JP6841397B2 - B型肝炎患者の臨床経過を予測する方法 - Google Patents
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Description
そこで本発明は、B型肝炎患者の治療方針の決定に有用な指標(特に、上記のごとき判定に利用可能なもの)となる予測マーカー及びその用途を提供することを課題とする。
[1]B型肝炎患者である被検者由来のB型肝炎ウイルスにおける、I97L変異及びP79Q変異の有無を指標にすること特徴とする、B型肝炎患者の臨床経過を予測する方法。
[2]以下のステップ(1)及び(2)を含む、[1]に記載の予測方法:
(1)被検者由来のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異とP79Q変異の有無を調べるステップ、
(2)ステップ(1)の結果に基づき、B型肝炎患者の臨床経過を判定するステップであって、I97L変異とP79Q変異の存在は肝炎鎮静化の確率が高いことを表す、ステップ。
[3]肝炎鎮静化の確率の高さに関する、以下の(a)又は(b)の基準に従いステップ(2)の判定を行う、[2]に記載の予測方法:
(a) I97L変異とP79Q変異のいずれも認められない場合又はI97L変異とP79Q変異の片方が認められる場合 < I97L変異とP79Q変異の両方が認められる場合
(b) I97L変異とP79Q変異のいずれも認められない場合 < I97L変異とP79Q変異の片方が認められる場合 < I97L変異とP79Q変異の両方が認められる場合
[4]以下のステップ(3)を更に含む、[2]又は[3]に記載の予測方法:
(3)判定結果に基づき、被検者の治療方針を決定又は変更するステップ。
[5]B型肝炎ウイルスの遺伝子型がC型である、[1]〜[4]のいずれか一項に記載の予測方法。
[6]B型肝炎患者がB型慢性肝炎患者である、[1]〜[5]のいずれか一項に記載の予測方法。
[7]B型肝炎ウイルスにおけるI97L変異を検出するための核酸と、B型肝炎ウイルスにおけるP79Q変異を検出するための核酸と、を含む、B型肝炎患者の臨床経過を予測するための検査キット。
[8]B型肝炎ウイルスにおける、I97L変異とP79Q変異の組合せからなる、B型肝炎患者の臨床経過を予測するためのマーカー。
[9]B型肝炎ウイルスにおける、I97L変異とP79Q変異の、B型肝炎患者の臨床経過を予測するためのマーカーとしての使用。
[10]B型肝炎患者である被検者由来のB型肝炎ウイルスにおける、I97L変異の有無を指標にすること特徴とする、インターフェロン治療後の臨床経過を予測する方法。
[11]以下のステップ(i)及び(ii)を含む、[10]に記載の予測方法:
(i)インターフェロン治療後の被検者由来のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異の有無を調べるステップ、
(ii)ステップ(i)の結果に基づき、インターフェロン治療後の臨床経過を予測するステップであって、I97L変異の存在はインターフェロン治療後の肝炎鎮静化の確率が高いことを表す、ステップ。
[12]以下のステップ(I)を更に含み、ステップ(i)とステップ(I)の結果から、インターフェロン治療によってI97L変異が導入されたか否かを判断し、I97L変異が導入された場合に肝炎鎮静化の確率が高いと予測する、[11]に記載の予測方法:
(I)インターフェロン治療前の被検者由来のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異の有無を調べるステップ。
[13]以下のステップ(a)及び(b)を含む、インターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測する方法:
(a)インターフェロン治療前の被検者由来のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異の有無を調べるステップ、
(b)ステップ(a)の結果に基づき、インターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測するステップであって、I97L変異の存在はインターフェロン治療の効果が高いこと、及びインターフェロン治療後の肝炎鎮静化の確率が高いことを表す、ステップ。
[14]以下のステップ(iii)を更に含む、[11]〜[13]のいずれか一項に記載の予測方法:
(iii)予測結果に基づき、被検者の治療方針を決定又は変更するステップ。
[15]B型肝炎ウイルスの遺伝子型がC型である、[10]〜[14]のいずれか一項に記載の予測方法。
[16]B型肝炎患者がB型慢性肝炎患者である、[10]〜[15]のいずれか一項に記載の予測方法。
[17]B型肝炎ウイルスにおけるI97L変異を検出するための核酸を含む、B型肝炎患者に対するインターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測するための検査キット。
[18]B型肝炎ウイルスにおけるI97L変異からなる、B型肝炎患者に対するインターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測するためのマーカー。
[19]B型肝炎ウイルスにおけるI97L変異の、B型肝炎患者に対するインターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測するためのマーカーとしての使用。
本発明の第1の局面はB型肝炎患者の臨床経過を予測する方法(以下、「本発明の予測方法」と呼ぶことがある)に関する。本発明における「臨床経過」は肝炎の病態ないし症状の変化を表すものである。典型的には、「臨床経過」は、肝炎が鎮静化(症例によってはHBs抗原が消失)と、活動性肝炎が持続(肝硬変や肝癌に進展することが多い)の二つに大別される。「臨床経過」は、HBV DNA値、ALT値又はHBs抗原、或いはこれらの中の二つ以上の組合せによって評価なし把握することができる。例えば、HBV DNAが低値(例えば4 log copies/mL未満)且つALTが正常値(例えば30 IU/L以下)が持続する場合、肝炎が鎮静化した状態であると評価される。HBs抗原が消失すれば、臨床的に更に予後の良い状態に至ったと評価できる。一方、HBV DNAが高値(例えば4 log copies/mL以上)且つALTが高値(例えば30 IU/Lを超える)が継続する場合、活動性肝炎が持続している状態と評価される。
(1)被検者由来のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異とP79Q変異の有無を調べるステップ
(2)ステップ(1)の結果に基づき、B型肝炎患者の臨床経過を判定するステップであって、I97L変異とP79Q変異の存在は肝炎鎮静化の確率が高いことを表す、ステップ
<肝炎鎮静化の確率の高さに関する基準の例>
(a) I97L変異とP79Q変異のいずれも認められない場合又はI97L変異とP79Q変異の片方が認められる場合 < I97L変異とP79Q変異の両方が認められる場合
(b) I97L変異とP79Q変異のいずれも認められない場合 < I97L変異とP79Q変異の片方が認められる場合 < I97L変異とP79Q変異の両方が認められる場合
本発明は、B型肝炎患者の臨床経過を予測するための検査キットも提供する。当該検査キットを利用すれば、本発明の予測方法を簡便に実施することができる。本発明の検査キットは、I97L変異検出用の核酸試薬と、P79Q変異検出用の核酸試薬を必須の要素として含む。以下、各核酸試薬の例を示す。
<I97L変異検出用の核酸試薬>
(1)I97L変異をもたらす2189位の塩基がA(アデニン)である、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に相補的な配列を有する非標識又は標識核酸
(2)I97L変異をもたらす2189位の塩基がC(シトシン)である、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に相補的な配列を有する非標識又は標識核酸
(3)(1)と(2)の両者(即ち、組合せ)
(4)I97L変異をもたらす2189位の塩基がA(アデニン)である場合にのみ、該塩基を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)を特異的に増幅するように設計された核酸セット
(5)I97L変異をもたらす2189位の塩基がC(シトシン)である場合にのみ、該塩基を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)を特異的に増幅するように設計された核酸セット
(6)(4)の核酸セットと(5)の核酸セットの両者(即ち、組合せ)
(7)I97L変異をもたらす2189位の塩基を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)を特異的に増幅するように設計された核酸セットであって、2189位の塩基がA(アデニン)である、当該塩基位置を含むB型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマー、及び/又は2189位の塩基がC(シトシン)である、当該塩基位置を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマーと、当該部分ゲノムDNAの近傍領域に対して特異的にハイブリダイズするアンチセンスプライマーと、からなる核酸セット
(1)P79Q変異をもたらす2136位の塩基がC(シトシン)である、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に相補的な配列を有する非標識又は標識核酸
(2)P79Q変異をもたらす2136位の塩基がA(アデニン)である、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に相補的な配列を有する非標識又は標識核酸
(3)(1)と(2)の両者(即ち、組合せ)
(4)P79Q変異をもたらす2136位の塩基がC(シトシン)である場合にのみ、該塩基を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)を特異的に増幅するように設計された核酸セット
(5)P79Q変異をもたらす2136位の塩基がA(アデニン)である場合にのみ、該塩基を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)を特異的に増幅するように設計された核酸セット
(6)(4)の核酸セットと(5)の核酸セットの両者(即ち、組合せ)
(7)P79Q変異をもたらす2136位の塩基を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)を特異的に増幅するように設計された核酸セットであって、2136位の塩基がC(シトシン)である、当該塩基位置を含むB型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマー、及び/又は2136位の塩基がA(アデニン)である、当該塩基位置を含む、B型肝炎ウイルスのゲノムDNA領域(部分ゲノムDNA)に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマーと、当該部分ゲノムDNAの近傍領域に対して特異的にハイブリダイズするアンチセンスプライマーと、からなる核酸セット
本発明の別の局面は、インターフェロン治療の効果及びインターフェロン治療後の臨床経過を予測する指標としてもI97L変異が有用であるとの知見に基づき、インターフェロン治療(PegIFN治療含む)の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測する方法(以下、「本IFN治療予測方法」と呼ぶことがある)を提供する。本IFN治療予測方法ではI97L変異の有無を指標としてインターフェロン治療の効果及びインターフェロン治療後の臨床経過を予測する。即ち、インターフェロン治療の効果及びインターフェロン治療後の臨床経過を予測するためのマーカーとしてI97L変異を用いる。以下、本IFN治療予測方法の詳細を述べるが、上記の第1の局面と同一の用語や構成などについては、対応する説明を援用することとし、重複する説明を省略する。
(a)インターフェロン治療前の被検者由来のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異の有無を調べるステップ
(b)ステップ(a)の結果に基づき、インターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測するステップであって、I97L変異の存在はインターフェロン治療の効果が高いこと、及びインターフェロン治療後の肝炎鎮静化の確率が高いことを表す、ステップ
本発明は、B型肝炎患者に対するインターフェロン治療の効果及び/又はインターフェロン治療後の臨床経過を予測するための検査キットも提供する。当該検査キットを利用すれば、本IFN治療予測方法を簡便に実施することができる。本発明の検査キットはI97L変異検出用の核酸試薬を必須の要素として含む。I97L変異検出用の核酸試薬の構成は上記の通りであるため、その説明を省略する。
