JP6974360B2 - 多分化能性幹細胞増殖促進剤 - Google Patents
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Description
本願は、2017年1月31日に日本に出願された特願2017−015313号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
[1] 多分化能性幹細胞の培養培地であって、β−ニコチンアミドモノヌクレオチド若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とし、β−ニコチンアミドモノヌクレオチド濃度が0.02〜5mMであり、前記多分化能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、及び間葉系幹細胞からなる群より選択される一種以上であり、前記多分化能性幹細胞が、多分化能を維持したまま培養されることを特徴とする、多分化能性幹細胞の培養培地。
[2] 多分化能性幹細胞を、β−ニコチンアミドモノヌクレオチド若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を含有する培養培地中で、多分化能を維持したまま培養し、前記培養培地のβ−ニコチンアミドモノヌクレオチド濃度が0.02〜5mMであり、前記多分化能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、及び間葉系幹細胞からなる群より選択される一種以上であることを特徴とする、多分化能性幹細胞の培養方法。
[3] 多分化能性幹細胞を、β−ニコチンアミドモノヌクレオチド若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を含有する培養培地中で、多分化能を維持したまま培養し、前記培養培地のβ−ニコチンアミドモノヌクレオチド濃度が0.02〜5mMであり、前記多分化能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、及び間葉系幹細胞からなる群より選択される一種以上であることを特徴とする、多分化能性幹細胞の増殖促進方法。
iPS細胞をβ−NMNを含有させた培養培地で培養し、増殖に対するβ−NMNの効果を調べた。
iPS細胞としては、ヒトiPS細胞である201B7株を用いた。また、iPS細胞の基本培養培地としては、基礎培地としてDMEM/F12に19.4mg/Lのインスリン、10.7mg/Lのトランスフェリン、100μg/LのbFGF、2μg/LのTGFβ、14μg/Lの亜セレン酸ナトリウム、64mg/Lのアスコルビン酸、543mg/LのNaHCO3を含有するE8培地(LTC)を用いた。
iPS細胞をβ−NMN又はNAMを含有させた培養培地で培養し、増殖に対するβ−NMNとNAMの作用を比較した。iPS細胞としては、201B7株を用いた。
iPS細胞をβ−NMN又はNAMを含有させた培養培地で培養し、増殖に対するβ−NMNとNAMの作用を比較した。iPS細胞としては、253G1株を用いた。
具体的には、201B7株に代えて253G1株を用いた以外は実施例1と同様にして、iPS細胞を培養し、WSTアッセイを行った。
iPS細胞をβ−NMNを含有させた培養培地で培養した後、多分化能性と増殖に対するβ−NMNの効果を調べた。iPS細胞としては、201B7株を用いた。多分化能性は、未分化性のマーカーであるアルカリフォスファターゼの酵素活性を指標にして調べた。
実施例1で用いた基本培養培地で培養しておいたiPS細胞を細胞剥離液によって培養容器から剥離させて回収した。回収した細胞を計数し、1000〜2000個/ウェルとなるように、マトリゲルでコーティングしておいた96ウェルプレートの各ウェルに播種した。このとき、各ウェルには、ROCK阻害剤と終濃度が0〜1mMとなるβ−NMNを添加した。当該96ウェルプレートを37℃で1日培養して細胞を接着させた後、各ウェルからROCK阻害剤を含む培地を除去し、基本培養培地にβ−NMNを終濃度が0〜1mMとなるように添加した培養培地に交換して3〜4日間培養した。
まず、実施例1で用いた基本培養培地で培養しておいたiPS細胞を細胞剥離液によって培養容器から剥離させて回収した。回収した細胞を計数し、2000個/ウェルとなるように、マトリゲルでコーティングしておいた96ウェルプレートの各ウェルに播種した。このとき、各ウェルには、ROCK阻害剤と終濃度が0〜1mMとなるβ−NMNを添加した。当該96ウェルプレートを37℃で1日培養して細胞を接着させた後、各ウェルからROCK阻害剤を含む培地を除去し、基本培養培地にβ−NMNを終濃度が0〜1mMとなるように添加した培養培地に交換して3〜4日間培養した。この間、培地交換は毎日行った。
ヒト間葉系幹細胞(ヒトMSC)をβ−NMNを含有させた培養培地で培養し、増殖に対するβ−NMNの効果を調べた。
ヒトMSCとしては、Lonza社製の細胞を用いた。また、ヒトMSCの基本培養培地としては、Lonza社製の専用維持培地を用いた。
β−NMN存在下で維持・増殖させたiPS細胞の多能性を確認した。iPS細胞としては、201B7株を用いた。
Claims (3)
- 多分化能性幹細胞の培養培地であって、
β−ニコチンアミドモノヌクレオチド若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とし、
β−ニコチンアミドモノヌクレオチド濃度が0.05〜5mMであり、
前記多分化能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、及び間葉系幹細胞からなる群より選択される一種以上であり、
前記多分化能性幹細胞が、多分化能を維持したまま培養されることを特徴とする、多分化能性幹細胞の培養培地。 - 多分化能性幹細胞を、β−ニコチンアミドモノヌクレオチド若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を含有する培養培地中で、多分化能を維持したまま培養し、
前記培養培地のβ−ニコチンアミドモノヌクレオチド濃度が0.05〜5mMであり、
前記多分化能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、及び間葉系幹細胞からなる群より選択される一種以上であることを特徴とする、多分化能性幹細胞の培養方法。 - 多分化能性幹細胞を、β−ニコチンアミドモノヌクレオチド若しくはその薬理学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を含有する培養培地中で、多分化能を維持したまま培養し、
前記培養培地のβ−ニコチンアミドモノヌクレオチド濃度が0.05〜5mMであり、
前記多分化能性幹細胞が、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、及び間葉系幹細胞からなる群より選択される一種以上であることを特徴とする、多分化能性幹細胞の増殖促進方法。
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