JP6845531B2

JP6845531B2 - 免疫チェックポイント阻害作用を有するインドールアルカロイド型化合物

Info

Publication number: JP6845531B2
Application number: JP2018507460A
Authority: JP
Inventors: 晴久菊地; 大島　吉輝; 吉輝大島; 俊夫服部; 山田　修; 修山田; 張菁周; 進也喜田; 新也村瀬
Original assignee: Tohoku University NUC; Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: Tohoku University NUC; Fuso Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date: 2016-03-25
Filing date: 2017-03-24
Publication date: 2021-03-17
Anticipated expiration: 2037-03-24
Also published as: JPWO2017164407A1; WO2017164407A1; US10550120B2; US20190092774A1

Description

本発明は、新規インドールアルカロイド型化合物、特に免疫チェックポイント阻害作用を有するインドールアルカロイド型化合物に関する。また、本発明は、がんを含む、免疫チェックポイントに起因する疾患の予防および／または治療に有用であり得る。

生体は、自身の体で生じたがん細胞から体を守るための免疫機構を備えているが、がんが進行するとその免疫機能は低下し、がん細胞に対して免疫が働かなくなることが多い。近年、がん細胞は、生体の免疫機構を回避する機能を有していることが明らかになってきた。その仕組みの一つとして、がん細胞自身がＩＬ−１０、ＴＧＦ−βなどのサイトカインを産生し、その産生されたサイトカインによりナイーブＴ細胞が誘導型制御性Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）へ誘導されることが挙げられる。がんに対してはキラーＴ細胞を中心とする細胞性免疫が重要であるが、免疫抑制に作用するｉＴｒｅｇが増大すると、細胞膜上に発現されるＣＴＬＡ−４（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4）が作用し、キラーＴ細胞が減少して、がん細胞を殺すことができなくなる。ＣＴＬＡ−４分子とは本来、制御性Ｔ細胞の細胞表面に発現するイムノグロブリンスーパーファミリーメンバーの一つであり、負のフィードバック制御因子として、樹状細胞やマクロファージからＴ細胞が抗原提示を受ける際に抑制的に作用し、これを制御する分子である（非特許文献１）。

がんに対しては外科的治療、化学療法、放射線療法が主な治療法として行われているが、十分な効果が得られる治療法はいまだ確立されておらず、新たな治療法の確立が求められている。ＣＴＬＡ−４のように免疫に抑制的に作用する分子のことを「免疫チェックポイント」といい、ＣＴＬＡ−４は、免疫チェックポイントの一つとしてがん治療法の新たな標的となっている（非特許文献２および３）。さらに、種々の免疫担当細胞から産生されるＩＬ−１０もまた、免疫系に対して抑制的に作用するものであり、また、がん細胞自身はＩＬ−１０を産生することが知られている（非特許文献４および５）。つまり、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のＣＴＬＡ−４発現および／または免疫抑制サイトカインＩＬ−１０産生を抑制することによってがんの治療が期待されるため、そのような作用を有する化合物が、がんの新たな治療として注目されている。

これまでに、免疫チェックポイント阻害剤として、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１（もしくはＰＤ−Ｌ１）を標的とする、抗ＣＴＬＡ−４抗体（イピリムマブ）、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ、ペンブロリズマブ）および抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６）が既に創薬されているが、これらの薬剤は抗体医薬品であり、低分子化合物の免疫チェックポイント阻害剤は知られていない。

Grosso JF & Kunkel NJ,Cancer Immunity 13:p.5 (2013) Pardoll D.M Nature Reviews Cancer 12: 252-264 (2012) Adams J et al., Nature Review 14: 603-621 (2015) Sky Ng TH et al., Frontiers in Immunology 4: 1-13 (2013) Itakura E et al., Modern Pathol 24: 801-809 (2011)

本発明は、ＣＴＬＡ−４発現および／またはＩＬ−１０産生の抑制活性を有する低分子化合物を検討すると共に、がんを含む、免疫チェックポイントに起因する疾患の治療および／または予防に有用な治療剤およびワクチンの補助剤（アジュバント）を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、サンシュユの偽果、クチナシの果実、センブリの全草などの植物から抽出・精製された下記式（Ｉ）で表される化合物群が、ＣＴＬＡ−４発現抑制作用およびＩＬ−１０産生抑制作用を有することを見出し、本発明を完成させた。本発明によれば、下記式（Ｉ）で表されるインドールアルカロイド型化合物またはその医薬的に許容される塩（以下、「本発明の化合物」と称することもある）、およびその免疫チェックポイント阻害作用による医薬用途発明が提供される。

すなわち、本発明は、以下の態様の発明を提供するものである。
［１］式（Ｉ）：

［式中：
ａ〜ｃ：

は、単結合または二重結合を表し、ｄ：

は、不存在または単結合を表すが、ただし、ａが二重結合を表す場合、ｂは単結合を表し、ｂが二重結合を表す場合、ａは単結合を表し、Ｒ^５は不存在であり、ｃが二重結合を表す場合、Ｒ^６は不存在であり、ならびに、ｃが二重結合を表し、ｄが単結合を表す場合、Ｒ^６およびＲ^７は不存在であり；
環Ａは、Ｃ_３−６シクロアルキル環、Ｃ_３−６シクロアルケニル環または５員もしくは６員の単環式ヘテロ環であり、ここで、該シクロアルキル環、シクロアルケン環および単環式ヘテロ環は、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−４アシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’およびＲ^３は、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシであり；
Ｒ^４は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_３−６シクロアルキル、３員ないし６員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−１０アリールまたは６員ないし１０員のヘテロアリールであり、ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキルアミノ、Ｃ_１−４アシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３ハロアルキル、Ｃ_１−３ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−３アルコキシまたはＣ_１−３ハロアルコキシであり；
Ｒ^８は、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシ、ベンジルオキシ、Ｃ_３−６シクロアルキル、３員ないし６員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−１０アリールまたは６員ないし１０員のヘテロアリールであり、ここで、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−４アシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；および
ｎは、１〜４である］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。

［２］［１］の化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、点線ａが二重結合を表し、Ｒ^８が水素である化合物は除く。

［３］［１］の化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、点線ａが二重結合を表す化合物は除く。

［４］［１］の化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、下記の化合物は除く。

［５］Ｒ^４が、水素、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシである、［１］〜［４］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［６］Ｒ^８が、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ベンジルオキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシである、［１］〜［５］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［７］環Ａが、Ｃ_５−６シクロアルキル環、Ｃ_５−６シクロアルケニル環または５員もしくは６員の単環式飽和ヘテロ環であり、ここで、該シクロアルキル環、シクロアルケン環および単環式飽和ヘテロ環は、置換可能な位置で、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい、［１］〜［６］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［８］環Ａが、以下：

からなる群から選択される基であり、ここで、各基は、置換可能な位置で、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３ヒドロキシアルキル、およびＣ_１−３アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい、［１］〜［７］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［９］Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７が、各々独立して、水素またはヒドロキシである、［１］〜［８］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［１０］Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’およびＲ^８が、水素である、［１］〜［９］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［１１］Ｒ^３が、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシである、［１］〜［１０］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［１２］化合物が、

である、［１］〜［１１］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［１３］［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。

［１４］［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分とする、がんの治療剤。

［１５］がんが、悪性黒色腫、神経膠芽腫、肺癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、食道癌、咽頭癌、喉頭癌、口腔癌、膀胱癌、舌癌、甲状腺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫または多発性骨髄腫である、［１４］の治療剤。

［１６］［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、免疫チェックポイント阻害剤。

［１７］免疫チェックポイントが、ＣＴＬＡ−４である、［１６］の阻害剤。

［１８］［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、ワクチンの補助剤（アジュバント）。

［１９］治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、がんの治療方法。

［２０］がんの治療に使用する、［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩。

［２１］がんの治療剤を製造するための、［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩の使用。

［２２］治療が必要な患者に、治療上の有効量の［１］〜［１２］のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする、免疫チェックポイントの阻害方法。

本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４発現抑制作用およびＩＬ−１０産生抑制作用を有しており、免疫チェックポイントに起因する疾患、特に、がん（例えば、悪性黒色腫、神経膠芽腫、肺癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、食道癌、咽頭癌、喉頭癌、口腔癌、膀胱癌、舌癌、甲状腺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫）の新規な治療剤および／または予防剤として有用である。また、免疫チェックポイントを抑制することから、ワクチンの補助剤（アジュバント）としても有用である。

対照における、抗ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２）−ＰＥ抗体またはアイソタイプコントロールのＩｇＧ１−ＰＥ抗体染色したＭＴ２細胞のＦＣＭ解析結果（ヒストグラム）を示す。化合物１（濃度：20μmol/L）における、抗ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２）−ＰＥ抗体またはアイソタイプコントロールのＩｇＧ１−ＰＥ抗体染色したＭＴ２細胞のＦＣＭ解析結果（ヒストグラム）を示す。

