JP6921249B2 - 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 - Google Patents
向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6921249B2 JP6921249B2 JP2020004030A JP2020004030A JP6921249B2 JP 6921249 B2 JP6921249 B2 JP 6921249B2 JP 2020004030 A JP2020004030 A JP 2020004030A JP 2020004030 A JP2020004030 A JP 2020004030A JP 6921249 B2 JP6921249 B2 JP 6921249B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- umbilical cord
- stem cells
- derived adherent
- cell
- adherent stem
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0605—Cells from extra-embryonic tissues, e.g. placenta, amnion, yolk sac, Wharton's jelly
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0665—Blood-borne mesenchymal stem cells, e.g. from umbilical cord blood
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/02—Atmosphere, e.g. low oxygen conditions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/119—Other fibroblast growth factors, e.g. FGF-4, FGF-8, FGF-10
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/90—Polysaccharides
- C12N2501/91—Heparin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24003—Microbial collagenase (3.4.24.3)
Description
a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
b)CCND1、SERPINE1、PRNP、及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
e)CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、CD141+、CD61+、CD87+、MICA/B−及びSSEA4+からなる群から選択される1以上の表面抗原特性。
f)S100A10、BNIP3、IGFBP5、NDUFA4L2、DPYD及びSCARA3からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに多く発現されること;
g)IL8、ALDH1A1、DLC1、CTHRC1及びCPA4からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに少なく発現されること;
h)SNCA、DSG2、NRP2及びPLATからなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
i)TPMT、NAGK及びANXA4からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること。
a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
b)CCND1、SERPINE1、PRNP、及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
e)CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、CD141+、CD61+、CD87+、MICA/B−及びSSEA4+からなる群から選択される1以上の表面抗原特性。
f)S100A10、BNIP3、IGFBP5、NDUFA4L2、DPYD及びSCARA3からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに多く発現されること;
g)IL8、ALDH1A1、DLC1、CTHRC1及びCPA4からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに少なく発現されること;
h)SNCA、DSG2、NRP2及びPLATからなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
i)TPMT、NAGK及びANXA4からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること。
a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
b)CCND1、SERPINE1、PRNP及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
e)CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、CD141+、CD61+、CD87+、MICA/B−及びSSEA4+からなる群から選択される1以上の表面抗原特性。
f)S100A10、BNIP3、IGFBP5、NDUFA4L2、DPYD及びSCARA3からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに多く発現されること;
