JP6845846B2 - 抗ヒトcd137の完全ヒト抗体及びその用途 - Google Patents
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Description
前記重鎖可変領域が、配列番号5で示されるCDR1と、配列番号6で示されるCDR2と、配列番号7で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号10で示されるCDR1と、配列番号11で示されるCDR2と、配列番号12で示されるCDR3とを含むか、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号29で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、
前記重鎖可変領域が、配列番号32で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号35で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号38で示されるCDR3とを含むか、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号41で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号35で示されるCDR2と、配列番号41で示されるCDR3とを含む、抗体又はその抗原結合部分が提供される。
重鎖が、配列番号4で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号9で示される可変領域を含むか、
重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号19で示される可変領域を含むか、
重鎖が、配列番号28で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号19で示される可変領域を含むか、
重鎖が、配列番号31で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号19で示される可変領域を含むか、
重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号34で示される可変領域を含むか、
重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号37で示される可変領域を含むか、
重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号40で示される可変領域を含むか、又は、
重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
軽鎖が、配列番号43で示される可変領域を含む、CD137に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合部分が提供される。
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合部分と、
医薬担体と、
を含む、医薬組成物が提供される。
本発明に係る配列は、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を含んでおり、配列表として整理して明細書の後に添付されている。また、発明者は、配列表のコンピューター可読形式ファイルも提出している。
タンパク質データベースUniprotにおけるヒトCD137のアミノ酸配列(Q07011)に基づいて、ヒトCD137の細胞外ドメインのアミノ酸配列(すなわち、Q07011における1位の残基〜186位の残基)を取得した。タンパク質データベースUniprotにおけるアカゲザルCD137(RhCD137)のアミノ酸配列(F6W5G6)に基づいて、サルCD137の細胞外ドメインのアミノ酸配列(すなわち、F6W5G6における1位の残基〜186位の残基)を取得した。タンパク質データベースUniprotにおけるヒト免疫グロブリンgamma(γ)1(IgG1)の定常領域のアミノ酸配列(P01857)に基づいて、ヒトIgG1−Fcの結合領域のアミノ酸配列(すなわち、P01857における104位の残基〜330位の残基)を取得した。タンパク質データベースUniprotにおけるマウス免疫グロブリンgamma(γ)1(IgG1)の定常領域のアミノ酸配列(P01868)に基づいて、マウスIgG1−Fc(muFc)の結合領域のアミノ酸配列(すなわち、P01868における98位の残基〜324位の残基)を取得した。オンラインツールDNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて、対応するコーディングDNA配列を設計してhCD137−Fc、hCD137−muFc及びRhCD137−muFcの融合タンパク質の遺伝子を取得した。タンパク質データベースUniprotにおける情報に基づいて、高感度緑色蛍光タンパク質EGFPのアミノ酸配列(C5MKY7)、ヒトCD137のアミノ酸配列(Q07011)、マウスCD137のアミノ酸配列(P20334)、ヒトCD137Lのアミノ酸配列(P41274)、ヒトOX40のアミノ酸配列(P43489)、ヒトGITRのアミノ酸配列(Q9Y5U5)、ヒトCD27のアミノ酸配列(P26842)を取得し、オンラインツールDNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて、対応するコーディングDNA配列を設計して上記の配列とEGFPとの融合タンパク質の遺伝子を取得した。これには、hCD137−EGFP、hCD137L−EGFP、mCD137−EGFP、hOX40−EGFP、hCD27−EGFP及びhGITR−EGFPの遺伝子が含まれる。人工合成の手法によってそれらのDNA断片を取得した。合成された遺伝子の配列は、それぞれFermentas社のHindIII及びEcoRIのダブルダイジェストによって市販のベクターpcDNA4/myc−HisA(Invitrogen、V863−20)にサブクローニングし、プラスミド構築の正確性をシークエンシングして検証し、組換えプラスミドDNA、すなわち、pcDNA4−hCD137−hFc、pcDNA4−hCD137−muFc、pcDNA4−RhCD137−muFc、pcDNA4−hOX40−EGFP、pcDNA4−hCD137−EGFP、pcDNA4−mCD137−EGFP、pcDNA4−hCD137L−EGFP、pcDNA4−hCD27−EGFP、及びpcDNA4−hGITR−EGFPを取得した。
ヒトCD137を対象とした完全ヒト抗体を酵母ディスプレイ技術によってスクリーニングした。健康な150人に由来するPBMCのIgM及びIgGのcDNAにおけるVH及びVL遺伝子をクローニングすることによって、容量5×108のscFV酵母ディスプレイライブラリーを構築した(VHとVLとの間の結合配列はGGGGSGGGGSGGGGSリンカーペプチド(配列番号1)である)。10倍の容量の酵母バンクを回復させ、酵母表面での抗体発現を誘導し、100nMのビオチン化hCD137−Fc抗原を用いて磁気分離の手法によって2回濃縮し、その後、ビオチン化hCD137を用いてフローサイトメトリー分離によって更に2回濃縮した。得られた酵母コーティングプレートは、単クローンを選択した。単クローン酵母は増殖及び誘導によって発現した後、ビオチン化hCD137又は対照抗原hOX40を用いて染色、分析し、抗原陽性/対照抗原陰性の酵母を陽性酵母とした。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSDYYMNWIRQAPGKGLEWVSYISSSASGSTIYYADSVKGRFTISRDNANNSLYLHMDSLRAEDTAIYFCARVVPAGSGWRWFDPWGQGTLVTVSS(配列番号4)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号5)、CDR2(配列番号6)、CDR3(配列番号7)である。
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTGACTACTACATGAACTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGCTAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAACAACTCACTGTATCTGCACATGGACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCATATACTTCTGTGCGAGAGTCGTCCCAGCTGGAAGTGGGTGGAGGTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGTACCCTGGTCACTGTCTCCTCA(配列番号8)
QSVLIQPPSASGSPGQSVTISCTGISSDVGAYDYVSWYQQHPGKVPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGDTASLTVSGLQAEDEADYYCSSHAGSNNFYVFGTGTKLTVL(配列番号9)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号10)、CDR2(配列番号11)、CDR3(配列番号12)である。
CAGTCTGTTCTGATTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAATCAGCAGTGACGTTGGTGCTTATGACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGTCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCGACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTACTACTGCAGCTCACATGCAGGCAGCAACAATTTTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(配列番号13)
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAPSVESRITINPDTSKNQFSLQLSSVTPEDTAVYYCARDPPYVLSTFDIWGQGTMVTVSS(配列番号14)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号15)、CDR2(配列番号16)、CDR3(配列番号17)である。
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTTTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGGGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCACCATCTGTGGAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAGCTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTACTACTGTGCAAGAGACCCTCCTTATGTGCTCAGTACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA(配列番号18)
NFMLTQPPSVSESPGKTVTISCTRSSGNIASFYVQWFQQRPGSSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDRSSNSASLTISGLTTDDEADYYCQSYDTNNVIFGGGTKLTVL(配列番号19)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号20)、CDR2(配列番号21)、CDR3(配列番号22)である。
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCCCTCTGTGTCGGAGTCCCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGGAACATTGCCAGCTTCTATGTGCAGTGGTTTCAACAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAAGATGACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGATCGTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATTTCTGGACTGACGACTGACGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATACCAACAATGTCATATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(配列番号23)
3.1 hCD137に対する特異的結合の同定(FACS法)
hCD137−EGFP、hOX40−EGFP、hCD27−EGFP及びhGITR−EGFPを発現した実施例1で構築されたHEK293細胞を0.5%のPBS−BSAバッファーに再懸濁し、抗hCD137C2scFv及びC14scFvタンパク質を加え、陰性対照をhIgG Fcタンパク質とし、氷上で20分インキュベートした。洗浄後、eBioscienceの二次抗体の抗hIg−PEを加え、氷上で20分。洗浄後、細胞を500μLの0.5%のPBS−BSAバッファーに再懸濁し、フローサイトメーターで検出した。結果は図2に示す通りであり、抗hCD137C2scFv及びC14scFvはいずれもhCD137−EGFP細胞と結合することができ、他のいくつかの種類のEGFP細胞(hOX40−EGFP−293F、hCD27−EGFP−293F及びhGITR−EGFP−293F)とは結合することができず、良好な特異性が示された。
コーティングバッファー(50mM、Na2CO3、NaHCO3、pH9.6)でhCD137−muFcを2μg/mLに希釈し、100μL/ウェル、4℃で一晩静置した。プレート洗浄後、3%のBSA−PBS、37℃で1時間密閉した。C2scFv及びC14scFv抗体をそれぞれ2000ng/mLから始めて合計11個の濃度で2倍段階希釈を行い、希釈液(1%のBSA−PBS)を対照とし、37℃で2時間インキュベートした。ヤギ抗ヒトIgG−HRP(Goat anti-human IgG-HRP conjugated)を加え、37℃で1時間インキュベートした。可溶性で単一成分のTMB基質発色液を加え、室温、遮光下で5分〜10分発色させた。2NのH2SO4、50μL/ウェルで発色反応を終了させた。マイクロプレートリーダーMD SpectraMax Plus384に置いてOD450nm〜650nmにおける値を読み取り、ソフトウェアSoftMax Pro v5.4でデータを処理し、作図、解析した。結果は図3に示す通りである。
組換えヒトCD137に対する抗hCD137C2scFv及びC14scFv抗体の結合反応速度は、表面プラズモン共鳴(SRP:surface plasmon resonance)法によって計測器BIAcore X100を用いて測定した。チップCM5に抗ヒトFc抗体(マウスFcを交差認識しない)をカップリングし、C2scFv又はC14scFvをランニングバッファーで5nMに希釈し、リガンドとしてチップ上の抗体により捕獲した。CD137−muFcは、ランニングバッファーで1000nMから31.6nMに6つの濃度で2倍希釈した。注入時間は180秒とし、解離時間は1800秒とし、再生時間は60秒とした。ランニングバッファーはHBS−EP+とし、再生バッファーは10mMのグリシン−HCl(pH2.0)とした。シンプルな1対1のLanguir結合モデル(BIAcore評価ソフトウェア3.2版(BIAcore Evaluation Software version 3.2))によって結合速度(Kon)及び解離速度(Koff)を算出した。平衡解離定数(KD)は、Koff/Konの比率で算出した。
ヒトリンパ球分離溶液(Tianjin Hanyang)の密度勾配遠心によって健康なボランティアの末梢血濃縮白血球から末梢血単核球PBMCを分離し、RPMI完全培地に播種した。予め50μL、1μg/mLの抗CD3で96ウェルプレートをコーティングして4℃で一晩静置した。実験群は50μL、2μg/mLのC2scFv又はC14scFvを用いて37℃で2時間コーティングするか、又は可溶性で終濃度2μg/mLのC2scFv又はC14scFv+終濃度2μg/mLのcross−link(Jackson Immuno Research Laboratories、109−006−008)を同時に加え、陰性対照はRPMI完全培地とした。PBMCの量は2×105/ウェルとし、5日間培養した後に上清を取った。図4に示すように、IFN−γELISA検出キット(ebioscience)によって上清中のIFN−γのレベルを検出し(図4)、BrdU染色キット(Roche、11647229001)によってT細胞の増殖を検出した(図4)。このことから、C2scFv及びC14scFvは、コーティングとcross−linkとの2種類の方法のいずれにおいても、良好にPBMCを活性化させると共にT細胞の増殖を促進する活性を有しており、また、C2scFvよりもC14scFvのアゴニスト活性の方がやや強いことがわかる。
5.1 親和性が向上した酵母発現ライブラリーの構築
実施例2で構築されたpcDNA4−CD137−14−Fcプラスミドをテンプレートとし、pcDNA4−F:TCTGGTGGTGGTGGTTCTGCTAGC(配列番号24)及びcMyc−BBXhoI:GCCAGATCTCGAGCTATTACAAGTCTTCTTCAGAAATAAGCTTTTGTTCTAGAATTCCG(配列番号25)をプライマーとして標準的なPCR反応を行った。得られたPCR産物は、Fermentas社のNheI及びBglII酵素消化によって組換えプラスミドを構築した。続いて、文献Ginger他、(2006) Nat Protoc 1(2):755-68の方法を参照し、エラープローンPCR法によって、scFvがランダム変異したPCR産物を得た。使用するプライマーは、ep−F:TAATACGACTCACTATAGGG(配列番号26)及びep−R:GGCAGCCCCATAAACACACAGTAT(配列番号27)とした。得られたPCR産物は、Fermentas社のGeneJET DNA purification Kitで精製してからエタノール沈殿で濃度が1μg/μLを超えるまで濃縮した。残りの操作手順は、文献Ginger他、(2006) Nat Protoc 1(2):755-68の方法を参照し、酵母電気穿孔法及びin vivo組換え法によって、親和性が成熟した酵母バンクを得た。
このようにして得られた親和性成熟後の酵母バンクを10nM及び1nMのhCD137−Fcタンパク質を用いて2回のフローサイトメトリーによって分離した。分離して得られた酵母産物のコーティングプレートは、単クローンを選択して同定した。低濃度の抗原染色法によって、事前に得られた野生型酵母を対照として、フローサイトメトリー染色で親和性が向上した酵母単クローンを特定した。酵母染色の結果は、図5に示す通りである。
タンパク質データベースUniprotにおけるヒト免疫グロブリンgamma(γ)4(IgG4)の定常領域のアミノ酸配列(P01861)に基づいて、ヒトIgG4の定常領域のアミノ酸配列を取得した。オンラインツールDNAworks(http://helixweb.nih.gov/dnaworks/)を用いて、対応するコーディングDNA配列を設計してヒトIgG4の定常領域の遺伝子を取得し、スクリーニングして得られたC14の重鎖可変領域VHの配列をヒトIgG4の定常領域の遺伝子配列と一緒にアセンブリングし、アセンブリングされた遺伝子を合成し、Fermentas社のHindIII及びEcoRIのダブルダイジェストによってベクターpcDNA4/myc−HisAにサブクローニングし、pcDNA4−C14HCを取得した。
NFMLTQPPSVSESPGKTVTISCTRSSGNIASFYVQWFQQRPGSSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDRSSNSASLTISGLTTDDEADYYCQSYDTNNVIFGGGTKLTVL(配列番号19)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号20)、CDR2(配列番号21)、CDR3(配列番号22)である。
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCCCTCTGTGTCGGAGTCCCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGGAACATTGCCAGCTTCTATGTGCAGTGGTTTCAACAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAAGATGACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGATCGTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATTTCTGGACTGACGACTGACGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATACCAACAATGTCATATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(配列番号23)
NFMLTQPPSVSESPGKTVTISCTRSSGNIASFYVQWFQQRPGSSPTTVIYEDDQRPSGVPDRFSGSIDRSSNSASLTISGLTTDDEADYYCQSYDTNNVIFGGGTKLTVL(配列番号19)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号20)、CDR2(配列番号21)、CDR3(配列番号22)である。
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCCCTCTGTGTCGGAGTCCCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGGAACATTGCCAGCTTCTATGTGCAGTGGTTTCAACAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAAGATGACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGATCGTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATTTCTGGACTGACGACTGACGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATACCAACAATGTCATATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA(配列番号23)
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAPSVESRITINPDTSKNQFSLQLSSVTPEDTAVYYCARDPPYVLSTFDIWGQGTMVTVSS(配列番号14)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号15)、CDR2(配列番号16)、CDR3(配列番号17)である。
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTTTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGGGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCACCATCTGTGGAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAGCTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTACTACTGTGCAAGAGACCCTCCTTATGTGCTCAGTACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA(配列番号18)
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAPSVESRITINPDTSKNQFSLQLSSVTPEDTAVYYCARDPPYVLSTFDIWGQGTMVTVSS(配列番号14)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号15)、CDR2(配列番号16)、CDR3(配列番号17)である。
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTTTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGGGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCACCATCTGTGGAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAGCTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTACTACTGTGCAAGAGACCCTCCTTATGTGCTCAGTACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA(配列番号18)
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAPSVESRITINPDTSKNQFSLQLSSVTPEDTAVYYCARDPPYVLSTFDIWGQGTMVTVSS(配列番号14)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号15)、CDR2(配列番号16)、CDR3(配列番号17)である。
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTTTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGGGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCACCATCTGTGGAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAGCTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTACTACTGTGCAAGAGACCCTCCTTATGTGCTCAGTACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA(配列番号18)
QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAPSVESRITINPDTSKNQFSLQLSSVTPEDTAVYYCARDPPYVLSTFDIWGQGTMVTVSS(配列番号14)
下線部に対応するアミノ酸は、それぞれCDR1(配列番号15)、CDR2(配列番号16)、CDR3(配列番号17)である。
CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTTTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGGGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCACCATCTGTGGAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAGCTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTACTACTGTGCAAGAGACCCTCCTTATGTGCTCAGTACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA(配列番号18)
7.1 hCD137に対する特異的結合の同定(FACS法)
hCD137−EGFP、hOX40−EGFP、hCD27−EGFP及びhGITR−EGFPを発現した実施例1で構築されたHEK293細胞を0.5%のPBS−BSAバッファーに再懸濁し、抗hCD137C14mAbタンパク質を加え、陰性対照をhIgG Fcタンパク質とし、氷上で20分インキュベートした。洗浄後、eBioscienceの二次抗体の抗hIg−PEを加え、氷上で20分。洗浄後、細胞を500μLの0.5%のPBS−BSAバッファーに再懸濁し、フローサイトメーターで検出した。結果は図に示す通りである。図6に示すように、抗hCD137C14mAbはhCD137−EGFP細胞と結合することができ、他のいくつかの種類のEGFP細胞(hOX40−EGFP−293F、hCD27−EGFP−293F及びhGITR−EGFP−293F)とは結合することができず、良好な特異性が示された。
コーティングバッファー(50mM、Na2CO3、NaHCO3、pH9.6)でhCD137−muFcを2μg/mLに希釈し、100μL/ウェル、4℃で一晩静置した。プレート洗浄後、3%のBSA−PBS、37℃で1時間密閉した。C14mAb及び変異体をそれぞれ2000ng/mLから始めて合計11個の濃度で2倍段階希釈を行い、希釈液(1%のBSA−PBS)を対照とし、37℃で2時間インキュベートした。ヤギ抗ヒトIgG−HRP(Goat anti-human IgG-HRP conjugated)を加え、37℃で1時間インキュベートした。可溶性で単一成分のTMB基質発色液を加え、室温、遮光下で5分〜10分発色させた。2NのH2SO4、50μL/ウェルで発色反応を終了させた。マイクロプレートリーダーMD SpectraMax Plus384に置いてOD450nm〜650nmにおける値を読み取り、ソフトウェアSoftMax Pro v5.4でデータを処理し、作図、解析した。結果は図7に示す通りである。
組換えヒトCD137に対する抗hCD137抗体の結合反応速度は、表面プラズモン共鳴(SRP:surface plasmon resonance)法によって計測器BIAcore X100を用いて測定した。チップCM5に抗ヒトFc抗体(マウスFcを交差認識しない)をカップリングし、C14Mab又はC14Mab newをランニングバッファーで5nMに希釈し、リガンドとしてチップ上の抗体により捕獲した。CD137−muFcは、ランニングバッファーで1000nMから31.6nMに(C14Mab)又は100nMから3.16nMに(C14Mab new)6つの濃度で2倍希釈した。注入時間は180秒とし、解離時間は1800秒とし、再生時間は60秒とした。ランニングバッファーはHBS−EP+とし、再生バッファーは10mMのグリシン−HCl(pH2.0)とした。シンプルな1対1のLanguir結合モデル(BIAcore評価ソフトウェア3.2版(BIAcore Evaluation Software version 3.2))によって結合速度(Kon)及び解離速度(Koff)を算出した。平衡解離定数(KD)は、Koff/Konの比率で算出した。測定された抗hCD137抗体の結合親和力は、表4を参照されたい。
コーティングバッファー(50mM、Na2CO3、NaHCO3、pH9.6)でRhCD137−muFcを5μg/mLに希釈し、100μL/ウェル、4℃で一晩静置した。プレート洗浄後、3%のBSA−PBS、37℃で1時間密閉した。抗hCD137 14#mAb new抗体をそれぞれ2000ng/mLから始めて3倍段階希釈を行い、希釈液(1%のBSA−PBS)を対照とし、37℃で2時間インキュベートした。ヤギ抗ヒトIgG−HRP(Goat anti-human IgG-HRP conjugated)を加え、37℃で1時間インキュベートした。可溶性で単一成分のTMB基質発色液を加え、室温、遮光下で5分〜10分発色させた。2NのH2SO4、50μL/ウェルで発色反応を終了させた。マイクロプレートリーダーMD SpectraMax Plus384に置いてOD450nm〜650nmにおける値を読み取り、ソフトウェアSoftMax Pro v5.4でデータを処理し、作図、解析した。結果は図8に示す通りであり、抗hCD137 14#mAb newがアカゲザルCD137と結合可能であることがわかる。
細胞表面に発現したCD137LとCD137タンパク質との結合を抗CD137 14#mAb newがブロッキング可能であるか否かを検出した。実施例1で構築された5×105個のCD137L−EGFP細胞を取り、10μg/mLのCD137−muFcタンパク質及び20μg/mLの抗CD137C14#mAb new抗体を反応系に加え、氷上で20分インキュベートし、2回洗浄し、さらに、抗mIg−PE二次抗体を加えて染色し、氷上で20分インキュベートし、2回洗浄した後、BSAを0.5%含有するPBSに細胞を保存した。抗体を加えずにCD137−muFcを加えたものを対照とした。フローサイトメーターで染色結果を検出し、結果は図9に示す通りである。なお、X軸はEGFPの蛍光強度であり、Y軸はPEの蛍光強度である。結果からわかるように、ここでの抗CD137 14#mAb newは、CD137LとCD137タンパク質との結合をブロッキングしなかった。
ヒトリンパ球分離溶液(Tianjin Hanyang)の密度勾配遠心によって健康なボランティアの末梢血濃縮白血球から末梢血単核球PBMCを分離し、RPMI完全培地に播種した。予め50μL、10μg/mLの抗CD3及び0.5μg/mLの可溶性の抗CD28で96ウェルプレートをコーティングして4℃で一晩静置した。実験群は50μL、2μg/mLのC14scFv又はC14mAb+終濃度2μg/mLのcross−link(Jackson Immuno Research Laboratories、109−006−008)を用い、陰性対照はRPMI完全培地とした。PBMCの量は2×105/ウェルとし、5日間培養した後に上清を取った。IFN−γELISA検出キット(ebioscience)によってPBMC上清中のIFN−γのレベルを検出し、結果は図10Aに示す通りである。結果から、抗CD137 14#ScFv及び抗CD137 14#mAbはいずれも、活性化されたPBMCのIFN−γ分泌レベルを引上げ可能であることがわかる。
腫瘍細胞PC−3及びヒトPBMCを移植したNOD−SCIDマウス腫瘍モデルを用いて抗CD137抗体のin vivoにおける薬効を評価した。0日目にPC−35×106(ATCC、CRL−1435(商標))をヒトの末梢血単核球2.5×106(PBMC)と共にマウスに皮下(SC)注射し、0日目及び7日目に1mg/kgのC14mAbを、PBSを陰性対照として腹腔内注射により投与した。腫瘍の形成を毎週2回観察し、腫瘍の長径及び短径をノギスで測定し、腫瘍体積を算出して、腫瘍増殖曲線を作図した。結果は図11に示す通りであり、抗体C14mAbが腫瘍の増殖を有意に阻害可能であることがわかる。
10.1 45℃の加速安定性試験による抗CD137 14#mAbの安定性の検出
抗CD137 14#mAbに対して45℃の加速安定性試験を行った。具体的な試験方法は、ProteinAでシングルステップ精製された抗CD137 14#mAbをPBS(pH7.4)に溶解して2mg/mlに濃縮し、100μgの抗体を200μLのPCRチューブに入れ、45℃で水浴させ、0日目、10日目、20日目、30日目に試料を採取してA280検出及びSEC−HPLC解析を行った。結果は図12に示す通りである。なお、図12Aは抗体濃度の経時変化を示す図であり、それぞれの時点で採取された試料濃度には有意な変化がないことがわかる。図12Bは抗体の二量体の経時変化の百分率であり、時間の経過に伴って抗体の二量体の割合がやや減少していることがわかり、多量体の形成は見られなかった。
DSC法によって抗CD137 14#mAbの熱安定性を検出した。DSCによって正確にテストを実施するために、単独の緩衝液及びタンパク質含有緩衝液の走査結果を収集した。
[配列表]
<120> FULLY HUMAN ANTIBODY AGAINST HUMAN CD137 AND USE THEREOF
<160> 45
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<400> 1
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 2
cgtagaatcg agaccgagga ga 22
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 3
ctggtggtgg tggttctgct agc 23
<210> 4
<211> 124
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu His Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Val Val Pro Ala Gly Ser Gly Trp Arg Trp Phe Asp
100 105 110
Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Asp Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 6
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Tyr Ile Ser Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 7
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Val Val Pro Ala Gly Ser Gly Trp Arg Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 8
<211> 372
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt gactactaca tgaactggat ccgccaggct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtttcatac attagtagta gtgctagtgg tagtaccata 180
tactacgcag actctgtgaa gggccgattc accatctcca gggacaacgc caacaactca 240
ctgtatctgc acatggacag cctgagagcc gaggacacgg ccatatactt ctgtgcgaga 300
gtcgtcccag ctggaagtgg gtggaggtgg ttcgacccct ggggccaggg taccctggtc 360
actgtctcct ca 372
<210> 9
<211> 111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Gln Ser Val Leu Ile Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ile Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser His Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Asn Phe Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 10
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Thr Gly Ile Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Ser Ser His Ala Gly Ser Asn Asn Phe Tyr Val
1 5 10
<210> 13
<211> 333
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
cagtctgttc tgattcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaatcagcag tgacgttggt gcttatgact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagtccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc gacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttactactgc agctcacatg caggcagcaa caatttttat 300
gtcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333
<210> 14
<211> 123
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 14
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Pro Ser Val Glu Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Pro Tyr Val Leu Ser Thr Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn
1 5
<210> 16
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 16
Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Pro Ser Val
1 5 10 15
Glu Ser
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Asp Pro Pro Tyr Val Leu Ser Thr Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 18
<211> 369
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 18
caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60
acctgtgcca tctccgggga cagtgtttct agcaacagtg ctgcttggaa ctggatcagg 120
cagtccccat cgaggggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180
aatgattatg caccatctgt ggaaagtcga ataaccatca acccagacac atccaagaac 240
cagttctccc tgcagctgag ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ctactgtgca 300
agagaccctc cttatgtgct cagtactttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 19
<211> 110
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Asn Ile Ala Ser Phe
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Glu Asp Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Thr Thr Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr
85 90 95
Asn Asn Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 20
Thr Arg Ser Ser Gly Asn Ile Ala Ser Phe Tyr Val Gln
1 5 10
<210> 21
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Glu Asp Asp Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 22
Gln Ser Tyr Asp Thr Asn Asn Val Ile
1 5
<210> 23
<211> 330
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 23
aattttatgc tgactcagcc cccctctgtg tcggagtccc cggggaagac ggtaaccatc 60
tcctgcaccc gcagcagtgg gaacattgcc agcttctatg tgcagtggtt tcaacagcgc 120
ccgggcagtt cccccaccac tgtgatctat gaagatgacc aaagaccctc tggggtccct 180
gatcggttct ctggctccat cgacagatcg tccaactctg cctccctcac catttctgga 240
ctgacgactg acgacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgataccaa caatgtcata 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 24
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 24
tctggtggtg gtggttctgc tagc 24
<210> 25
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 25
gccagatctc gagctattac aagtcttctt cagaaataag cttttgttct agaattccg 59
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 26
taatacgact cactataggg 20
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 27
ggcagcccca taaacacaca gtat 24
<210> 28
<211> 123
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 28
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Arg Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala
50 55 60
Ser Ser Val Glu Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Pro Tyr Val Leu Ser Thr Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 29
Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Arg Trp Tyr Ser Asp Tyr Ala Ser Ser Val
1 5 10 15
Glu Ser
<210> 30
<211> 369
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 30
caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60
acctgtgcca tctccgggga cagtgtttct agcaacagtg ctgcttggaa ctggatcagg 120
cagtccccat cgaggggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caggtggtat 180
agtgattatg catcatctgt ggaaagtcga ataaccatca acccagacac atccaagaac 240
cagttctccc tgcagctgag ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ctactgtgca 300
agagaccctc cttatgtgct cagtactttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 31
<211> 123
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 31
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Pro Ser Val Glu Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Pro Tyr Val Leu Ser Thr Phe Asp Ile
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<213> Homo sapiens
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Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Asn Ile Ala Ser Phe
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Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val
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Ile Tyr Asp Asp Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Thr Thr Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Thr
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<213> Homo sapiens
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ctgacgactg acgacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgataccaa caatgtcata 300
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<213> Homo sapiens
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aattttatgc tgactcagcc cccctctgtg tcggagtccc cggggaagac ggtaaccatc 60
tcctgcaccc gcagcagtgg gaacattgcc agcttctatg tgcagtggtt tcaacagcgc 120
ccgggcagtt cccccaccac tgtgatctat gaagatgacc aaagaccctc tggggtccct 180
gatcggttct ctggctccat cgacagatcg tccaactctg cctccctcac catttctgga 240
ctgacgactg acgacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatatcaa caaggtcata 300
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<213> Homo sapiens
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ctgacgactg acgacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatatcaa caaggtcata 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
Claims (10)
- 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、CD137に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分であって、
前記重鎖可変領域が、配列番号5で示されるCDR1と、配列番号6で示されるCDR2と、配列番号7で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号10で示されるCDR1と、配列番号11で示されるCDR2と、配列番号12で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号29で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号32で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号35で示されるCDR2と、配列番号22で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号38で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号21で示されるCDR2と、配列番号41で示されるCDR3とを含むか、又は、
前記重鎖可変領域が、配列番号15で示されるCDR1と、配列番号16で示されるCDR2と、配列番号17で示されるCDR3とを含むと共に、
前記軽鎖可変領域が、配列番号20で示されるCDR1と、配列番号35で示されるCDR2と、配列番号41で示されるCDR3とを含む、抗体又はその抗原結合部分。 - 前記重鎖が、配列番号4で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号9で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号19で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号28で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号19で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号31で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号19で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号34で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号37で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号40で示される可変領域を含むか、又は、
前記重鎖が、配列番号14で示される可変領域を含むと共に、
前記軽鎖が、配列番号43で示される可変領域を含む、請求項1に記載の抗体又はその抗原結合部分。 - 完全抗体、二重特異性抗体、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2又はFvである、請求項1又は2に記載の抗体又はその抗原結合部分。
- VH、VL及びリンカーペプチドを含む一本鎖抗体であって、
前記VHが配列番号4であり、前記VLが配列番号9であり、前記リンカーペプチドが配列番号1であることを特徴とし、
前記一本鎖抗体がCD137に特異的に結合する、一本鎖抗体。 - VH、VL及びリンカーペプチドを含む一本鎖抗体であって、
前記VHが配列番号14であり、前記VLが配列番号19であり、前記リンカーペプチドが配列番号1であることを特徴とし、
前記一本鎖抗体がCD137に特異的に結合する、一本鎖抗体。 - 請求項1〜3のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合部分と、
薬学的に許容可能な担体と、
を含む、医薬組成物。 - 癌を治療するための、請求項1〜3のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合部分。
- 癌治療のための付加的な薬物又は付加的な方法と組み合わせた、癌を治療するための請求項1〜3のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合部分。
- 配列番号4及び配列番号9、又は、配列番号14及び配列番号19、又は、配列番号14及び配列番号34、又は、配列番号14及び配列番号37、又は、配列番号14及び配列番号40、又は、配列番号14及び配列番号43、又は、配列番号28及び配列番号19、又は、配列番号31及び配列番号19に記載のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、
CD137に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分の製造に用いられる、単離されたポリヌクレオチド。 - 配列番号8及び配列番号13、又は、配列番号18及び配列番号23、又は、配列番号18及び配列番号36、又は、配列番号18及び配列番号39、又は、配列番号18及び配列番号42、又は、配列番号18及び配列番号44、又は、配列番号30及び配列番号23、又は配列番号33及び配列番号23に記載のヌクレオチド配列を含み、
CD137に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分の製造に用いられる、請求項9に記載のポリヌクレオチド。
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