本明細書における用語について、以下に説明する。
用語「Ｃ_１−６アルキル」とは、１〜６個の炭素原子を有する、直鎖状または分枝鎖状の飽和炭化水素を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。「Ｃ_１−６アルキル」は、好ましくは炭素数が１〜５、１〜４、または１〜３であってもよい。かかる具体例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等が挙げられる。

用語「Ｃ_２−６アルケニル」とは、２〜６個の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素二重結合を含有する、直鎖または分枝鎖状の脂肪族炭化水素を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。「Ｃ_２−６アルケニル」は、好ましくは炭素数が２〜５、２〜４、または２〜３であってもよい。かかる具体例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等が挙げられる。

用語「Ｃ_２−６アルキニル」とは、２〜６個の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素三重結合を有する、直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。「Ｃ_２−６アルキニル」は、好ましくは炭素数が２〜５、２〜４、または２〜３であってもよい。かかる具体例として、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル等が挙げられる。

用語「Ｃ_３−６シクロアルキル」または「Ｃ_３−６シクロアルキル環」とは、３〜６個の炭素原子を有する、単環式飽和炭化水素を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。かかる具体例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル等が挙げられる。

用語「Ｃ_３−６シクロアルケニル環」とは、３〜６個の炭素原子を有し、１以上の炭素−炭素二重結合を含有する、単環式炭化水素を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。かかる具体例として、シクロプロペン、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン等が挙げられる。

用語「３員ないし６員のヘテロシクロアルキル」とは、窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、３員ないし６員の単環式飽和複素環を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。窒素および硫黄原子は、所望により酸化されてもよく、窒素原子は、所望により四級化されてもよい。かかる具体例として、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル等が挙げられる。

用語「５員もしくは６員の単環式ヘテロ環」とは、窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、５員または６員の単環式複素環を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。該環は、飽和、部分的飽和または不飽和であってもよく、また、窒素および硫黄原子は、所望により酸化されてもよく、窒素原子は、所望により四級化されてもよい。かかる具体例として、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピリジル、ピロリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、イミダゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チエニル、フリル等が挙げられる。

用語「Ｃ_６−１０アリール」とは、芳香族環に結合する１個の水素原子が除外された、６〜１０個の炭素原子を有する単環または二環の芳香族炭化水素を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。かかる具体例として、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、アントラセニル等が挙げられる。

用語「６員ないし１０員のヘテロアリール」とは、窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、６員ないし１０員の単環式または二環式芳香族複素環を意味し、これらは、所望により本発明に含まれる１以上の基で置換されていてもよい。かかる具体例として、ピリジル、ピリダジニル、イソチアゾリル、ピロリル、フリル、チエニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インドリル、インダゾリル、クロメニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイミダゾリル等が挙げられる。

用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。中でも好ましくは、フッ素、塩素または臭素である。

用語「モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキルアミノ」とは、１個または２個の水素原子が１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基によって置き換えられている、アミノ基を意味する。アルキル基によって２個置換される場合は、同一または異なるアルキル基で置換されていてもよい。かかる具体例として、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等が挙げられる。

用語「Ｃ_１−４アシル」とは、水素原子、または１〜３個の炭素原子を有する上記のアルキル基が結合している、カルボニル基（−Ｃ（＝Ｏ））を意味する。かかる具体例として、ホルミル、アセチル、プロピオニル等が挙げられる。

用語「Ｃ_１−６ハロアルキル」とは、１個以上の水素原子がハロゲン原子（複数可）によって置き換えられている、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。かかる具体例として、クロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル等が挙げられる。

用語「Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル」とは、１個以上の水素原子がヒドロキシ基（複数可）によって置き換えられている、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。かかる具体例として、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、４−ヒドロキシブチル等が挙げられる。

用語「Ｃ_１−６アルコキシ」とは、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルキル基が酸素原子を介して結合している基を意味する。かかる具体例として、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等が挙げられる。

用語「Ｃ_１−６ハロアルコキシ」とは、１個以上の水素原子がハロゲン原子（複数可）によって置き換えられている、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルコキシ基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。ハロゲン原子を複数有する場合は、同一または異なるハロゲン原子で置換されていてもよい。かかる具体例として、クロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ等が挙げられる。

用語「Ｃ_１−６ヒドロキシアルコキシ」とは、１個以上の水素原子がヒドロキシ（複数可）によって置き換えられている、１〜６個の炭素原子を有する上記のアルコキシ基を意味する。置き換えられている水素原子の数は、１個から、最大で親アルキル基に他に存在しうる水素原子の総数の範囲まで及びうる。かかる具体例として、ヒドロキシメトキシ、２−ヒドロキシエトキシ、２−ヒドロキシプロポキシ、３−ヒドロキシプロポキシ、４−ヒドロキシブトキシ等が挙げられる。

用語「免疫チェックポイント阻害剤」とは、１つ以上の免疫チェックポイント分子（例えば、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１）の機能を阻害し、Ｔ細胞の抑制を解除して活性化し、抗腫瘍効果を発揮する薬剤を意味する。免疫チェックポイントは、キラーＴ細胞の活性化を阻害し、がん細胞の免疫に対して抑制的に作用するタンパク質である。

「免疫チェックポイントに起因する疾患」とは、がん（例えば、悪性黒色腫、神経膠芽腫、肺癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、食道癌、咽頭癌、喉頭癌、口腔癌、膀胱癌、舌癌、甲状腺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫または多発性骨髄腫）が挙げられる。本発明における疾患としては、特に悪性黒色腫が好ましい。

「医薬的に許容される塩」とは、式（Ｉ）で表される本発明の化合物と医薬的に許容される酸または塩基により形成される塩を意味する。式（Ｉ）で表される本発明の化合物がアミノ基等の塩基性官能基を有する場合、各種の酸と塩を形成しうる。酸付加塩の具体例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩等の有機酸塩、またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩が挙げられる。
本発明の化合物が酸性官能基を有する場合、各種の塩基と塩を形成しうる。塩基付加塩の具体例としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩等が挙げられる。
これらの塩は、本発明の化合物を酸または塩基と混合した後、再結晶等の常法により得ることができる。
本発明の化合物は、水和物および／または溶媒和物の形で存在することもあるので、これらの水和物および／または溶媒和物もまた本発明の化合物に包含される。溶媒和物としてはエタノール溶媒和物等が挙げられる。

「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける疾患および／または障害の治癒および／または改善を意味する。例えば、（ａ）疾患および／または障害を予防すること；および（ｂ）疾患および／または疾患を緩和および／または軽減すること等も含まれる。

「患者」とは、ヒトおよび動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ等を意味する。その中でも、ヒトが好ましい。

「治療上の有効量」とは、未治療対象と比べて、疾患、障害および／または副作用の改善、治癒、予防および／または軽減をもたらす量、あるいは疾患および／または障害の進行速度の遅延をもたらす量を意味する。該用語は、その範囲内に、正常な生理的機能を促進するのに有効な量も含む。療法における使用では、本発明の化合物の治療上の有効量を、化合物原体として投与することが可能である。特に限定するものではないが、通常、本発明の化合物として、１日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲が有効である。
かかる有効量として、本発明の化合物単独の量、本発明の化合物の組み合わせの量および／またはがん治療に有用な他の活性成分と組み合わせた本発明の化合物の量が挙げられる。

式（Ｉ）で表される本発明の化合物の中のａ〜ｄ、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３〜Ｒ^８および環Ａに関して、好ましいものは以下のとおりであるが、本発明の技術的範囲は下記に挙げられた化合物の範囲に限定されるものではない。

ａ〜ｃ：

は、単結合または二重結合を表し、ｄ：

は、不存在または単結合を表す。ただし、ａが二重結合を表す場合、ｂは単結合を表し、ｂが二重結合を表す場合、ａは単結合を表し、Ｒ^５は不存在であり、ｃが二重結合を表す場合、Ｒ^６は不存在であり、ならびに、ｃが二重結合を表し、ｄが単結合を表す場合、Ｒ^６およびＲ^７は不存在である。中でも好ましくは、ａが単結合、ｂが二重結合、ｃが単結合または二重結合、そして、ｄが不存在または単結合であり、より好ましくは、ａが単結合、ｂが二重結合、ｃが二重結合、そして、ｄが不存在である。また、ｄが不存在である場合、インドール環の２位には水素が存在する。

Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２およびＲ^２’としては、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシが挙げられる。中でも好ましくは、水素、フッ素、塩素、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、メチル、トリフルオロメチル、メトキシまたはトリフルオロメトキシが挙げられ、より好ましくは水素が挙げられる。

Ｒ^３としては、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシが挙げられる。中でも好ましくは、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシが挙げられ、より好ましくは水素またはＣ_１−６アルキルが挙げられ、さらに好ましくは水素またはメチルが挙げられる。