g)IL8、ALDH1A1、DLC1、CTHRC1及びCPA4からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに少なく発現されること;
h)SNCA、DSG2、NRP2及びPLATからなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
i)TPMT、NAGK及びANXA4からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること。
a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
b)CCND1、SERPINE1、PRNP及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
e)CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、CD141+、CD61+、CD87+、MICA/B−及びSSEA4+からなる群から選択される1以上の表面抗原特性。
f)S100A10、BNIP3、IGFBP5、NDUFA4L2、DPYD及びSCARA3からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに多く発現されること;
g)IL8、ALDH1A1、DLC1、CTHRC1及びCPA4からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに少なく発現されること;
h)SNCA、DSG2、NRP2及びPLATからなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
i)TPMT、NAGK及びANXA4からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること。
[1]下記(a)ないし(e)から選択される1以上の特性を有する向上された臍帯由来付着型幹細胞:
(a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること; (b)CCND1、SERPINE1、PRNP及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
(c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
(d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
(e)CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、CD141+、CD61+、CD87+、MICA/B−及びSSEA4+からなる群から選択される1以上の表面抗原特性。[2]前記向上された臍帯由来付着型幹細胞は、下記(f)ないし(i)から選択される1以上の特性をさらに有することを特徴とする請求項1に記載の細胞:
(f)S100A10、BNIP3、IGFBP5、NDUFA4L2、DPYD及びSCARA3からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに多く発現されること;
(g)IL8、ALDH1A1、DLC1、CTHRC1及びCPA4からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに少なく発現されること;
(h)SNCA、DSG2、NRP2及びPLATからなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
(i)TPMT、NAGK及びANXA4からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること。
[3](a)及び(b)の特性は、マイクロアレイ分析により、骨髄幹細胞に比べ、2倍以上の発現量に差を示すことを特徴とする実施形態1に記載の細胞。
[4]低酸素条件で培養した(f)及び(g)の特性は、マイクロアレイ分析及びプロテオミクスにより、正常酸素条件に比べ、2倍以上の発現量に差を示すことを特徴とする実施形態2に記載の細胞。
[5]前記細胞は、コロニー形成能を有することを特徴とする実施形態1に記載の細胞。[6]前記細胞は、IL−6、IL−8、G−CSF、GM−CSF、MCP−3、VEGF、GRO、IFNγ、IL−1a、IL−1b、IL−1ra、IL−3、IL−4、IL−7、IL−9、IL−12(p40)、IL12(P70)、IL−13、IL−14、IFNα2、MDC、sIL−2Ra、Eotaxin、Flt−3ligand、MCP−1、MIP−1a、MIP1b、RANTE、フラクタルカイン、IP−10、EGF、FGF−2、IGF−1SR、EpCAM、IGFBP3、またはそれらの組み合わせのタンパク質を分泌することを特徴とする実施形態1に記載の細胞。
[7]前記細胞は、哺乳動物臍帯のワルトンゼリー組織由来であることを特徴とする実施形態1に記載の細胞。
[8]分離された臍帯を培養容器に付着させて培養する段階と、
前記培養された臍帯に分離酵素を接触させ、向上された臍帯由来付着型幹細胞を分離する段階と、
前記分離された向上された臍帯由来付着型幹細胞を線維芽細胞成長因子−4(FGF−4)及びヘパリンを含む培地で継代培養する段階と、を含む向上された臍帯由来付着型幹細胞を製造する方法。
[9]前記継代培養する段階は、継代培養のための細胞移植前、動物由来成分がない(ACF)組み換え酵素の処理をさらに含むことを特徴とする実施形態8に記載の方法。
[10]前記継代培養する段階は、正常酸素条件である21%に比べ、低い低酸素条件で継代培養することを特徴とする実施形態8に記載の方法。
[11]前記向上された臍帯由来付着型幹細胞は、下記(a)ないし(e)から選択される1以上の特性を有することを特徴とする実施形態8に記載の方法:
(a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること; (b)CCND1、SERPINE1、PRNP及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
(c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
(d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
(e)CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、CD141+、CD61+、CD87+、MICA/B−及びSSEA4+からなる群から選択される1以上の表面抗原特性。[12]前記継代培養は、3ないし15継代まで行うことを特徴とする実施形態8に記載の方法。
[13]前記分離酵素は、コラゲナーゼであることを特徴とする実施形態8に記載の方法。
[14]実施形態1に記載の向上された臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む製剤。
[15]実施形態1に記載の向上された臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む炎症性疾患の治療または予防のための薬学的組成物。
[16]前記炎症性疾患は、気管支炎、胃炎、動脈硬化症、関節炎、炎症性腸疾患(IBD)、肝炎、胆嚢炎、真菌性感染症、胃潰瘍、喘息、アトピー性皮膚炎、腱炎及び腎臓炎からなる群から選択されることを特徴とする実施形態15に記載の薬学的組成物。
[17]実施形態1の向上された臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む虚血性疾患治療または予防のための薬学的組成物。
[18]前記虚血性疾患は、虚血性脳卒中、心筋梗塞、虚血性心臓疾患、虚血性脳疾患、虚血性心不全、虚血性腸炎、虚血性血管疾患、虚血性眼疾患、虚血性網膜症、虚血性緑内障、虚血性腎不全及び虚血性下肢疾患からなる群から選択されることを特徴とする実施形態17に記載の薬学的組成物。
[19]実施形態1に記載の向上された臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む神経退行性疾患の治療または予防のための薬学的組成物。[20]前記神経退行性疾患は、脊髄損傷、多発性硬化症、アルツハイマー病、前頭側頭葉痴呆、進行性核上麻痺、皮質基底核変性、ピック病及び拳闘選手痴呆(DP)からなる群から選択されることを特徴とする実施形態19に記載の薬学的組成物。
[21]炎症性疾患、虚血性疾患または神経退行性疾患の治療または予防に使用するための医薬の製造に使用するための実施形態1に記載の向上された臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液の使用。
[22]有効成分の実施形態1に記載の向上された臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を、それを必要とする個体に投与する段階を含む炎症性疾患、虚血性疾患または神経退行性疾患を治療または予防する方法。
以下、本発明について、実施例によってさらに詳細に説明する。しかし、それら実施例は、本発明について例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲は、それら実施例によって制限されるものではない。
1.向上された臍帯由来付着型幹細胞の製造及び培養方法による比較分析
(1.1)向上された臍帯由来付着型幹細胞の分離及び培養1
正常に分娩した健康な産婦から、事前に十分な説明に基づいた同意(informed consent)を受け、正常胎盤分娩時に収集された胎盤組織から臍帯を分離した。分離された臍帯を、Ca/Mg free DPBSで、2ないし5回洗浄して血液を除去した。その後、外部羊膜は剥がさず、動脈2本及び静脈1本を除去した後、1ないし5mmほどの大きさに臍帯を切った。その後、前記臍帯を培養容器に付着させ、10ないし15日培養を行い、前記培養された組織から細胞が伸び出るところを確認した後、5ないし6時間、200U/mlのコラゲナーゼIを処理し、向上された臍帯由来付着型幹細胞を分離した。前記コラゲナーゼIの処理前、後で臍帯付着した組織から細胞が伸び出るところを確認するために、光学顕微鏡下で、40x,100x倍率で細胞形態を確認し、その結果を図1Aに示した。
前記(1.1)において、コラゲナーゼIの処理を、臍帯を培養容器に付着する前に行ったことのみを除いては、前記(1.1)と同一方法により、向上された臍帯由来付着型幹細胞を分離及び培養した。
前記(1.1)で分離された幹細胞に対して、正常酸素条件(O2 21%)で遂行したことのみを除いては、前記(1.1)と同一方法により、向上された臍帯由来付着型幹細胞を分離及び培養した。
前記(1.1)及び(1.2)で分離された幹細胞の細胞回収率を比較するために、前記(1.2)で分離された幹細胞群、及び(1.1)で分離された幹細胞群を、それぞれG1及びG2と命名し、分離された細胞の形態を、光学顕微鏡下で、40x,100x倍率で細胞形態確認を行い、その結果を図1Bに示した。
前記(1.1)の低酸素条件、及び(1.2)の正常酸素条件において、1ないし20回継代培養(P1ないしP20)された付着型細胞の成長曲線及び倍化時間などを比較するために、それぞれ同数の細胞を6ウェルプレートに接種し、プレート底面積の70〜80%を占めるとき、細胞を収集した。その後、10μlの検体と、トリパンブルー試薬10μlとを混ぜたもの10μlを、血球計算機の一方測定部に注入した。自動細胞計数機を利用して細胞数を測定した。このとき、時間も共に記録し、倍加時間(doubling timeを計算した。該倍化時間は、細胞数が2倍になる時間であり、総細胞数と、それを測定した時間とを利用して計算し、その結果を図2A及び図2Bに示した。
(2.1)向上された臍帯由来付着型幹細胞の遺伝的安定性分析
前記(1.1)及び(1.3)で製造した向上された臍帯由来付着型幹細胞の遺伝的安定性を分析するために、GTG−Banding分析法を遂行した。
前記(1.1)で製造した向上された臍帯由来付着型幹細胞の表面タンパク質分析のために、流細胞分析及び免疫蛍光染色分析を行った。
(2.3.1)脂肪細胞分化能分析
