JP6929928B2 - Ｈｌａ−ｇ特異的キメラ抗原受容体、核酸、ｈｌａ−ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミド、ｈｌａ−ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞及び癌治療用の医薬組成物 - Google Patents

Description

本発明は、抗原又は抗体を含む医薬品に関し、特に、キメラ抗原受容体、キメラ抗原受容体をコードする核酸、キメラ抗原受容体発現プラスミド、キメラ抗原受容体発見細胞、癌治療用の医薬組成物及びキメラ抗原受容体発見細胞の用途に関する。

癌は、悪性腫瘍としても知られ、細胞の異常な増殖であり、これらの増殖性細胞が体の他の部分に侵入する可能性があり、細胞の分裂と増殖を制御するメカニズムの異常により引き起こされる疾患である。世界中で癌に苦しむ人口が増加する傾向になり、癌は中国人の死因のトップ１０の１つであり、２７年連続でその上位を占めている。

従来の腫瘍治療法としては、手術的治療、放射線療法、化学療法、及び標的療法を含む。腫瘍免疫療法は、上記の治療法以外の腫瘍を治療する別の方法であり、患者自体の免疫系を活性化し、腫瘍細胞又は腫瘍抗原物質を使用して生体の特異的細胞性免疫及び体液性免疫反応を誘導して、生体の抗がん能力を強化し、腫瘍の成長、拡大及び再発を阻止することで、腫瘍を除去又は制御する目的を達成する。

腫瘍免疫療法には、腫瘍ワクチン、細胞療法、免疫学的チェックポイント阻害薬という３つの主な方向性があり、キメラ抗原受容体免疫細胞技術は、近年に非常に急速に発展してきた細胞療法である。従来技術において、キメラ抗原受容体免疫細胞は、ある腫瘍抗原を認識可能な抗体の抗原結合部分と、ＣＤ３−δ鎖又はＦｃεＲＩγの細胞内部分とをインビトロでキメラタンパク質として結合し、遺伝子形質導入の方法によって患者の免疫細胞をトランスフェクトし、キメラ抗原受容体を発現させ、急性白血病及び非ホジキンリンパ腫の治療に顕著な治療効果を有し、がんの最も有望な治療法の１つと考えられている。ただし、現在のキメラ抗原受容体免疫細胞の細胞療法には、ユニークな腫瘍関連抗原を欠け、免疫細胞の腫瘍部位へのホーミング効率が低く、及び固形腫瘍の免疫抑制性微小環境を克服できないため、キメラ抗原受容体の固形腫瘍への効果は大きく制限されている。

本発明の目的は、ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体、単離された核酸、ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミド、ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞、癌治療用の医薬組成物及びＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞の用途を提供することにある。前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体は、優れた腫瘍細胞に特異的に結合される能力を有する。前記核酸は、前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体をコードする。前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドは、前記核酸を含む。前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞は、前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドを含み、前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を発見させ、腫瘍細胞を特異的に標的化し、標的外効果を回避し、更に腫瘍細胞を効果的に殺して、哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬の調製に用いられることができる。前記癌治療用の医薬組成物は、前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を含み、腫瘍細胞を効果的に殺し、更に癌を治療することができる。

本発明の一態様の実施形態によれば、抗原認識ドメイン、膜貫通ドメイン、ＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン及びＣＤ３ζ情報伝達ドメインを含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を提供する。前記抗原認識ドメインは、ヒト白血球抗原Ｇ（ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ Ｇ；ＨＬＡ−Ｇ）に特異的なモノクローナル抗体断片を含み、且つアミノ酸配列が配列識別番号１に示される。前記膜貫通ドメインは、アミノ酸配列が配列識別番号２に示される。前記ＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメインのアミノ酸配列は、配列識別番号３に示される。前記ＣＤ３ζ情報伝達ドメインのアミノ酸配列は、配列識別番号４に示される。

前記のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体によれば、抗原認識ドメインのＮ端に接続される、配列識別番号５に示されるシグナルペプチド鎖を更に含んでよい。