Ｒ^４としては、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_３−６シクロアルキル、３員ないし６員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−１０アリールまたは６員ないし１０員のヘテロアリールが挙げられ、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールは、各々独立して、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキルアミノ、Ｃ_１−４アシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、水素、ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_１−６ハロアルコキシが挙げられ、より好ましくは水素、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシが挙げられ、さらに好ましくは水素またはメトキシが挙げられる。

Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７としては、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３ハロアルキル、Ｃ_１−３ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−３アルコキシまたはＣ_１−３ハロアルコキシが挙げられる。中でも好ましくは、水素、ヒドロキシまたはＣ_１−３アルキルが挙げられ、より好ましくは水素、ヒドロキシまたはメチルが挙げられる。また、Ｒ^５は、ｂが二重結合を表す場合、不存在となり、Ｒ^６は、ｃが二重結合である場合、不存在となり、さらに、Ｒ^７は、ｃが二重結合を表し、ｄが単結合を表す場合、不存在となり、ｃが単結合を表し、ｄが不存在を表す場合、メチルとなり、そして、ｃおよびｄが単結合を表す場合、水素となる。

Ｒ^８としては、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_１−６アルコキシ、ベンジルオキシ、Ｃ_３−６シクロアルキル、３員ないし６員のヘテロシクロアルキル、Ｃ_６−１０アリールまたは６員ないし１０員のヘテロアリールが挙げられ、該アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールは、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−４アシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい。中でも好ましくは、水素、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ、トリフルオロメトキシまたはベンジルオキシが挙げられ、より好ましくは水素、フッ素、塩素、臭素、ヒドロキシ、メチル、メトキシまたはベンジルオキシが挙げられる。また、Ｒ^８が水素である場合、ｎは４を表す。

環Ａとしては、Ｃ_３−６シクロアルキル環、Ｃ_３−６シクロアルケニル環または５員もしくは６員の単環式ヘテロ環が挙げられ、該シクロアルキル環、シクロアルケン環および単環式ヘテロ環は、置換可能な位置で、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、アミノ、ニトロ、モノ−もしくはジ−Ｃ_１−６アルキル−アミノ、Ｃ_１−４アシル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよい、中でも好ましくは、Ｃ_５−６シクロアルキル環、Ｃ_５−６シクロアルケニル環または５員もしくは６員の単環式飽和ヘテロ環が挙げられ、該シクロアルキル環、シクロアルケン環および単環式飽和ヘテロ環は、置換可能な位置で、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６ハロアルキル、Ｃ_１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６ハロアルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく、より好ましくは、以下：

が挙げられ、各基は、置換可能な位置で、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_１−３ヒドロキシアルキル、およびＣ_１−３アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく、さらにより好ましくは、以下：

が挙げられる。

本発明の化合物は、１個または場合によりそれ以上の不斉炭素原子を有する場合があり、また幾何異性や軸性キラリティを生じることがあるので、数種の光学または立体異性体として存在することがある。本発明においては、これらの立体異性体、それらの混合物およびラセミ体は本発明に包含される。
また、本発明の化合物のいずれか１つまたは２つ以上の^１Ｈを^２Ｈ（Ｄ）に変換した重水素変換体も本発明に包含される。
結晶として得られる本発明の化合物およびその医薬上許容される塩には、結晶多形が存在する場合があり、その結晶多形も本発明に包含される。

以下、本発明の化合物の製造方法について、例を挙げて説明するが、本発明はもとよりこれに限定されるものではない。式（Ｉ）で表される本発明の代表的な化合物は、以下：

で示されるように、化学変換を行った植物抽出物（多様性拡大抽出物：diversity-enhanced extracts）から調製することができる（Org. Lett. 2014, 16, 1916-1919）。また、ステップ３のトリプタミンを６−メトキシトリプタミン等の置換トリプタミンに置き換えることによって、化合物８〜１７を調製することができる。

ステップ１は、サンシュユの偽果、クチナシの果実、センブリの全草などの植物をメタノールで抽出し、その抽出物を、活性炭を担体とするカラムクロマトグラフィーに付し、イリドイド型化合物等の配糖体を多く含む粗画分を得る工程である。

ステップ２は、ステップ１で得られた粗画分にβ-グルコシダーゼを作用させることで、粗画分に含まれる化合物の加水分解を行う工程である。

ステップ３は、トリフルオロメタンスルホン酸金属塩などのルイス酸存在下でトリプタミンを作用させることでインドールアルカロイド型化合物等の化合物を含む多様性拡大抽出物を得る工程である。化合物８〜１７においては、トリプタミンの代わりに６−メトキシトリプタミン等の置換トリプタミンが用いられる。

ステップ４は、得られた多様性拡大抽出物を各種カラムクロマトグラフィーにより分画・精製して、本発明の化合物を得る工程である。

本発明の治療剤または免疫チェックポイント剤の有効成分として好ましい式（Ｉ）の化合物は、

であり、より好ましくは、

であり、さらにより好ましくは、

である。

本発明の治療剤または免疫チェックポイント阻害剤は、本発明の化合物を有効成分として含むものであればよく、免疫チェックポイントを阻害する作用を妨げない限り、他の成分をさらに含むものであってもよい。したがって、本発明の治療剤または免疫チェックポイント阻害剤中の本発明の化合物の割合は特に限定されるものではない。例えば、本発明の治療剤は、本発明の化合物を０．１重量％以上、または０．５重量％以上、または１．０重量％以上含むものであってもよく、０．１〜７０重量％が好ましい。あるいは、本発明の治療剤または免疫チェックポイント阻害剤は、本発明の化合物のみからなるものであってもよい。

本発明の化合物は、経口または非経口（例えば、静脈、局所、経鼻、経肺、直腸等）投与することができる。本発明の剤形は、対象の身体状況、健康状態などに応じて適宜選択することができ、調製することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤などの経口投与剤、または注射剤、透析用剤、吸入剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤、外用剤、スプレー剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤などの非経口投与剤の剤形に、常法により調製されうる。

本発明の治療剤または免疫チェックポイント剤は、必要に応じ、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトールおよび微結晶セルロース）、崩壊剤（例えば、カルメロース、カルメロースナトリウムおよび低置換度ヒドロキシプロピルセルロース）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドンおよび結晶セルロース）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルク）、溶剤（例えば、水、エタノールおよびプロピレングリコール）、緩衝剤（例えば、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム）、懸濁化剤（例えば、アラビアゴム、トラガントおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム）、乳化剤（例えば、グリセリン脂肪酸エステルおよびソルビタン脂肪酸エステル）など１種以上の医薬的に許容される担体を含むものであってもよい。

本発明の化合物の投与量は、投与方法、対象の年齢、疾患の程度、症状、剤形等により適宜選択されるが、例えば、一日あたり、０．０１ｍｇ〜０．１ｍｇ、０．１ｍｇ〜１ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、５ｍｇ〜１０ｍｇ、１０ｍｇ〜５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、５００ｍｇ〜１ｇ、１ｇ〜１．５ｇ、１．５ｇ〜２ｇ、２ｇ〜５ｇ、５ｇ〜１０ｇの用量で、経口投与されうる。１日あたりの本発明の化合物の量を、１回〜数回に分けて投与してもよい。

以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。なお、化合物の同定は、ＮＭＲスペクトル法、質量分析法等により行った。

明細書の記載を簡略化するために実施例において以下に示すような略号を用いることもある。ＮＭＲに用いられる記号としては、ｓは一重線、ｄは二重線、ｄｄは二重の二重線、ｄｄｄは二重の二重の二重線、ｄｔは二重の三重線、ｔは三重線、ｔｄは三重の二重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒは幅広い、ｂｒｓは幅広い一重線およびＪは結合定数を意味する。

実施例１：化合物１〜３の調製

工程１：サンシュユの偽果（４２ｇ）（株式会社紀伊國屋漢薬局より購入）にメタノール（０．５Ｌ）を加え、２日間静置し抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮し、メタノール抽出物（２１ｇ）を得た。メタノール抽出物を酢酸エチル（５０ｍＬ）に懸濁させ、水（５０ｍＬ）で３回抽出し、水可溶部を得た。水可溶部を活性炭素（１５ｇ）に加え、水（０．２Ｌ）、５％エタノール水溶液（０．２Ｌ）、メタノール（０．２Ｌ）で順次溶出し、メタノール溶出部を減圧濃縮することで、イリドイド型化合物等の配糖体を多く含む粗画分（１．５５ｇ）を得た。
工程２：得られた粗画分を、０．０５Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）（５０ｍＬ）に懸濁させ、β−グルコシダーゼ（スイートアーモンド由来，東洋紡）（３６ｍｇ）を加え、４５℃で２日間攪拌した。反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で３回抽出し、抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、水（１００ｍＬ）で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を減圧留去することで、加水分解物（２０３ｍｇ）を得た。
工程３：得られた加水分解物を、ジクロロメタン（１３．５ｍＬ）に溶かし、トリプタミン（１３１ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸ビスマス（ＩＩＩ）（５４ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。反応液に飽和重曹水（３０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５０ｍＬ）で３回抽出を行った。抽出した酢酸エチル層を全て合わせて、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧濃縮することでインドールアルカロイド型化合物等の化合物を含む多様性拡大抽出物（１９７ｍｇ）を得た。
工程４：得られた多様性拡大抽出物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、ヘキサン−酢酸エチル（４：１）で溶出して画分Ａ（１０．４ｍｇ）、ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で溶出して画分Ｂ（１６．７ｍｇ）、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出して画分Ｃ（３０．５ｍｇ）、ヘキサン−酢酸エチル（１：２）で溶出して画分Ｄ（３０．９ｍｇ）、酢酸エチルで溶出して画分Ｅ（５７．５ｍｇ）をそれぞれ得た。
工程５：画分Ｂを再度シリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で溶出した画分より化合物１（２．５ｍｇ）を得た。画分Ｄを再度シリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出した画分より化合物２（８．４ｍｇ）を得た。また、画分Ｄをヘキサン−酢酸エチル（１：２）で溶出して画分Ｄ−１（７．８ｍｇ）を得、得られた画分Ｄ−１をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、クロロホルム−メタノール（９９：１）で溶出した画分より化合物３（２．５ｍｇ）を得た。

化合物１〜３は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析およびＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
化合物１：
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.05 (1H, br.s), 7.56 (1H, dd, J = 7.9, 1.0 Hz), 7.36 (1H, dd, J = 8.2, 1.0 Hz), 7.35 (1H, s), 7.19 (1H, ddd, J = 8.2, 7.6, 1.0 Hz), 7.12 (1H, ddd, J = 8.2, 7.6, 1.0 Hz), 6.96 (1H, d, J = 2.5 Hz), 4.09-4.12 (1H, m), 3.63 (3H, s), 3.42 (2H, t, J = 7.4 Hz), 3.12 (1H, dd, J = 12.2, 4.7 Hz), 3.04 (1H, td, J = 8.2, 7.4 Hz), 2.98 (2H, dt, J = 7.4, 2.5 Hz), 2.75 (1H, dd, J = 12.2, 6.7 Hz), 2.20 (1H, ddd, J = 14.2, 7.4, 1.5 Hz), 1.87-1.92 (1H, m), 1.66-1.70 (1H, m), 1.56 (1H, ddd, J = 14.2, 8.1, 5.6 Hz), 1.00 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 169.3, 145.9, 136.3, 127.1, 122.2, 122.0, 119.5, 118.5, 112.5, 111.3, 99.9, 74.5, 56.2, 50.5, 47.3, 43.1, 42.0, 41.6, 32.4, 25.1, 13.0.
EIMS m/z (rel. int) 354 [M]⁺ (40), 224 (100), 192 (36).
HREIMS m/z 354.1934 (C₂₁H₂₆O₃N₂の計算値354.1943).
化合物２：
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.31 (1H, br.s), 7.45 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.36 (1H, s), 7.32 (1H, d, J = 7.6 Hz), 7.15 (1H, t, J = 7.6 Hz), 7.10 (1H, t, J = 7.6 Hz), 4.39 (1H, brs), 4.24 (1H, t, J = 5.4 Hz), 3.73 (1H, dd, J = 15.8, 5.4 Hz), 3.62 (3H, s), 3.46 (1H, dd, J = 15.8, 5.8 Hz), 2.98 (1H, ddd, J = 9.8, 8.0, 6.7 Hz), 2.90-2.95 (1H, m), 2.77 (1H, dd, J = 15.1, 5.4 Hz), 2.41 (1H, ddd, J = 10.1, 9.8, 2.5 Hz), 2.24 (1H, dd, J = 14.7, 8.0 Hz), 2.05-2.11 (1H, m), 1.80 (1H, ddd, J = 14.7, 6.7, 5.3), 1.20 (3H, d, J = 6.9 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.6, 144.7, 135.8, 133.4, 127.1, 121.9, 119.6, 118.0, 111.0, 108.6, 104.3, 74.5, 52.8, 51.5, 50.6, 44.9, 42.5, 41.5, 30.9, 22.2, 12.8.
EIMS m/z (rel. int) 352 [M]⁺ (100), 293 (57), 279 (32), 255 (22), 224 (12), 170 (17).
HREIMS m/z 352.1806 (C₂₁H₂₄O₃N₂の計算値352.1787).
化合物３：
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.08 (1H, br.s), 7.55 (1H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz), 7.35 (1H, dd, J = 8.0, 0.9 Hz), 7.19 (1H, td, J = 8.0, 1.0 Hz), 7.13 (1H, td, J = 8.0, 0.9 Hz), 7.00 (1H, d, J = 2.6 Hz), 6.93 (1H, d, J = 2.6 Hz), 5.42 (1H, br.s), 4.75 (1H, d, J = 2.8 Hz), 4.21 (1H, q, J = 6.5 Hz), 3.92 (1H, dd, J = 12.1, 3.9 Hz), 3.62 (3H, s), 3.38 (2H, t, J = 7.1 Hz), 3.35 (3H, s), 2.98 (2H, t, J = 7.1 Hz), 2.23 (1H, dd, J = 12.7, 3.9 Hz), 1.78 (1H, ddd, J = 12.7, 12.1, 2.8 Hz), 1.05 (3H, d, J = 6.5 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.5, 141.3, 136.3, 127.0, 122.5, 122.2, 121.1, 120.2, 119.6, 118.4, 111.9, 111.3, 99.8, 99.5, 64.6, 54.6, 54.4, 50.7, 39.0, 29.3, 26.2, 16.5.
EIMS m/z (rel. int) 382 [M]⁺ (23), 351 (13), 323 (32), 144 (100).
HREIMS m/z 382.0962 (C₂₂H₂₆O₄N₂の計算値382.1893).

実施例２：化合物４〜６の調製

サンシシの果実（３０ｇ）（株式会社紀伊國屋漢薬局より購入）にメタノール（０．５Ｌ）を加え、２日間静置し抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮し、メタノール抽出物（７．５ｇ）を得た。得られたメタノール抽出物を用いて、実施例１の工程１〜３と同様の工程にしたがって、インドールアルカロイド型化合物等の化合物を含む多様性拡大抽出物（４７８ｍｇ）を得た。
得られた多様性拡大抽出物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、ヘキサン−酢酸エチル（３：１）で溶出して画分Ａ（４．３ｍｇ）、ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶出して画分Ｂ（１７．５ｍｇ）、ヘキサン−酢酸エチル（１：３）で溶出して画分Ｃ（３４．０ｍｇ）、ヘキサン−酢酸エチル（１：９）で溶出して画分Ｄ（７４．３ｍｇ）、酢酸エチルで溶出して画分Ｅ（２８５．２ｍｇ）をそれぞれ得た。
画分Ｂをオクタデシルシリル化シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーに付し、水−アセトニトリル（３：２）で溶出した画分より化合物４（２．２ｍｇ）を得た。また、画分Ｄをオクタデシルシリル化シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーに付し、水−アセトニトリル（１：１）で溶出した画分より化合物５（３．０ｍｇ）を、水−アセトニトリル（２：３）で溶出した画分より化合物６（４．４ｍｇ）をそれぞれ得た。

化合物４〜６は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
化合物４：
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.99 (1H, br.s), 7.55 (1H, s), 7.45 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.33 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.14 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.08 (1H, dd, J = 8.0, 7.7 Hz), 6.01 (1H, br.s), 4.44 (1H, d, J = 13.0 Hz), 4.34 (1H, d, J = 7.6 Hz), 4.32 (1H, d, J = 13.0 Hz), 3.72 (1H, dd, J = 15.6, 4.2 Hz), 3.67 (3H, s), 3.56 (1H, td, J = 12.3, 4.1 Hz), 3.25 (1H, q, J = 8.0 Hz), 2.91-2.95 (1H, m), 2.88-2.91 (1H, m), 2.87 (1H, dd, J = 8.0, 7.6 Hz), 2.75-2.78 (1H, m), 2.56 (1H, br.s), 2.10 (1H, ddd, J = 16.7, 8.0, 2.1 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.9, 145.3, 144.4, 136.2, 133.4, 133.1, 126.6, 121.8, 119.4, 117.9, 111.3, 108.8, 99.0, 60.9, 54.1, 52.1, 50.6, 47.0, 39.6, 36.8, 22.1.
EIMS m/z (rel. int) 350 [M]⁺ (100), 319 (26), 291 (26), 279 (50), 170 (39).
HREIMS m/z 350.1619 (C₂₁H₂₂O₃N₂の計算値350.1630).
化合物５：
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.58 (1H, br.s), 7.49 (1H, s), 7.46 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.31 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.15 (1H, t, J = 8.0 Hz), 7.08 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.15 (1H, br.s), 4.65 (1H, br.s), 4.37 (1H, d, J = 12.2 Hz), 4.23 (1H, d, J = 12.2 Hz), 3.72 (1H, dd, J = 12.6, 4.7 Hz), 3.63 (3H, s), 3.48 (1H, td, J = 12.6, 4.4 Hz), 2.93-2.99 (3H, m), 2.82 (1H, dd, J = 15.3, 4.4 Hz), 2.15-2.18 (1H, m).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.2, 145.9, 144.8, 135.9, 135.7, 130.1, 126.5, 122.0, 119.4, 117.9, 111.2, 110.2, 103.6, 83.3, 58.5, 56.5, 51.4, 50.8, 45.1, 37.7, 21.9.
EIMS m/z (rel. int) 366 [M]⁺ (100), 335 (21), 305 (20), 255 (86), 169 (36), 144 (44).
HREIMS m/z 366.1586 (C₂₁H₂₂O₄N₂の計算値366.1580).
化合物６：
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.04 (1H, br.s), 7.56 (1H, dd, J = 8.1, 0.9 Hz), 7.35 (1H, dd, J = 8.1, 0.8 Hz), 7.30 (1H, s), 7.19 (1H, td, J = 8.1, 0.9 Hz), 7.11 (1H, td, J = 8.1, 0.8 Hz), 6.97 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.10 (1H, dd, J = 5.4, 2.1 Hz), 5.61 (1H, dd, J = 5.4, 2.7 Hz), 4.90 (1H, d, J = 6.9 Hz), 3.82 (1H, d, J = 9.4 Hz), 3.81-3.83 (1H, m), 3.67 (3H, s), 3.60-3.65 (1H, m), 3.59 (1H, d, J = 9.4 Hz), 3.50-3.56 (1H,m), 3.02-3.11 (2H, m), 2.43 (1H, dd, J = 9.1, 6.9 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.5, 142.2, 139.3, 136.3, 131.1, 127.2, 122.2, 122.1, 119.5, 118.6, 112.5, 111.2, 97.4, 94.5, 87.4, 72.3, 54.7, 50.8, 47.4, 39.3, 25.9.
EIMS m/z (rel. int) 366 [M-H₂O]⁺ (50), 236 (100), 206 (240).
HREIMS m/z 366.1596 (C₂₁H₂₄O₅N₂の計算値366.1580).

実施例３：化合物７の調製

センブリの全草（７３ｇ）（株式会社紀伊國屋漢薬局より購入）にメタノール（０．８Ｌ）を加え、２日間静置し抽出した。得られた抽出液を減圧濃縮し、メタノール抽出物（２１．６ｇ）を得た。得られたメタノール抽出物を用いて、実施例１の工程１〜３と同様の工程にしたがって、インドールアルカロイド型化合物等の化合物を含む多様性拡大抽出物（７３７ｍｇ）を得た。
得られた多様性拡大抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、クロロホルム−メタノール（９９：１）で溶出して画分Ａ（２４３．１ｍｇ）、クロロホルム−メタノール（１９７：３）で溶出して画分Ｂ（５９．５ｍｇ）、クロロホルム−メタノール（４９：１）で溶出して画分Ｃ（９１．７ｍｇ）、クロロホルム−メタノール（１９：１）で溶出して画分Ｄ（５９．８ｍｇ）、メタノールで溶出して画分Ｅ（１９６．２ｍｇ）をそれぞれ得た。
得られた画分Ｂをオクタデシルシリル化シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーに付し、水−アセトニトリル（３：２）で溶出した画分より化合物７（３．５ｍｇ）を得た。

化合物７は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 9.61 (1H, s), 8.10 (1H, br.s), 7.55 (1H, s), 7.45 (1H, dd, J = 7.9, 0.9 Hz), 7.34 (1H, dd, J = 8.2, 0.8 Hz), 7.18 (1H, ddd, J = 8.2, 8.0, 0.9 Hz), 7.07 (1H, td, J = 8.0, 0.8 Hz), 6.96 (1H, d, J = 2.0 Hz), 4.79 (1H, q, J = 6.4 Hz), 4.20-4.28 (2H, m), 3.75-3.82 (1H, m), 3.56-3.63 (1H, m), 3.10-3.16 (2H, m), 2.94 (1H, dt, J = 16.4, 4.6 Hz), 2.85 (1H, ddd, J = 16.4, 8.8, 5.4 Hz), 1.13 (3H, d, J = 6.4 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 184.4, 165.2, 151.9, 147.7, 136.2, 126.9, 122.5, 122.2, 119.7, 118.1, 115.1, 111.4, 110.9, 95.2, 64.8, 56.2, 51.3, 25.0, 23.1, 18.5.
EIMS m/z (rel. int) 336 [M]⁺ (18), 321 (26), 144 (100), 130 (39).
HREIMS m/z 336.1454 (C₂₀H₂₀O₃N₂の計算値336.1474).

実施例４：化合物８の調製

工程３のトリプタミンの代わりに６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例１の工程１〜３と同様の工程にしたがって、インドールアルカロイド型化合物を含む多様性拡大抽出物（２１３ｍｇ）を得た。得られた多様性拡大抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し，クロロホルム−メタノール（４９：１）で溶出して画分Ａ（１０２ｍｇ）を得た。画分Ａをリサイクル高速液体クロマトグラフィ（カラム：ＹＭＣ−ＧＰＣＴ−２０００、溶出溶媒：酢酸エチル、流速８ｍＬ／分）に付し，溶出時間１２分〜１３分の画分を，５回繰り返し同一のカラムで分離することによって、化合物８（６５ｍｇ）を得た。

化合物８は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.61 (1H, br.s), 7.34 (1H, s), 7.29 (1H, d, J = 8.5 Hz), 6.81 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.75 (1H, dd, J = 8.5, 2.2 Hz), 4.32 (1H, br.s), 4.20 (1H, t, J = 4.8 Hz), 3.79 (3H, s), 3.66 (1H, dd, J = 13.1, 5.9 Hz), 3.60 (3H, s), 3.40 (1H, ddd, J = 13.1, 12.0, 4.4 Hz), 2.91-2.97 (1H, m), 2.83-2.90 (1H, m), 2.68 (1H, dd, J = 15.2, 4.4 Hz), 2.39 (1H, ddd, J = 9.7, 8.2, 4.0 Hz), 2.23 (1H, ddd, J = 14.7, 7.9, 0.9 Hz), 1.99-2.05 (1H, m), 1.77 (1H, dt, J = 14.7, 5.9 Hz), 1.15 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.8, 156.2, 144.9, 136.6, 132.2, 121.5, 118.4, 109.0, 108.1, 104.0, 95.2, 74.3, 55.7, 52.8, 51.5, 50.6, 44.7, 42.3, 41.4, 30.8, 22.2, 12.8.
EIMS m/z (rel. int) 382 [M]⁺ (100), 365 (24), 323 (77), 311 (30), 200 (22).
HREIMS m/z 382.1851 (C₂₂H₂₆O₄N₂の計算値382.1893).

実施例５：化合物９の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに６−クロロトリプタミン（１１０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物９（４．３ｍｇ）を得た。

化合物９は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.20 (1H, br.s), 7.32 (1H, d, J = 1.3 Hz), 7.30 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.28 (1H, d, J = 1.8 Hz), 7.04 (1H, dd, J = 8.4, 1.8 Hz), 4.35 (1H, br.s), 4.22 (1H, t, J = 4.6 Hz), 3.71 (1H, dd, J = 13.3, 5.5 Hz), 3.61 (3H, s), 3.43 (1H, ddd, J = 13.3, 11.8, 4.8 Hz), 2.92-2.97 (1H, m), 2.85-2.91 (1H, m), 2.70 (1H, dd, J = 15.3, 4.8 Hz), 2.38 (1H, ddd, J = 9.8, 8.2, 4.0 Hz), 2.22 (1H, ddd, J = 14.8, 7.8, 1.1 Hz), 2.02-2.08 (1H, m), 1.79 (1H, dt, J = 14.8, 5.7 Hz), 1.17 (3H, d, J = 7.1 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.5, 144.4, 136.1, 134.1, 127.7., 125.8, 120.4, 118.8, 111.0, 108.8, 104.8, 74.5, 52.7, 51.3, 50.7, 44.8, 42.5, 41.4, 30.9, 22.0, 12.7.
EIMS m/z (rel. int) 388 [M+2]⁺ (33), 386 [M]⁺ (100), 327 (72), 313 (48), 289 (39), 204 (30).
HREIMS m/z 386.1431 (C₂₁H₂₃O₃N₂ ³⁵Clの計算値386.1397).

実施例６：化合物１０の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに５−メトキシトリプタミン（２６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１０（９．５ｍｇ）を得た。

化合物１０は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.20 (1H, br.s), 7.33 (1H, s), 7.19 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.87 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.79 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 4.35 (1H, br.s), 4.20 (1H, t, J = 5.5 Hz), 3.82 (3H, s), 3.70 (1H, dd, J = 13.1, 5.7 Hz), 3.59 (3H, s), 3.43 (1H, ddd, J = 13.1, 12.0, 4.7 Hz), 2.91-2.96 (1H, m), 2.85-2.91 (1H, m), 2.70 (1H, dd, J = 15.1, 4.7 Hz), 2.36 (1H, ddd, J = 9.7, 8.1, 3.8 Hz), 2.18 (1H, ddd, J = 14.7, 8.1, 1.2 Hz), 2.00-2.07 (1H, m), 1.77 (1H, dt, J = 14.7, 5.9 Hz), 1.16 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.6, 154.2, 144.6, 134.2, 130.9, 127.5, 111.74, 111.73, 108.4, 104.4, 100.2, 74.5, 56.0, 52.9, 51.5, 50.6, 44.8, 42.5, 41.4, 30.9, 22.2, 12.8.
EIMS m/z (rel. int) 382 [M]⁺ (100), 364 (90), 323 (66), 200 (52), 129 (81).
HREIMS m/z 382.1896 (C₂₂H₂₆O₄N₂の計算値382.1893).

実施例７：化合物１１の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに７−メチルトリプタミン（７１ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１１（１０．１ｍｇ）を得た。

化合物１１は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.10 (1H, br.s), 7.34 (1H, s), 7.29 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.01 (1H, t, J = 7.8 Hz), 6.95 (1H, t, J = 7.8 Hz), 4.39 (1H, br.s), 4.22 (1H, t, J = 5.4 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 13.1, 6.0 Hz), 3.60 (3H, s), 3.44 (1H, ddd, J = 13.1, 12.0, 4.5 Hz), 2.95-3.00 (1H, m), 2.88-2.95 (1H, m), 2.74 (1H, dd, J = 14.5, 5.6 Hz), 2.47 (3H, s), 2.40-2.44 (1H, m), 2.23 (1H, ddd, J = 14.8, 8.2, 0.9 Hz), 2.02-2.10 (1H, m), 1.78 (1H, dt, J = 14.8, 5.4 Hz), 1.20 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.6, 144.7, 135.3, 133.0, 126.6, 122.6, 120.3, 119.9, 115.6, 109.1, 104.3, 74.5, 52.9, 51.5, 50.6, 44.7, 42.5, 41.6, 31.0, 22.3, 16.8, 12.7.
EIMS m/z (rel. int) 366 [M]⁺ (100), 348 (41), 305 (80), 293 (91).
HREIMS m/z 366.1968 (C₂₂H₂₆O₃N₂の計算値366.1943).

実施例８：化合物１２の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに５−クロロトリプタミン（１１４ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１２（２．０ｍｇ）を得た。

化合物１２は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (1H, br.s), 7.38 (1H, d, J = 1.9 Hz), 7.31 (1H, d, J = 1.0 Hz), 7.20 (1H, d, J = 8.6 Hz), 7.08 (1H, dd, J = 8.6, 1.9 Hz), 4.37 (1H, br.s), 4.22 (1H, t, J = 5.2 Hz), 3.71 (1H, dd, J = 13.3, 6.7 Hz), 3.60 (3H, s), 3.42 (1H, ddd, J = 13.3, 11.9, 4.6 Hz), 2.92-2.97 (1H, m), 2.84-2.90 (1H, m), 2.74 (1H, dd, J = 15.4, 4.6 Hz), 2.36 (1H, ddd, J = 9.7, 8.1, 3.7 Hz), 2.23 (1H, ddd, J = 14.8, 8.0, 1.2 Hz), 2.01-2.08 (1H, m), 1.79 (1H, dt, J = 14.8, 5.2 Hz), 1.17 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.4, 144.3, 134.9, 134.1, 128.3, 125.5, 122.2, 117.7, 111.9, 108.5, 104.9, 74.5, 52.7, 51.3, 50.7, 44.8, 42.5, 41.4, 30.8, 22.0, 12.7.
EIMS m/z (rel. int) 388 [M+2]⁺ (22), 386 [M]⁺ (99), 368 (69), 327 (71), 313 (100), 289 (68), 204 (71).
HREIMS m/z 386.1369 (C₂₁H₂₃O₃N₂ ³⁵Clの計算値386.1397).

実施例９：化合物１３の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに５−ブロモトリプタミン（１３３ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１３（１．４ｍｇ）を得た。

化合物１３は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.05 (1H, br.s), 7.55 (1H, d, J = 1.8 Hz), 7.31 (1H, s), 7.22 (1H, dd, J = 8.5, 1.8 Hz), 7.17 (1H, d, J = 8.5 Hz), 4.37 (1H, br.s), 4.22 (1H, t, J = 5.1 Hz), 3.71 (1H, dd, J = 13.3, 5.8 Hz), 3.60 (3H, s), 3.42 (1H, ddd, J = 13.3, 12.0, 4.6 Hz), 2.92-2.98 (1H, m), 2.84-2.90 (1H, m), 2.74 (1H, dd, J = 15.4, 4.6 Hz), 2.36 (1H, ddd, J = 9.9, 8.3, 3.7 Hz), 2.21 (1H, ddd, J = 14.8, 8.1, 0.9 Hz), 2.02-2.09 (1H, m), 1.79 (1H, dt, J = 14.8, 5.1 Hz), 1.17 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.4, 144.3, 134.8, 134.4, 129.0, 124.7, 120.8, 113.0, 112.4, 108.5, 104.9, 74.4, 52.7, 51.3, 50.7, 44.8, 42.5, 41.4, 30.8, 22.0, 12.7.
EIMS m/z (rel. int) 432 [M+2]⁺ (72), 430 [M]⁺ (100), 371 (90), 359 (95), 333 (56), 248 (50).
HREIMS m/z 430.0885 (C₂₁H₂₃O₃N₂ ⁷⁹Brの計算値430.0892).

実施例１０：化合物１４の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに５−メチルトリプタミン（９６ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１４（９．３ｍｇ）を得た。

化合物１４は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.15 (1H, br.d), 7.33 (1H, d, J = 0.9 Hz), 7.22 (1H, d, J = 1.1 Hz), 7.19 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.95 (1H, dd, J = 8.3, 1.1 Hz), 4.35 (1H, br.s), 4.21 (1H, t, J = 4.7 Hz), 3.69 (1H, dd, J = 12.9, 5.9 Hz), 3.59 (3H, s), 3.43 (1H, ddd, J = 12.9, 11.9, 4.7 Hz), 2.92-2.97 (1H, m), 2.85-2.92 (1H, m), 2.71 (1H, dd, J = 15.2, 4.7 Hz), 2.41 (3H, s), 2.31-2.37 (1H, m), 2.20 (1H, ddd, J = 14.7, 7.8, 1.1 Hz), 2.01-2.09 (1H, m), 1.76 (1H, dt, J = 14.7, 5.6 Hz), 1.17 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.6, 144.7, 134.1, 133.5, 128.9, 127.3, 123.4, 117.7, 110.7, 108.1, 104.2, 74.4, 52.9, 51.5, 50.6, 44.9, 42.5, 41.5, 31.0, 22.2, 21.4, 14.2, 12.8.
EIMS m/z (rel. int) 366 [M]⁺ (100), 307 (55), 295 (35), 269 (21), 184 (15).
HREIMS m/z 366.1956 (C₂₂H₂₆O₃N₂の計算値366.1943).

実施例１１：化合物１５の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに５−ベンジルオキシトリプタミン（１０２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１５（１０．３ｍｇ）を得た。

化合物１５は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.20 (1H, br.s), 7.45 (2H, dd, J = 7.3, 1.1 Hz), 7.36 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.33 (1H, d, J = 1.0 Hz), 7.29 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.20 (1H, d, J = 8.7 Hz), 6.97 (1H, d, J = 2.3 Hz), 6.87 (1H, dd, J = 8.7, 2.3 Hz), 5.07 (2H, s), 4.35 (1H, br.s), 4.20 (1H, t, J = 5.0 Hz), 3.69 (1H, dd, J = 12.9, 5.8 Hz), 3.60 (3H, s), 3.43 (1H, td, J = 12.9, 4.5 Hz), 2.92-2.97 (1H, m), 2.83-2.90 (1H, m), 2.71 (1H, dd, J = 15.3, 4.5 Hz), 2.33-2.38 (1H, m), 2.19 (1H, ddd, J = 14.7, 9.0, 1.2 Hz), 2.00-2.08 (1H, m), 1.78 (1H, dt, J = 14.7, 5.8 Hz), 1.16 (3H, d, J = 6.9 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.6, 153.4, 144.6, 137.6, 134.3, 131.1, 128.5 (2C), 127.7, 127.5 (3C), 112.4, 111.7, 108.4, 104.3, 101.9, 74.4, 71.0, 52.9, 51.5, 50.6, 44.8, 42.5, 41.5, 30.9, 22.2, 12.8.
EIMS m/z (rel. int) 458 [M]⁺ (100), 440 (54), 399 (52), 367 (79).
HREIMS m/z 458.2194 (C₂₈H₃₀O₄N₂の計算値458.2206).

実施例１２：化合物１６の調製

化合物１５（４．０ｍｇ、８．７２μｍｏｌ）をメタノール（０．５ｍＬ）に溶かし、２０％水酸化パラジウム−炭素（１．０ｍｇ）を加えて，水素雰囲気（１気圧）下室温で１５時間撹拌した。反応液を濾過し、その濾液を減圧留去した。残渣をオクタデシルシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し、アセトニトリル−水（７：３）で溶出した画分より化合物１６（２．９ｍｇ、７．８８μｍｏｌ）を得た。

化合物１６は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD) δ 7.45 (1H, d, J = 0.6 Hz), 7.15 (1H, d, J = 8.7 Hz), 6.76 (1H, d, J = 2.1 Hz), 6.62 (1H, dd, J = 8.7, 2.1 Hz), 4.42 (1H, br.s), 4.15 (1H, td, J = 5.5, 2.2 Hz), 3.77 (1H, dd, J = 12.8, 6.0 Hz), 3.60 (3H, s), 3.47 (1H, td, J = 12.8, 4.2 Hz), 2.87-2.91 (1H, m), 2.77-2.85 (1H, m), 2.66 (1H, dd, J = 15.0, 4.2 Hz), 2.36 (1H, ddd, J = 9.5, 8.0, 4.1 Hz), 2.14 (1H, ddd, J = 14.3, 7.7, 2.2 Hz), 2.06-2.11 (1H, m), 1.80 (1H, dt, J = 14.3, 5.8 Hz), 1.14 (3H, d, J = 7.0 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD) δ 171.0, 151.4, 147.1, 135.8, 132.8, 129.1, 112.5, 112.0, 108.1, 104.4, 103.0, 74.7, 54.7, 52.7, 51.1, 46.8, 43.1, 42.4, 32.3, 23.5, 13.4.
EIMS m/z (rel. int) 368 [M]⁺ (100), 351 (15), 309 (48), 297 (27), 271 (18), 186 (11).
HREIMS m/z 368.1753 (C₂₁H₂₄O₄N₂の計算値368.1736).

実施例１３：化合物１７の調製

工程３の６−メトキシトリプタミン（１２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の代わりに６−フルオロトリプタミン（１０１ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を用いること以外は、実施例４と同様の方法にしたがって、化合物１７（１２．３ｍｇ）を得た。

化合物１７は、ＥＩＭＳ（電子衝撃質量スペクトル）法による質量分析及びＮＭＲによって解析した。ＥＩＭＳおよびＮＭＲの結果を以下に示す。
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.50 (1H, br.d), 7.32 (1H, s), 7.31 (1H, dd, J = 8.6, 5.1 Hz), 6.99 (1H, dd, J = 7.6, 2.1 Hz), 6.82 (1H, ddd, J = 8.6, 7.3, 2.1 Hz), 4.35 (1H, br.s), 4.21 (1H, t, J = 4.9 Hz), 3.70 (1H, dd, J = 12.9, 5.9 Hz), 3.59 (3H, s), 3.43 (1H, td, J = 12.9, 4.5 Hz), 2.91-2.96 (1H, m), 2.84-2.91 (1H, m), 2.70 (1H, dd, J = 15.3, 4.5 Hz), 2.40 (1H, td, J = 9.5, 3.5 Hz), 2.20 (1H, ddd, J = 14.7, 8.0 Hz), 1.99-2.05 (1H, m), 1.77 (1H, dt, J = 14.7, 5.7 Hz), 1.15 (3H, d, J = 6.8 Hz).
¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ 168.6, 159.8 (d, J = 237.3 Hz), 144.6, 135.8 (d, J = 12.2 Hz), 133.6 (d, J = 2.9 Hz), 123.7, 118.5 (d, J = 10.0 Hz), 108.5, 108.1 (d, J = 24.4 Hz), 104.6, 97.5 (d, J = 25.8 Hz), 74.5, 52.7, 51.4, 50.7, 44.7, 42.4, 41.4, 30.8, 22.1, 12.7.
EIMS m/z (rel. int) 370 [M]⁺ (100), 311 (76), 297 (53), 273 (35), 188 (40).
HREIMS m/z 370.1685 (C₂₁H₂₃O₃N₂Fの計算値370.1693).

薬理試験
以下に、本発明の実施例化合物についての薬理試験方法およびその結果を示す。
［実験材料］
（１）細胞
ヒト成人Ｔ細胞白血病由来ＭＴ２細胞を使用した。ヒト成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）の白血病細胞はＣＤ４分子およびＣＤ２５分子を細胞表面に発現しており、Ｔｒｅｇ由来であると考えられている（Chen S. et al., International Immunology 18:269-277 (2005)）。ＭＴ２細胞はＡＴＬ由来の細胞で、ＣＤ４陽性、ＣＤ２５陽性、ＦＯＸＰ３陽性細胞であることからＴｒｅｇのモデルとして実験に使用した。
（２）被験試料
本発明の実施例化合物（化合物１〜１７）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）によって５０ｍｍｏｌ／Ｌ溶液とし、−８０℃で保存した。

試験例１：ＥＬＩＳＡキットによる培養上清中のヒトＩＬ−１０量の測定
本発明の実施例化合物のＩＬ−１０産生抑制効果を評価するために、以下の手順に従って、対照および実施例化合物におけるＩＬ−１０産生量を測定した。
（１）ＭＴ２細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および１％ペニシリン・ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（培地）に３×１０^５細胞／ｍＬとなるよう懸濁し、２４ウェルプレートの各ウェルに１ｍＬずつ分注、播種した。これに、被験試料（化合物１〜７）を培地で５０倍希釈した希釈液２０μＬまたは１０μＬ加えて、炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ_２条件下）で４８±２時間培養した。また、被験試料（化合物８〜１７）を培地で５０倍希釈した希釈液２５．０μＬまたは１２．５μＬ加えて、炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ_２条件下）で４８±２時間培養した。化合物１〜７の対照として、ＤＭＳＯを培地で５０倍希釈したものを２０μＬ加えた。また、化合物８〜１７の対照として、ＤＭＳＯを培地で５０倍希釈したものを２５．０μＬ加えた。
（２）細胞培養液の一部を採取し、セルカウンター（ＢＩＯＲＡＤＴＣ−２０）で細胞を計数した。細胞培養液を３００×ｇで５分間遠心分離し、上清をＩＬ−１０測定用試料として採取した。当日測定しない場合には−８０℃のフリーザーで保存した。
（３）測定には、Human IL-10 ELISA kit II (BD OptEIA)を使用した。キットには抗ＩＬ−１０抗体処理済ウェル（８ウェル／ストリップ）、Standard/Sample diluent、凍結乾燥のIL-10 Standard含有バイアル（１２８０ｐｇ／バイアル）、ELISA diluent、20 x Washi Buffer、Detection antibody、Enzyme Concentrate、TMB One Step Substrate Reagent、Stop Solution、カバーシートが含まれている。
（４）IL-10 Standard含有バイアルに、２．３ｍＬ Standard/Sample diluentを加え、１５分間室温放置後に溶解した（標準試料原液ＩＬ−１０濃度：５００ｐｇ／ｍＬ）。
（５）検量線用の各濃度の標準試料を以下のように調製した。最初に３００μＬの培地に標準試料原液を３００μＬ加え、ボルテックスミキサー(voltex mixer)で混合した（２５０ｐｇ／ｍＬ）。次に２５０ｐｇ／ｍＬの標準試料３００μＬを３００μＬの培地に加え、ボルテックスミキサーで混合した（１２５ｐｇ／ｍＬ）。同様の操作を順次繰り返し、６２．５、３１．２５、１５．６２５、７．８１２５ｐｇ／ｍＬの濃度の標準試料を調製した。０ｐｇ／ｍＬには培地を使用した。
（６）キットの抗ＩＬ−１０抗体処理ウェル（８ウェルが１ストリップ）を室温に戻し、各ウェルにキットに含まれるELISA diluentを５０μＬずつ加えた。
（７）ELISA diluentの入った各ウェルに、各濃度の標準試料および被験試料（培地で５０−１００倍希釈）を１００μＬずつウェルに添加した。
（８）ウェルにカバーシールを貼り、軽くタッピング後に２時間室温放置した。
（９）20 x Wash Bufferを水で２０倍希釈し、1 x Wash Bufferを調製した。
（１０）２時間の反応後、ウェルの中の溶液をアスピレーションし、３００μＬの1 x Wash Bufferで５回洗浄した。
（１１）Enzyme Concentreat（８ウェル当たり４μＬ）をDetection antibody（８ウェル当たり１ｍＬ）に加えた後、ボルテックスミキサーで混合し、必要量のWorking Detectorを調製した。
（１２）Working Detectorを各ウェルに１００μＬずつ加え、カバーシートをし、１時間室温放置した。
（１３）１時間の反応後、ウェルの中の溶液をアスピレーションし、３００μＬの1 x Wash Bufferで７回洗浄した。
（１４）１００μＬのTMB One Step Substrate Reagentを加え、暗所に３０分間放置した。
（１５）５０μＬのStop solutionを加え、３０分以内に570nmにおける吸光度をバックグランドとして差し引いた470nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダー(Thermo Scientific;Varioskan Flash)で測定した。
（１６）吸光値より、Microsoft Excel 2013を使用し、各濃度の標準試料の吸光値から回帰直線を求め（検量線）、検量線から対照及び各化合物処置検体の値を求めた。実験はｎ＝３で行ったので、各群の値は平均値と標準偏差値を示した。

本発明の実施例化合物を上述の薬理試験で評価したところ、本発明の化合物がＩＬ−１０産生抑制効果を示すことを見出した。対照および各化合物のＩＬ−１０産生抑制活性ならびに対照に対する抑制率（％）を、下表１に示す。

試験例２：蛍光抗体標識抗ＣＴＬＡ−４抗体による細胞内染色とフローサイトメーターによる測定
試験例１においてＩＬ−１０阻害活性を示す上記化合物のうち、特に優れた阻害活性を有する化合物１、２、４および８〜１７について、以下の手順にしたがって、ＣＴＬＡ−４の発現量を測定し、免疫チェックポイント阻害活性を評価した。
（１）ＭＴ２細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および１％ペニシリン・ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（以下、培地）に３ｘ１０^５細胞／ｍＬとなるよう懸濁し、６ウェルプレートの各ウェルに３ｍＬずつ分注、播種した。これに試験化合物（化合物１、２および４）溶液を０．６μＬまたは１．２μＬ、試験化合物（化合物９）溶液を０．７５μＬまたは１．５μＬ、そして、試験化合物（化合物８および１０〜１７）溶液を１．５μＬ加えて、炭酸ガス培養器（３７℃、５％ＣＯ_２条件下）で４８±２時間培養した。化合物１、２および４の対照として、ＤＭＳＯのみを１．２μＬ加えた。また、化合物８〜１７の対照として、ＤＭＳＯのみを１．５μＬ加えた。
（２）細胞培養液の一部を採取し、セルカウンター（ＢＩＯＲＡＤＴＣ−２０）で細胞を計数した。細胞培養液を３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を除去した。細胞濃度が５〜１０ｘ１０^６細胞／ｍＬとなるように１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）添加カルシウム・マグネシウム不含リン酸緩衝生理的食塩液（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ）で懸濁した。
（３）５ｍＬチューブに、細胞懸濁液を各５０μＬ加えた。
（４）FOXP3/Transcription Factor Staining kit (TONBO biosciences)に含まれるFoxp3/Transcription Factor Fix/Perm Concentrate(4X)(Cat. No. TNB-1020-L050)（Ａ液）をFoxp3/Transcription Factor Fix/Perm Diluent (1X)(Cat. No. TNB-1022-L160)（Ａ希釈用液）で希釈し、１×Ａ液を調製した。
（５）１×Ａ液を各チューブに１ｍＬずつ加え、軽くピペッティングして撹拌した。続いて、室温で３０分間放置し、３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を捨てた。
（６）キットに含まれるFlow Cytometry Perm Buffer (10X)(Cat. No. TNB-1213-L150)（Ｂ液）を水で１０倍希釈し、１×Ｂ液を調製した。
（７）１×Ｂ液を２ｍＬ加え、３００ｘｇで５分間遠心分離した。上清を捨て、２％正常マウス血清／ＰＢＳを２μＬ加え、軽くピペッティングした。続いて、室温で１５分間静置した。
（８）ＣＴＬＡ−４測定では、抗ＣＴＬＡ−４抗体(BECKMAN COULTER, CD152-PE clone BN13I M2282)または対照としてマウスＩｇＧ２ａ(BECKMAN COULTER, IgG2a(Mouse)-PE A09142)を２０μＬ加え、軽く撹拌した。続いて、室温・暗所で３０分間放置し、１×Ｂ液を２ｍＬ加え、３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を捨てた。再度、１×Ｂ液を２ｍＬ加え、３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を捨てた。
（９）該溶液を０．５ｍＬの１％ＢＳＡ／ＰＢＳに懸濁させ、フローサイトメーター(ソニー:Cell Sorter SH800)を用いて、励起波長488nmで575nmの蛍光を２時間以内に測定した。結果は、ソフトウエアのFlowJo（Tree Star Inc.）で解析した。測定した蛍光の強度と細胞数のヒストグラムからＣＴＬＡ−４のピーク中間蛍光値（ＭＦＩ）とアイソタイプコントロールのＩｇＧ２ａのピーク中間蛍光値を求め、ＣＴＬＡ−４の中間蛍光値からＩｇＧ２ａの中間蛍光値を際し引いた。実験はｎ＝３で行い、平均値を示した。

本発明の化合物１、２および４（10μmol/Lおよび20μmol/L）、化合物９（12.5μmol/Lおよび25.0μmol/L）ならびに化合物８および１０〜１７（25.0μmol/L）を上述の薬理試験で評価したところ、本発明の化合物１、４および８〜１７、特に化合物１、１５および１７がＣＴＬＡ−４発現抑制効果を示すことを見出した。対照および各化合物のＣＴＬＡ−４発現抑制活性ならびに対照に対する抑制率（％）を、下表２に示す。

上記結果より、本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４阻害活性、すなわち、免疫チェックポイント阻害活性を有することが確認された。

本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４発現抑制作用およびＩＬ−１０産生抑制作用を有しており、免疫チェックポイントに起因する疾患、特に、がんの予防および／または治療に有用である。また、ワクチンの補助剤（アジュバント）として有用である。

Claims

式（Ｉ）：

［式中：
ａ〜ｃ：

は、単結合または二重結合を表し、ｄ：

は、不存在または単結合を表すが、ただし、ａが二重結合を表す場合、ｂは単結合を表し、ｂが二重結合を表す場合、ａは単結合を表し、Ｒ^５は不存在であり、ｃが二重結合を表す場合、Ｒ^６は不存在であり、ならびに、ｃが二重結合を表し、ｄが単結合を表す場合、Ｒ^６およびＲ^７は不存在であり；
環Ａは、以下：

からなる群から選択される基であり、ここで、各基は、置換可能な位置で、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ _１−３アルキル、Ｃ _１−３ヒドロキシアルキル、およびＣ _１−３アルコキシからなる群から選択される１つまたは同一もしくは異なる２つ以上の基で置換されていてもよく；
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２およびＲ^２’ は、水素であり；
Ｒ ^３は、水素またはＣ _１−３アルキルであり；
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_１−６アルコキシであり；
Ｒ ^５およびＲ ^６は、水素であり；
Ｒ ^７は、水素またはヒドロキシであり；
Ｒ^８は、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシまたはベンジルオキシであり；および
ｎは、１〜４である］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。
請求項１記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、ただし、点線ａが二重結合を表す化合物は除く。
Ｒ^４が、水素またはＣ _１−３アルコキシである、請求項１または２に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
Ｒ^８が、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、メチル、メトキシまたはベンジルオキシである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
環Ａが、以下：

である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
Ｒ^３が、水素またはメチルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
ａが二重結合、ｂが単結合、ｃが単結合を表し、
ｄが単結合を表し、
環Ａが、以下：

であり、
Ｒ ^１、Ｒ ^１’ 、Ｒ ^２、Ｒ ^２’ およびＲ ^３が、水素であり、
Ｒ ^４が、Ｃ _１−３アルコキシであり、
Ｒ ^５、Ｒ ^６およびＲ ^７が、水素であり、
Ｒ ^８が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ _１−３アルキル、Ｃ _１−３アルコキシまたはベンジルオキシであり、および
ｎが１である、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
以下：

から選択される、化合物またはその医薬的に許容される塩。
化合物が、

である、請求項８に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分とする、がんの治療剤。
がんが、悪性黒色腫、神経膠芽腫、肺癌、胃癌、大腸癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、副腎癌、胆道癌、食道癌、咽頭癌、喉頭癌、口腔癌、膀胱癌、舌癌、甲状腺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、精巣癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、成人Ｔ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫または多発性骨髄腫である、請求項１１に記載の治療剤。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分として含む、免疫チェックポイント阻害剤。
免疫チェックポイントが、ＣＴＬＡ−４である、請求項１３に記載の阻害剤。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を有効成分とする、ワクチンの補助剤（アジュバント）。