JP6883102B2 - タンパク質含有液のろ過方法 - Google Patents
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Description
(1)処理すべき液をサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)等を用いて分画した際の三量体以上の多量体を、動的光散乱法(DLS)で測定したときの平均直径が100nm未満であること。
(2)処理すべき液をサイズ排除クロマトグラフィーチャートを用いて分画した際の三量体以上の多量体のピーク面積から算出される相対面積比と、ウイルス除去膜1m2あたり処理すべき総液量と、総タンパク質濃度と、から下記(1)式を用いて算出される、処理すべき液に含まれる多量体の量が、0.25g以上であること。
(ウイルス除去膜1m2あたり含まれる多量体量:g/m2)
=(1m2あたり処理すべき総液量:L/m2)×(総タンパク質濃度:g/L)×
(クロマトチャートのピーク面積から算出される三量体以上の多量体の相対面積比:%)
/100 (1)
T=(B20−A30)×CAVE (2)
なお、上記の方法では、直径20nm以上直径30nm以下の金コロイド捕捉部位を、直径30nmの金コロイドをろ過したウイルス除去膜における第1の到達位置と、直径20nmの金コロイドをろ過したウイルス除去膜における第2の到達位置と、の間の領域の厚みとして求めているが、誤差の範囲を除いて、直径20nm以上直径30nm以下の金コロイドであれば、上記の範囲に捕捉されることを確認している。
T=(E−D)×F (3)
α=100×(Tc0−Tc)÷(100−C) (4)
式中、αは相分離温度降下定数(℃)、Tc0は熱可塑性樹脂の結晶化温度(℃)、Tcは組成物の熱誘起固液相分離点(℃)、Cは組成物中の熱可塑性樹脂の濃度(wt%)を表す。
ドラフト比=(膜の引取速度)/(組成物の吐出口における吐出速度) (5)
組成物の吐出口における吐出速度
=(単位時間当りに吐出される組成物の体積)/(吐出口の面積) (6)
グラフト率(%)
=100×{(グラフト後の膜質量−グラフト前の膜質量)/グラフト前の膜質量}
(7)
(ウイルス除去膜の製造)
ポリフッ化ビニリデン樹脂(株式会社クレハ製、KF#1300)49wt%、フタル酸ジシクロヘキシル(北広ケミカル工株式会社製)51wt%からなる組成物を、ヘンシェルミキサーを用いて室温で攪拌混合した粉体をホッパーより投入し、二軸押出機(26mmφ、L/D=50)を用いて210.0℃で溶融混合し均一溶解したのち、225.0℃に温調された、内直径0.8mm、外直径1.05mmの環状オリフィスからなる紡口より吐出速度4.2g/分で中空糸状に押し出し、エアギャップを経たのち、図5に示す凝固浴温度で温調された水浴中で冷却固化させて、50m/分の速度でカセに巻き取った。この際、中空糸の内部には中空剤としてフタル酸ジブチル(大八化学工業株式会社製)を7.1g/分の速度で流した。製造例1から11において、フタル酸ジブチルは紡口の側方から導入し、紡口へ入る直前の温度と紡口から吐出された時の温度は、図5に示す値であった。また、エアギャップの際に、中空糸に側方から当たる風速は、2.7m/sであった。その後、2−プロパノール(株式会社トクヤマ製)でフタル酸ジシクロヘキシル及びフタル酸ジブチルを抽出除去し、付着した2−プロパノールを水で置換した後、水中に浸漬した状態で高圧蒸気滅菌装置を用いて125.0℃の熱処理を4時間施した。その後、付着した水を2−プロパノールで置換した後、60.0℃で真空乾燥することにより中空糸状の微多孔膜を得た。抽出から乾燥にかけての工程では、収縮を防止するために膜を定長状態に固定して処理を行った。
(1)中空糸の外径、内径、膜厚
中空糸形状の微多孔膜の外径、内径は、該膜の垂直割断面を実体顕微鏡(モリテック(株)製SCOPEMAN503)を使用して210倍の倍率で撮影することにより求めた。膜厚は中空糸の外直径と内直径との差の1/2として計算した。結果を、図5に示す。
ASTM F316−86に準拠したバブルポイント法により求まるバブルポイント(Pa)を測定した。膜を浸漬する試験液として表面張力が13.6mN/mのハイドロフルオロエーテル(3M社製 Novec(登録商標) 7200)を用いた。バブルポイントは、有効長8cmの中空糸膜一本をバブルポイント測定装置にセットした後、中空部側の徐々に圧力を上げ、膜を透過するガス流量が2.4E−3リットル/分となった時の圧力とした。結果を、図5に示す。
定圧デッドエンドろ過による温度25.0℃の純水の透過量を測定し、膜面積、ろ過圧力(0.1MPa)、及びろ過時間から、下記(8)式の通りに計算して純水透過速度とした。結果を、図5に示す。
純水透過速度(L/m2/hrs/0.1MPa)=透過量÷(膜面積×ろ過時間)
(8)
(1)金コロイド溶液の調製
粒径が10、15、20、及び30nmの金コロイドをそれぞれ含む溶液(Cytodiagnostics社製)を購入した。次に、紫外・可視分光光度計UVmini−1240(島津製作所製)にて測定した各金コロイド溶液の金コロイドに応じた最大吸収波長における吸光度が0.25になるよう、金コロイド溶液を、注射用蒸留水、ポリオキシエチレン−ナフチルエーテル(1.59vol%)、及びポリ(4−スチレンスルホン酸ナトリウム)(0.20vol%)で希釈した。
調製した金コロイド溶液のそれぞれ40mLを、196kPaの加圧下にて、製造例に係るウイルス除去膜でろ過した。ウイルス除去膜のろ過面積は、0.001m2であった。
紫外・可視分光光度計UVmini−1240(島津製作所製)を用いて、金コロイド溶液のそれぞれについて、金コロイドの最大吸収波長におけるろ過前の金コロイド溶液の吸光度Aと、ろ液の吸光度Bと、を測定し、下記(9)式で与えられる、製造例に係るウイルス除去膜による金コロイドの対数除去率(LRV)を算出した。結果を、図5に示す。
LRV=log10(A/B) (9)
金コロイド溶液をろ過した後の製造例に係るウイルス除去膜から切片(厚みは8μm)を切り出し、切片の断面において金コロイドによって染まった部分16カ所の輝度プロファイルを、光学顕微鏡(Biozero、BZ8100、キーエンス社製)で測定した。次に、定数(255)から測定した輝度プロファイルを引いた。その後、横軸に膜厚(100分率)、縦軸に輝度の変位を有するグラフを作成し、グラフに現れた輝度の変位のスペクトルの面積を算出した。さらに、16カ所における輝度の変位のスペクトルの面積の標準偏差を、16カ所における輝度の変位のスペクトルの面積の平均で除した値を、製造例に係るウイルス除去膜における金コロイド捕捉部位の金コロイドの捕捉量の変動係数を示す値として算出した。直径20nmの金コロイドのみを流したときの結果を、図5に示す。製造例に係るウイルスの除去膜における金コロイド捕捉部位における金コロイドの捕捉量の均一性が高いことが示された。また、製造例のなかでも、中空剤の入口温度と出口温度との温度差が、熱可塑性樹脂と可塑剤との均一溶液と接触する前後で小さいほど金コロイド捕捉部位における金コロイドの捕捉量の均一性が高くなる傾向にあり、また、紡口の中央部から中空剤を入れることで金コロイド捕捉部位における金コロイドの捕捉量の均一性が高くなる傾向にあった。
20及び30nmの金コロイド溶液をそれぞれろ過した湿潤状態のウイルス除去膜から切片(厚みは8μm)を切り出した。湿潤状態の切片の断面において金コロイドによって染まった部分16カ所の輝度プロファイルを、光学顕微鏡(Biozero、BZ8100、キーエンス社製)で測定した。ここで、膜厚方向において、ウイルス除去膜の一次側の表面から、金コロイドが捕捉された部位の最も一次側の表面に近い部分までの第1の距離aを測定した。また、膜厚方向において、ウイルス除去膜の一次側の表面から、金コロイドが捕捉された部位の最も二次側の表面に近い部分までの第2の距離bを測定した。
T=(B20−A30)×CAVE (10)
T=(B1−A1)×C (11)
直径15nmの金コロイド溶液をろ過した湿潤状態のウイルス除去膜から切片(厚みは8μm)を切り出した。湿潤状態の切片の断面において金コロイドによって染まった部分16カ所の輝度プロファイルを、光学顕微鏡(Biozero、BZ8100、キーエンス社製)で測定した。ここで、膜厚方向において、ウイルス除去膜の一次側の表面から、金コロイドが捕捉された部位の最も一次側の表面に近い部分までの第1の距離dを測定した。また、膜厚方向において、ウイルス除去膜の一次側の表面から、金コロイドが捕捉された部位の最も二次側の表面に近い部分までの第2の距離eを測定した。
T=(E−D)×F (12)
直径15nm、20nm及び30nmの金コロイド溶液をそれぞれろ過したウイルス除去膜から切片(厚みは8μm)を切り出した。切片の断面において金コロイドによって染まった部分16カ所の輝度プロファイルを、光学顕微鏡(Biozero、BZ8100、キーエンス社製)で測定した。ここで、膜厚方向において、ウイルス除去膜の一次側の表面から、金コロイドが捕捉された部位の最も一次側の表面に近い部分までの第1の距離aを測定した。また、膜厚方向において、ウイルス除去膜の一次側の表面から、金コロイドが捕捉された部位の最も二次側の表面に近い部分までの第2の距離bを測定した。
(1)ウイルス含有タンパク質溶液の調製
ポリクローナル抗体(ヒトIgG)(ヴェノグロブリン−IH、ベネシス社製)を用いて、抗体濃度が10mg/mLになるように注射用水(大塚製薬)で希釈した抗体溶液を得た。また、1mol/L NaCl水溶液を用いて塩濃度を0.1mol/Lに調整した。さらに、0.1mol/L HCl又は0.1mol/L NaOHを用いて、水素イオン指数(pH)を4.0に調整し、これをタンパク質溶液とした。得られたタンパク質溶液に、ブタパルボウイルス(PPV、社団法人動物用生物学的製剤協会)を1.0vol%添加し、よく攪拌して、ウイルス含有タンパク質溶液を得た。
196kPaのろ過圧力で、製造した膜面積0.001m2のウイルス除去膜を用いて、ろ過量が150L/m2に到達するまで、ウイルス含有タンパク質溶液のデッドエンドろ過を行った。
196kPaのろ過圧力で、製造した膜面積0.001m2のウイルス除去膜を用いて、ウイルス含有タンパク質溶液のデッドエンドろ過を行った。ろ過圧力は供給液容器側に圧力計を設置して測定した。15L/m2毎にろ液を採取し、最大でウイルス負荷量が14.0(Log10(TCID50/m2))になるまでろ過を実施した。
アメリカ培養細胞系統保存機関(ATCC)より入手し、培養したPK−13細胞(ATCC No.CRL−6489)を用意した。また、56.0℃の水浴で30分間加熱し非働化させた後の牛血清(Upstate社製)3vol%と、ペニシリン/ストレプトマイシン(+10000 Units/mL ペニシリン、+10000μg/mL ストレプトマイシン、インビトロジェン製)1vol%含有D−MEM(インビトロジェン製、高グルコース)と、の混合液を用意した。以下、この混合液を、3vol%FBS/D−MEMという。次に、PK−13細胞を3vol%FBS/D−MEMで希釈し、細胞濃度2.0×105(細胞/mL)の希釈細胞懸濁液を調製した。次に、96ウェル丸底細胞培養プレート(Falcon社製)を10枚準備し、全てのウェルに、希釈細胞懸濁液を100μLずつ分注した。
LRV=log10(C0/CF) (13)
ここで、C0は、ウイルス除去膜でろ過する前の元液(ウイルス含有タンパク質溶液)中の感染価を表し、CFはウイルス除去膜でろ過した後のろ過液中の感染価を表す。
圧力開放(Stop&Start)を含むプロセスのLRV:
LRV=log10(C0×150/(CF100×100+CF50×50))
(14)
ここで、C0は、ウイルス除去膜でろ過する前の元液(ウイルス含有タンパク質溶液)中の感染価を表し、CF100はウイルス除去膜で圧開放前まで100mL/0.001m2ろ過した後のろ過液プール中の感染価、CF50はウイルス除去膜で圧開放後3時間静置し、再加圧し50mL/0.001m2ろ過した後のろ過液プール中の感染価、を表す。
ウイルス除去率の測定において、検出限界より大きな値が得られた際のろ過量(=最大ろ過容量)から下記(15)式の算出方法でウイルス除去膜の最大捕捉容量を算出した。
最大捕捉容量(Log10(TCID50/m2))
=元液の感染価Log10((TCID50/mL)×最大ろ過容量(L/m2)×1000)
(15)
ヒト免疫グロブリン製剤(献血ヴェノグロブリンIH5%静注、日本血液製剤機構)を用いて、グロブリン終濃度2%、塩化ナトリウム濃度100mmol/Lの溶液を調製した。この溶液のpHは4.5であった。本溶液を室温にて1mol/L塩酸水溶液によりpH2.5に低下させ、1時間静置したのち、1mol/Lの水酸化ナトリウム水溶液にてpH4.5に戻し、24時間静置することでグロブリンの一部を多量体にした。なお、本実施例では、タンパク質を変性させるため、過酷な条件でのpH処理を用いて粒子状物を発生させた。以下この多量体含有溶液を溶液Aとする。
ヒト免疫グロブリン製剤(献血ヴェノグロブリンIH5%静注、日本血液製剤機構)を用いてグロブリン終濃度30mg/mL、塩化ナトリウム濃度50mmol/L、pH5.3の溶液を25mL調製し当該溶液に多量体を0.3mg含有するよう溶液Aを添加した。
実施例1で調製した溶液と同じ溶液に対して、プレフィルターによるろ過を行わず、直接ウイルス除去膜で3bar定圧ろ過したところ、図8に示すように、3時間かかっても約9.6mLしかろ過できず、この曲線から25mL全量ろ過するのに4900時間以上を要すると予想された。このときウイルス除去膜に負荷された多量体は1m2あたり1gである。本試験結果を、膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図9に示す。
実施例1と同様の方法で、グロブリン終濃度30mg/mL、塩化ナトリウム濃度50mmol/L、pH5.3の溶液を25mL調製し、当該溶液に多量体を1.03mg含有するよう溶液Aを添加した。
実施例2で調製した溶液と同じ溶液に対して、プレフィルターによるろ過を行わず、直接ウイルス除去膜で3bar定圧ろ過したところ、図10に示すように、3時間かかっても約7.7mLしかろ過できず、この曲線から25mL全量ろ過するのに150,000時間以上を要すると予想された。このときウイルス除去膜に負荷された多量体は1m2あたり3.4gである。本試験結果、を膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図9に示す。
実施例1と同様の方法で、グロブリン終濃度30mg/mL、塩化ナトリウム濃度50mmol/L、pH5.3の溶液を25mL調製し、当該溶液に多量体を0.15mg含有するよう溶液Aを添加した。プレフィルターとして、膜面積が5.8cm2であり、ポリエーテルスルホンからなる0.2μmの孔径の膜であるSupor(ポール)を用意し、0.2bar定圧ろ過した。プレフィルターは2個用意し、処理液の全量に対し半分量である12.5mLで1個目のフィルターから2個目のフィルターに接続し直した。得られたろ液を、製造例5と同じ条件で製造され、膜面積が3cm2であるウイルス除去膜で3bar定圧ろ過したところ、図11に示すように、調製した25mL全量ろ過するのに180分を要した。本試験結果、を膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図9に示す。
実施例3で調製した溶液と同じ溶液に対して、プレフィルターによるろ過を行わず、直接ウイルス除去膜で3bar定圧ろ過したところ、図11に示すように、3時間かかっても約15.9mLしかろ過できず、この曲線から25mL全量ろ過するのに1850時間以上を要すると予想された。このときウイルス除去膜に負荷された多量体は1m2あたり0.5gである。本試験結果を、膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図9に示す。
実施例1と同様の方法で、グロブリン終濃度30mg/mL、塩化ナトリウム濃度50mmol/L、pH5.3の溶液を25mL調製し、当該溶液に多量体を0.3mg含有するよう溶液Aを添加した。
実施例4で調製した溶液と同じ溶液に対して、プレフィルターによるろ過を行わず、直接ウイルス除去膜で3bar定圧ろ過したところ、図12に示すように、3時間かかっても約9.6mLしかろ過できず、この曲線から25mL全量ろ過するのに4900時間以上を要すると予想された。このときウイルス除去膜に負荷された多量体は1m2あたり1gである。本試験結果を、膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図9に示す。
実施例1と同様の方法で、グロブリン終濃度30mg/mL、塩化ナトリウム濃度50mmol/L、pH5.3の溶液を25mL調製し、当該溶液に多量体を1.03mg含有するよう溶液Aを添加した。
実施例5と同じ溶液に対し、プレフィルターとして、膜面積が5cm2であり、ポリアミドからなる0.1μmの孔径である膜が3層積層されたVirosartMax(ザルトリウス ステディム)を2個直列で連結したものを用意した。これを製造例5と同じ条件で製造され、膜面積が3cm2であるウイルス除去膜の上流に連結し、ウイルス除去膜にかかる圧力を3barになるよう調整しながら定圧ろ過したところ、図13に示すように、調製した25mL全量ろ過するのに340分を要した。本試験結果を、膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図14に示す。
実施例5と同じ溶液に対し、プレフィルターを用いないで直接製造例5と同じ条件で製造され、膜面積が3cm2であるウイルス除去膜の上流に連結し、圧力を3barになるよう調整しながら定圧ろ過したところ、図13に示すように、6時間かかっても約9.6mLしかろ過できず、この曲線から25mL全量ろ過するのに150,000時間以上を要すると予想された。このときウイルス除去膜に負荷された多量体は1m2あたり3.4gである。本試験結果を、膜面積あたり、総ろ過量に換算した結果を図14に示す。
(1)多量体およびウイルス含有タンパク質溶液の調製
ポリクローナル抗体(ヒトIgG)(ヴェノグロブリン−IH、ベネシス社製)を用いて、抗体濃度が30mg/mLになるように注射用水(大塚製薬)で希釈した抗体溶液を300mL得た。また、1mol/L NaCl水溶液を用いて塩濃度を0.1mol/Lに調整した。さらに、0.1mol/L HCl又は0.1mol/L NaOHを用いて、水素イオン指数(pH)を4.0に調整し、これをタンパク質溶液とした。得られたタンパク質溶液が多量体を0.1125mg含有するよう、タンパク質溶液に溶液Aを添加し、さらにブタパルボウイルス(PPV、社団法人動物用生物学的製剤協会)を3.0vol%添加し、よく攪拌して、多量体及びウイルス含有タンパク質溶液を得た。
196kPaのろ過圧力で、製造した膜面積0.0003m2のウイルス除去膜の前段にプレフィルターとしてVirosartMax(ザルトリウス ステディム)を連結して、多量体及びウイルス含有タンパク質溶液のデッドエンドろ過を行った。全量ろ過を行ったろ液にはウイルスが検出されなかった。
実施例1と同じ溶液をプレフィルターを用いずにデッドエンドろ過を行ったところ、途中60mL程度ろ過したところで急激にろ過速度が低下し、それ以上はろ過を行うのが困難であったため、約80mLろ過時点でろ過を中断した。中断するまでに得られたろ液にはウイルスが検出され、ウイルス除去膜がウイルスを除去しきれていなかった。この時全量ろ過していれば、ウイルス除去膜に負荷された多量体はウイルス除去膜1m2あたり、0.375gである。
2 二次側の表面
10 ウイルス除去膜
Claims (26)
- 20mg/mL以上100mg/mL以下の濃度でタンパク質を含有するタンパク質含有液のろ過方法であって、
前記タンパク質含有液を、孔径が0.08μmから0.25μmであり、疎水性樹脂からなるプレフィルターでろ過する前ろ過工程と、
前記前ろ過工程後に、前記タンパク質含有液を、合成高分子からなるウイルス除去膜でろ過するウイルス除去工程と、を含み、
前記前ろ過工程をされる前の前記タンパク質含有液が、平均直径が100nm未満である前記タンパク質の三量体以上の多量体を、前記ウイルス除去膜1m2あたり0.25g以上含んでおり、
前記プレフィルターが、負電荷を付与されたフィルターを除く、
方法。 - 前記プレフィルターが、ポリアミド、ポリスルホン系、及びフッ素系樹脂からなる群から選択される材料からなる、請求項1に記載の方法。
- 前記プレフィルターが、ポリエーテルスルホン又はポリフッ化ビニリデンからなる、請求項2に記載の方法。
- 前記前ろ過工程の前のタンパク質含有液が、前記タンパク質の多量体であって、平均直径が100nm以上である粒子状物をさらに含む、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記前ろ過工程の前に、前記タンパク質含有液に対し透析ろ過を行う、透析ろ過工程をさらに含む、請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記前ろ過工程の前に、前記タンパク質含有液に対し限外ろ過を行う、限外ろ過工程をさらに含む、請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記透析ろ過工程の後に、さらに限外ろ過工程及び透析ろ過工程を含まない、請求項5に記載の方法。
- 前記前ろ過工程の前に、タンジェンシャルフローろ過装置を用いてろ過を行うタンジェンシャルフローろ過工程をさらに含む、請求項1から4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記前ろ過工程の前に、前記タンパク質含有液を2時間以上撹拌する撹拌工程をさらに含む、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 前記前ろ過工程及び前記ウイルス除去工程の間に、他の工程を含まない、請求項1から9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記前ろ過工程及び前記ウイルス除去工程が、連続して行われる、請求項1から9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレフィルターがシート状のフィルターである、請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレフィルターが多層膜を含む、請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレフィルターが、各層でフィルターの孔径が異なる多層膜を含む、請求項1から11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレフィルターでろ過されたタンパク質含有液の粘度が、前記プレフィルターでろ過される前のタンパク質含有液の粘度よりも低い、請求項1から14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記タンパク質が抗体を含む、請求項1から15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記タンパク質がモノクローナル抗体を含む、請求項1から15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルス除去膜がフッ素系樹脂からなる、請求項1から17のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルス除去膜がポリフッ化ビニリデンからなる、請求項1から17のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルス除去膜によるパルボウイルスの対数除去率(LRV)が4.0以上である、請求項1から19のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルス除去膜が、
前記プレフィルターでろ過された前記タンパク質含有液が供給される一次側の表面と、
当該ウイルス除去膜を透過した透過液が排出される二次側の表面と、
を有し、
前記一次側から当該ウイルス除去膜に直径20nmの金コロイドを含有する溶液を供給して当該ウイルス除去膜で前記金コロイドを捕捉し、当該ウイルス除去膜の断面において輝度を測定すると、前記輝度の変位のスペクトルの面積値の標準偏差を前記輝度の変位のスペクトルの面積値の平均値で除した値が0.01以上1.50以下であり、
当該ウイルス除去膜の断面において、直径20nm以上直径30nm以下の金コロイドが捕捉される部位の厚さが、湿潤状態で、10μm以上30μm以下である、
請求項1から20のいずれか1項に記載の方法。 - 前記前ろ過工程をされる前のタンパク質含有液の水素イオン指数が、4.0以上8.0以下である、請求項1から21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記前ろ過工程をされる前のタンパク質含有液のイオン強度が、0mmol/L以上300mmol/L以下である、請求項1から22のいずれか1項に記載の方法。
- 前記前ろ過工程をされる前のタンパク質含有液が、糖類及び塩基性アミノ酸からなる群から選ばれる少なくとも一つを含む添加剤を含む、請求項1から23のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレフィルターが、定置滅菌可能である、請求項1から24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記プレフィルターが、疎水性相互作用により、前記多量体を吸着する、請求項1から25のいずれか1項に記載の方法。
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