前記のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体によれば、抗原認識ドメイン及び膜貫通ドメインに接続されるＣＤ８ヒンジ領域を更に含んでよい。

本発明の態様の別の実施形態は、前段に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体をコードする単離された核酸において、順番に並んだ配列識別番号１２に示されるコードされた抗原認識ドメイン断片、配列識別番号１３に示されるコードされた膜貫通ドメイン断片、配列識別番号１４に示されるコードされたＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン断片及び配列識別番号１５に示されるコードされたＣＤ３ζ情報伝達ドメイン断片を含む単離された核酸を提供する。

前記の単離された核酸によれば、コードされた抗原認識ドメイン断片の５’端に接続される、配列識別番号１６に示されるコードされたシグナルペプチド鎖断片を更に含んでよい。

前記の単離された核酸によれば、コードされた抗原認識ドメイン断片及びコードされた膜貫通ドメイン断片に接続されるコードされたＣＤ８ヒンジ領域配列を更に含んでよい。

本発明の態様の更に１つの実施形態は、順番に並んだ配列識別番号１８に示されるプロモーター及び前段に記載の核酸を含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドを提供する。

本発明の態様のまた１つの実施形態は、免疫細胞及び前段に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドを含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を提供する。

前記のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞によれば、前記免疫細胞は、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞であってよい。好ましくは、前記ナチュラルキラー細胞は、ＮＫ−９２細胞株又は初代ナチュラルキラー細胞であってよい。

本発明の態様のまた１つの実施形態は、前段に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む癌治療用の医薬組成物を提供する。

前記の癌治療用の医薬組成物によれば、化学療法薬を更に含んでよい。好ましくは、前記化学療法薬は、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）又はカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）であってよい。

本発明の別の態様の実施形態は、哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬を調製するための、前段に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞の用途を提供する。

前記のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞の用途によれば、前記腫瘍細胞は、乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞又は卵巣癌細胞であってよい。

本発明の内容は、読者に本開示内容を基本的に理解させるように、本開示内容の簡略化された概要を提供することを意図する。この発明の内容は、本開示内容の完全な記述ではなく、また本発明実施例の重要な（又は肝心な）素子を指摘し、又は本発明の範囲を限定するものではない。

下記の添付図面の説明は、本発明の上記及び他の目的、特徴、メリット及び実施例をより分かりやすくするためのものである。
本発明の抗原認識ドメインのタンパク質構造を示す模式図である。 本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドの構築を示す模式図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。 腫瘍細胞が化学療法を受けた後のＨＬＡ−Ｇ発見量のフローサイトメトリー分析結果を示す統計図である。

本明細書の開示内容は、ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体、前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体をコードする核酸、前記核酸を含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミド、前記ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドを含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞、その用途、及びＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を含む癌治療用の医薬組成物を提出する。明細書において、腫瘍細胞の細胞試験で、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体が優れた腫瘍細胞に特異的に結合される能力を有し、特に腫瘍細胞の細胞膜で発見されたヒト白血球抗原Ｇ（ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ Ｇ；ＨＬＡ−Ｇ）に特異的に結合される能力を有するため、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を発見させるＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞を特異的に標的化し、標的外効果を回避し、更に腫瘍細胞を効果的に殺して、哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬の調製に用いられることができる。前記本発明の癌治療用の医薬組成物は、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を含み、更に化学療法薬を含んでよく、腫瘍細胞を効果的に殺し更に癌を治療することができる。

本明細書に記載の「ヒト白血球抗原Ｇ（ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ Ｇ；ＨＬＡ−Ｇ）」は、ＨＬＡ−Ｇ遺伝子によってコードされ、非定型的な最初の主要組織適合遺伝子複合体（ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ；ＭＨＣ）であり、重鎖が約４５ｋＤａである。ＨＬＡ−Ｇは、胎児由来の胎盤細胞に発現し、免疫応答の負の調節に活発に作用し、その役割が主に細胞傷害性免疫細胞の機能を阻害することにある。

下記の具体的な試験例において、例を挙げて本発明を説明し、本発明の当業者に寄与し、過度に解釈せずに本発明を完全に利用し実施できるようにし、これらの試験例を本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではないが、本発明の材料や方法を実施する方法を説明することを意図している。

