JP6842326B2 - ナノピペット - Google Patents
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Description
例えば下記特許文献1には、比較的小さい細胞塊をナノピペット内に採取した後、吸引動作及び吐出動作を繰り返し行うことで、ナノピペット内で細胞塊を砕くことができるナノピペットが開示されている。
なお、Co−Ni基合金が高弾性材料であるので、突起片の押し付けを解除することで、該突起片を弾性復元変形させて元の状態に復帰させることができる。従って、突起片を繰り返し弾性変形させることができ、対象物の採取を安定して繰り返し行うことができる。また、Co−Ni基合金が高強度材料であるという観点から、突起片が上記基板に対して仮に強く押し付けられたとしても、突起片に例えば変形、ひび割れや欠損等の不具合が生じ難い。従って、長期に亘って使用することができる、高品質なナノピペットとすることができる。
また、図1では、複数の細胞Cが基板4に付着した状態で培養されている場合を図示している。上記基板4としては、例えば図示しない培養容器における底壁部等が挙げられる。複数の細胞Cは、培養による増殖に伴って、互いに密に繋がり合って凝集したコロニー状の細胞塊Mを形成している。
ただし、この場合に限定されるものではなく、例えばピペット本体2の基端部12側に、さらに径の大きい操作用のガラス管を連結し、オペレータが操作用のガラス管を保持して、顕微鏡等を視認しながらナノピペット1を手動で操作しても構わない。
ただし、ピペット部3の固定は、デポジション膜Dに限定されるものではなく、例えば接着や溶着等、他の固着方法で固定しても構わないし、係止等の嵌め合いを利用して固定しても構わない。
さらに、図示の例では、突起片25は根元部分26から先端部分27に向かうにしたがって漸次厚みが薄くなるように形成されている。
Co−Ni基合金としては、組成が質量比で、Co:28〜42%、Cr:10〜27%、Mo:3〜12%、Ni:15〜40%、Ti:0.1〜1%、Mn:1.5%以下、Fe:0.1〜26%、C:0.1%以下、Nb:3%以下を含み、残部不可避不純物からなる組成であることが好ましい。
より好ましくは、上記組成に加え、W:5%以下、Al:0.5%以下、Zr:0.1%以下、B:0.01%以下からなる群より選択される少なくとも1種を含むことが良い。これらの組成範囲を限定した理由を以下に簡単に説明する。
Crは耐食性を確保するのに不可欠な成分であり、またマトリクスを強化する効果を有するが、10%未満では優れた耐食性を得る効果が弱く、27%を超えると加工性及び靱性が急激に低下する。従ってCrの質量比は10〜27%が好ましい。
Niは面心立方格子相を安定化し、加工性を維持し、耐食性を高める効果を有するが、Co、Cr、Mo、Nb、Feの組成範囲において、Niが15%未満では安定した面心立方格子相を得ることが困難であり、40%を超えると機械的強度が低下する。従って、Niの質量比は15〜40%が好ましい。
Mnは脱酸、脱硫の効果、及び面心立方格子相を安定化する効果を有するが、多過ぎると耐食性、耐酸化性を劣化させる。従って、Mnの質量比は1.5%以下が好ましい。
Cはマトリクスに固溶するほか、Cr、Mo、Nb、W等と炭化物を形成し、結晶粒の粗大化の防止効果を有するが、多過ぎると靭性の低下、耐食性の劣化等が生じる。従って、Cの質量比は0.1%以下が好ましい。
Wは、マトリクスに固溶してこれを強化し、加工硬化能を著しく増大させる効果を有するが、5%を超えるとσ相を析出して靭性が低下することから、Wを含有させる場合は質量比を5%以下とすることが好ましい。
Zrは、高温での結晶粒界強度を上げて、熱間加工性を向上させる効果を有するが、多過ぎると逆に加工性が悪くなるため、Zrを含有させる場合は質量比を0.1%以下とすることが好ましい。
Bは、熱間加工性を改善する効果があるが、多過ぎると逆に熱間加工性が低下し割れ易くなるため、Bを含有させる場合は0.01%以下とすることが好ましい。
すなわち、組成が質量比で、Co:28〜42%、Cr:10〜27%、Mo:3〜12%、Ni:15〜40%、Ti:0.1〜1%、Mn:1.5%以下、Fe:0.1〜3%、C:0.1%以下、Nb:3%以下、及び残部不可避不純物よりなるCo−Ni基合金がより好ましい。
このような組成のCo−Ni基合金では、Feの上限を3%とすることにより、耐酸化性が低下することをより効果的に防ぐことができる。
このように、ピペット部3は、高いヤング率及び剛性率を具備しているので、特に突起片25は高い機械的強度を有しながら、径方向への弾性変形が可能とされている。
次に、上述のように構成されたナノピペット1を作製する場合について簡単に説明する。従来から、Co−Ni基合金のような難削材を微細加工してナノピペット1を作製することに関しては、何ら開示も示唆もされていない。
これに対して本実施形態では、図3に示すように、FIB(集束イオンビーム)及びEB(電子ビーム)の2つの荷電粒子ビームを照射可能なFIB加工装置30を利用することで、精度良くナノピペット1を作製することが可能になった。以下、ナノピペット1の作製について説明する。
FIB加工装置30は、Co−Ni基合金のブロック部材31を挟持可能な第1ピンセット32と、ピペット本体2を挟持可能な第2ピンセット33と、FIB及びEBを照射する照射機構34と、FIB或いはEBの照射によって発生した二次荷電粒子Eを検出する検出器35と、デポジション膜Dを形成するための化合物ガスGを供給するガス銃36と、検出された二次荷電粒子Eに基づいて画像データを生成すると共に該画像データを表示部37に表示させる制御部38と、真空チャンバ39と、を備えている。
第1ピンセット32は、ピンセット部40でブロック部材31を挟持することでブロック部材31を安定的に保持している。第2ピンセット33は、ピンセット部40でピペット本体2を挟持することでピペット本体2を安定的に保持している。
SEM鏡筒46は、電子発生源46a及び電子光学系46bを有しており、電子発生源46aで発生した電子を電子光学系46bで細く絞ってEBにした後、真空チャンバ39内においてブロック部材31やピペット本体2に向けてEBを照射することが可能とされている。
なお、化合物ガスGは、二次荷電粒子Eによって分解され、気体成分と固体成分とに分離する。そして、分離した固体成分が堆積することでデポジション膜Dとなる。
制御部38には、オペレータが入力可能な入力部47が接続されている。これにより、制御部38は入力部47によって入力された信号に基づいて各構成品を制御している。つまり、オペレータは、入力部47を介して所望する領域にFIBやEBを照射して観察することや、所望する領域にFIBを照射してエッチング加工を行うことや、所望する領域に化合物ガスGを供給しながらFIBを照射してデポジション膜Dを堆積させることができる。
図4に示すように、第1ピンセット32でブロック部材31の一端部を保持した後、適宜ブロック部材31の姿勢を変化させながらFIBを照射して、ブロック部材31の一部を切り落とすようにブロック部材31を連続的にエッチング加工する。これにより、吸引部20及び突起片25の外形をそれぞれ形成することができると共に、吸引部20と突起片25とを一体に形成することができる。さらに、これと同時に或いは前後して、吸引部20にFIBを連続的に照射することで、該吸引部20を中心軸線Oに沿って貫通するように、吸引部20に孔をあけることができる。これにより、吸引部20に第2吸引通路22を形成することができる。
これにより、ピペット部3とピペット本体2との接触部分にFIBが照射されることで発生した二次荷電粒子Eが化合物ガスGを分解して気体成分と固体成分に分離させる。すると、分離した固体成分が、ピペット部3とピペット本体2との接触部分に堆積してデポジション膜Dとなる。
次に、上述のように構成されたナノピペット1を利用して、図1に示す細胞塊Mの中から所望の細胞C1を採取する場合について説明する。
また、Co−Ni基合金が高強度材料であるという観点から、突起片25が上記基板4に対して仮に強く押し付けられたとしても、突起片25に例えば変形、ひび割れや欠損等の不具合が生じ難い。従って、長期に亘って使用することができる高品質なナノピペット1とすることができる。
しかも、突起片25が外向きに傾斜しているので、基板4に対して突起片25を押し付けたときに、抵抗少なく突起片25を径方向に撓むように弾性変形させることができる。これにより、細胞C同士の繋がりをスムーズに切り離すことができ、所望の細胞C1を速やかに分離させ易い。
図示の例では、周溝61は各突起片25に対して中心軸線O方向に間隔をあけて2つ形成されている。ただし、周溝61の数は、各突起片25に対して1つだけ形成されていても構わないし、中心軸線O方向に3つ以上の多段に形成されていても構わない。
なお、図9では、複数の突起片25を具備する場合を例に挙げて説明しているが、例えば図1及び図2に示す1つの突起片25を有するナノピペット1において、突起片25に周溝61を形成しても構わない。
即ち、中心軸線に沿って延び、対象物を吸引可能な第1吸引通路が内部に形成された筒状のピペット本体と、弾性変形可能な金属材料から形成され、前記中心軸線に沿って延在すると共に前記ピペット本体に基端部が固定されたピペット部と、を備え、前記ピペット部は、対象物を吸引可能な第2吸引通路が前記第1吸引通路に連通し、且つ先端部に開口した状態で内部に形成された筒状の吸引部と、前記吸引部の前記先端部から突出するように形成されると共に、前記中心軸線に対して直交する径方向に弾性変形可能な突起片と、を備えている、ナノピペットであってもよい。
O…中心軸線
1、50、60…ナノピペット
2…ピペット本体
3…ピペット部
10…第1吸引通路
20…吸引部
21…吸引部の基端部
22…第2吸引通路
23…吸引部の先端部
25…突起片
61…周溝
Claims (5)
- 中心軸線に沿って延び、対象物を吸引可能な第1吸引通路が内部に形成された筒状のピペット本体と、
Co、Ni、Cr及びMoを含むCo−Ni基合金から形成され、前記中心軸線に沿って延在すると共に前記ピペット本体に基端部が固定されたピペット部と、を備え、
前記ピペット部は、
対象物を吸引可能な第2吸引通路が前記第1吸引通路に連通し、且つ先端部に開口した状態で内部に形成された筒状の吸引部と、
前記吸引部の前記先端部から突出するように形成されると共に、前記中心軸線に対して直交する径方向に弾性変形可能な突起片と、を備えている、ナノピペット。 - 請求項1に記載のナノピペットにおいて、
前記吸引部は、前記基端部から前記先端部に向かうにしたがって漸次縮径している、ナノピペット。 - 請求項1又は2に記載のナノピペットにおいて、
前記突起片は、前記先端部から前記中心軸線に沿って前記先端部から離間するように突出していると共に、前記先端部から離間するにしたがって漸次前記中心軸線から径方向に離間するように、外向きに傾斜している、ナノピペット。 - 請求項1から3のいずれか1項に記載のナノピペットにおいて、
前記突起片は、前記中心軸線回りを周回する周方向に沿って間隔をあけて複数形成されている、ナノピペット。 - 請求項1から4のいずれか1項に記載のナノピペットにおいて、
前記突起片には、前記中心軸線回りを周回する周方向に沿って延びる周溝が形成されている、ナノピペット。
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