向上された臍帯由来付着型幹細胞の脂肪細胞分化能分析は、下記の方法で行った。
向上された臍帯由来付着型幹細胞の骨細胞分化能分析は、下記の方法で行った。
向上された臍帯由来付着型幹細胞の軟骨細胞分化能分析は、下記の方法で行った。
前記(1.1)で製造した向上された臍帯由来付着型幹細胞の分泌タンパク質を分析するために、マルチプレックスビード分析(multiplex bead analysis)(MILLIPLEX Human Cytokine/Chemokine Panel 1,Merck Millipore,Billerica,Ma、米国)を行った。
前記(1.1)で製造された向上された臍帯由来付着型幹細胞の遺伝子発現を分析し、骨髄幹細胞と比較して分析した。
前記(1.1)で製造された向上された臍帯由来付着型幹細胞の抗炎症効果を分析するために、PBMC増殖抑制能、及び活性化されたPBMCから分泌されたIL−10を分析した。
前記(1.1)で製造された向上された臍帯由来付着型幹細胞の血管再生効果を分析するために、血管内皮細胞増殖分析を行った。
前記(1.1)で製造された向上された臍帯由来付着型幹細胞の神経再生効果を分析するために、神経細胞増殖分析を行った。
Claims (20)
- 下記(a)ないし(e)の特性を有する臍帯由来付着型幹細胞:
(a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
(b)TPMT、NAGK、ANXA4、CCND1、SERPINE1、PRNP及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
(c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
(d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
(e)Oct4−、CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、及びCD141+の抗原特性。 - 前記臍帯由来付着型幹細胞は、下記(f)ないし(h)から選択される1以上の特性をさらに有することを特徴とする請求項1に記載の細胞:
(f)S100A10、BNIP3、IGFBP5、NDUFA4L2、DPYD及びSCARA3からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに多く発現されること;
(g)IL8、ALDH1A1、DLC1、CTHRC1及びCPA4からなる群から選択される1以上が、正常酸素条件での培養に比べ、さらに少なく発現されること;
(h)SNCA、DSG2、NRP2及びPLATからなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること。 - (a)及び(b)の特性は、マイクロアレイ分析により、骨髄幹細胞に比べ、2倍以上の発現量に差を示すことを特徴とする請求項1に記載の細胞。
- 低酸素条件で培養した(f)及び(g)の特性は、マイクロアレイ分析又はプロテオミクスにより、正常酸素条件に比べ、2倍以上の発現量に差を示すことを特徴とする請求項2に記載の細胞。
- 前記細胞は、コロニー形成能を有することを特徴とする請求項1に記載の細胞。
- 前記細胞は、IL−6、IL−8、G−CSF、GM−CSF、MCP−3、VEGF、GRO、IFNγ、IL−1a、IL−1b、IL−1ra、IL−3、IL−4、IL−7、IL−9、IL−12(p40)、IL12(P70)、IL−13、IL−15、IFNα2、MDC、sIL−2Ra、エオタキシン、Flt−3リガンド、MCP−1、MIP−1a、MIP1b、RANTES、フラクタルカイン、IP−10、EGF、FGF−2、IGF−1SR、EpCAM、IGFBP3、またはそれらの組み合わせのタンパク質を分泌することを特徴とする請求項1に記載の細胞。
- 前記細胞は、哺乳動物臍帯のワルトンゼリー組織由来であることを特徴とする請求項1に記載の細胞。
- 分離された臍帯を培養容器に付着させて培養する段階と、
前記培養された臍帯に分離酵素を接触させ、臍帯由来付着型幹細胞を分離する段階と、
前記分離された臍帯由来付着型幹細胞を線維芽細胞成長因子−4(FGF−4)及びヘパリンを含む培地で継代培養する段階と、
を含む臍帯由来付着型幹細胞を製造する方法であって、
前記臍帯由来付着型幹細胞は、下記(a)ないし(e)の特性:
(a)COL1A1、IGFBP4、TAGLN、STC1、LRRC17及びIL33からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに多く発現されること;
(b)TPMT、NAGK、ANXA4、CCND1、SERPINE1、PRNP及びCYP1B1からなる群から選択される1以上が、骨髄幹細胞に比べ、さらに少なく発現されること;
(c)継代培養する間、付着型線維芽細胞の形態を維持すること;
(d)脂肪細胞、骨細胞または軟骨細胞への分化能;及び
(e)Oct4−、CD200+、Tra−1−60−、CD3−、CD1a−、CD11c−、CD16−、CD86−、CD8a−、CD40−、及びCD141+の抗原特性
を有することを特徴とする、方法。 - 前記継代培養する段階は、継代培養のための細胞移植前、動物由来成分がない(ACF)組み換え酵素の処理をさらに含むことを特徴とする請求項8に記載の方法。
- 前記継代培養する段階は、正常酸素条件である21%に比べ、低い低酸素条件で継代培養することを特徴とする請求項8に記載の方法。
- 前記継代培養は、3ないし15継代まで行うことを特徴とする請求項8に記載の方法。
- 前記分離酵素は、コラゲナーゼであることを特徴とする請求項8に記載の方法。
- 請求項1に記載の臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む製剤。
- 請求項1に記載の臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む炎症性疾患の治療または予防のための薬学的組成物。