［試験例］
一、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体、単離された核酸及びＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミド
本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体は、配列識別番号１に示される抗原認識ドメイン、配列識別番号２に示される膜貫通ドメイン、配列識別番号３に示されるＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン及び配列識別番号４に示されるＣＤ３ζ情報伝達ドメインを含む。抗原認識ドメインは、ヒト白血球抗原Ｇ（ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ Ｇ；ＨＬＡ−Ｇ）に特異的なモノクローナル抗体断片を含む。好ましくは、その抗原認識ドメインにおけるＮ端は、更に配列識別番号５に示されるシグナルペプチド鎖に接続され、及び前記抗原認識ドメイン及び膜貫通ドメインに接続される配列識別番号１１に示されるＣＤ８ヒンジ領域を更に含んでよい。詳しく言えば、配列識別番号１に示される抗原認識ドメインには、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む。重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、配列識別番号６に示されるＣＤＲＨ１、配列識別番号７に示されるＣＤＲＨ２及び配列識別番号８に示されるＣＤＲＨ３である。軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列は、配列識別番号９に示されるＣＤＲＬ１、配列がＲＭＳのＣＤＲＬ２及び配列識別番号１０に示されるＣＤＲＬ３である。本発明の抗原認識ドメインのタンパク質構造を示す模式図である図１を参照されたく、ドットのある環状領域は本発明の抗原認識ドメインにおける可変ドメインを示す。

本発明の単離された核酸は、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体をコードする。前記核酸は、順番に並んだ配列識別番号１２に示されるコードされた抗原認識ドメイン断片、配列識別番号１３に示されるコードされた膜貫通ドメイン断片、配列識別番号１４に示されるコードされたＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン断片及び配列識別番号１５に示されるコードされたＣＤ３ζ情報伝達ドメイン断片を含む。好ましくは、そのコードされた抗原認識ドメイン断片における５’端は、更に配列識別番号１６に示されるコードされたシグナルペプチド鎖断片に接続されてよく、また前記コードされた抗原認識ドメイン断片及び前記コードされた膜貫通ドメイン断片に接続される配列識別番号１７に示されるコードされたＣＤ８ヒンジ領域配列を更に含んでよい。配列識別番号１２に示されるコードされた抗原認識ドメイン断片は配列識別番号１に示される抗原認識ドメインをコードし、配列識別番号１３に示されるコードされた膜貫通ドメイン断片は配列識別番号２に示される膜貫通ドメインをコードし、配列識別番号１４に示されるコードされたＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン断片は配列識別番号３に示されるＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメインをコードし、配列識別番号１５に示されるコードされたＣＤ３ζ情報伝達ドメイン断片は配列識別番号４に示されるＣＤ３ζ情報伝達ドメインをコードし、配列識別番号１６に示されるコードされたシグナルペプチド鎖断片は配列識別番号５に示されるシグナルペプチド鎖をコードし、配列識別番号１７に示されるコードされたＣＤ８ヒンジ領域は配列識別番号１１に示されるＣＤ８ヒンジ領域をコードする。

本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドの構築を示す模式図である図２を参照されたい。詳しく言えば、本試験例に示される実施例において、ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドはＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−Ｈ−２８−ＩＬ２ＲＢ−Ｚプラスミドであり、そのインサーター（ｉｎｓｅｒｔ）断片が順番に並んだプロモーター、コードされた抗原認識ドメイン断片、コードされた膜貫通ドメイン断片、コードされたＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン断片及びコードされたＣＤ３ζ情報伝達ドメイン断片を含む。プロモーターは配列識別番号１８に示されるＥＦ−１ ａｌｐｈａプロモーターであり、コードされた抗原認識ドメイン断片の配列は、配列識別番号１２に示され、コードされた膜貫通ドメイン断片の配列は、配列識別番号１３に示され、コードされたＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン断片の配列は、配列識別番号１４に示され、コードされたＣＤ３ζ情報伝達ドメイン断片の配列は、配列識別番号１５に示される。また、インサーターは配列識別番号１６に示されるコードされたシグナルペプチド鎖断片と配列識別番号１７に示されるコードされたＣＤ８ヒンジ領域配列を更に含む。コードされたシグナルペプチド鎖断片はコードされた抗原認識ドメイン断片の５’端に接続され、コードされたＣＤ８ヒンジ領域配列は前記コードされた抗原認識ドメイン断片及びコードされた膜貫通ドメイン断片に接続される。更に、インサーター断片をＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓベクター（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，ＮＹ，ＵＳＡ）に構築して、Ｌｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−Ｈ−２８−ＩＬ２ＲＢ−Ｚプラスミドを得る。使用されるベクターはレンチウイルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）ベクターシステムであるため、構築されたＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドを発見細胞にトランスフェクトしてレンチウイルスを生産し、その後、レンチウイルスによりＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を免疫細胞に形質導入することができる。

二、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞、その用途及び癌治療用の医薬組成物
本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞は本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体をレンチウイルスにより免疫細胞に形質導入することにより得られた。好ましくは、前記免疫細胞は、Ｔ細胞又はナチュラルキラー細胞であってよい。より好ましくは、前記ナチュラルキラー細胞は、ＮＫ−９２細胞株又は初代ナチュラルキラー細胞であってよい。詳しく言えば、構築されたＬｅｎｔｉ−ＥＦ１ａ−Ｈ−２８−ＩＬ２ＲＢ−Ｚプラスミドを、まずｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により２９３Ｔ細胞株にトランスフェクトして本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を持つレンチウイルスを調製してから、また調製されたレンチウイルスを含む上清液と８μｇ／ｍｌのポリブレン（ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）のＯｐｔｉ−ＭＥＭ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により初代Ｔ細胞を３日間培養して、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を初代Ｔ細胞に形質導入した。そして調製されたレンチウイルスの上清液と５０μｇ／ｍｌを含む硫酸プロタミン（Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ、 Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）のＯｐｔｉ−ＭＥＭ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により初代ナチュラルキラー細胞を７日間培養して、本発明のキメラ抗原受容体を初代ナチュラルキラー細胞又はＮＫ−９２細胞株に形質導入して、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が得られた。得られたＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞は哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する効果を有し、哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬の調製に用いられることができる。好ましくは、腫瘍細胞は、乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞又は卵巣癌細胞であってよい。

本発明の癌治療用の医薬組成物は本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞及び薬学的に許容される担体を含む。好ましくは、前記癌治療用の医薬組成物は化学療法薬を更に含んでよい。より好ましくは、前記化学療法薬はドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）又はカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）であってよい。

以下の試験例において、データにより本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞及び本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を含む癌治療用の医薬組成物が多種類の哺乳類動物の腫瘍細胞の何れもに対してもその死亡を誘導する良好な効果を有することを証明する。試験に使用される腫瘍細胞はそれぞれヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧ−０５ＭＧ（以下、ＤＢＴＲＧと略す）、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１及びヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３である。使用される腫瘍細胞株の何れもアメリカンタイプカルチャーコレクションセンター（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）から購入した。ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株はトリプルネガティブ乳がん細胞株であり、即ちホルモン受容体（ＥＲ、ＰＲ）とＨＥＲ−２受容体が陰性であり、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ培地で培養された。ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧは１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地で培養された。ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１は１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地で培養された。ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３は１０％ウシ胎児血清を含むＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ培地で培養された。

２．１． 実施例１
本試験例において、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を初代ナチュラルキラー細胞に形質導入して本発明の実施例１のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞（以下、実施例１と略す）が得られた。更に実施例１及び実施例１を含む癌治療用の医薬組成物による乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞と卵巣癌細胞の死亡を誘導する効果をテストした。

まず、それぞれヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧ、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１及びヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３を１×１０^５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で１２ウェルプレートに播種してから、４８時間の培養後で試験を行った。試験で各種類の腫瘍細胞を６群に分け、それぞれ未処理の対照群、化学療法薬を処理する試験群１、親初代ナチュラルキラー細胞を処理する試験群２、親初代ナチュラルキラー細胞と化学療法薬を処理する試験群３、実施例１を処理する試験群４及び実施例１と化学療法薬を処理する試験群５である。ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の群において、使用される化学療法薬はドキソルビシン（２００ ｎＭ）であり、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの群において、使用される化学療法薬はテモゾロミド（８０μｇ／ｍｌ）であり、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の群において、使用される化学療法薬はゲムシタビン（２０μＭ）であり、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の群において、使用される化学療法薬はカルボプラチン（２０μＭ）である。試験群４と試験群５において、処理された実施例１の細胞数は１×１０^５ ｃｅｌｌｓであり、試験群２と試験群３において処理された親初代ナチュラルキラー細胞の細胞数も１×１０^５ ｃｅｌｌｓである。また、処理された各群の細胞をＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩにより細胞染色を行い、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣと／又はＰＩで染色された細胞の割合の合計を計算して、細胞毒性効果効果を得た。各群に対して３つの独立した重複試験を行った後、細胞毒性効果の統計結果を統計した。

図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃ、図３Ｄ、図３Ｅ、図３Ｆ、図３Ｇ及び図３Ｈは、実施例１が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である。図３Ａは実施例１がヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡を誘導する分析結果図である。図３Ｂは図３Ａの３つの重複試験後の統計図である。図３Ｃは実施例１がヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡を誘導する分析結果図である。図３Ｄは図３Ｃの３つの重複試験後の統計図である。図３Ｅは実施例１がヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡を誘導する分析結果図である。図３Ｆは図３Ｅの３つの重複試験後の統計図である。図３Ｇは実施例１がヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡を誘導する分析結果図である。図３Ｈは図３Ｇの３つの重複試験後の統計図である。図３Ｂ、図３Ｄ、図３Ｆと図３ＨにおけるＰは親初代ナチュラルキラー細胞を示す。

図３Ａと図３Ｂの結果から分かるように、未処理の対照群において、約５％のヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡が見られ、ドキソルビシンを処理する試験群１、親初代ナチュラルキラー細胞を処理する試験群２と親初代ナチュラルキラー細胞とドキソルビシンを処理する試験群３において、ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡率が増加するが、統計的な差がない。実施例１を処理する試験群４のそのヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡を誘導する死亡率は約７０％に達し、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）がある。また、実施例１とドキソルビシンを処理する試験群５のそのヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡を誘導する死亡率は更に８０％まで達し、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）もある。

図３Ｃと図３Ｄの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ５％未満のヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡が見られ、テモゾロミドを処理する試験群１、親初代ナチュラルキラー細胞を処理する試験群２と親初代ナチュラルキラー細胞とテモゾロミドを処理する試験群３において、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡率が増加するが、統計的な差がない。実施例１を処理する試験群４のそのヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡を誘導する死亡率が６０％を超え、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）がある。また、実施例１とテモゾロミドを処理する試験群５によって誘導されたヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡率更は更に９０％に近くなり、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）もある。

図３Ｅと図３Ｆの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ５％未満のヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡が見られ、ゲムシタビンを処理する試験群１、親初代ナチュラルキラー細胞を処理する試験群２と親初代ナチュラルキラー細胞とゲムシタビンを処理する試験群３において、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡率が増加するが、統計的な差がない。実施例１を処理する試験群４によって誘導されたヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡率は約５０％であり、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）がある。また、実施例１とゲムシタビンを処理する試験群５のそのヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡を誘導する死亡率は更に約７０％に達し、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）もある。

図３Ｇ及び図３Ｈの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ未満のヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡が見られ、カルボプラチンを処理する試験群１と親初代ナチュラルキラー細胞を処理する試験群２において、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率が増加するが、統計的な差がない。親初代ナチュラルキラー細胞とカルボプラチンを処理する試験群３において、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率は４０％に近くなるが、やはり統計的な差がない。実施例１を処理する試験群４によって誘導されたヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率は約５０％であり、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）がある。また、実施例１とカルボプラチンを処理する試験群５によって誘導されたヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率は更に７０％に近くなり、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）もある。

図３Ａ〜図３Ｈの結果から分かるように、実施例１を処理すると、乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞又は卵巣癌細胞の何れを殺す作用を有し、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞は哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬の調製に用いられることができる。また、同時に実施例１と化学療法薬を処理すると、乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞又は卵巣癌細胞の何れを殺す作用が更に顕著であり、本発明の癌治療用の医薬組成物は、好ましくは化学療法薬を含んでよく、腫瘍細胞を効果的に殺し、更に癌を治療することができることが明らかである。

２．２． 実施例２
本試験例において、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を初代Ｔ細胞に形質導入して本発明の実施例２のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞（以下、実施例２と略す）が得られた。更に実施例２及び実施例２を含む癌治療用の医薬組成物による乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞と卵巣癌細胞の死亡を誘導する効果をテストした。

まず、それぞれヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧ、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１及びヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３を１×１０^５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で１２ウェルプレートに播種してから、４８時間の培養後で試験を行った。試験で各種類の腫瘍細胞を６群に分け、それぞれ未処理の対照群、化学療法薬を処理する試験群１、親初代Ｔ細胞を処理する試験群２、親初代Ｔ細胞と化学療法薬を処理する試験群３、実施例１を処理する試験群４及び実施例１と化学療法薬を処理する試験群５である。ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の群において、使用される化学療法薬はドキソルビシン（２００ ｎＭ）であり、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの群において、使用される化学療法薬はテモゾロミド（８０μｇ／ｍｌ）であり、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の群において、使用される化学療法薬はゲムシタビン（２０μＭ）であり、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の群において、使用される化学療法薬はカルボプラチン（２０μＭ）である。試験群４と試験群５において、処理された実施例２の細胞数は１×１０^５ ｃｅｌｌｓであり、試験群２と試験群３において処理された親初代Ｔキラー細胞の細胞数も１×１０^５ ｃｅｌｌｓである。また、処理された各群の細胞をＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣとＰＩにより細胞染色を行い、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣと／又はＰＩで染色された細胞の割合の合計を計算して、細胞毒性効果効果を得た。各群に対して３つの独立した重複試験を行った後、細胞毒性効果の統計結果を統計した。

実施例２が腫瘍細胞死を誘導する分析結果図である図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ、図４Ｄ、図４Ｅ、図４Ｆ、図４Ｇ及び図４Ｈを参照されたい。図４Ａは実施例２を誘導するヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡を誘導する分析結果図である。図４Ｂは図４Ａの３つの重複試験後の統計図である。図４Ｃは実施例２がヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡を誘導する分析結果図である。図４Ｄは図４Ｃの３つの重複試験後の統計図である。図４Ｅは実施例２がヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡を誘導する分析結果図である。図４Ｆは図４Ｅの３つの重複試験後の統計図である。図４Ｇは実施例２がヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡を誘導する分析結果図である。図４Ｈは図４Ｇの統計図である。図４Ｂ、図４Ｄ、図４Ｆと図４ＨにおけるＰは親初代Ｔ細胞を示す。

図４Ａと図４Ｂの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ約１０％のヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡が見られ、ドキソルビシンを処理する試験群１、親初代Ｔ細胞を処理する試験群２と親初代Ｔ細胞とドキソルビシンを処理する試験群３において、ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡率が増加するが、統計的な差がない。実施例２を処理する試験群４のそのヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡を誘導する死亡率は約７０％に達し、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）がある。また、実施例２とドキソルビシンを処理する試験群５のそのヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の死亡を誘導する死亡率は更に８０％に近くなり、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）もある。

図４Ｃと図４Ｄの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ１０％未満のヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡が見られ、テモゾロミドを処理する試験群１とを処理する親初代Ｔ細胞の試験群２において、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡率が増加するが、統計的な差がない。親初代Ｔ細胞とテモゾロミドを処理する試験群３において、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡率は更に向上して４０％に近くなり、やはり統計的な差がない。実施例２を処理する試験群４によって誘導されたヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡率は７０％を超えてよく、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）がある。また、実施例２とテモゾロミドを処理する試験群５によって誘導されたヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの死亡率は更に８０％に近くなり、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）もある。

図４Ｅと図４Ｆの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ約５％のヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１が死亡し、ゲムシタビンを処理する試験群１と親初代Ｔ細胞を処理する試験群２において、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡率が増加するが、統計的な差がない。親初代Ｔ細胞とゲムシタビンを処理する試験群３において、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡率は更に向上して４０％に近くなってよい。実施例２を処理する試験群４によって誘導されたヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡率は向上して３０％を超えてよく、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）がある。また、実施例２とゲムシタビンを処理する試験群５によって誘導されたヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の死亡率は更に５０％を超え、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０１）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）もある。

図４Ｇ及び図４Ｈの結果から分かるように、未処理の対照群において、ただ５％未満のヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡が見られ、カルボプラチンを処理する試験群１において、親初代Ｔ細胞を処理する試験群２と親初代Ｔ細胞とカルボプラチンを処理する試験群３において、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率が増加するが、統計的な差がない。実施例２を処理する試験群４によって誘導されたヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率は８０％に近くなり、試験群２と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）がある。また、実施例２とカルボプラチンを処理する試験群５によって誘導されたヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の死亡率は更に８０％を超え、試験群４と比べると統計的な差（ｐ＜０．０５）があり、試験群３と比べると統計的な差（ｐ＜０．００１）もある。

図４Ａ〜図４Ｈの結果から分かるように、実施例２を処理すると、乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞又は卵巣癌細胞の何れを殺す作用を有し、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞は哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬の調製に用いられることができる。また、同時に実施例２と化学療法薬を処理すると、乳癌細胞、多形性膠芽腫細胞、膵臓癌細胞又は卵巣癌細胞の何れを殺す作用が更に顕著であり、本発明の癌治療用の医薬組成物は、好ましくは化学療法薬を含んでよく、腫瘍細胞を効果的に殺し、更に癌を治療することができることが明らかである。

２．３． 化学療法薬を処理すると腫瘍細胞の細胞膜上のヒト白血球抗原Ｇの発見を向上させる
本試験例は、更に同時に本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞と化学療法薬を処理する群がより優れた腫瘍細胞を殺す効果の原因を検討した。

まずそれぞれヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧ、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１及びヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３を２×１０^５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で６ウェルプレートに播種してから、翌日まで培養し細胞が付着した後試験を行った。試験で各種類の腫瘍細胞を２群に分け、それぞれ未処理の対照群及び化学療法薬を４８時間処理する化学療法群である。ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の群において、使用される化学療法薬はドキソルビシン（２００ ｎＭ）であり、ヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの群において、使用される化学療法薬はテモゾロミド（８０μｇ／ｍｌ）であり、ヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の群において、使用される化学療法薬はゲムシタビン（２０μＭ）であり、ヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の群において、使用される化学療法薬はカルボプラチン（２０μＭ）である。また処理された各群の腫瘍細胞をフローサイトメトリーにより腫瘍細胞の細胞表面のＨＬＡ−Ｇへの発見をテストした。

腫瘍細胞が化学療法を受けた後のＨＬＡ−Ｇ発見量のフローサイトメトリー分析結果を示す統計図である図５を参照されたい。図５において同一腫瘍細胞の対照群と化学療法群とが比べると、ドキソルビシンを処理してヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の細胞膜上のＨＬＡ−Ｇの発見（ｐ＜０．００１）を向上させ、テモゾロミドを処理してヒト悪性脳腫瘍細胞株ＤＢＴＲＧの細胞膜上のＨＬＡ−Ｇの発見（ｐ＜０．００１）を向上させ、ゲムシタビンを処理してヒト膵臓癌細胞株ＡｓＰＣ１の細胞膜上のＨＬＡ−Ｇの発見（ｐ＜０．００１）を向上させ、カルボプラチンを処理してヒト卵巣癌細胞株ＳＫＯＶ３の細胞膜上のＨＬＡ−Ｇの発見（ｐ＜０．００１）を向上させることができる。図５の結果から分かるように、化学療法薬を処理して腫瘍細胞の細胞膜上のＨＬＡ−Ｇの発見を向上させることができ、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞によって発見されたＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体はＨＬＡ−Ｇに特異的に結合されることができ、化学療法薬を処理した後また本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を処理し、又は同時に本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞と化学療法薬を処理して、より優れた腫瘍細胞を殺す効果を有することができる。

要するに、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体は、優れた腫瘍細胞に特異的に結合される能力を有し、特に腫瘍細胞の細胞膜上に発見されたＨＬＡ−Ｇに特異的に結合される能力を有するため、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体を発見させるＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞を特異的に標的化し、標的外効果を回避し、更に腫瘍細胞を効果的に殺して、哺乳類動物の腫瘍細胞死を誘導する薬の調製に用いられることができる。本発明の癌治療用の医薬組成物は、本発明のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞を含み、腫瘍細胞を効果的に殺し、更に癌を治療することができる。更に化学療法薬の癌治療用の医薬組成物を含み、それは更に腫瘍細胞の細胞膜が多くＨＬＡ−Ｇを発見させるように誘導することができるため、ＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞が腫瘍細胞を殺す作用を強めることができ、より優れた腫瘍細胞を殺す作用を有する。

本発明は、実施形態として上記の通り開示したが、これは本発明を限定するものではない。当業者は、本発明の精神と範囲から逸脱しない限り、各種の変更や修正を加えることができる。従って、本発明の保護範囲は、添付する特許請求の範囲に限定されるものを基準とする。

Claims (14)

1. ヒト白血球抗原Ｇ（ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ Ｇ；ＨＬＡ−Ｇ）に特異的なモノクローナル抗体断片を含み、アミノ酸配列が配列識別番号１に示される抗原認識ドメインと、
   アミノ酸配列が配列識別番号２に示される膜貫通ドメインと、
   アミノ酸配列が配列識別番号３に示されるＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメインと、
   アミノ酸配列が配列識別番号４に示されるＣＤ３ζ情報伝達ドメインと、
   を備えるＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体。
2. 前記抗原認識ドメインのＮ端に接続される、配列識別番号５に示されるシグナルペプチド鎖を更に備える請求項１に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体。
3. 前記抗原認識ドメイン及び前記膜貫通ドメインに接続されるＣＤ８ヒンジ領域を更に備える請求項１に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体。
4. 請求項１に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体をコードする単離された核酸において、
   順番に並んだ配列識別番号１２に示されるコードされた抗原認識ドメイン断片、配列識別番号１３に示されるコードされた膜貫通ドメイン断片、配列識別番号１４に示されるコードされたＩＬ２受容体β鎖情報伝達ドメイン断片及び配列識別番号１５に示されるコードされたＣＤ３ζ情報伝達ドメイン断片を含む単離された核酸。
5. 前記コードされた抗原認識ドメイン断片の５’端に接続される、配列識別番号１６に示されるコードされたシグナルペプチド鎖断片を更に備える請求項４に記載の核酸。
6. 前記コードされた抗原認識ドメイン断片及び前記コードされた膜貫通ドメイン断片に接続されるコードされたＣＤ８ヒンジ領域配列を更に備える請求項４に記載の核酸。
7. 順番に並んだ配列識別番号１８に示されるプロモーター及び請求項４に記載の核酸を含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミド。
8. 免疫細胞と、
   請求項７に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現プラスミドと、
   を含むＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞。
9. 前記免疫細胞は、Ｔ細胞である請求項８に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞。
10. 前記免疫細胞は、ナチュラルキラー細胞である請求項８に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞。
11. 前記ナチュラルキラー細胞は、ＮＫ−９２細胞株又は初代ナチュラルキラー細胞である請求項１０に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞。
12. 請求項８に記載のＨＬＡ−Ｇ特異的キメラ抗原受容体発現細胞と、
    薬学的に許容される担体と、
    を含む癌治療用の医薬組成物。
13. 化学療法薬を更に含む請求項１２に記載の癌治療用の医薬組成物。
14. 前記化学療法薬は、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）又はカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）である請求項１３に記載の癌治療用の医薬組成物。

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