AASLD(参考文献3)やEASL(参考文献5)のガイドラインによると、HBe抗原陰性のB型慢性肝炎患者はHBV DNAが4 log copies/mLより高く、ALT値が正常範囲の上限を超える場合には治療すべきとしている。日本におけるガイドラインではHBV DNAが4 log copies/mLより高く、ALT値が31 IU/Lより高い場合に、HBe抗原陰性B型慢性肝炎患者の治療開始が推奨される(参考文献16)。しかしながら、これらの患者の一部は治療しなくても自然に鎮静化し、結果的にHBV DNA低値且つALT正常の望ましい状態になり、症例によってはHBs抗原の消失がみられる。そのため、その後の臨床的な経過の予測に有用なファクター/指標(遺伝子の変異など)を見つけることが望まれる。本発明者らは、B型慢性肝炎患者におけるHBV DNA低値、ALT正常、HBs抗原消失を予測可能な遺伝子変異を明らかにするため、全遺伝子配列の解析を行った。この研究の目的はHBe抗原陰性B型慢性肝炎患者における、肝炎の鎮静化と関連する遺伝子変異を決定することである。この目的を達成するため、まず、少なくとも2年間の臨床経過に基づき分類したHBe抗原陰性B型慢性肝炎患者について、観察開始時のHBV DNAの全塩基配列を比較した。次に、少なくとも2年間、HBV DNA低値とALT正常の持続する状態への累積達成率を調べた。加えて、Kaplan-Meier法を用い、HBe抗原陰性B型慢性肝炎患者とHBe抗原陽性B型慢性肝炎患者の両方について、HBs抗原の累積消失率と、同定された変異の有無との関係を検討した。
検討1:全ウイルス遺伝子配列の比較
ジェノタイプCのHBV DNAを持つ患者を、2年以上の経過観察におけるHBV DNA値とALT値により3つの群に分類した。A群:HBV DNA値 ≧ 5.0 log copies/mL、ALT値 ≧ 120 IU/Lで持続。B群:HBV DNA値 < 5.0 log copies/mL、ALT値 < 60 IU/Lで持続。C群:HBV DNA値 < 4.0 log copies/mL、ALT値 < 30 IU/Lで持続。A群、B群、C群に該当する33名のB型慢性肝炎患者の血清を、名古屋大学附属病院の連続するB型慢性肝炎患者(A群 n=10、B群 n=11、C群 n=12)からレトロスペクティブに入手した。A群では患者の意志により少なくとも2年間、核酸アナログ治療は行われなかった。33人のB型慢性肝炎患者の中に、C型ウイルス肝炎やアルコール多飲、脂肪肝などの肝疾患の合併を認める者はいなかった。超音波検査及び/又はダイナミックCT検査と採血で肝硬変と診断された患者は除外した。HBVウイルスの全核酸配列はネスティッド(nested)PCRとダイレクトシークエンス法により決定した。HBV DNAはQIAamp(登録商標) Circulating Nucleic Acid kit (Qiagen, Hilden, Germany)を使用して200μlの血清から抽出した。最初のPCR(1stPCR)は、Guntherら(参考文献17)によって設計された以下のプライマーを使用した。
FullS (5’-CCG GAA AGC TTG AGC TCT TCT TTT TCA CCT CTG CCT AAT CA-3’, nt 1821-1841)(配列番号2)
FullAS (5’-CCG GAA AGC TTG AGC TCT TCA AAA AGT TGC ATG GTG CTG G-3’, nt 1823-1806) (配列番号3)
BF1s (5’-TTT TTC ACC TCT GCC TAA TCA-3’, nt 1821-1841)(配列番号4)
BR5 (5’-AAC TGG AGC CAC CAG CAG GA-3’, nt 74-55)(配列番号5)
BF4 (5’-GTC ACC ATA TTC TTG GGA AC-3’, nt 2816-2835)(配列番号6)
BR7 (5’-GGG TTC AAA TGT ATA CCC AA-3’, nt 839-820)(配列番号7)
BF7 (5’-TAT TGG GGG CCA AGT CTG TA-3’, nt 752-771)(配列番号8)
BR1s (5’-AAA AAG TTG CAT GGT GCT GG-3’, nt 1825-1806)(配列番号9)
BF2 (5’-CAG ACA ACT ATT GTG GTT TC-3’, nt 2191-2210)(配列番号10)
BF3 (5’-TCT TTA ATC CTG AGT GGC AA-3’, nt 2512-2531)(配列番号11)
BF5 (5’-AAG AGA CAG TCA TCC TCA GG-3’ nt 3183-3202)(配列番号12)
BF6 (5’-CCT CCA ATT TGT CCT GGC TA-3’, nt 350-369)(配列番号13)
BF8 (5’-TTT ACC CCG TTG CCC GGC A-3’, nt 1142-1160)(配列番号14)
BR2 (5’-CAG AAT AGC TTG CCT GAG TG-3’, nt 2080-2061)(配列番号15)
BR3 (5’-TTC CCG AGA TTG AGA TCT TC-3’, nt 2440-2421)(配列番号16)
BR4 (5’-GAC CAA ATG CTC CCG CTC CT-3’, nt 3040-3021)(配列番号17)
BR6 (5’-GAG CAG GGG TCC TAG GAA TC-3’ nt 193-174)(配列番号18)
C型慢性肝炎、アルコール摂取、脂肪肝などの肝疾患を合併しないジェノタイプCの123名のB型肝炎患者をレトロスペクティブに評価した。20名は超音波検査及び/又はダイナミックCT検査と採血で肝硬変と診断され、除外した。21名は経過観察期間が2年以内のため除外した。82名のジェノタイプC B型慢性肝炎患者について、検討1で同定した変異の有病率などを調べた。コア領域のアミノ酸配列をネスティッド(nested)PCRのダイレクトシークエンスにより決定した。PCRの手順は検討1と同様であるが、コア領域のみを対象とするため、より増幅効果のよいシークエンスプライマーを2nd PCRに使用した。この2nd PCR用プライマーが、検討1で使用したプライマーと同様の結果をもたらすことを確認した。この2nd PCR用プライマー(以下に示す)はEhataら(参考文献19)が以前報告したものである。
CF1 (5’-GGG AGG AGA TTA GGT TAA-3’, nt 1618-1635)(配列番号19)
CF3R (5’-ACC TTA TGA GTC CAA GGG AT-3’, nt 2347-2328)(配列番号20)
CS4 (5’-GCA CTC AGG CAA GCT ATT CT-3’, nt 1934-1953)(配列番号21)
CS5R (5’-AGA ACA GTT TCT CTT CCA A-3’, nt 2121-2103)(配列番号22)
HBs抗原(Architect HBsAg QT; Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA)、HBe抗原(Architect HBsAg QT; Abbott Laboratories)、及び抗HBe抗体(Architect HBsAg QT; Abbott Laboratories)は化学発光法又は酵素免疫アッセイで測定した。HBV DNAはPCRベースのアッセイ(COBAS TaqMan HBV auto v2.0; Roche Molecular, Pleasanton, NJ, USA; detection limit from 2.1-9.0 log copies/mL)で定量的に検出した。
結果は中央値(1/4-3/4)か平均値(±標準偏差)で表した。平均の定量値における群間の違いはStudent’s t-testで解析した。また、ノンパラメトリックデータおいて群間の違いはMann-Whitney U testで測定した。比率における違いはカイ二乗検定で検定した。持続HBV DNA低値且つALT正常、並びにHBs抗原消失とHCCの累積発生率はKaplan-Meier法で決定した。統計解析にはSPSS software version 22.0 (SPSS Japan, Tokyo, Japan)を使用した。すべてのP値は両側検定で求め、P<0.05を統計的有意とした。
検討1の患者背景
各群の観察開始時の患者背景を図1に示す。ALTの中央値はA群、B群及びC群でそれぞれ70.5 IU/L、26.0 IU/L及び17.5 IU/Lであった。ALT値はA群よりB群とC群で有意に低かった(それぞれP = 0.024, 0.006)。HBV DNAの中央値はA群、B群及びC群でそれぞれ6.2 log copies/mL、3.8 log copies/mL及び3.4 log copies/mLであった。HBV DNA量はA群よりB群とC群で有意に低かった(それぞれP = 0.007, 0.001)。性差、年齢、T.Bil、アルブミン、血小板値及びHBs抗原については群間で有意な差は見られなかった。2年のフォローアップ後、A群の10人中5人にエンテカビル(entecavir)による治療が行われた。他の5人は経過観察を希望した。B群において、11人中1人に対して4年のフォローアップ後にエンテカビルによる治療が行われた。他の10名は治療が必要ではなかった。C群ではフォローアップ中に治療が必要になったものはいなかった。
BCP(A1762T)変異のある患者の割合はA群、B群及びC群において100%、90.9%及び58.3%であり、群間に有意な違いは見られなかった。PC(G1896A)変異のある患者の割合はA群、B群及びC群において50.0%、63.6%及び75.0%であった。この割合はA群、B群、C群の順で増加したが、有意な差は見られなかった。PC(G1899A)変異のある患者の割合はA群、B群及びC群において10.0%、9.1%及び25.0%であった(図2)。
方法の欄で定義した重要な変異がエンベロープ領域で3カ所(E A60V、E R189K、E I244T)、コア領域で5カ所(C P79Q、C E83D、C I97L、C L100I、C P130T)、ポリメラーゼ領域で2カ所(P I617L、P R715Q)検出された。これらの中でコアI97L変異の発生率だけが群間で有意に異なっていた(A群は30%、B群は36.4%、C群は83.3%)(P = 0.021)(図3)。コア領域におけるアミノ酸変異残基61から130までを図4に示す。
HBe抗原の状態で区分した、ベースラインの患者背景を図5に示す。ALT値はHBe抗原陰性患者よりHBe抗原陽性患者で有意に高値であった(P = 0.004)。HBs抗原値とHBV DNA量はHBe抗原陰性患者と比較してHBe抗原陽性患者において有意に高かった(P = 0.022 と P < 0.001)。I97L変異率はHBe抗原陰性の61名の患者において検討1と同様であった。I97L変異はHBe抗原陰性患者により多く認められた(50.8% vs. 14.3%。P = 0.002。HBe抗原陽性患者ではI/L=18/3、HBe抗原陰性患者ではI/L/F/L+F/I+F =25/31/2/1/2。コア領域の97番残基にはI97LとI97Fなどのアミノ酸置換が見られた。2つの変異が混在する場合にはI97L+Fのように表した)。
I97L変異と追加のP79Q変異はHBe抗原陽性患者よりもHBe抗原陰性患者に多くみられる。そこで、I97L変異とP79Q変異の有無に基づき、HBe抗原陰性患者の特徴を比較した。I97L変異の有無で区分したベースラインの臨床背景を図10に示す。一方、I97L変異とP79Q変異の有無で区分したものを図11に示す。I97L変異のある患者は野生型I97の患者より有意に若かった(P = 0.046)。性差、ALT、T.Bil、アルブミン、血小板値、HBs抗原、HBV DNA値及び観察期間については群間で有意な差は見られなかった。I97L変異とP79Q変異のある患者のHBs抗原値は、野生型I97の患者、I97L変異で野生型P79の患者と比較して有意に低値であった(P = 0.026、P = 0.015)。性差、年齢、AL、T.Bil、アルブミン、血小板値、HBV DNA値及び観察期間については有意な差は見られなかった(図11)。I97L変異のある患者ではHBV DNA値は3〜4 log copies/mLで変動し徐々に減少した。一方、野生型I97の患者では5 log copies/mL付近で観察期間(4年)の間変動した(図12A)。I97L変異のある患者ではALT値は2.5年間20〜50 IU/Lで変動し、その後1.5年は20 IU/L程度で安定した。対照的に野生型I97の患者ではALT値は30〜70 IU/L程度4年にわたり変動した(図12B)。追加のコアP79Q変異を考慮した場合、I97L変異とP79Q変異のある患者ではHBV DNA値は3〜4 log copies/mLで変動し、徐々に減少した。一方、野生型I97の患者では5 log copies/mL程度で観察期間(4年)の間、変動した(図12C)。I97L変異とP79Q変異のある患者では2.5年間、ALT値は20〜50 IU/Lで変動し、その後1.5年は20 IU/Lより低く安定した。対照的に野生型I97でP79Q変異の患者ではALT値は4年にわたって30〜70 IU/Lで変動した(図12D)。
この検討の結果、HBe抗原陰性のB型慢性肝炎患者において持続HBV DNA低値とALT正常と関連するコア領域の変異、I97Lが同定された。驚くことに、このコア領域の変異はHBs抗原消失とも関連していた。Ehataらは、I97Lを含むコア領域(84〜101アミノ酸残基)の変異が免疫反応による肝障害を反映すると報告した(参考文献19)。その研究では、HBe抗原陰性患者のうち4症例全例でコアI97L変異がみられた。また、コア残基84〜99の変異は重症肝炎と関連していることが示された(参考文献20)。更に驚いたことに、コアI97L変異は感染の自然経過中にみられる最も高頻度にみられる変異であった(参考文献21、22)。コア領域の変異は免疫認識部位の周りに頻度が高く見つかり、免疫排除期により多く見られる(参考文献22)。これらの結果はI97L変異が免疫反応により引き起こされるかもしれないことを示している。また、免疫反応が重篤な肝障害を起こしたときにI97L変異を生じさせ、最終的に肝硬変や肝癌を発症させる可能性を示している(参考文献23)。しかしながら、今回の研究ではI97L変異は多くの患者、特にHBe抗原陰性患者に肝硬変のない状態で認められることが示された。それゆえ、ある患者ではI97L変異は重篤な肝障害を起こすことなく、免疫反応により誘導されるかもしれない。あるいは、最初に感染した時にすでに存在するのかもしれない。B型慢性肝炎感染の自然経過中にI97L変異が誘導されるメカニズムを明らかにするためには、更なる研究が必要と考えられる。
B型慢性肝炎においてその後の経過を予測するにはHBV DNA及びALTの値に加え、コアI97変異及び追加のP79Q変異を測定することが望まれる(研究1)。コアI97変異の更なる臨床的意義を見出すべく、インターフェロン治療前後のI97L変異により、その後肝炎が鎮静化するかどうかを検討した。
B型慢性肝炎患者においてインターフェロン治療前後にI97変異が測定された18名(年齢中央値36歳、男/女=14/4、HBe抗原陽性/陰性=12/6、IFN治療/PegIFN治療=7/11)を対象とした。観察期間は中央値3.5年である。インターフェロン治療前後のI97とKaplan-Meier法による累積肝炎沈静化率(HBVDNA値 4.0 log copies/mL未満且つALT値 30 IU/L未満を半年以上持続)と患者背景を比較検討した。I97変異はダイレクトシークエンスにより調べた。
観察開始時にHBe抗原陽性例(陽性群=12例)の年齢は中央値で33歳であり、HBe抗原陰性例(陰性群=6例)の中央値59.5歳と比較して有意に若年であった(P=0.003)。その他の項目(ALT、血小板値、T.Bil、アルブミン、HBV DNA、HBs抗原量及び観察期間)に有意な差はみられなかった。陽性群では8例(66.7%)でセロコンバージョンが起こりHBe抗原陰性となった。陽性群ではI97変異はIFN治療前の3/12(25.0%)が治療後の5/12(41.6%)になり、Peg-IFNの施行された2例で治療前I97野生型が治療後I97L変異になり、その後肝炎が沈静化した。陰性群ではI97L変異は治療前で3/6(50%)であり、治療後も変化は見られなかった。治療後I97L変異のある症例の累積肝炎沈静化率はI97L野生型である症例より有意に高率であった(P=0.040)。
HBe抗原陽性のB型慢性肝炎患者においてI97野生型の症例の一部でPegIFNによりI97L変異が誘導され、その症例では肝炎が鎮静化した。また、IFN治療前I97L変異例も含めて、IFN治療後におけるI97L変異例ではI97野生型例より肝炎が鎮静化していた。
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Claims (6)
- B型慢性肝炎患者である被検者由来の、遺伝子型がC型のB型肝炎ウイルスにおける、コア領域のアミノ酸配列における97番目のアミノ酸の変異であるI97L変異及びコア領域のアミノ酸配列における79番目のアミノ酸の変異であるP79Q変異の有無を指標にすることを特徴とする、B型肝炎患者の臨床経過を予測する方法。
- 以下のステップ(1)及び(2)を含む、請求項1に記載の予測方法:
(1)被検者由来の、遺伝子型がC型のB型肝炎ウイルス遺伝子サンプルについて、I97L変異とP79Q変異の有無を調べるステップ、
(2)ステップ(1)の結果に基づき、B型慢性肝炎患者の臨床経過を判定するステップであって、I97L変異とP79Q変異の存在は肝炎鎮静化の確率が高いことを表す、ステップ。 - 肝炎鎮静化の確率の高さに関する、以下の(a)又は(b)の基準に従いステップ(2)の判定を行う、請求項2に記載の予測方法:
(a) I97L変異とP79Q変異のいずれも認められない場合又はI97L変異とP79Q変異の片方が認められる場合 < I97L変異とP79Q変異の両方が認められる場合
(b) I97L変異とP79Q変異のいずれも認められない場合 < I97L変異とP79Q変異の片方が認められる場合 < I97L変異とP79Q変異の両方が認められる場合 - 以下のステップ(3)を更に含む、請求項2又は3に記載の予測方法:
(3)判定結果に基づき、被検者の治療方針を決定又は変更するステップ。 - 遺伝子型がC型のB型肝炎ウイルスにおける、コア領域のアミノ酸配列における97番目のアミノ酸の変異であるI97L変異を検出するための核酸と、遺伝子型がC型のB型肝炎ウイルスにおける、コア領域のアミノ酸配列における79番目のアミノ酸の変異であるP79Q変異を検出するための核酸と、を含む、B型慢性肝炎患者の臨床経過を予測するための検査キット。
- 遺伝子型がC型のB型肝炎ウイルスにおける、コア領域のアミノ酸配列における97番目のアミノ酸の変異であるI97L変異と、コア領域のアミノ酸配列における79番目のアミノ酸の変異であるP79Q変異の、B型慢性肝炎患者の臨床経過を予測するためのマーカーとしての使用。
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