- 前記炎症性疾患は、気管支炎、胃炎、動脈硬化症、関節炎、炎症性腸疾患(IBD)、肝炎、胆嚢炎、真菌性感染症、胃潰瘍、喘息、アトピー性皮膚炎、腱炎及び腎臓炎からなる群から選択されることを特徴とする請求項14に記載の薬学的組成物。
- 請求項1に記載の臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む虚血性疾患の治療または予防のための薬学的組成物。
- 前記虚血性疾患は、虚血性脳卒中、心筋梗塞、虚血性心臓疾患、虚血性脳疾患、虚血性心不全、虚血性腸炎、虚血性血管疾患、虚血性眼疾患、虚血性網膜症、虚血性緑内障、虚血性腎不全及び虚血性下肢疾患からなる群から選択されることを特徴とする請求項16に記載の薬学的組成物。
- 請求項1に記載の臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液を有効成分として含む神経退行性疾患の治療または予防のための薬学的組成物。
- 前記神経退行性疾患は、脊髄損傷、多発性硬化症、アルツハイマー病、前頭側頭葉痴呆、進行性核上麻痺、皮質基底核変性、ピック病及び拳闘選手痴呆(DP)からなる群から選択されることを特徴とする請求項18に記載の薬学的組成物。
- 炎症性疾患、虚血性疾患または神経退行性疾患の治療または予防に使用するための医薬の製造における請求項1に記載の臍帯由来付着型幹細胞、その細胞集団、またはその培養液の使用。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20150113858 | 2015-08-12 | ||
KR10-2015-0113858 | 2015-08-12 | ||
KR1020160102721A KR20170020273A (ko) | 2015-08-12 | 2016-08-12 | 향상된 탯줄 유래 부착형 줄기세포, 그의 제조방법 및 용도 |
KR10-2016-0102721 | 2016-08-12 | ||
JP2018507615A JP6648259B2 (ja) | 2015-08-12 | 2016-08-12 | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018507615A Division JP6648259B2 (ja) | 2015-08-12 | 2016-08-12 | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020072725A JP2020072725A (ja) | 2020-05-14 |
JP6921249B2 true JP6921249B2 (ja) | 2021-08-18 |
Family
ID=58315308
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018507615A Active JP6648259B2 (ja) | 2015-08-12 | 2016-08-12 | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 |
JP2020004030A Active JP6921249B2 (ja) | 2015-08-12 | 2020-01-15 | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018507615A Active JP6648259B2 (ja) | 2015-08-12 | 2016-08-12 | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11690877B2 (ja) |
EP (1) | EP3336176B1 (ja) |
JP (2) | JP6648259B2 (ja) |
KR (2) | KR20170020273A (ja) |
CN (1) | CN108138137A (ja) |
ES (1) | ES2914692T3 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108138137A (zh) * | 2015-08-12 | 2018-06-08 | 车比奥泰有限公司 | 增强的脐带来源的粘着干细胞、其制备方法及其用途 |
US20210338740A1 (en) * | 2018-11-08 | 2021-11-04 | Pluristem Ltd. | Therapeutic methods and compositions |
US11951134B2 (en) | 2019-09-30 | 2024-04-09 | North Carolina State University | Cationic platelet lysate compositions and related methods |
KR102224273B1 (ko) * | 2019-10-10 | 2021-03-08 | 고려대학교 산학협력단 | 줄기세포 유래 성숙 심근세포 및 이를 이용한 심혈관 질환 모델 |
KR20220055921A (ko) * | 2020-10-27 | 2022-05-04 | 서울대학교산학협력단 | 제대유래 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 건 또는 인대 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
KR20240029698A (ko) * | 2022-08-26 | 2024-03-06 | (주)메디노 | TIMP-1, MCP-1, GROα 및 IL-6를 발현하는 고효능 줄기세포를 포함하는 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 그 선별 방법 |
WO2024080661A1 (ko) * | 2022-10-12 | 2024-04-18 | (주) 엘피스셀테라퓨틱스 | 신규한 혈관 형성 줄기세포 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2589041C (en) * | 2004-12-23 | 2019-08-20 | Ethicon, Incorporated | Postpartum cells derived from umbilical cord tissue, and methods of making and using the same |
EP2205719A1 (en) * | 2007-09-26 | 2010-07-14 | Celgene Cellular Therapeutics | Angiogenic cells from human placental perfusate |
DK2329012T3 (da) * | 2008-08-20 | 2020-08-24 | Celularity Inc | Behandling af slagtilfælde under anvendelse af isolerede placentaceller |
AU2009316376B2 (en) * | 2008-11-21 | 2015-08-20 | Celularity Inc. | Treatment of diseases, disorders or conditions of the lung using placental cells |
WO2012131618A1 (en) | 2011-03-30 | 2012-10-04 | Stempeutics Research Private Limited | A composition comprising pooled wharton's jelly derived mesenchymal stem cells and methods thereof |
KR101462004B1 (ko) * | 2011-07-11 | 2014-11-19 | (주)차바이오메드 | 탯줄 추출물의 제조방법 및 그의 용도 |
EP3381456A1 (en) | 2011-12-02 | 2018-10-03 | Fate Therapeutics, Inc. | Improved methods for treating ischemia |
EP2798058B1 (en) * | 2011-12-30 | 2017-10-18 | Amit Patel | Methods and compositions for the clinical derivation of an allogenic cell and therapeutic uses |
IN2014MN01680A (ja) * | 2012-02-13 | 2015-07-03 | Gamida Cell Ltd | |
EP2850178A4 (en) * | 2012-05-18 | 2015-10-28 | Agency Science Tech & Res | EXOSOMES OF MESHCHYMIC STROKE CELL OF UMBILICAL CORD |
KR101384549B1 (ko) | 2012-07-11 | 2014-04-11 | 한밭대학교 산학협력단 | 볼트 접합부의 면외변형에 따른 최대 내력 저하의 판단방법 및 판단장치 |
CN105209606A (zh) | 2013-02-15 | 2015-12-30 | 圣光医疗财团 | 使用体细胞核转移产生单性生殖干细胞和患者特异性人胚胎干细胞 |
US20150104470A1 (en) * | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Neil H. Riordan | Immune modulation by peri-lymphatic or intra-lymphatic cell therapy |
WO2015170347A2 (en) * | 2014-05-09 | 2015-11-12 | Reelabs Private Limited | Foetal polymix of mesenchymal stem cells under hypoxic conditions for the treatment of clinical disorders |
CN108138137A (zh) * | 2015-08-12 | 2018-06-08 | 车比奥泰有限公司 | 增强的脐带来源的粘着干细胞、其制备方法及其用途 |
-
2016
- 2016-08-12 CN CN201680057936.5A patent/CN108138137A/zh active Pending
- 2016-08-12 EP EP16835478.5A patent/EP3336176B1/en active Active
- 2016-08-12 ES ES16835478T patent/ES2914692T3/es active Active
- 2016-08-12 US US15/752,057 patent/US11690877B2/en active Active
- 2016-08-12 KR KR1020160102721A patent/KR20170020273A/ko active Application Filing
- 2016-08-12 JP JP2018507615A patent/JP6648259B2/ja active Active
-
2019
- 2019-02-12 KR KR1020190016260A patent/KR102414662B1/ko active IP Right Grant
-
2020
- 2020-01-15 JP JP2020004030A patent/JP6921249B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6648259B2 (ja) | 2020-02-14 |
ES2914692T3 (es) | 2022-06-15 |
KR20190017006A (ko) | 2019-02-19 |
US20180236007A1 (en) | 2018-08-23 |
EP3336176A4 (en) | 2019-04-10 |
US11690877B2 (en) | 2023-07-04 |
JP2020072725A (ja) | 2020-05-14 |
