝液に浸漬することによって得られた。ＳＯＲＴＥＣＤ構築物の会合が、１０００秒間のインキュベーション中に行われた。この後、１００秒間にわたるキネティクス緩衝液中での解離が続いた。解離の後、センサーを再生し（１０ｍＭのグリシンｐＨ１．０）、５秒間にわたって３回中和した（キネティクス緩衝液）。全てのＨｕＭａｂを、４つの濃度のＳＯＲＴＥＣＤ構築物（１０、５、２．５および１．２５μｇ／ｍｌ）を用いて分析した。７６．８ｋＤＡの分子量を、ＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓに使用した。データを、グローバルフルフィット（ｇｌｏｂａｌ ｆｕｌｌ ｆｉｔ）を用いて、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ａｎａｌｙｓｉｓ ６．４ソフトウェアと適合させた。結果が図３および図４に示される。
実施例９：抗ソルチリンＨｕＭａｂの抗体クロスブロック
抗体クロスブロック試験を、Ｏｃｔｅｔ ３８４ＲＥＤ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて行った。２μｇ／ｍｌのＨｕＭａｂ抗体溶液を、試料希釈剤（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．Ｎｏ．１８−５０２８）中での希釈によって作製した。アミン反応性センサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ａｒｔ．ｎｏ．１８−０００８）を、ＨｕＭａｂの固定化に使用した。アミン反応性センサーへのカップリングの前に、ＨｕＭａｂを、ＭＥＳ ｐＨ６．０緩衝液（１８−５０２７）中で希釈した。カップリングを、３０℃および１０００ｒｐｍで、以下のとおりに行った：アミン反応性センサーを、ＰＢＳ中で予め湿らせ、続いて、３００秒間にわたって（製造業者の指示にしたがって）ＥＤＣ／ＮＨＳ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ．Ａｒｔ．ｎｏ．１８−１０３３／１８−１０３４）活性化溶液で活性化した。活性化センサーを、６００秒間、ＨｕＭａｂで固定化した。固定化センサーを、エタノールアミンとの残っているアミン反応性のためにクエンチした（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ｃａｔ ｎｏ．１８−１０３９）。クエンチの後、センサーを、使用するまでＰＢＳ中に入れた。クロスブロック分析は、３０℃および１０００ｒｐｍでベースライン反応を設定することから開始する。ベースライン反応は、１２０秒間にわたって試料希釈剤に浸漬することによって得られた。ＳＯＲＴＥＣＤＨｉｓの会合は、３００秒間にわたって行われ、その直後に、３００秒間にわたってＨｕＭａｂの会合が行われた。ＨｕＭａｂの会合の後、センサーを再生し（１０ｍＭのグリシンｐＨ１．０）、５秒間にわたって３回中和した（試料希釈剤）。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ａｎａｌｙｓｉｓ ６．４ソフトウェアを用いて処理した。
抗体を、異なるソルチリンシャッフル構築物（図２、図３および図４）についてのそれらの結合プロファイルに基づいて分類した。領域Ｄ（および領域Ｆ）からの全ての抗体が、ヒト野生型ソルチリンＥＣＤにおける同じ領域に結合することを確認するために、野生型ヒトソルチリンＥＣＤへの互いの結合をブロックするそれらの能力を、Ｏｃｔｅｔ３８４ ｒｅｄを用いたクロスブロッキング試験において特性評価した。例えば、同じ領域からの抗体を試験したとき、一次抗体は、二次抗体の結合をブロックし、逆も同様であった。一方、異なる領域からの抗体を試験したとき、１つのみの領域が一次抗体によってブロックされ、残りの領域は、二次抗体が結合するのに利用されるため、クロスブロッキングはなかった。図７は、全てのＤ領域およびＤ＋抗体が、互いにクロスブロックすることを示し、これは、シャッフル構築物に基づいた領域ＤおよびＤ＋に対する抗体の分類を裏付ける。さらに、これらのデータはまた、キメラソルチリン構築物が、天然のヒト野生型ソルチリンＥＣＤとの類似性を保持することを裏付ける。
実施例１０：抗ソルチリン抗体の存在下におけるソルチリン−ＰＧＲＮリガンド結合の特性評価
抗体のＩＣ５０値を、均一性時間分解蛍光（ＨＴＲＦ、ＣｉｓＢｉｏ）アッセイを用いて、ソルチリンへのＰＧＲＮ結合の移動を測定することによって決定した（図５および図６を参照）。
実験を、Ｇｒｅｉｎｅｒ ３８４ウェルの、白色の小容量マイクロタイタープレート（７８４０７５、Ｇｒｅｉｎｅｒ）において、２０μｌの総体積のアッセイ緩衝液（５０ｍＭのホスフェート、ｐＨ７．０、０．１％のＢＳＡ）中で行った。
抗体を、５０ｎＭのＨＩＳタグ化ソルチリンＥＣＤおよび４ｎＭのＰＧＲＮ（ＳＵＬＵ２０１１０９２４）とともに、室温で１５分間プレインキュベートしてから、コンジュゲート緩衝液（５０ｍＭのホスフェート、ｐＨ７．０、０．８ｍＭのＫＦ、０．１％のＢＳＡ）中で希釈された７ｎＭの抗６ＨＩＳ−ｄ２および０．７ｎＭの抗ＰＧＲＮ−Ｅｕクリプテート（Ｃｉｓｂｉｏ）を加えた。２０μＭのニューロテンシンを、陽性対照として使用し、緩衝液中のＤＭＳＯを、陰性対照として使用した。
アッセイプレートを、室温で６０分間および４℃で一晩インキュベートしてから、プレートをＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）において読み取った。
非標識ニューロテンシンおよびＤＭＳＯブランクを、それぞれアッセイ設備のための陽性および陰性対照として使用した。抗体の用量反応評価を、３倍希釈曲線において１μＭ〜５０ｐＭの１０の濃度を用いて行った。
半数阻害濃度（ＩＣ５０）を、ＸＬｆｉｔ ４（ＩＤＢＳ，ＵＫ）においてＳ字形濃度反応（可変の傾き）を用いた非線形回帰によって計算した（図５および６）。
実施例１１：抗ソルチリン抗体の存在下におけるソルチリン−ニューロテンシン結合の特性評価
ソルチリン特異的化合物ＡＦ３８４６９（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．２０１４ Ｊａｎ １；２４（１）：１７７−８０，２０１４）のＩＣ５０を、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を用いて、ソルチリンへの３Ｈ−ニューロテンシン結合の移動を測定することによって決定した。
実験を、３８４ウェルの乳白色のＯｐｔｉｐｌａｔｅ（６００７２９９、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）において４０μｌの総体積のアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＣａＣｌ２、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＴｗｅｅｎ−２０）中で行った。
１５０ｎＭのＨＩＳタグ化ソルチリンを、１μＭのソルチリン特異的抗体（ＩｇＧ１−６００３−０４５またはＩｇＧ１−６００３−０６８）を用いてもしくは用いずに、またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いて室温で１５分間プレインキュベートしてから、タンパク質溶液を、濃度系列５０μＭ〜２．５ｎＭでＡＦ３８４６９を含むウェルに加えた。混合物を、振とう器中で、室温で１５分間インキュベートしてから、５ｎＭの３Ｈ−ニューロテンシンおよびＮｉ−キレートイメージングビーズ（ＲＰＮＱ０２６６、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加えた。アッセイを、同じ条件下で、さらに６０分間インキュベートした。
６時間後、プレートを、ＶｉｅｗＬｕｘ（３６０秒の露光時間）において読みとった。非標識ニューロテンシンおよびＤＭＳＯブランクを、それぞれ陽性および陰性対照として使用した。
ＡＦ３８４６９についての用量反応評価を、３倍希釈曲線において５０μＭ〜２．５ｎＭの１０の濃度で行った。半数阻害濃度（ＩＣ５０）を、ＸＬｆｉｔ ４（ＩＤＢＳ，ＵＫ）においてＳ字形濃度反応（可変の傾き）を用いた非線形回帰によって計算した。結果が、図８において見られる。
実施例１２：抗ソルチリン抗体の存在下における細胞の表面へのソルチリン−ＰＧＲＮリガンド結合の特性評価
ソルチリンで一過性にトランスフェクトした細胞および安定した細胞株Ｓ１８−ＨＥＫ細胞（ヒトソルチリン過剰発現ＨＥＫ細胞）の両方を、このアッセイに使用した。細胞をトリプシン処理し、９６ウェルプレートにおいてウェル当たり４２，０００個の細胞の密度で平板培養した。一過性にトランスフェクトした細胞の場合、細胞を、９６ウェルプレートにおけるトランスフェクションの２４時間後に平板培養した。翌日、培地を完全に交換し、培地中で希釈された試験化合物を、３０分間にわたって細胞に加えてから、４時間にわたってＰＧＲＮを加えた。試験の最後に（４．５時間後）、細胞を固定し、ＰＧＲＮについて染色した。全ての染色されたプレートを、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ Ａｒｒａｙ Ｓｃａｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）によって分析し、ＰＧＲＮ／細胞／ウェルの平均染色強度を、分析に使用した。
アッセイに使用されるＰＧＲＮを、ＨＥＫ ２９３細胞内のＰＧＲＮ発現プラスミドの一過性トランスフェクションの後、培地から採取した。ＰＧＲＮレベルを、ＰＧＲＮ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ）を用いて測定した。
細胞に加えられたＰＧＲＮは、容易に結合され、取り込まれ、これは、ソルチリンでトランスフェクトしたウェルにおける増加した蛍光シグナルをもたらす。ニューロテンシンの添加は、ＰＧＲＮへのソルチリン結合を防ぎ、ＰＧＲＮ蛍光強度は、対照レベルと同様であり、これは、ＰＧＲＮが、ニューロテンシンの存在下で、結合されず、取り込まれなかったことを示す。
ソルチリンＨｕｍＡｂ（４５および６８）は両方とも、ニューロテンシンと同様の有効性でＰＧＲＮの取り込みをブロックした。アイソタイプ対照抗体、Ｂ１２は、ＰＧＲＮエンドサイトーシスまたは結合に対する効果を全く与えなかった。結果が、図９において見られる。
実施例１３：細胞外ＰＧＲＮレベルに対する抗体の効果
ＨＥＫ２９３細胞およびＳ１８−ＨＥＫ細胞は両方とも、刺激なしで、ＰＧＲＮを連続して培地中に分泌することが分かった。
抗体および対照の薬剤を、Ｓ１８−ＨＥＫ細胞に加えて、ＰＧＲＮに対する効果を評価した。ニューロテンシン、公知のペプチドソルチリンリガンド、またはヒト抗体、４５、６８および８１１の、Ｓ１８−ＨＥＫ細胞への添加は、細胞培地におけるＰＧＲＮを増加させた。ソルチリンヒト抗体の２つ（４５および６８）が、ＰＧＲＮレベルをそれぞれ２０２％および２０１％に高め、ニューロテンシンと同様の効果を与えた。抗体８１１は、対照Ｂ１２と比較して、培地中でＰＧＲＮを１４６％に増加させ、アイソタイプ対照抗体を、全ての試験において陰性対照として使用し、これは、ＰＧＲＮレベルに対する効果を全く示さなかった。これらの観察は、試験されるソルチリン抗体が、ＰＧＲＮのソルチリンに仲介される内在化を阻害し、それによって、細胞外ＰＧＲＮを増加させることを示す。
１日目に、Ｓ１８−ＨＥＫ細胞を、９６ウェルプレートに播種した。２４時間後、培地を、培地単独（対照）または試験化合物が補充された培地と完全に交換した。特に規定されない限り、全ての化合物を１０ｕＭで、および抗体を１００ｎＭで試験した。培地を３日目に収集し、ＰＧＲＮ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ）を用いて分析した。細胞生存性を、Ｃｅｌｌ ＴｉｔｅｒＧｌｏ（Ｐｒｏ Ｍｅｇａ）によって評価して、化合物の細胞傷害効果を評価した。培地中のＰＧＲＮレベルを、ＥＬＩＳＡによって分析し、値を対照ウェルに対して正規化した。結果が、図１０において見られる。
実施例１４：ｉＰＳＣ中の細胞外ＰＧＲＮについてのＥＬＩＳＡアッセイ
誘導された多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を、他で記載されるように（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１４ Ｓｅｐ ９；３（３）：４０４−１３．）ヒト線維芽細胞（１８歳の男性の正常なヒト皮膚線維芽細胞；Ｌｏｎｚａ）の非統合的（ｎｏｎ−ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）再プログラミングによって生成した。ＮＨＤＦ Ｋ１＿ｓｈｐ５３系統を、これらの試験に使用した。ｉＰＳＣを、ｍＴＥＳＲ培地中で最初に生成し、続いて、Ｐｌｕｒｉｐｒｏ（Ｃｅｌｌ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｓｙｓｔｅｍ）において単層中で培養した。ポリ−Ｌ−オルニチン／ラミニン被覆皿上で細胞を再度平板培養し、それらを、５００ｎｇ／ｍＬの脳（ｎｏｇｇｉｎ）および１０μＭのＳＢ４３１５４２とともにＮ３培地（ＲＡ、０．５ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ、０．５＆ ＮＥＡ、５０μＭの２−メルカプトエタノールおよび２．５ｍｇ／ｍＬのインスリンとともに０．５％のＮ２、１％のＢ２７が補充された、５０％のＤＭＥＭ／Ｆ１２＋５０％のＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地）中で培養することによって、神経分化を０日目に開始させた。培地を、毎日新しくした。脳／ＳＢ４３１５４２誘導の１１日後、細胞を、ｄｉｓｐａｓｅで分割し、Ｎ３培地中でポリ−Ｌ−オルニチン／ラミニンにおいて再度平板培養した。その時点から、Ｎ３培地を、２〜３日ごとに新しくし、細胞を、ａｃｃｕｔａｓｅを用いて、ほぼ１０〜１４日ごとに分割した。
神経分化ｉＰＳＣ細胞を、９６ウェルプレートへと平板培養した。１週間後、抗体を細胞に加えた。細胞からの培地を、４８時間または９６時間の時点で収集し、ヒトＰＧＲＮ ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって分析し、製造業者の指示にしたがって試料を分析した。
試験されるソルチリンヒト抗体（４５および６８）は、４８時間および９６時間で、培地中の可変のレベルで、ＰＧＲＮレベルを増加させた。Ｂ１２および抗Ｈｅｌは、対照アイソタイプ抗体（陰性対照）である。データは、平均±ＳＤとして示される。データを、一元配置Ａｎｏｖａ、続いてダネットの分析によって分析した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。結果が、図１２において見られる。
実施例１５
血漿中のＰＧＲＮレベルに対する抗体の効果を分析するために、ヒト化ソルチリンＫＩマウスに、単回または複数回注入（１０ｍｇ／ｋｇ）のソルチリン抗体またはアイソタイプ対照を、皮下注入によって与えた。動物に麻酔をかけ、投与後の様々な時点で殺処分し、血漿ＰＧＲＮレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。
Ａ．経時的試験：マウスを、抗体（ソルチリンｈｕｍａｂまたは対照ａｂ）で処理し、様々な時点で殺処分した。対照抗体（抗Ｈｅｌ）で処理されたマウスは、血漿ＰＧＲＮの変化を示さなかった一方、ソルチリンｈｕｍａｂ４５で処理されたマウスでは、ＰＧＲＮレベルの増加があり、これは、２４〜４８時間の間にピークになるように見え、次に、４日前後から徐々に減少した。ＰＧＲＮレベルは、７日目にまだ高かった。
Ｂ．亜慢性試験：経時的試験からのデータに基づいて、ソルチリンＫＩマウスに、亜慢性試験の間（４週間）安定した抗体レベルを維持するために、ソルチリンヒト抗体４５またはアイソタイプ対照抗体のいずれかを１０ｍｇ／ｋｇで皮下に（ｓ．ｃ）週に２回投与した。血液試料を、試験の開始時および週に１回収集して、血漿ＰＧＲＮの変化を追跡した。試験の開始時の血漿ＰＧＲＮレベルは、動物の両方の群で同様であった。より高いレベルの血漿ＰＧＲＮが、ソルチリン抗体４５で処理されたマウスにおいて、１週目から見られ、試験全体を通して高いままであった。対照ａｂで処理されたマウスは、血漿ＰＧＲＮの増加を全く示さず、ベースラインレベル（０週目）に保たれた。
Ｃ．用量反応試験：異なる用量（４つの用量：１０、２、０．４および０．１ｍｇ／ｋｇ）のソルチリン（４５）および対照抗体（抗Ｈｅｌ）を注入し、マウスを２日目に殺処分した。血漿ＰＧＲＮは、ソルチリンｈｕｍａｂで処理されたマウスにおいて１０ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇで高く、より低い用量は、血漿ＰＧＲＮに対する効果を与えず、これは、血漿ＰＧＲＮレベルに対するソルチリン抗体の用量依存的効果を明らかに示す。対照抗体で処理されたマウスは、ＰＧＲＮレベルの変化を全く示さなかった。
マウスに、０．４ｍｌのＡｖｅｒｔｉｎ ＩＰで麻酔をかけ、心臓の血液を収集し、５００ｕｌのｋＥＤＴＡバイアルに移した。試料を、４Ｃで１５分間にわたって３６００Ｇで遠心分離するまで氷上に保持した。血漿を、ｍｉｃｒｏｎｉｃバイアルにピペットで取り、−２０Ｃで凍結させた。試料中のＰＧＲＮを、製造業者の指示にしたがって、ＰＧＲＮ ＥＬＩＳＡキット（Ａｄｉｐｏｇｅｎ）を用いて測定した。結果が、図１３において見られる。
実施例１６：水素／重水素交換、続いて質量分析法によるプログラニュリン−ソルチリン相互作用を標的にする抗体のエピトープマッピング
水素／重水素交換、続いて質量分析法（ＨＤＸ−ＭＳ）において、タンパク質中の骨格アミド水素の交換速度が測定される。これによって、プロリン残基を除く全タンパク質骨格の立体配座動態を調べることが可能である。交換反応の速度は、骨格アミドの水素結合状態およびより低い程度に溶媒露出度（ｓｏｌｖｅｎｔ ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）によって決定される。例えばリガンドの存在によって引き起こされるこれらの２つのパラメータのわずかな変化が、重水素取り込みの変化として観察され得る。
重水素取り込みの変化を亜局在化する（ｓｕｂ−ｌｏｃａｌｉｚｅ）ために、タンパク質は、酸安定性プロテアーゼ（例えばペプシン）で処理され、これは、典型的に１０〜１５のアミノ酸の局所領域を生成する。リガンドの存在下で摂動を示す領域が、結合界面に直接関与され、または結合事象によってアロステリックに影響される。
抗体のエピトープマッピング
ソルチリン（配列番号１８８）の細胞外領域の重水素取り込みを、ｍＡｂ４５、ｍＡｂ６８、ｍＡｂ８１１およびＤ領域に結合しないｍＡｂ３０と示される抗体の非存在下および存在下で測定した。測定を定常状態条件下で行うのを確実にするために、複合体を２５℃で１５分間平衡化してから、交換反応を開始させた。交換反応を、重水素化緩衝液（９９％のＤ２Ｏ、２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＤｒｅａｄ＝７．６）中へのタンパク質試料の１：９（ｖ／ｖ）の希釈によって開始させた。様々な時点（１５秒、１分、１０分、１時間および８時間）の後、交換反応を、氷冷クエンチ緩衝液（２Ｍのグリシン、０．８Ｍのトリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ｐＨ＝２．３）による１：１（ｖ／ｖ）の希釈によってクエンチし、それによって、ｐＨを２．４６に低下させた。クエンチされた試料を、直ぐに−８０°の冷凍庫の中に入れ、分析するまで貯蔵した。完全に重水素化された対照試料を、重水素化変性緩衝液（６Ｍの塩化グアニジウム、９９％のＤ２Ｏ、２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＤｒｅａｄ＝７．６）中へのソルチリン試料の１：９（ｖ／ｖ）の希釈によって調製し、続いて、２５℃で１６時間インキュベートしてから、それらをクエンチし、上述されるように処理した。
クエンチされた試料を解凍し、家庭で充填される（ｈｏｍｅ−ｐａｃｋｅｄ）ペプシンカラム（６０μＬの内部体積、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．から入手したペプシンビーズ）を備えた冷却された（０℃）逆相ＵＰＬＣ−ＨＤＸ−システム（Ｗａｔｅｒｓ Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）に注入した。ここで、重水素化タンパク質試料を、２０℃でオンラインペプシン消化に供し、得られた消化性ペプチドを、逆相ＵＰＬＣによって分離した。ペプチドを、質量分析計（Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２質量分析計、Ｗａｔｅｒｓ Ｉｎｃ，ＵＫ）中へのエレクトロスプレーイオン化によってイオン化し、ここで、ペプチドを、最終的な質量決定の前にイオン移動度によってさらに分離した。
データ非依存（ＭＳｅ）およびデータ依存収集の組合せを用いたタンデム質量分析法によって、完全に還元された非重水素化試料においてペプチドの同定を行った。
データ分析
ペプチドの同定
収集された質量スペクトルは、ＧＦＰに対して補正されたロックマス（ｌｏｃｋ ｍａｓｓ）であり、前駆体およびフラグメントイオンを局所タンパク質データベースに適合させるＰＬＧＳ ３．０において分析された。全てのペプチドの同定を、手動で注意深く評価した。
重水素取り込みの決定：収集された質量スペクトルは、ＧＦＰに対して補正されたロックマスであり、ソフトウェアＤｙｎａｍＸ ３．０（Ｗａｔｅｒｓ Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて、抗体の非存在下または存在下でソルチリンの全てのペプチドについての重水素取り込みを決定した。
０．５Ｄより大きい交換からの保護が、抗体の存在下で観察された場合、ペプチドは、結合エピトープの一部であるとみなされた。
Figure 0006979397
実施例１７：覚醒自由行動動物の脳におけるプログラニュリンレベルを評価するための微小透析
プッシュプル微小透析方法を用いて、覚醒および自由行動マウスに由来する脳ＩＳＦプログラニュリン（ＰＲＧＮ）を評価した。マウスを、制御された温度（２２±１．５℃）および湿度条件（５５〜６５％）において単一の小屋に収容し、１２：１２時間の明／暗サイクル（０６：００ｈで照明をオンにする）で飼育した。食物および水は自由に摂取可能であった。この試験を、ヒトソルチリンノックイン（ｈＳＯＲＴ１）マウス（２２週齢）の海馬において行った。海馬における微小透析を可能にするために、マウスにイソフルランで麻酔をかけ、大脳内ガイドカニューレ（ＣＭＡ）を、脳内に定位に埋め込み、ＰａｘｉｎｏｓおよびＦｒａｎｋｌｉｎ ２００１の図解にしたがって、微小透析プローブを海馬内で位置決めした（プローブ先端の配置：ブレグマの３．１ｍｍ後方および２．８ｍｍ側方、および硬膜に対して１．３ｍｍ）。アクリルセメントを、ガイドカニューレの固定に使用した。カニューレの埋め込みの後、マウスを、透析前の７日間にわたって外科手術から回復させた。外科手術の日を含む最初の５日間、動物は、疼痛を有し、抗生物質処理を与えられた（ＲｉｍａｄｙｌおよびＮｏｒｏｍｏｘ Ｐｒｏｌｏｎｇａｔｕｍ）。微小透析実験の開始の２４時間前に、かん流液を管から引き出すことによって、プローブからのかん流液損失を防ぐために、蠕動ポンプをさらに出口管に連結した。かん流緩衝液として、２５％のウシアルブミン画分Ｖ（Ｓｉｇｍａ）を、使用当日に人工ＣＳＦ（ａＣＳＦ；ｍＭ単位：１４７ＮａＣｌ、２．７ＫＣｌ、１．２ＣａＣｌ２、０．８５ＭｇＣｌ２）で０．２％に希釈し、０．１μｍの膜に通してろ過した。ポンプの実際の流量を、プローブを連結させずに測定した。試料管を、所与の期間にわたって試料採取する前および後に秤量し、流量を計算した。次に、ポンプを、１μＬ／分の一定流量を有するように設定した。１２０分のサンプリング計画を、実験期間を通して使用し、１２の試料（１２時間の収集）を収集した（手順については、図１７）。実験の最後に、血液を動物から採取し、動物をかん流させ、脳を収集した。透析液、血漿および脳を、ＥＬＩＳＡによるＰＲＧＮの決定まで−８０℃で貯蔵した。
２４時間の間の２時間置きのＰＲＧＮレベルの測定が、図１７に示される。ｄｉ透析液の収集開始の２４時間後を除く全ての期間で、ＰＲＧＮレベルは、ＰＢＳで処理された動物からのものと比較したとき、増加したｍａｂ ＃４５で処理された動物において有意に増加される（図１８ａ）。ＰＲＧＮレベルは、海馬へのプローブ挿入の４時間後から１６時間後まで、時間が経過しても安定している。第１の透析液において、ＰＲＧＮは、おそらく海馬へのプローブ挿入により高い。ＰＲＧＮレベルは、おそらくプローブ膜の詰まりにより、プローブ挿入の１８時間後／２０時間後以上で減少していることが推測され、それは両方の群において起こった（他のプッシュプル試験において以前に観察された）。
各動物および次にプールされた全ての動物についての、抗体またはビヒクル処理の２４
時間後の１２の透析試料の平均±ＳＥＭを、ベースラインとして取った（図１８ｂ）。ｍ
ａｂ ＃４５およびＰＢＳで処理された動物間の差を、対応のないｔ検定を用いて分析し
た。ｍａｂ ＃４５で処理された動物におけるＰＲＧＮの基底レベルは、ＰＢＳで処理さ
れた動物からのものと比較したとき、有意に増加された（ｐ＜０．００１、Ｆ１０．０、
ＤＦｎ、９ Ｄｆｄ ７；３．３±０．３ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝１０対１．１±０．１ｎｇ／
ｍｌ、ｎ＝８）（図１８ｂ）。

本発明は以下の態様も含み得る。
［１］
ソルチリンに特異的に結合し、ソルチリンへのＰＧＲＮの結合を阻害するかまたは減少
させることが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２］
前記抗原結合フラグメントが、Ｆｖフラグメント（例えば一本鎖Ｆｖまたはジスルフィ
ド結合Ｆｖ）；Ｆａｂ様フラグメント（例えばＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメン
トまたはＦ（ａｂ）２フラグメント）；およびドメイン抗体（例えば単一のＶＨ可変領域
またはＶＬ可変領域）からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体、またはその抗
原結合フラグメント。
［３］
前記抗体が、無傷の抗体からなる、請求項１または２に記載の抗体。
［４］
前記抗体が、サブタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の抗体からなる
群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラ
グメント。
［５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１７０によって定義されるソル
チリンのＤ領域に結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原
結合フラグメント。
［６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１８５、１８６または１８７の
いずれか１つによって定義されるソルチリンのＤ領域に結合する、請求項１〜５のいずれ
か一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１８０によって定義されるソル
チリンのＡ領域にさらに結合する、請求項５または６に記載の抗体、またはその抗原結合
フラグメント。
［８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１８１、１８２、１８３または
１８４のいずれか１つによって定義されるソルチリンのＡ領域にさらに結合する、請求項
５または６に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１７０によって定義されるソル
チリンのＤ領域内の、少なくとも３連続アミノ酸、例えば４、５、６または７連続アミノ
酸に結合する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメ
ント。
［１０］
前記抗体または抗原結合フラグメントが、以下の特性：
ａ．０．５〜１０ｎＭ、例えば１〜５ｎＭまたは１〜２ｎＭの、ソルチリンに対する結
合親和性（ＫＤ）；
ｂ．ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
ｃ．ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／または
阻害する能力；
ｄ．ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、および／
または阻害する能力；
ｅ．脳内のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力、および／または
ｆ．ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／ま
たは濃度を増加させる能力
の１つまたは複数を示す、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結
合フラグメント。
［１１］
ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する前記抗体またはその
抗原結合フラグメントの前記能力が、時間分解蛍光アッセイ（ＨＴＦＲ）を用いて、５０
ｎＭ未満であるが、好ましくは、１０ｎＭ〜０．２ｎＭのＩＣ５０におけるものである、
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［１２］
ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する前記抗体またはその
抗原結合フラグメントの前記能力が、２２ｎＭ以下、例えば２２ｎＭ〜１ｎＭ、または１
０ｎＭ〜１ｎＭ、または５ｎＭ〜１ｎＭのＩＣ５０で、ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減
少させ、および／または阻害することを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体
、またはその抗原結合フラグメント。
［１３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト、ヒト化、組み換えまたはキメラ抗
体である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメン
ト。
［１４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［１５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号８を含む重鎖可変領域を含む、
請求項１４に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［１６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７を含む軽鎖可変領域を含む、
請求項１４に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［１７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項１５および１６に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１４に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［１８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［１９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１６を含む重鎖可変領域を含む
、請求項１８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１５を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項１８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項１９および２０に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項１８に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［２２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号２０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号２１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号２２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［２３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号２４を含む重鎖可変領域を含む
、請求項２２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号２３を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項２２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項２３および２４に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項２２に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［２６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号２５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号２６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号２７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号２８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号２９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号３０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［２７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号３２を含む重鎖可変領域を含む
、請求項２６に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号３１を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項２６に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［２９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項２７および２８に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項２６に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［３０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号３３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号３４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号３５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号３６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号３７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号３８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［３１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号４０を含む重鎖可変領域を含む
、請求項３０に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［３２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号３９を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項３０に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［３３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項３１および３２に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［３４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号４１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号４２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号４３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号４４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号４５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号４６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［３５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号４８を含む重鎖可変領域を含む
、請求項３４に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［３６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号４７を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項３４に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［３７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項３５および３６に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項３４に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［３８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号４９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号５０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号５１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号５２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号５３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号５４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［３９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号５６を含む重鎖可変領域を含む
、請求項３８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［４０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号５５を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項３８に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［４１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項３９および４０に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項３８に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［４２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号５７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号５８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号５９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号６０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号６１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号６２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［４３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６４を含む重鎖可変領域を含む
、請求項４２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［４４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６３を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項４２に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント。
［４５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項４３および４４に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項４２に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント。
［４６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号６５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号６６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号６７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号６８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号６９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号７０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［４７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７２を含む重鎖可変領域を含む
、請求項４６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［４８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７１を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項４６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［４９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項４７および４８に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項４６に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［５０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号７３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号７４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号７５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号７６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号７７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号７８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［５１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号８０を含む重鎖可変領域を含む
、請求項５０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［５２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号７９を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項５０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［５３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項５１および５２に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項５０に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［５４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号８１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号８２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号８３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号８４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号８６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［５５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号８８を含む重鎖可変領域を含む
、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［５６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号８７を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［５７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項５５および５６に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［５８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号８９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号９０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号９１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号９２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号９３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号９４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［５９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号９６を含む重鎖可変領域を含む
、請求項５８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［６０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号９５を含む軽鎖可変領域を含む
、請求項５８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［６１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項５９および６０に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項５８に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［６２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号９７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号９８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号９９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１００を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１０１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１０２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［６３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１０４を含む重鎖可変領域を含
む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［６４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１０３を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［６５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項６３および６４に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［６６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１０５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１０６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１０７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１０８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１０９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１１０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［６７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１１２を含む重鎖可変領域を含
む、請求項６６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［６８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１１１を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項６６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［６９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項６７および６８に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項６６に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［７０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１１３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１１４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１１５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１１６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１１７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１１８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［７１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１２０を含む重鎖可変領域を含
む、請求項７０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［７２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１１９を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項７０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［７３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項７１および７２に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項７０に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［７４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１２１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１２２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１２３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１２４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１２５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１２６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［７５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１２８を含む重鎖可変領域を含
む、請求項７４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［７６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１２７を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項７４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［７７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項７５および７６に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項７４に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［７８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１２９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１３０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１３１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１３２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１３３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１３４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［７９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１３６を含む重鎖可変領域を含
む、請求項７８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［８０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１３５を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項７８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［８１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項７９および８０に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項７８に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［８２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１３７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１３８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１３９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１４０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１４１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１４２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［８３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１４４を含む重鎖可変領域を含
む、請求項８２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［８４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１４３を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項８２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［８５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項８３および８４に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項８２に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［８６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１４５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１４６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１４７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１４８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１４９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１５０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［８７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１５２を含む重鎖可変領域を含
む、請求項８６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［８８］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１５１を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項８６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［８９］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項８７および８８に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項８６に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［９０］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１５３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１５４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１５５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１５６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１５７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１５８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［９１］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１６０を含む重鎖可変領域を含
む、請求項９０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［９２］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１５９を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項９０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［９３］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項９１および９２に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項９０に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［９４］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
ａ．配列番号１６１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
ｂ．配列番号１６２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
ｃ．配列番号１６３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
ｄ．配列番号１６４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
ｅ．配列番号１６５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
ｆ．配列番号１６６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント
。
［９５］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１６８を含む重鎖可変領域を含
む、請求項９４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［９６］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１６７を含む軽鎖可変領域を含
む、請求項９４に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
［９７］
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、請求項９５および９６に記載の重鎖可変
領域および軽鎖可変領域の両方を含む、請求項９４に記載の抗体またはその抗原結合フラ
グメント。
［９８］
請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む調
製物であって、前記調製物が、ソルチリンに結合することが可能でないかまたは前記調製
物の抗ソルチリン機能性を実質的に変更しない自然発生する抗体を実質的に含まず、前記
機能性が、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（Ｋ Ｄ ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／
または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、およ
び／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／
または濃度を増加させる能力；
（ｖｉ）脳内のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力および／または
（ｖｉｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化
症（ＡＬＳ）またはアルツハイマー病（ＡＤ）の治療を提供する能力
からなる群から選択される調製物。
［９９］
請求項１〜９８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグ
メントを含む調製物であって、前記モノクローナル抗体が、天然抗ソルチリン抗体の構造
と比べて、そのアミノ酸配列の構造変化を有し、前記構造変化
により、前記モノクローナ
ル抗体が、前記天然抗ソルチリン抗体によって示される機能性と比べて変化した機能性を
示し、前記機能性が、
（ｉ）ソルチリンに対する結合親和性（Ｋ Ｄ ）；
（ｉｉ）ソルチリンへのＰＧＲＮ結合を減少させ、および／または阻害する能力；
（ｉｉｉ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのクリアランスを減少させ、および／
または阻害する能力；
（ｉｖ）ソルチリン発現細胞によってＰＧＲＮのエンドサイトーシスを減少させ、およ
び／または阻害する能力；
（ｖ）ヒト−ソルチリン発現ノックインマウスにおいて血漿中のＰＧＲＮの量および／
または濃度を増加させる能力；
（ｖｉ）脳内のＰＧＲＮの量および／または濃度を増加させる能力、または
（ｖｉｉ）慢性的に投与されるときの、前頭側頭認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化
症（ＡＬＳ）および／またはアルツハイマー病（ＡＤ）の治療を提供する能力
からなる群から選択される調製物。
［１００］
請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、また
は請求項９８〜９９のいずれか一項に記載の調製物、および薬学的に許容できる担体を含
む医薬組成物。
［１０１］
医療に使用するための、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原
結合フラグメント、または請求項９８〜９９のいずれか一項に記載の調製物、または請求
項１００に記載の医薬組成物。
［１０２］
患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するのに使用するための、
請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、または
請求項９８〜９９のいずれか一項に記載の調製物、または請求項１００に記載の医薬組成
物。
［１０３］
患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための薬剤の製造にお
ける、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、
または請求項９８〜９９のいずれか一項に記載の調製物、または請求項１００に記載の医
薬組成物の使用。
［１０４］
患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を予防または治療する方法であっ
て、有効投与量の、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フ
ラグメント、または請求項９８〜９９のいずれか一項に記載の調製物、または請求項１０
０に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
［１０５］
前記疾患が、ＦＴＤ；ＡＬＳ；またはＴＤＰ４３タンパク質症（ＡＤなど）である、請
求項１０２に記載の使用のための抗体、またはその抗原結合フラグメント、または請求項
１０３に記載の使用、または請求項１０４に記載の方法。
［１０６］
前記治療が長期であり、好ましくは、少なくとも２週間、例えば少なくとも１か月間、
または少なくとも６か月間、または少なくとも１年間にわたる、請求項１０２に記載の使
用のための抗体、またはその抗原結合フラグメント、または請求項１０３に記載の使用、
または請求項１０４に記載の方法。
［１０７］
請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメント、また
は請求項９８〜９９のいずれか一項に記載の調製物、または請求項１００に記載の医薬組
成物を含むキット。
［１０８］
ヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、昆虫、酵母または細菌細胞株などの細胞株におい
て生産または製造された、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原
結合フラグメント。
［１０９］
ＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ−２１細胞株、マウス細胞株（骨髄腫細胞株など
）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ−１１細胞株、ＣＡＰ細胞株およびＨ
ｕＨ−７ヒト細胞株において生産される、請求項１０８に記載の抗体、またはその抗原結
合フラグメント。

Claims (19)

  1. 配列番号１７０に定義されるソルチリンのＤ領域に特異的に結合することができ、それによってソルチリンへのプログラニュリン（ＰＧＲＮ）の結合を阻害または減少するモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
    以下の抗体（３）〜（２１）からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合フラグメント：
    以下により特徴付けられる抗体（３）：
    ａ．配列番号１７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号２０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号２１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号２２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（４）：
    ａ．配列番号２５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号２６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号２７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号２８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号２９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号３０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（５）：
    ａ．配列番号３３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号３４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号３５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号３６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号３７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号３８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（６）：
    ａ．配列番号４１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号４２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号４３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号４４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号４５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号４６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（７）：
    ａ．配列番号４９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号５０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号５１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号５２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号５３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号５４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（８）：
    ａ．配列番号５７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号５８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号５９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号６０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号６１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号６２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（９）：
    ａ．配列番号６５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号６６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号６７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号６８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号６９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号７０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１０）：
    ａ．配列番号７３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号７４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号７５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号７６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号７７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号７８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１１）：
    ａ．配列番号８１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号８２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号８３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号８４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号８５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号８６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１２）：
    ａ．配列番号８９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号９０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号９１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号９２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号９３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号９４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１３）：
    ａ．配列番号９７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号９８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号９９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１００を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１０１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１０２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１４）：
    ａ．配列番号１０５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１０６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１０７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１０８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１０９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１１０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１５）：
    ａ．配列番号１１３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１１４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１１５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１１６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１１７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１１８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１６）：
    ａ．配列番号１２１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１２２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１２３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１２４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１２５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１２６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１７）：
    ａ．配列番号１２９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１３０を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１３１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１３２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１３３を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１３４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１８）：
    ａ．配列番号１３７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１３８を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１３９を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１４０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１４１を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１４２を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（１９）：
    ａ．配列番号１４５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１４６を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１４７を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１４８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１４９を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１５０を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、
    以下により特徴付けられる抗体（２０）：
    ａ．配列番号１５３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１５４を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１５５を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１５６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１５７を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１５８を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３、または
    以下により特徴付けられる抗体（２１）：
    ａ．配列番号１６１を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号１６２を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ２；
    ｃ．配列番号１６３を含む軽鎖可変領域Ｌ−ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１６４を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１６５を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号１６６を含む重鎖可変領域Ｈ−ＣＤＲ３。
  2. 前記抗体がさらに以下により特徴付けられる、請求項１に記載の抗体：
    前記抗体（３）が、配列番号２４を含む重鎖可変領域および配列番号２３を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（４）が、配列番号３２を含む重鎖可変領域および配列番号３１を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（５）が、配列番号４０を含む重鎖可変領域および配列番号３９を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（６）が、配列番号４８を含む重鎖可変領域および配列番号４７を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（７）が、配列番号５６を含む重鎖可変領域および配列番号５５を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（８）が、配列番号６４を含む重鎖可変領域および配列番号６３を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（９）が、配列番号７２を含む重鎖可変領域および配列番号７１を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１０）が、配列番号８０を含む重鎖可変領域および配列番号７９を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１１）が、配列番号８８を含む重鎖可変領域および配列番号８７を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１２）が、配列番号９６を含む重鎖可変領域および配列番号９５を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１３）が、配列番号１０４を含む重鎖可変領域および配列番号１０３を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１４）が、配列番号１１２を含む重鎖可変領域および配列番号１１１を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１５）が、配列番号１２０を含む重鎖可変領域および配列番号１１９を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１６）が、配列番号１２８を含む重鎖可変領域および配列番号１２７を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１７）が、配列番号１３６を含む重鎖可変領域および配列番号１３５を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１８）が、配列番号１４４を含む重鎖可変領域および配列番号１４３を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（１９）が、配列番号１５２を含む重鎖可変領域および配列番号１５１を含む軽鎖可変領域を含む、
    前記抗体（２０）が、配列番号１６０を含む重鎖可変領域および配列番号１５９を含む軽鎖可変領域を含む、または
    前記抗体（２１）が、配列番号１６８を含む重鎖可変領域および配列番号１６７を含む軽鎖可変領域を含む。
  3. 患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための、請求項１または２に記載の抗体。
  4. 請求項１または２に記載の抗体および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
  5. 患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための、請求項１または２に記載の抗体および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
  6. 前記疾患が、前頭側頭認知症；筋萎縮性側索硬化症；またはアルツハイマー病などのＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質−４３タンパク質症である、請求項５に記載の医薬組成物。
  7. 前記治療が、少なくとも２週間の慢性的投与を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
  8. 前記治療が、少なくとも１か月間の慢性的投与を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
  9. 前記治療が、少なくとも６か月間の慢性的投与を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
  10. 前記治療が、少なくとも１年間の慢性的投与を含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
  11. 患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための医薬を製造するための、請求項１または２に記載の抗体の使用。
  12. 患者の脳内の減少したＰＧＲＮレベルに関連する疾患を治療するための医薬を製造するための、請求項４に記載の医薬組成物の使用。
  13. 前記疾患が、前頭側頭認知症；筋萎縮性側索硬化症；またはアルツハイマー病などのＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質−４３タンパク質症である、請求項１１または１２に記載の使用。
  14. 前記治療が、少なくとも２週間の慢性的投与を含む、請求項１１または１２に記載の使用。
  15. 前記治療が、少なくとも１か月間の慢性的投与を含む、請求項１１または１２に記載の使用。
  16. 前記治療が、少なくとも６か月間の慢性的投与を含む、請求項１１または１２に記載の使用。
  17. 前記治療が、少なくとも１年間の慢性的投与を含む、請求項１１または１２に記載の使用。
  18. 請求項１または２に記載の抗体または請求項４に記載の医薬組成物を含むキット。
  19. ヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、昆虫、酵母または細菌細胞株などの細胞株において生産または製造された、請求項１または２に記載の抗体。
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