JP6872392B2 - グルカゴン抑制剤、グルカゴン抑制用組成物およびグルカゴン抑制用食品組成物 - Google Patents
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ゴボウシ中のβ−グルコシダーゼ活性は、以下の方法で測定した。産地やロットが異なるゴボウシをウイレー氏粉砕機により粉砕し、このゴボウシ粉砕品0.1gを10mLの水で希釈し、試料溶液とした。
酵素活性(U/g)=(試料溶液の吸光度-ブランク溶液の吸光度)×4mL×1/18.1(p-ニトロフェノールの上記測定条件下でのミリモル分子吸光係数:cm2/μmol)×1/光路長(cm)×1/反応時間(分)×1/0.5mL×1/試料溶液濃度(g/mL)。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性8.23U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを29〜33℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した。次いで、エタノール265Lを加えて85℃に昇温し、さらに60分間加熱還流した。この溶液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25%量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.2%および7.1%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.89のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性8.23U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜33℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した後、エタノール265Lを加えて85℃に昇温し、さらに30分間加熱還流した。この溶液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25%量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.0%および6.8%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.87のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性7.82U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜32℃に保温した水560Lに加えて40分間攪拌した後、60分後にエタノール258Lを加えて85℃に昇温し、さらに30分間加熱還流した。この液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25%量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.2%および6.7%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.93のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性7.82U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜32℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した後、エタノール253Lを加えて85℃に昇温し、さらに40分間加熱還流した。この液を遠心分離し、得られた抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25%量を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.4%および7.2%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.89のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、シナレンギョウ葉からエキス(抽出物)を抽出した。アルクチイン2.53%およびアルクチゲニン0.76%を含有するレンギョウ葉小刻み50gに水350mLを加えて37℃で30分間保温後、エタノール150mLを添加し30分間加熱抽出した。この溶液を100メッシュ篩を用いて固液分離し、凍結乾燥を行うことにより、アルクチゲニン含量が5.62%のシナレンギョウ葉抽出物18.62gを得た。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、シナレンギョウ葉からエキス(抽出物)を抽出した。アルクチイン7.38%およびアルクチゲニン0.78%を含有するレンギョウ葉小刻み720gに水5Lを加えて37°Cで30分間保温後、エタノール2.16Lを添加し30分間加熱抽出した。この溶液を100メッシュ篩を用いて固液分離し、凍結乾燥を行うことにより、アルクチゲニン含量が9.55%のシナレンギョウ葉抽出物343.07gを得た。
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて顆粒剤を製造した。「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。すなわち、下記(1)〜(3)の成分をとり、顆粒状に製した。これを1.5gずつアルミラミネートフィルムに充填し、1包あたりゴボウシ抽出物粉末を0.5g含有する顆粒剤を得た。
(2)乳糖 65.2%
(3)ヒドロキシプロピルセルロース 1.5%
合計 100%
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて顆粒剤を製造した。「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。すなわち、下記(1)〜(3)の成分をとり、顆粒状に製した。これを3.0gずつアルミラミネートフィルムに充填し、1包あたりゴボウシ抽出物粉末を2g含有する顆粒剤を得た。
(2)乳糖 30.3%
(3)ヒドロキシプロピルセルロース 3.0%
合計 100%
本発明のグルカゴン抑制用組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて錠剤を製造した。「日局」製剤総則、錠剤の項に準じて錠剤を製した。すなわち、下記(1)〜(6)の成分をとり、錠剤を得た。
(2)結晶セルロース 45.1%
(3)カルメロースカルシウム 10.0%
(4)クロスポピドン 3.5%
(5)含水二酸化ケイ素 3.4%
(6)ステアリン酸マグネシウム 1.0%
合計 100%
レプチン受容体欠損モデルである、5週齢の雄性db/dbマウス(BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/Jcl、日本クレア社より購入)を使用して、1週間の予備飼育後に実験を開始した。動物は温度23.0±5℃、湿度50.0±10%、12時間の明暗サイクルの環境下で飼育した。動物実験は慶應義塾大学動物実験委員会の承認を得て、慶應義塾大学動物実験規定に基づき実施した。
予備飼育後に、マウスを(a)Control群および(b)アルクチゲニン投与群(AG群)の2群にわけ(各群n=8)、Control群には精製飼料(AIN-93G)を、AG群にはアルクチゲニン(>98.0%)0.2%配合の精製飼料を9週間自由摂取させた。投与終了後、18時間の絶食を行い、麻酔下で腹部大静脈より採血し、肝臓を採取した。
Mercodia Glucagon ELISA Kit(Mercodia AB社)を用いて、血中グルカゴン濃度を測定した。図1は、各群における血中グルカゴン濃度を示す。AG群では、Control群と比較して血中グルカゴン濃度が低かった。
各群について、得られた臓器からtotal RNAの抽出およびcDNA合成を行った後、qPCRによりグルカゴンの下流遺伝子であるFOXO1、PGC1α、PEPCKおよびG6Paseの発現量を比較した。コントロールとして、18S rRNAを用いた。qPCRのためのプライマーは、18S(F: TTCTGGCCAACGGTCTAGACAAC(配列番号1)、R: CCAGTGGTCTTGGTGTGCTGA(配列番号2))、FOXO1(F: CACACAGCTGGGTGTCAGGCTA(配列番号3)、R: GGGGTGAAGGGCATCTTT(配列番号4))、PGC1α(F: AAGGGCCAAACAGAGAGAGA(配列番号5)、R: GCGTTGTGTCAGGTCTGATT(配列番号6))、PEPCK(F: GGGAACTGACTACTCGGGAA(配列番号7)、R: GCCAGGTATTTCTTCTTGCC(配列番号8))、G6Pase(F: CCGGATCTACCTTGCTGCTCACTTT(配列番号9)、R:TAGCAGGTAGAATCCAAGCGCGAAAC(配列番号10))を用いた。
実施例10のControl群およびAG群について、各群にそれぞれの餌を摂取させて4週目に絶食させ、絶食開始時からの空腹時血糖の経時的変化を測定した。空腹時血糖は、尾静脈より採血し、自己血糖測定器「LIFE CHECK」(エーディア株式会社)によって測定した。
Claims (6)
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、グルカゴン抑制剤(糖尿病および高血糖症に適用される場合を除く)。
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、グルカゴン抑制用組成物(糖尿病および高血糖症に適用される場合を除く)。
- 前記アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有する、請求項2に記載のグルカゴン抑制用組成物。
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、グルカゴン抑制用食品組成物(糖尿病および高血糖症に適用される場合を除く)。
- 前記アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらの抽出物として含有する、請求項4に記載のグルカゴン抑制用食品組成物。
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、FOXO1、PGC1αまたはPEPCKの発現抑制剤(糖尿病および高血糖症に適用される場合を除く)。
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