EP3336176A1 (en) | 2018-06-20 |
KR20170020273A (ko) | 2017-02-22 |
CN108138137A (zh) | 2018-06-08 |
KR102414662B1 (ko) | 2022-07-01 |
JP2018522576A (ja) | 2018-08-16 |
EP3336176B1 (en) | 2022-04-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6921249B2 (ja) | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 | |
KR101389850B1 (ko) | 심장전구세포의 배양방법 및 그 용도 | |
JP6478243B2 (ja) | 間葉系幹細胞を培養するための方法 | |
JP7048977B2 (ja) | コロニー形成培地及びその使用 | |
US10479978B2 (en) | Postnatal adherent cells and preparation method therefor | |
CN103403150A (zh) | 利用羊膜来源贴壁细胞治疗与免疫相关的疾病和紊乱 | |
KR20180120261A (ko) | 크론병의 난치성 복합 항문주위 누공 치료용 지방 조직 유래 기질 줄기 세포 | |
WO2018030448A1 (ja) | 細胞培養用培地、及び細胞培養方法 | |
Preciado et al. | Mesenchymal stromal cell irradiation interferes with the adipogenic/osteogenic differentiation balance and improves their hematopoietic-supporting ability | |
JP2023052609A (ja) | 細胞培養物の製造方法 | |
CN105861425B (zh) | 透明质酸促人羊膜干细胞增殖的方法及其应用 | |
CN114317421B (zh) | 强化间充质干细胞促进血管生成的方法、组合物及应用 | |
KR20190092978A (ko) | 하비갑개 유래 중간엽 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경계질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
TWI642781B (zh) | 具優異細胞保護及免疫調節之quadri-正之基質細胞 | |
Lee et al. | The effect of fibroblast growth factor on distinct differentiation potential of cord blood–derived unrestricted somatic stem cells and Wharton's jelly–derived mesenchymal stem/stromal cells | |
Jiang et al. | Adipose tissue‑derived stem cells modulate immune function in vivo and promote long‑term hematopoiesis in vitro using the aGVHD model | |
US20230302059A1 (en) | Umbilical cord-derived adherent stem cells, preparation method therefor, and use thereof | |
Bohlouli et al. | Tissue buccal fat pad–stromal vascular fraction as a safe source in maxillofacial bone regeneration: A clinical pilot study | |
US20210180018A1 (en) | Composition for promoting stem cell differentiation, comprising progenitor cell culture solution and multilayer graphene film, and use thereof | |
KR102011634B1 (ko) | 향상된 산후 부착형 세포 및 그의 용도 | |
WO2018225703A1 (ja) | 分化誘導細胞の調製方法 | |
JP7441447B2 (ja) | ヘルニア嚢から間葉系幹細胞を単離精製する方法、及び組織修復するためのヘルニア嚢由来の間葉系幹細胞の使用 | |
RU2795621C2 (ru) | Способ получения клеток из зубной пульпы | |
KR20220164437A (ko) | 조직 내재성 uPAR+/Nestin+ 줄기세포 분리 배양 방법 및 이의 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200214 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200310 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210309 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210607 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210629 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210727 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6921249 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |