JP6851199B2 - 多量体Fcタンパク質 - Google Patents
多量体Fcタンパク質 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6851199B2 JP6851199B2 JP2016555472A JP2016555472A JP6851199B2 JP 6851199 B2 JP6851199 B2 JP 6851199B2 JP 2016555472 A JP2016555472 A JP 2016555472A JP 2016555472 A JP2016555472 A JP 2016555472A JP 6851199 B2 JP6851199 B2 JP 6851199B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- residue
- domain
- igg4
- fusion protein
- replaced
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/524—CH2 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/528—CH4 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/66—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a swap of domains, e.g. CH3-CH2, VH-CL or VL-CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Edelman et al, 1969;「全γG免疫グロブリン分子の共有結合構造(The covalent structure of an entire γG immunoglobulin molecule)」、PNAS Biochemistry Vol.63 pp78-85.
Kabat et al, 1987;「免疫学的に興味深いタンパク質の配列において(in Sequences of Proteins of Immunological Interest)」、US Department of Health and Human Services, NIH, USA.
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
それぞれの重鎖Fc領域が、309位のシステイン残基並びにFcR結合及び/又は補体結合を変化させる少なくとも1つの追加の突然変異を含み、単量体単位を集合させて多量体にするテイルピースにそのC末端で融合しており、
それぞれのポリペプチド単量体単位が、抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
前記融合パートナーは、存在している場合には、それぞれの重鎖Fc領域のN末端に融合される。融合パートナーは重鎖Fc領域のN末端に直接融合させることができる。代わりに、融合パートナーは、存在する場合にはヒンジを含んでいてもよい介在アミノ酸配列により間接的に融合させることができる。例えば、短いリンカー配列を融合パートナーと重鎖Fc領域の間に与えることができる。
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
それぞれの重鎖Fc領域が、309位にシステイン残基を含み、単量体単位を集合させて多量体にするテイルピースにそのC末端で融合しており、
それぞれの重鎖Fc領域が、IgG4に由来するCH2ドメインとIgG1に由来するCH3ドメインを含み、場合によりそれぞれのポリペプチド単量体単位が抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
それぞれの重鎖Fc領域が、309位のシステイン残基並びにFcR結合及び/又は補体結合を変化させる少なくとも1つの追加の突然変異を含み、単量体単位を集合させて多量体にするテイルピースにそのC末端で融合しており、
それぞれの重鎖Fc領域が、IgG4に由来するCH2ドメインとIgG1に由来するCH3ドメインを含み、場合によって、ポリペプチド単量体単位が抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
それぞれの重鎖Fc領域が309位にシステイン残基を含み、単量体単位を集合させて多量体にするテイルピースにそのC末端で融合しており、
それぞれの重鎖Fc領域が、IgG4に由来するCH2ドメインと、355位のグルタミン残基がアルギニン残基又はシステイン残基で置換されているIgG4に由来するCH3ドメインを含み、場合によって、それぞれのポリペプチド単量体単位が抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン(芳香族側鎖を有するアミノ酸)
リシン、アルギニン及びヒスチジン(塩基性側鎖を有するアミノ酸)
アスパラギン酸及びグルタミン酸(酸性側鎖を有するアミノ酸)
アスパラギン及びグルタミン(アミド側鎖を有するアミノ酸)、並びに
システイン及びメチオニン(硫黄含有側鎖を有するアミノ酸)
が含まれるがこれらに限定されない。
それぞれのポリペプチド単量体単位が抗体Fcドメインとテイルピース領域からなり、
それぞれの抗体Fcドメインが、それぞれの重鎖Fc領域中の309位のアミノ酸残基がシステイン残基である2つの重鎖Fc領域からなり、それぞれの重鎖Fc領域がFcR結合及び/又は補体結合を変化させる少なくとも1つの追加の突然変異を含み、場合によって、それぞれの重鎖Fc領域はN末端にヒンジ領域を有し、
テイルピース領域がそれぞれの重鎖Fc領域のC末端に融合されており、単量体単位を集合させて多量体にする、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
それぞれのポリペプチド単量体単位が2つの同一なポリペプチド鎖を含み、それぞれのポリペプチド鎖が配列番号26〜32及び50〜64のいずれか1つに与えられる配列を含む又はそれからなり、
そのポリペプチド単量体単位が抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質も提供する。
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
それぞれの重鎖Fc領域が、配列番号26〜29及び32のいずれか1つのアミノ酸6〜222若しくは配列番号50〜64のいずれか1つのアミノ酸6〜222に与えられる配列又は配列番号30若しくは31のアミノ酸6〜333に与えられる配列を含み又はそれからなり、単量体単位を多量体に集合させるテイルピースにそのC末端で融合されており、
ポリペプチド単量体単位が抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
サイトカイン放出、血小板活性化及びC1q結合は当技術分野で既知の任意の適切な方法により測定することができる。一例では、サイトカイン放出は全血サイトカイン放出アッセイにおいて測定される。
一例では、血小板活性化は、活性化マーカーとしてCD62pを使用してフローサイトメトリーにより測定される。
一例では、C1q結合はELISAにより測定される。
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
それぞれの重鎖Fc領域が、309位のシステイン残基及び310位のヒスチジン残基を含み、単量体単位を集合させて多量体にするテイルピースにそのC末端で融合しており、
それぞれのポリペプチド単量体単位が、抗体可変領域を含まない、
上記多量体融合タンパク質を提供する。
この工程は、例えば、4.5などの約4〜5のpHで実施される、陽イオン交換クロマトグラフィーを用いる最初の捕獲ステップをさらに含むことができる。陽イオン交換クロマトグラフィーは、例えば、CaptoS樹脂又はSPセファロースFF(GE−Healthcareから供給される)などの樹脂を用いることができる。次に、抗体又は断片は、例えば、200mMの濃度で塩化ナトリウムなどのイオン食塩水を用いて樹脂から溶出させることが可能である。
したがって、クロマトグラフィーステップ(単数又は複数)は、必要に応じて1回又は複数回の洗浄ステップを含むことができる。
精製工程は、ダイアフィルトレーションステップなどの、1つ又は複数の濾過ステップも含むことができる。
・抗HLA抗体に起因する移植ドナーミスマッチ
・胎児及び新生児同種免疫性血小板減少症、FNAIT(又は新生児同種免疫性血小板減少症、NAITP若しくはNAIT若しくはNAT、又は胎児母体同種免疫性血小板減少症、FMAITP若しくはFMAIT)
を含む同種免疫疾患/徴候の治療又は予防に用いられる。
・慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー(CIDP)
・ギラン・バレー症候群
・異常タンパク性多発ニューロパチー
・視神経脊髄炎(NMO、NMOスペクトル障害又はNMOスペクトル疾患)、及び
・重症筋無力症
などの神経学障害の治療又は予防に用いられる。
・水疱性類天疱瘡
・尋常性天疱瘡
・ANCA関連血管炎
・拡張型心筋症
などの皮膚科障害に用いられる。
・特発性血小板減少性紫斑病(ITP)
・血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)
・温特発性溶血性貧血
・グッドパスチャー症候群
・抗HLA抗体に起因する移植ドナーミスマッチ
などの免疫学又は血液学障害に用いられる。
分子生物学
Fc多量体DNA配列は、PCR、制限−ライゲーションクローニング、点突然変異誘発(Quikchange)及びサンガー配列決定法を含む標準分子生物学的方法を使用して構築した。発現構築物は、CHO細胞において一過性発現と安定的発現の両方に適している発現プラスミド(pNAFL、pNAFH)にクローニングした。適切な発現ベクターの他の例にはpCDNA3(Invitrogen)が含まれる。
Fcドメイン中のある種の鍵となる重要なアミノ酸残基がIgG1において見出されるアミノ酸残基にマッチするように設計され、他の鍵となる重要なアミノ酸残基がIgG4に見出されるアミノ酸残基にマッチするように設計された種々のFc多量体変異体を構築した。表4に要約されているように、IgG1とIgG4はCH2ドメイン中の7つの位置で及びCH3ドメイン中の6つの位置で互いに異なっている。
CH2ドメインが一特定のIgGサブクラスに由来しCH3ドメインが異なるIgGサブクラスに由来しているハイブリッド重鎖Fc領域を含むFc多量体変異体も構築した。ハイブリッド重鎖Fc領域を有するFc多量体の例となるアミノ酸配列を示す図は図2(d)に提供されている。
発現
リポフェクタミン又は電気穿孔法を使用してトランスフェクトされたHEK293又はCHO細胞の「一過性」発現を使用して小規模発現を実施した。培養物は、CD−CHO(Lonza)又はProCHO5(Life Technologies)培地において50〜2000mlの範囲のスケールで5〜10日間、振盪フラスコ又は撹拌バッグ中で増殖させた。細胞は遠心分離により除去し、培養液上清は精製するまで4℃で保存した。細胞を除去した後、いくつかの培養物には保存剤を添加した。
精製及び分析
Fc多量体は、pHの点検/6.5以上への調整後プロテインAクロマトグラフィーとともにpH3.4緩衝液を使用する溶出ステップにより培養液上清から精製した。溶出液は1M Tris pH8.5を使用して直ちにpH約7.0まで中和し、その後4℃で保存した。分析的サイズ排除クロマトグラフィーを使用し、S200カラム及び画分採取を使用して種々の多量体形態のFcドメインを分離した。画分は分析し、G3000HPLC並びに還元及び非還元SDS−PAGE分析後プールした。エンドトキシンはカブトガニアメボサイトライセート(LAL)アッセイを使用して試験し、アッセイで使用した試料は1EU/mg未満であった。
Fc多量体集合におけるCH3ドメインの役割
多量体化の程度は思いがけないことに、Fc領域が由来する元のIgGサブクラスに応じて変動することが分かった。IgG1に由来するCH2ドメインとCH3ドメインを含むFc多量体は非常に効率的に六量体に集合し、その分子のおおよそ80%が六量体形態で存在していた。これとは対照的に、IgG4に由来するCH2ドメインとCH3ドメインを含むFc多量体はもっと低いレベルの六量体を形成した。CH2ドメインが一特定のIgGサブクラスに由来しておりCH3ドメインが異なるIgGサブクラスに由来しているハイブリッドFc領域を含むFc多量体を調べると、六量体を形成する能力が主にCH3ドメインにコードされていることが明らかになった。IgG1に由来するCH3ドメインが存在すると六量体化が著しく増加する。CH3ドメインがIgG1に由来しておりCH2ドメインがIgG4に由来しているハイブリッドFc多量体はIgG1野生型と同じくらいの効率で六量体化し、その分子のおおよそ80%が六量体として見出された。したがって、IgG4のCH3ドメインをIgG1のもので置き換えると、野生型IgG4 Fc多量体と比べて六量体化のレベルを改善する。こうして得られたハイブリッドは、IgG4の望ましい特性の多くを保持しつつ高いレベルの六量体形成をするという利点がある。図3(a)。
Fc多量体とFcRの相互作用についての親和性測定
多量体融合タンパク質とFcγR及びFcRnを含むFc受容体(FcR)の相互作用についての親和性/結合力測定は、FcR担持細胞系での表面プラズモン共鳴、競合ELISA及び競合結合研究を含む周知の方法を使用して実施することが可能である。FcRの可溶性細胞外ドメイン(ECD)は、BiacoreT200でのBIAcoreセンサーチップ上への非特異的固定化又はタグ特異的捕獲による表面プラズモン共鳴実験において使用した。ヒトFcRn細胞外ドメインは、ヒトFcRnアルファ鎖細胞外ドメインとβ2マイクログロブリンの間の非共有結合複合体として提供された。多量体融合タンパク質は、相互作用の強さを最もよく決定するために、受容体上、種々の濃度及び流速で滴定した。データはBiacore T200 Evaluationソフトウェアを使用して解析した。
(a)は低密度FcRnへのヒトIgG1 Fc多量体IgM tp L309Cの結合を示している。
(b)は低密度FcRnへのヒトIgG1 Fc多量体IgM tpの結合を示している。
(c)は高密度FcRnへのヒトIgG1 Fc多量体IgM tp L309Cの結合を示している。
(d)は高密度FcRnへのヒトIgG1 Fc多量体IgM tpの結合を示している。
B細胞標的のマクロファージ食作用
ヒトマクロファージによるB細胞の抗体依存性食作用を測定するアッセイを設計した。マクロファージを調製するため、ヒト末梢血単核球(PBMC)を先ず密度勾配遠心分離により新鮮血から単離した。次に、単核球は、PBMCを6ウェル組織培養被覆プレートにおいて37℃で1時間インキュベートし、それに続いて非付着性細胞を除去することにより選択した。付着性単核球は、マクロファージコロニー刺激因子(MCSF)での5日培養によりマクロファージに分化した。次に、ヒトB細胞は、PBMCの単離とそれに続くMACSを使用する負の選択によりB細胞を精製することにより、別々の(同種)ドナーから調製した(B cell isolation kit II、Miltenyi Biotech)。いくつかのアッセイで、B細胞はカルボキシフルオセインサクシニミジルエステル(CFSE)(Molecular Probes)で標識した。分化したマクロファージとB細胞は抗CD20 mAb(リツキシマブ)の存在下、1対5比で共培養し、B細胞の抗体依存性食作用を誘導した。多量体融合タンパク質又は対照は指示濃度で添加し、細胞は37℃、5%CO2で1〜24時間インキュベートした。それぞれの時点の終了時、細胞は遠心分離し4℃でFACS緩衝液に再懸濁してそれ以上の食作用を停止し、B細胞はフローサイトメトリーによる分析前に抗CD19アロフィコシアニン(APC)で表面染色した。マクロファージはその自己蛍光/側方散乱性により、B細胞はそのCFSE/CD19標識化により識別した。CD19標識化に対して陰性のCFSE陽性マクロファージは貪食されたB細胞を含有すると仮定した。
IgG FITCビーズのTHP1細胞食作用
THP1細胞は継代7でプレートアウトし、計数して、5×105細胞/mlで再懸濁した。200μlの細胞を96ウェル平底プレートのそれぞれのウェルに添加した(ウェル当たり1×105細胞)。ウサギIgGで被覆したビーズ(Cambridge bioscience CAY500290−1ea)をそれぞれのウェルに直接添加し、混合し(10希釈度中1、10μl/ウェル)、時点1時間、2時間、4時間、8時間放置した。ゼロ時点は、氷上、氷冷緩衝液中の細胞にビーズを添加することによりもたらされた。それぞれの時点の終了時、細胞は300gで3分間遠心分離した。細胞は、1対20の希釈度のトリパンブルー原液を含有するFACS緩衝液中に2分間再懸濁した。細胞は150μlのFACS緩衝液で洗浄し、遠心分離し、200μlのFACS緩衝液に再懸濁しFACS用に準備された丸底プレートに移した。細胞は、フローサイトメトリーによる分析前に、もう1度遠心分離し200μlのFACS緩衝液に再懸濁した。THP1細胞は前方及び側方散乱でゲートをかけ、ビーズの取り込みはFITC蛍光として測定した。
ヒト全血サイトカイン放出アッセイ
新鮮血をリチウムヘパリンバキュテナーにおいてドナーから採取した。対象のFc多量体構築物又は対照は指示濃度まで無菌PBS中に連続希釈した。12.5μlのFc多量体又は対照をアッセイプレートに添加し、続いて237.5μlの全血を添加した。プレートはCO2補充なしで24時間、37℃でインキュベートした。プレートは1800rpmで5分間遠心分離し、サイトカイン分析のために血清を除去した。サイトカイン分析はMeso Scale Discoveryサイトカインマルチプレックスにより、製造業者のプロトコルに従って実施し、Sector Imager6000上で読み取った。
培養中の細胞におけるIgGリサイクリングに対する効果
細胞ベースのアッセイを、ヒトFcRnとヒトβ2Mダブル遺伝子ベクターをジェネテシン選択マーカーと一緒に安定的にトランスフェクトされているメイディン・ダービーイヌ腎臓(MDCK)II細胞を使用して実施した。ヒトIgGをリサイクルし経細胞輸送することができる安定な細胞クローンを選択し、これをその後のすべての研究で使用した。この細胞はMDCKIIクローン15と呼ばれることになる。カニクイザル(「クローン40」)又はマウスFcRnのどちらかをトランスフェクトされた対応するMDCK細胞系を、上記のものに等しいアッセイにおいて使用するために、同じように生成した。
急性ITPにおけるFc多量体の有効性
Fc多量体の有効性を、血小板損失を抗CD41の投与により誘導しているITPのマウスモデルにおいて研究した。この抗体は血小板表面上の糖タンパク質IIbに結合し、その血小板を破壊の標的にする。
ITPin vivoプロトコル
ベースライン血小板数を得るために投与に先立って5μlの血液試料をマウスの尾から採取した。
マウスには1mg/kg又は10mg/kgのFc多量体を静脈内に投与した。
1時間後1μg/マウスのラット抗マウスCD41 IgG1抗体(MWReg30)を腹腔内に投与した。
最終心臓穿刺は、抗CD41投与の24時間後に実施した。
FAC染色プロトコル
5μlの血液を尾静脈から採取した。最終試料では、血液は心臓穿刺によりヘパリンチューブ内に採取し5μlを染色用に採取した。
100μlの抗体カクテルを5μlの血液試料に添加し、暗所において4℃で20分間インキュベートした。
5mlのFAC緩衝液を添加した。
それぞれの試料は1対4で希釈して「V字形」底プレートで最終体積200μlにし、Becton Dickinson FACs Canto上で取得する準備ができるまで氷上に保った。
設定体積150μlの試料を流速1.5μl/秒で採取した。閾値は200に設定した。
解析はFlowJoソフトウェアで実施した。血小板数はCD45−/CD42d+にゲートをかけた細胞から導き出した。
細胞数は、最初の5μlの血液試料は1/4000に希釈されこのうちの150μlはFACs機械に流され、これは分析されている最初の試料の0.1875μlに一致するという事実に基づいて試料希釈について補正した。5/0.1875=血小板/μlでは増倍係数×26.7。
試薬
ラット抗マウスCD41機能的等級精製されている(Ebiosciences、MWReg30、ロット番号E11914−1632)
エンドトキシンなしPBS(Sigma、D8537)
FAC緩衝液:0.1%のFCS、2mMのEDTA
結果
1mg/kg用量でのヒト多量体融合タンパク質(「Fc多量体」)は十分に許容的であった。しかし、これらのタンパク質はモデルでのこの用量では効果的ではなかった。陽性結果は10mg/kgのヒトFc多量体を使用して観察された。IgM又はIgAテイルピースのどちらかを有するFc多量体は、1μg/マウスの抗CD41の注射によって引き起こされる血小板減少を著しく阻害した。
慢性ITPにおけるFc多量体の有効性
Fc多量体の有効性を、ミニポンプを使用して持続時間の間抗CD41を投与することにより血小板損失が誘導されている慢性ITPのマウスモデルにおいて研究した。
ITP in vivoプロトコル
ベースライン血小板数を得るために投与に先立って5μlの尾出血を行った。
ラット抗マウスCD41を82.5μg/mlの濃度(57.75μlのラット抗マウスCD41 Ab+642.25μlのPBS/BSA(1.5mg/ml))で含有するアルゼットミニポンプを皮下に植え込んだ。ポンプは流速0.5μl/時を有し、1日当たり0.99μgの抗CD41の相当量を投与する。
血小板数を得るための5μlの尾出血は毎日行った。
定常状態の血小板数に到達した時点で、マウスに1g/kgのIVIG、又はFc多量体を一定範囲の用量で静脈内に投与する。
7日目、最終心臓穿刺を実施した。
FAC染色プロトコル
尾部静脈を経て5μlの血液を採取する。最終試料では、心臓穿刺によりヘパリンチューブ内に血液を採取し、染色のために5μl採取する。
100μlの抗体カクテルを添加し、暗所で4℃、20分間インキュベートする。
5mlのFAC緩衝液を添加する。
それぞれの試料を1対4で希釈して「V字形」底プレートで最終体積200μlにし、BD FACs Canto上で取得する準備ができるまで氷上に保つ。
設定体積150μlの試料を流速1.5μl/秒で収集する。閾値は200に設定する。
解析はFlowJoソフトウェアで実施する。血小板数はCD45−CD42d+にゲートをかけた細胞から導き出す。
細胞数は、最初の5μlの血液試料は1/4000に希釈されこのうちの150μlはFACs機械に流されこれは分析されている最初の試料の0.1875μlに一致することに基づいて試料希釈について補正する。5/0.1875=血小板/μlでは増倍係数×26.7。
ラット抗マウスCD41機能的等級精製されている(Ebiosciences、MWReg30、ロット番号E11914−1632)
エンドトキシンなしPBS(Sigma、D8537)
FAC緩衝液:0.1%のFCS、2mMのEDTA
10mg/kg IgG1 IgM tp、(ID:PB0000238)、EWBE−017553、5.69mg/mg、
エンドトキシン(Endototoxin)<0.35EU/mg
IgG1 Fc IgM tp L309C、(ID:PB0000198)、EWBE−017400、6.49mg/ml、エンドトキシン<0.46EU/mg
IVIG:Gammunex ロット番号26NK1N1
質量分析による六量体Fc多量体のジスルフィド結合及びグリカン分析
方法
六量体Fc多量体の精製された試料(100μg)は、55mMのTris−HCl pH8.0中8M尿素の存在下で変性し、22mMのヨードアセトアミド(IAM)と一緒に37℃で60分間インキュベートすることにより遊離のチオールを捕獲した。尿素濃度は限外濾過を使用して6Mまで減少させタンパク質はLysC/トリプシン混合物(Promega)を用いて37℃で3時間消化した。試料は5体積の緩衝液でさらに希釈し、消化は37℃で一晩続けた。ペプチドは収集し、Water Oasis HLBカートリッジで脱塩し、遠心式エバポレータを使用して乾燥させ、0.2%蟻酸を含有する水(溶媒A)中に再構成した。
L309C有り及びなしでのFc多量体(IgG1 Fc/IgMテイルピース)のグリカン分析の結果は表13に示している。グリカン構造は表8に示している。
Fc多量体のC1qへの結合
Fc多量体のC1qへの結合は、Abnova Corporation製、カタログ番号KA1274、ロット番号V14−111723527のC1q ELISAキットを使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)により測定した。Fc多量体構築物は500μg/mlから4μg/mlまでずっと5倍希釈で滴定した。100μlのそれぞれのFc多量体構築物を適切なウェルに添加し、1時間撹拌して結合を可能にする。次に、製造業者のプロトコルに従ってアッセイを実施し、プレートリーダー上、吸光度450nmで分析した。
血小板活性化
Fc多量体による血小板活性化はフローサイトメトリーにより分析した。2倍希釈のFc多量体をRMPI培養液中で調製しFACSチューブに移した。最終濃度は100μg/mlから下がって3.12μg/mlであった。チューブ当たり5μlの新鮮な全血(最小限2人のヒトドナーから)を添加した。血小板は抗CD42b標識Mabを使用してゲートをかけ、活性化はマーカーCD62p、CD63及びPAC−1に対するMabを用いて追跡した。(Becton Dickinson、BD CD42b APC カタログ番号551061、BD CD62p PE カタログ番号550561、BD CD63 PE−Cy−7 カタログ番号561982、BD PAC−1 FITC カタログ番号340507)。細胞はフローサイトメトリーによる分析前に500μlのパラホルムアルデヒド1%の添加により固定化した。
Fc多量体変異体の操作
以前の例は、免疫不全の治療において使用するのに特に適しているFc多量体が作り出されたことを説明している。以下の特性を有するFc多量体を生成する目的でFc多量体を操作した。
抗体被覆標的細胞のマクロファージ食作用の阻害
Fc多量体の効力はできる限り高いほうがよい。
サイトカイン放出
Fc多量体によるサイトカイン放出の刺激はできる限り低いほうがよい。
C1q結合
Fc多量体のC1qへの結合はできる限り低いほうがよい。
血小板活性化
Fc多量体による血小板活性化はできる限り低いほうがよい。
Claims (24)
- 2つ以上のポリペプチド単量体単位を含む多量体融合タンパク質であって、
それぞれのポリペプチド単量体単位が、2つの重鎖Fc領域を含む抗体Fcドメインを含み、
前記2つの重鎖Fc領域は、それぞれ、309位にシステイン残基を含み、単量体単位を集合させて多量体にする抗体テイルピースにそのC末端で融合しており、
それぞれのポリペプチド単量体単位が、抗体可変領域も融合パートナーも含まず、
前記2つの重鎖Fc領域は、それぞれ、
234位のロイシン残基がフェニルアラニン残基で置換されており、331位のプロリン残基がセリン残基で置換されている(L234F/P331S)IgG1に由来するCH2及びCH3ドメイン、
234位のフェニルアラニン残基がロイシン残基で置換されている(F234L)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメイン、
234位のフェニルアラニン残基がロイシン残基で置換されており、296位のフェニルアラニン残基がチロシン残基で置換されている(F234L/F296Y)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメイン、
327位のグリシン残基がアラニン残基で置換されており、330位のセリン残基がアラニン残基で置換されている(G327A/S330A)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメイン、
327位のグリシン残基がアラニン残基で置換されており、331位のセリン残基がプロリン残基で置換されている(G327A/S331P)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメイン、
330位のセリン残基がアラニン残基で置換されており、331位のセリン残基がプロリン残基で置換されている(S330A/S331P)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメイン、または
IgG4に由来するCH2ドメインとIgG1に由来するCH3ドメイン
を含む、多量体融合タンパク質。 - 前記抗体テイルピースが、IgM又はIgAに由来する、請求項1に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域がそのN末端にヒンジ領域を有する、請求項1又は2に記載の多量体融合タンパク質。
- 前記ヒンジ領域が突然変異配列CPPCを含む、請求項3に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、234位のロイシン残基がフェニルアラニン残基で置換されており、331位のプロリン残基がセリン残基で置換されている(L234F/P331S)IgG1に由来するCH2及びCH3ドメインを含む、請求項1から4までのいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、234位のフェニルアラニン残基がロイシン残基で置換されている(F234L)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメインを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、234位のフェニルアラニン残基がロイシン残基で置換されており、296位のフェニルアラニン残基がチロシン残基で置換されている(F234L/F296Y)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメインを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、327位のグリシン残基がアラニン残基で置換されており、330位のセリン残基がアラニン残基で置換されている(G327A/S330A)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメインを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、327位のグリシン残基がアラニン残基で置換されており、331位のセリン残基がプロリン残基で置換されている(G327A/S331P)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメインを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、330位のセリン残基がアラニン残基で置換されており、331位のセリン残基がプロリン残基で置換されている(S330A/S331P)IgG4に由来するCH2及びCH3ドメインを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、IgG4に由来するCH2ドメインとIgG1に由来するCH3ドメインを含むハイブリッドである、請求項1から4までのいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれの重鎖Fc領域が、配列番号52〜64のうちのいずれか1つのアミノ酸6〜222に与えられる配列を含む又はそれからなる、請求項1に記載の多量体融合タンパク質。
- それぞれのポリペプチド単量体単位が、それぞれのポリペプチド鎖が配列番号52〜64のうちのいずれか1つに与えられる配列を含む又はそれからなる2つの同一なポリペプチド鎖を含む又はそれからなる、請求項1に記載の多量体融合タンパク質。
- 請求項1から13までのいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質のポリペプチド単量体単位のポリペプチド鎖をコードする単離されたDNA。
- 請求項14に記載の1つ又は複数のDNAを含むクローニング又は発現ベクター。
- 請求項15に記載の1つ又は複数のクローニング又は発現ベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1から13までのいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質の産生のための方法であって、請求項16に記載の宿主細胞をタンパク質発現及び多量体への集合に適した条件下で培養することと、多量体融合タンパク質を単離し、場合によって精製することとを含む、上記方法。
- 薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて、請求項1から13までのいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質を含む医薬組成物。
- 他の活性成分をさらに含む、請求項18に記載の医薬組成物。
- 治療において使用するための、請求項18又は19に記載の医薬組成物。
- 免疫不全の治療において使用するための、請求項18〜20の何れか1項に記載の医薬組成物。
- 前記免疫不全が、免疫性血小板減少症、ギラン・バレー症候群、川崎病、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチーから選択される、請求項21に記載の医薬組成物。
- 免疫不全の治療のための医薬を調製するための、請求項1から13までのいずれか一項に記載の多量体融合タンパク質の使用。
- 前記免疫不全が、免疫性血小板減少症、ギラン・バレー症候群、川崎病、及び慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチーから選択される、請求項23に記載の使用。
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB201403914A GB201403914D0 (en) | 2014-03-05 | 2014-03-05 | Proteins |
GB1403915.0 | 2014-03-05 | ||
GB1403914.3 | 2014-03-05 | ||
GB201403915A GB201403915D0 (en) | 2014-03-05 | 2014-03-05 | Proteins |
GB1405955.4 | 2014-04-02 | ||
GBGB1405955.4A GB201405955D0 (en) | 2014-04-02 | 2014-04-02 | Proteins |
GB1412648.6 | 2014-07-16 | ||
GB201412648A GB201412648D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-07-16 | Proteins |
PCT/EP2015/054688 WO2015132365A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-03-05 | Multimeric fc proteins |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017509335A JP2017509335A (ja) | 2017-04-06 |
JP2017509335A5 JP2017509335A5 (ja) | 2018-04-12 |
JP6851199B2 true JP6851199B2 (ja) | 2021-03-31 |
Family
ID=52697365
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016555472A Active JP6851199B2 (ja) | 2014-03-05 | 2015-03-05 | 多量体Fcタンパク質 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20170081406A1 (ja) |
EP (1) | EP3114137A1 (ja) |
JP (1) | JP6851199B2 (ja) |
KR (1) | KR20160127821A (ja) |
CN (1) | CN106132994A (ja) |
AU (1) | AU2015226101B2 (ja) |
BR (1) | BR112016020377A2 (ja) |
CA (1) | CA2939201A1 (ja) |
IL (1) | IL247246A0 (ja) |
MX (1) | MX2016010953A (ja) |
RU (1) | RU2016139022A (ja) |
SG (1) | SG11201606596PA (ja) |
WO (1) | WO2015132365A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20160130463A (ko) | 2014-03-05 | 2016-11-11 | 유씨비 바이오파마 에스피알엘 | 다량체 Fc 단백질 |
PL3137506T3 (pl) | 2014-05-02 | 2024-02-26 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Kompozycje i sposoby powiązane z uzyskanymi metodami inżynierii konstruktami fc |
GB201511787D0 (en) * | 2015-07-06 | 2015-08-19 | Ucb Biopharma Sprl | Proteins |
GB201513033D0 (en) * | 2015-07-23 | 2015-09-09 | Ucb Biopharma Sprl | Proteins |
RU2018130525A (ru) * | 2016-01-27 | 2020-02-27 | Цсл Беринг Ленгнау Аг | РЕКОМБИНАНТНЫЕ Fc-МУЛЬТИМЕРЫ IgG |
WO2017205436A1 (en) | 2016-05-23 | 2017-11-30 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods related to engineered fc constructs |
CA3026420A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | Gliknik Inc. | Cysteine-optimized stradomers |
US20190389941A1 (en) | 2016-07-22 | 2019-12-26 | Gliknik Inc. | Fusion proteins of human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions with enhanced fc receptor binding |
EP3551227A4 (en) | 2016-12-09 | 2020-07-29 | Gliknik Inc. | METHOD FOR TREATING INFLAMMABLE DISEASES WITH MULTI-VALUE FC COMPOUNDS |
BR112019013955A2 (pt) | 2017-01-06 | 2020-02-11 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Composições e métodos relacionados a construtos de fc manipulados |
CN113201071A (zh) * | 2017-03-28 | 2021-08-03 | 礼进生物医药科技(上海)有限公司 | 用于增强肿瘤微环境中免疫应答的治疗剂和方法 |
DK3723791T3 (da) | 2017-12-14 | 2024-04-08 | CSL Behring Lengnau AG | Rekombinante igg-fc-multimere til behandling af neuromyelitis optica |
BR112022003713A2 (pt) | 2019-09-13 | 2022-08-09 | CSL Behring Lengnau AG | Multímeros de fc de igg recombinantes para o tratamento de doenças renais mediadas por imunocomplexo |
CA3159705A1 (en) * | 2019-12-06 | 2021-06-10 | CSL Behring Lengnau AG | Stable compositions of fc multimers |
CN115724985A (zh) * | 2021-08-27 | 2023-03-03 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 一种cdc平台抗体 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL2250279T3 (pl) * | 2008-02-08 | 2016-11-30 | Przeciwciała anty-ifnar1 o zmniejszonym powinowactwie do liganda fc | |
RU2540018C2 (ru) * | 2008-03-13 | 2015-01-27 | Биотест Аг | Средство для лечения заболевания |
US20120100140A1 (en) * | 2009-01-23 | 2012-04-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Stabilized fc polypeptides with reduced effector function and methods of use |
US8952134B2 (en) * | 2011-09-26 | 2015-02-10 | Jn Biosciences Llc | Hybrid constant regions |
WO2014022592A1 (en) * | 2012-08-02 | 2014-02-06 | Jn Biosciences Llc | Antibodies or fusion proteins multimerized via cysteine mutation and a mu tailpiece |
-
2015
- 2015-03-05 CA CA2939201A patent/CA2939201A1/en not_active Abandoned
- 2015-03-05 JP JP2016555472A patent/JP6851199B2/ja active Active
- 2015-03-05 KR KR1020167027644A patent/KR20160127821A/ko unknown
- 2015-03-05 EP EP15711066.9A patent/EP3114137A1/en active Pending
- 2015-03-05 CN CN201580011852.3A patent/CN106132994A/zh active Pending
- 2015-03-05 MX MX2016010953A patent/MX2016010953A/es unknown
- 2015-03-05 WO PCT/EP2015/054688 patent/WO2015132365A1/en active Application Filing
- 2015-03-05 RU RU2016139022A patent/RU2016139022A/ru not_active Application Discontinuation
- 2015-03-05 US US15/123,066 patent/US20170081406A1/en active Pending
- 2015-03-05 SG SG11201606596PA patent/SG11201606596PA/en unknown
- 2015-03-05 BR BR112016020377A patent/BR112016020377A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-03-05 AU AU2015226101A patent/AU2015226101B2/en active Active
-
2016
- 2016-08-11 IL IL247246A patent/IL247246A0/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2016010953A (es) | 2016-11-29 |
CA2939201A1 (en) | 2015-09-11 |
SG11201606596PA (en) | 2016-09-29 |
EP3114137A1 (en) | 2017-01-11 |
BR112016020377A2 (pt) | 2018-01-23 |
JP2017509335A (ja) | 2017-04-06 |
KR20160127821A (ko) | 2016-11-04 |
CN106132994A (zh) | 2016-11-16 |
AU2015226101A1 (en) | 2016-08-25 |
IL247246A0 (en) | 2016-09-29 |
AU2015226101B2 (en) | 2019-08-22 |
WO2015132365A1 (en) | 2015-09-11 |
US20170081406A1 (en) | 2017-03-23 |
RU2016139022A (ru) | 2018-04-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6851200B2 (ja) | 多量体Fcタンパク質 | |
JP6851199B2 (ja) | 多量体Fcタンパク質 | |
JP2017513481A (ja) | 多量体Fcタンパク質 | |
JP2018510339A (ja) | 重合体Fcタンパク質及びその機能的特徴を改変するためのスクリーニング方法 | |
SG186397A1 (en) | Antibodies to the c3d fragment of complement component 3 | |
JP7097293B2 (ja) | ヒトFc受容体に結合する融合タンパク質 | |
KR102649702B1 (ko) | 향상된 상보체 결합을 갖는 규칙적으로 다형체화된 면역글로불린 fc 조성물을 생성하기 위한 인간 단백질 단편의 융합 단백질 | |
WO2017036905A1 (en) | Multimeric proteins which bind to human fc-receptors | |
EP4095158A1 (en) | Pharmaceutical composition containing anti-btla antibody and use thereof | |
KR20200098512A (ko) | FcRn에 대한 증가된 친화성 및 적어도 하나의 Fc 단편 수용체에 대한 증가된 친화성을 가진 Fc 단편을 가진 변이체 | |
WO2020165374A1 (en) | Bifunctional molecule comprising il-15ra | |
WO2021129775A1 (zh) | 抗ctla-4单克隆抗体及其制备方法与应用 | |
JP2024518163A (ja) | TACI-Fc融合免疫調節タンパク質を用いた投薬および処置の方法 | |
WO2023134771A1 (zh) | 抗ctla-4抗体药物组合物及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180226 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180226 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190319 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190614 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190919 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200214 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200407 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200804 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210121 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210208 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210309 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6851199 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |