JP6836829B2 - 核内受容体リガンドを含む免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物 - Google Patents

Description

本発明は、核内受容体リガンドを含む免疫誘導促進用組成物及び免疫誘導促進用組成物を含む免疫誘導のためのワクチン医薬組成物に関する。

一般に広く使用されているワクチンは、微生物若しくはウイルス等の病原体又はその一部の毒性を弱めるか無効化したもので、生体に投与されることにより感染症予防のための免疫を誘導するものである。

ウイルスや微生物等の外来性異物を貪食した樹状細胞は、リンパ節へと移行し、ｎａｉｖｅＴ細胞（Ｔｈ０細胞）に異物の情報を与え、ｈｅｌｐｅｒＴ細胞の分化を誘導する。Ｔｈ０細胞は、樹状細胞との様々な情報の授受により、細胞性免疫を担う１型ｈｅｌｐｅｒＴ細胞（Ｔｈ１細胞）や液性免疫を担う２型ｈｅｌｐｅｒＴ細胞（Ｔｈ２細胞）へと分化する（例えば、［非特許文献１］及び［非特許文献２］参照）。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、樹状細胞を始め、自然免疫系を担う免疫担当細胞表面上に多く発現しており、ＴＬＲリガンドを受容することで活性化し、ｈｅｌｐｅｒＴ細胞の分化を促進する。これにより、免疫反応が賦活化される（例えば、［非特許文献３］参照）。従来、免疫賦活化ではＴＬＲ刺激を介した反応経路のみが知られており、それ以外の反応経路は不明であった。
一方、コレラトキシンや大腸菌易熱性毒素などの毒素類や、抗原の徐放性により免疫反応の効果を高めるような油脂系アジュバントにも免疫賦活化作用があることは知られているが、その安全性と効果のバランスに関しては問題があった（例えば、［非特許文献４］参照）。

Ｌｉｐｓｃｏｍｂ ＭＦ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ．， ８２， ９７−１３０ （２００２） Ｚｈｏｕ Ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ３０， ６４６−６５５ （２００９） Ｍａｚｚｏｎｉ Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．， ７５， ７２１−７３０ （２００４） Ｓｔｅｖｃｅｖａ Ｌ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ， １１， ８０１−８１１ （２００５）

本発明は、上記現状に鑑み、様々な抗原に対する免疫誘導のために普遍的に使用可能であり、細胞性免疫や液性免疫といった生体防衛作用を効果的に発揮する免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物を提供することを目的とする。

本発明者らは、樹状細胞が抗原を貪食する際に、薬物によって外部から刺激を加えることで、ＴＬＲリガンドのように自然免疫系が活性化され、効果的な免疫反応を誘導できることを見出した。そして、免疫反応の起点である樹状細胞を制御することにより抗原特異的な免疫反応を効果的に誘導できる点に着目し、鋭意検討を行った。その結果、驚くべきことに、細胞表面に局在するＴＬＲとは全く異なり、細胞内特に核内に存在する、核内への情報伝達および転写制御を担う核内受容体に作用する薬物を用いることにより、抗原特異的な免疫誘導が可能であることを見出した。
即ち、本発明は、核内受容体リガンドを、抗原と共に又は別々に、同じ部位に又は別の部位に、直接生体に投与することで、ＴＬＲリガンドによるＴＬＲ刺激を介しない反応により、抗原特異的な免疫反応を効果的に誘導可能であることを見出した。

即ち、本発明は、核内受容体リガンドを含み、上記核内受容体リガンドは、レチノイドＸ受容体作動薬、甲状腺ホルモン受容体作動薬及びエストロゲン受容体調節薬からなる群より選択される少なくとも１種であり、上記レチノイドＸ受容体作動薬は、ベキサロテン及びその薬理学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、上記甲状腺ホルモン受容体作動薬は、レボチロキシン、リオチロニン及びそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、上記エストロゲン受容体調節薬は、クロミフェン、ラロキシフェン、タモキシフェン及びそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種であることを特徴とする免疫誘導促進用組成物である。
本発明の免疫誘導促進用組成物における上記核内受容体リガンドは、甲状腺ホルモン受容体作動薬及びエストロゲン受容体調節薬からなる群より選択される少なくとも１種であり、液性免疫誘導用であることが好ましい。
本発明の免疫誘導促進用組成物における上記核内受容体リガンドは、レチノイドＸ受容体作動薬であり、細胞性免疫誘導用であることが好ましい。
本発明の免疫誘導促進用組成物は、ヘルパーペプチドを更に含むことが好ましい。
また、本発明は、免疫誘導のための抗原と、上記免疫誘導促進用組成物とを含むことを特徴とするワクチン医薬組成物である。
本発明のワクチン医薬組成物は、体表面上に投与されるものであることが好ましい。
本発明のワクチン医薬組成物は、皮内注射、皮下注射又は筋肉内注射により投与されるものであることが好ましい。

また、本発明の一つの態様において、上記核内受容体リガンド及びＴＬＲリガンドに代表される免疫誘導促進剤を含む免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物は、更に高い液性免疫誘導効果を発揮する。
以下本発明について詳述する。

本発明の免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物は、抗原特異的な免疫誘導のために用いられるものである。
抗原特異的な免疫誘導には、細胞障害性Ｔ細胞などを誘導する細胞性免疫および抗体産生を促進する液性免疫が挙げられる。
細胞性免疫誘導効果を定量的に測定する方法は特に限定されず、様々な方法が開発されているが、例えば、免疫評価用モデル動物を用いた免疫誘導実験及びＥＬＩＳＰＯＴ方法（ＩＦＮ−γ）により測定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴ方法のためのサンプルとしては、例えば、免疫評価用モデル動物の脾臓が挙げられる。
液性免疫誘導効果を定量的に測定する方法は特に限定されず、様々な方法が開発されているが、例えば、免疫評価用モデル動物を用いた免疫誘導実験及びＥＬＩＳＡ法（抗原特異的ＩｇＧ抗体）により測定することができる。ＥＬＩＳＡ法のためのサンプルとしては、例えば、免疫評価用モデル動物の血液が挙げられる。

本発明の免疫誘導促進用組成物は、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤を含む。また、本発明のワクチン医薬組成物は、抗原と上記免疫誘導促進用組成物とを含む。
上記抗原と、上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤とを含むことで、本発明のワクチン医薬組成物は、抗原特異的な免疫反応を効果的に誘導することができる。

本明細書において使用するとき、用語「抗原」は、免疫応答を誘導しうるあらゆる物質を意味する。上記抗原は特に限定されず、例えば、タンパク質、ペプチド等が挙げられる。抗原の皮膚透過性が求められる経皮投与においては、分子量の小さい抗原を用いることが好ましく、例えば、約８〜１２個のアミノ酸からなるペプチドを用いることができる。

上記抗原は特に限定されず、例えば、癌抗原ペプチド、感染性病原体由来抗原、感染性抗原ペプチドが挙げられる。

本明細書において使用するとき、用語「癌」は、癌遺伝子の異常な発現を意味する。上記癌としては、例えば、造血器腫瘍、固形癌等の過剰発現を伴う癌が挙げられる。
本明細書において使用するとき、用語「遺伝子の異常な発現」は、ある細胞におけるその遺伝子の発現レベルが、同じ組織の他の細胞と比較して、例えば２倍以上、４倍以上等の倍率で顕著に上昇又は低下していることを意味する。
本明細書において使用するとき、用語「過剰発現」は、異常な発現が発現レベルの上昇であることを意味する。遺伝子の発現レベルは、当該技術分野で周知のいずれかの方法を用いて、容易に測定できる。

上記癌遺伝子としては、例えば、サバイビン遺伝子、ＧＰＣ３遺伝子、ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子、ＭＡＧＥ３遺伝子、ＭＡＧＥ Ａ１遺伝子、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６遺伝子、ＭＡＧＥ Ａ４遺伝子、ＭＡＧＥ１２遺伝子、プロテイナーゼ−３遺伝子、ＡＦＰ遺伝子、ＣＡ−１２５遺伝子、ＣＤ４４遺伝子、ＣＥＡ遺伝子、ｃ−Ｋｉｔ遺伝子、ｃ−ｍｅｔ遺伝子、ｃ−ｍｙｃ遺伝子、Ｌ−ｍｙｃ遺伝子、ＣＯＸ２遺伝子、ＣｙｃｌｉｎＤ１遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−７遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−１９遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−２０遺伝子、Ｅ２Ｆ１遺伝子、Ｅ２Ｆ３遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、Ｇｌｉ１遺伝子、ｈＣＧβ遺伝子、ＨＩＦ−１α遺伝子、ＨｎＲＮＰ Ａ２／Ｂ１遺伝子、ｈＴＥＲＴ遺伝子、ＭＤＭ遺伝子、ＭＤＲ−１遺伝子、ＭＭＰ−２遺伝子、ＭＭＰ−９遺伝子、Ｍｕｃ−１遺伝子、Ｍｕｃ−４遺伝子、Ｍｕｃ−７遺伝子、ＮＳＥ遺伝子、ＰｒｏＧＲＰ遺伝子、ＰＳＡ遺伝子、ＲＣＡＳ１遺伝子、ＳＣＣ遺伝子、サイモグロブリン遺伝子、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子等が挙げられる。
上記サバイビン遺伝子の異常な発現を伴う癌には、悪性リンパ腫、膀胱癌、肺癌、大腸癌等が含まれるが、これらに限定されない。上記ＧＰＣ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、肝癌、胆管癌、胃癌等が含まれるが、これらに限定されない。上記ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子の異常な発現を伴う癌には、乳癌、胃癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、前立腺癌等が含まれるが、これらに限定されない。上記ＭＡＧＥ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、メラノーマ、肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、肝臓癌等が含まれるが、これらに限定されない。上記プロテイナーゼ−３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、急性骨髄性白血病、膵臓癌等が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書において使用するとき、用語「癌抗原」は、腫瘍細胞又は癌細胞特異的に発現し、細胞性免疫応答を誘導しうるタンパク質、ペプチド等の物質を意味する。
本明細書において使用するとき、用語「癌抗原ペプチド」は、癌抗原タンパク質に由来する部分ペプチドであって、細胞性免疫応答を誘導しうるものをいう。通常、癌抗原ペプチドは、癌遺伝子の産物である癌抗原タンパク質が癌細胞内で分解されることによって生じ、ＭＨＣクラスＩ分子によって癌細胞の表面に提示される。

上記癌抗原ペプチドは、癌細胞から単離及び精製された内因性の癌抗原ペプチドであってもよく、内因性の癌抗原ペプチドと同じアミノ酸配列を有する合成ペプチドであってもよい。上記癌抗原ペプチドとして、具体的には、サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチド、ＭＵＣ１ペプチド、又は、それらの改変ペプチドが好ましい。

本明細書において使用するとき、用語「サバイビン２Ｂペプチド」は、配列Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ（配列番号１）からなる、癌遺伝子産物サバイビン由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＧＰＣ３ペプチド」は、配列Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ（配列番号２）からなる、癌遺伝子産物ＧＰＣ３由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ（配列番号３）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ−Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ（配列番号４）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ−Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＰＲ１ペプチド」は、配列Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ（配列番号５）からなる、癌遺伝子産物プロテイナーゼ−３由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｖａｌ（配列番号６）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ−Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｌｅｕ（配列番号７）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ−Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチド」は、配列Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ（配列番号８）からなる、癌遺伝子ＨＥＲ２／ｎｅｕの産物（ＨＥＲ２タンパク質）に由来するペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＵＣ１ペプチド」は、配列Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｖａｌ（配列番号９）からなり、多くの癌細胞上に高発現する糖タンパクであるＭＵＣ１タンパクに由来するペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「改変ペプチド」は、ペプチドの全部又は一部のアミノ酸が置換又は修飾等により改変されたペプチドを意味する。
上記改変ペプチドは特に限定されず、例えば、（ａ）ペプチドのアミノ酸配列において、１個から数個（例えば、１個、２個、３個、４個又は５個）のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；（ｂ）ペプチドのアミノ酸配列において、全部又は一部のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個）のアミノ酸が修飾されたアミノ酸配列からなるペプチド等が挙げられる。

上記改変ペプチドが有しうるアミノ酸の修飾は特に限定されず、例えば、アセチル化、メチル化等のアルキル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、カルボキシル化、アルデヒド化、リン酸化、スルホニル化、ホルミル化、ミリストイル化やパルミトイル化やステアロイル化等の脂肪鎖付加修飾、オクタノイル化、エステル化、アミド化、脱アミド化、シスチン修飾やグルタチオン修飾やチオグリコール酸修飾等のジスルフィド結合形成修飾、糖化、ユビキチン化、スクシンイミド形成、グルタミル化、プレニル化等が挙げられる。
上記改変ペプチドは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失又は付加と、１個以上のアミノ酸の修飾とを組み合わせて含むものであってもよい。

上記感染性病原体由来抗原とは、被験生物体によって生じる免疫応答の標的であることができるあらゆる物質を指す。また、上記感染性病原体由来抗原は、免疫担当細胞に接触した際に、免疫応答（例えば、免疫担当細胞の成熟、サイトカイン産生量の増加、抗体産生の促進等）の標的となる物質であってもよい。
本発明の液性免疫誘導用であるワクチン医薬組成物は、上記感染性病原体由来抗原及び液性免疫誘導用の上記免疫誘導促進用組成物を、共に対象に投与することで、感染性疾患を処置（例えば、治療又は予防）することができる。
本発明の細胞性免疫誘導用であるワクチン医薬組成物は、上記癌抗原及び細胞性免疫誘導用の上記免疫誘導促進用組成物を、共に対象に投与することで、癌を処置（例えば、治療又は予防）することができる。

上記感染性原体由来抗原としては、感染性病原体及び感染性病原体由来の抗原であれば特に限定されない。
上記感染性病原体から罹る疾患としては特に限定されず、例えば、アデノウイルス（例えば、ヒトアデノウイルス）、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス、風邪ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス（例えば、痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、伝染性軟属腫ウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、パラインフルエンザウィルス、おたふく風邪ウイルス、はしかウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ニューカッスル病ウイルス）、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、トガウイルス（例えば、風疹ウイルス）、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳコロナウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えば、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、西ナイル熱ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス）、ヘペウイルス（例えば、Ｅ型肝炎ウイルス）、パピローマウイルス（例えば、ヒト乳頭腫ウイルス）、カリシウイルス（例えば、ノロウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス、水疱性口内炎ウイルス）、フィロウイルス（例えば、エボラ出血熱ウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス）、ブニヤウイルス（例えば、カリフォルニア脳炎ウイルス、リフトバレー熱ウイルス）、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、レトロウィルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、成人Ｔ細胞白血病ウイルス）等のウイルス感染から罹る疾患等のウイルス疾患；エシェリキア属、エンテロバクター、サルモネラ、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア、アエロバクター、ヘリコバクター、クレブシエラ、プロテウス、シュードモナス、連鎖球菌、クラミジア、マイコプラズマ、肺炎球菌、ナイセリア、クロストリジウム、バシラス、コリネバクテリウム、マイコバクテリウム、カンピロバクター、ビブリオ、セラチア、プロビデンシア、クロモバクテリウム、ブルセラ、エルシニア、ヘモフィルス、ボルデテラ等の細菌感染から罹る疾患等の細菌疾患；クラミジア、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎等の真菌疾患；マラリア、ニューモシステイスカリニ肺炎、レーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、トリパノソーマ感染等が挙げられる。

本明細書において使用するとき、用語「感染性抗原ペプチド」は、感染性病原体由来抗原タンパク質に由来する部分ペプチドであって、細胞性免疫応答を誘導しうるものをいう。通常、上記感染性病原体由来抗原としては、ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチド、又は、それらの改変ペプチドが好ましい。

本明細書において使用するとき、用語「ＩＰＥＰ８７ペプチド」は、配列Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ（配列番号１０）からなる、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＢＶｅｎｖペプチド」は、配列Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｖａｌ（配列番号１１）からなる、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。

上述したペプチドは、遊離形又は薬理学的に許容される任意の塩形の形態をとりうる。
上記薬理学的に許容される任意の塩としては、例えば、酸塩（例えば、酢酸塩、ＴＦＡ塩、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、臭化水素酸塩、コハク酸塩、硝酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、ピクリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ドデシル硫酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、グルタル酸塩、種々のアミノ酸塩）、金属塩（例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）、アルミニウム塩）、アミン塩（例えば、トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩、ジエタノールアミン塩、ｔ−ブチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、アルギニン塩、ジメチルアンモニウム塩、アンモニウム塩等）等が挙げられる。なかでも、酢酸塩又はＴＦＡ塩が好ましい。
上述したペプチドは、周知の方法で合成又は産生し、単離及び精製したものを用いることができる。

一つの好ましい態様において、核内受容体リガンドを含有する免疫誘導促進用組成物を抗原と共に若しくは別々に投与すること、又は、抗原及び免疫誘導促進用組成物を含有するワクチン医薬組成物を投与することにより免疫の効果的な誘導が達成される。

本明細書において使用するとき、用語「免疫誘導促進剤」は、共に投与された抗原の免疫を誘導する効率を、それなしでの効率と比較して、改善しうるあらゆる物質を意味するものであり、免疫誘導を促進する作用機構によって限定されないが、本願明細書で特定されたものを意味する。

一つの好ましい態様において、レチノイド受容体作動薬、レチノイドＸ受容体作動薬、甲状腺ホルモン受容体作動薬及びエストロゲン受容体調節薬からなる群より選択される１種以上の核内受容体リガンドと抗原とを含有するワクチン医薬組成物を投与することにより達成される。

本明細書において使用するとき、用語「核内受容体リガンド」は、核内受容体もしくはそれに関連するタンパク質に作用する物質を意味する。一つの態様において、核内受容体リガンドは、免疫誘導促進剤の一種である。

核内受容体リガンドとして、レチノイド受容体リガンドを用いることができる。更にレチノイド受容体リガンドは、レチノイド受容体作動薬であることが好ましい。本明細書において使用するとき、用語「レチノイド受容体作動薬」は当該物質自体がレチノイド受容体に作用する機能を有する物質を意味する。レチノイド受容体作動薬としては、ビタミンＡ、レチノールパルミチン酸エステル、レチノール酢酸エステル、レチノールプロピオナート、タザロテン、エトレチナート、アシトレチン、トレチノイン、イソトレチノイン、アリトレチノイン、フェンレチニド、タミバロテン、パロバロテン及びそれらの誘導体、並びにそれらの薬理学的に許容される塩などが挙げられる。

核内受容体リガンドとして、レチノイドＸ受容体リガンドを用いることができる。更にレチノイドＸ受容体リガンドは、レチノイドＸ受容体作動薬であることが好ましい。
本明細書において使用するとき、用語「レチノイドＸ受容体作動薬」は当該物質自体がレチノイドＸ受容体に作用する機能を有する物質を意味する。レチノイドＸ受容体作動薬としては、ベキサロテン及びそれらの誘導体、並びにそれらの薬理学的に許容される塩などが挙げられる。

核内受容体リガンドとして、甲状腺ホルモン受容体リガンドを用いることができる。更に甲状腺ホルモン受容体リガンドは、甲状腺ホルモン受容体作動薬であることが好ましい。
本明細書において使用するとき、用語「甲状腺ホルモン受容体作動薬」は当該物質自体が甲状腺ホルモン受容体に作用する機能を有する物質を意味する。甲状腺ホルモン受容体作動薬としては、チラトリコール、レボチロキシン、リオチロニン、甲状腺、リオトリックス、ソベチロム及びそれらの誘導体、並びにそれらの薬理学的に許容される塩などが挙げられる。

核内受容体リガンドとして、エストロゲン受容体リガンドを用いることができる。更にエストロゲン受容体リガンドは、エストロゲン受容体調節薬であることが好ましい。
本明細書において使用するとき、用語「エストロゲン受容体調節薬」は当該物質自体がエストロゲン受容体に作用し、弱い受容体作動およびエストロゲンの結合を阻害する機能を有する物質を意味する。エストロゲン受容体調節薬としては、クロミフェン、ラロキシフェン、タモキシフェン、トレミフェン及びそれらの誘導体、並びにそれらの薬理学的に許容される塩などが挙げられる。

本明細書にいう「塩」とは、任意の有機酸又は無機酸であってよいが、好ましくは薬理学的に許容される塩である。
本明細書にいう「薬理学的に許容される塩」とは、投与対象に有害な作用を及ぼさず、かつ、ワクチン医薬組成物中の配合成分の薬理活性を消失させない塩を意味し、例えば、無機酸塩（例えば、塩酸塩、リン酸塩）、有機酸塩（例えば、酢酸塩、フタル酸塩、ＴＦＡ塩、クエン酸塩）、金属塩（例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）、アルミニウム塩）、アミン塩（例えば、トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩、ジエタノールアミン塩、ｔ−ブチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、アルギニン塩、ジメチルアンモニウム塩、アンモニウム塩）等が挙げられる。

本発明の免疫誘導促進用組成物における上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤の含有量は特に限定されないが、組成物の総重量に基づき、好ましくは０．０００１〜１００重量％、より好ましくは０．００１〜８０重量％、更に好ましくは０．０１〜５０重量％含む。最も好ましくは０．０５〜２０重量％含む。

本発明のワクチン医薬組成物における上記抗原の含有量は特に限定されないが、組成物の総重量に基づき、好ましくは０．０００００１〜５０重量％、より好ましくは０．００００１〜２０重量％である。
本発明のワクチン医薬組成物における上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤の含有量は特に限定されないが、１重量部の抗原に対して、好ましくは０．００１〜１００００重量部、より好ましくは０．０１〜１００００重量部である。
上記免疫誘導促進剤の含有量が下限値０．００１重量部未満であると、免疫誘導効果が充分に得られないことがある。上記免疫誘導促進剤の含有量が上限値１００００重量部を超えると、安全性が問題となることがある。

本発明のワクチン医薬組成物は、上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤に加えて、本発明の効果を損なわない範囲内で、第二の免疫誘導促進剤を更に含有していてもよい。上記第二の免疫誘導促進剤としては特に限定されないが、例えば、ヘルパーペプチド等が挙げられる。
上記第二の免疫誘導促進剤を併用することで、免疫誘導を更に効果的に促進することができる。
また、第二の免疫誘導促進剤としてヘルパーペプチドを用いる場合は、細胞性免疫誘導用の免疫部活化剤として用いることがより好ましい。

本明細書において使用するとき、用語「ヘルパーペプチド」は、ヘルパーＴ細胞を活性化するあらゆるペプチドを意味する。
上記ヘルパーペプチドである第二の細胞性免疫誘導促進剤としては、例えば、結核菌由来ヘルパーペプチド、麻疹ウイルス由来ヘルパーペプチド、Ｂ型肝炎ウイルス由来ヘルパーペプチド、Ｃ型肝炎ウイルス由来ヘルパーペプチド、トラコーマクラミジア由来ヘルパーペプチド、熱帯性マラリア原虫スポロゾイド由来ヘルパーペプチド、ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ由来ヘルパーペプチド、破傷風毒素由来ヘルパーペプチド、百日咳毒素由来ヘルパーペプチド、ジフテリア毒素由来ヘルパーペプチド、癌細胞由来ヘルパーペプチド（例えば、ＩＭＡ−ＭＭＰ−００１ヘルパーペプチド、ＣＥＡ−００６ヘルパーペプチド、ＭＭＰ−００１ヘルパーペプチド、ＴＧＦＢＩ−００４ヘルパーペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ａａ７７６−７９０）ヘルパーペプチド、ＡＥ３６ヘルパーペプチド、ＡＥ３７ヘルパーペプチド、ＭＥＴ−００５ヘルパーペプチド、ＢＩＲ−００２ヘルパーペプチド）、ユニバーサルヘルパーアナログ（例えば、ＰＡＤＲＥ）、それらの改変ペプチド等が挙げられる。なかでも、Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５、改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５、ＰＡＤＲＥが好ましい。

本明細書において使用するとき、用語「ＰＡＤＲＥ」は、配列Ｄ−Ａｌａ Ｌｙｓ ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｄ−Ａｌａ（配列番号１２）からなる１３アミノ酸のペプチドを意味する。

本発明の免疫誘導促進用組成物およびワクチン医薬組成物における上記第二の免疫誘導促進剤の含有量は特に限定されないが、１重量部の抗原に対して、好ましくは０．００１〜５００重量部、より好ましくは０．００５〜２００重量部、更に好ましくは０．０１〜１００重量部である。上記含有量が下限値０．００１重量部未満であると、免疫誘導効果が充分に得られないことがある。上記含有量が上限値５００重量部を超えると、安全性が問題となることがある。

本発明の免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物は、必要に応じて、添加剤を含有していてもよい。上記添加剤は、基材の主成分、上記抗原及び上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤との適合性、意図する投与レジメン等に応じて、例えば、等張化剤、防腐殺菌剤、酸化防止剤、溶解剤、溶解補助剤、懸濁化剤、充填剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、吸収促進剤、放出速度制御剤、着色剤、可塑剤、架橋剤、粘着剤等が挙げられる。これら添加剤は単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

本発明の免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物は、皮内、皮下又は筋肉内に投与されてもよいが、体表面上に投与されることが好ましく、経皮投与又は経粘膜投与されることがより好ましい。即ち、本発明のワクチン医薬組成物は、皮内、皮下又は筋肉内投与用ワクチン医薬組成物であってもよいが、経皮投与用又は経粘膜投与用ワクチン医薬組成物であることが好ましい。本発明のワクチン医薬組成物を経皮投与又は経粘膜投与により対象に投与することで、抗原特異的な液性免疫を効果的に誘導することができる。
本明細書にいう「対象」とは、実用段階においてワクチン医薬組成物を投与して免疫応答を誘導し得るいずれかの動物を意味する。上記対象は、典型的にはヒトを含む哺乳類（例えば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、サル、チンパンジー）である。特に好ましい対象は、ヒトである。

＜経粘膜投与用ワクチン医薬組成物＞
上記経粘膜投与として、例えば、舌下投与、経鼻投与、頬側投与、直腸投与、膣投与等が挙げられる。
上記経粘膜投与用ワクチン医薬組成物の剤形は、例えば、ゲル剤（ゼリー剤）、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤等の半固形剤；液剤；散剤、細粒剤、顆粒剤、フィルム剤、錠剤、口腔内崩壊錠（凍結乾燥型）等の固形製剤；エアゾール剤等の粘膜用スプレー剤；吸引剤等であってよい。これらの組成物の区分、定義、性質、製法等は、当該技術分野において周知であり、例えば日本薬局方第１６版を参照されたい。また、これらの材料といては特に限定されず、従来公知のものが使用できる。
上記剤形のなかでも、液剤、固形製剤（口腔内崩壊錠（凍結乾燥型）、フィルム剤等）が好ましい。

上記液剤に用いられる溶媒としては、適量の水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール等が挙げられる。これらの溶媒に配合成分（即ち、上記抗原、上記核内受容体リガンド剤である免疫誘導促進剤、必要に応じて上記第二の免疫誘導促進剤等）を分散又は溶解させることで、液剤を調製することができる。

上記ゲル剤（ゼリー剤）に用いられる基材としては特に限定されないが、例えば、カルボキシビニルポリマー、ゲルベース、無脂肪性軟膏、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、タラガム、タマリンドシードガム、サイリウムシードガム、寒天、ジェランガム、グルコマンナン、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、オイドラギット、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル、ゼラチン、ポリエチレングリコール等のヒドロゲル基材等が挙げられる。これらの基材を溶媒に溶解し、上記配合成分を配合することで、流動性のあるゲル剤又は成形性のあるゲル剤を調製することができる。溶媒としては、好ましくは水であるが、グリセリン、プロピレングリコール等も用いることができる。

上記クリーム剤に用いられる基材としては、親水軟膏、バニシングクリーム等の水／油型基材；親水ワセリン、精製ラノリン、アクアホール、オイセリン、ネオセリン、加水ラノリン、コールドクリーム、親水プラスチベース等の油／水型基材が挙げられる。これらの基材を油脂系溶媒又は水に入れてホモジナイザー等で高速攪拌させ、上記配合成分を配合することで、クリーム剤を調製することができる。

上記フィルム剤に用いられる基材としては特に限定されないが、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、カンテン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマーＬＤ、メタクリル酸コポリマーＳ、メチルアクリレート−メタクリル酸−メチルメタアクリレートコポリマー、アクリル酸エチル−メタクリル酸メチルコポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル等が挙げられる。これらの基材を水又はエタノール等の極性有機溶媒に溶解し、上記配合成分を配合し、薄膜塗工後に乾燥させることで、フィルム剤を調製することができる。

上記散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤等に用いられる添加剤としては特に限定されないが、例えば、乳糖、コーンスターチ、結晶セルロース等の賦形剤、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム等の結合剤等が挙げられる。これらの添加剤を適量の水又はエタノール等の溶媒に添加し、上記配合成分を配合し、混合攪拌した後、造粒、乾燥、打錠等の工程を組み合わせることで、上記散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤等を調製することができる。必要であれば、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ショ糖等のコーティング剤を添加してもよい。

上記口腔内崩壊錠（凍結乾燥型）に用いられる基材としては特に限定されないが、例えば、ゼラチン、プルラン等の多糖類、ヒドロキシプロピルセルロース等のヒドロゲル基材が挙げられる。また、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、グリシン等の成形剤を用いてもよい。これらの基材及び成形剤を水に溶解し、上記配合成分を配合し、分注後に凍結乾燥させることで、口腔内崩壊錠（凍結乾燥型）を調製することができる。

上記エアゾール剤としては、内容物として液剤、流動性が高いゲル剤、クリーム剤、散剤等の微粉末が挙げられる。これらの内容物を、噴霧デバイスを用いて気体中に固体又は液体の微粒子として分散させることにより、効率よく口腔粘膜、経鼻粘膜等の投与部位に投与することができる。

＜経粘膜投与用免疫誘導促進用組成物＞
本発明の経粘膜投与用免疫誘導促進用組成物は、対象における種々の核内受容体リガンドの粘膜投与において、共に又は別々に投与される種々の抗原が誘導する免疫をより効果的に発揮するものである。

上記経粘膜投与用免疫誘導促進用組成物の投与経路及び製剤としては、上記経粘膜投与用ワクチン医薬組成物と同様の投与経路及び製剤を用いることができる。更に、上記経粘膜投与用免疫誘導促進用組成物の製剤の調製については、上記経粘膜投与用ワクチン医薬組成物の製剤調製において用いる材料と同様の材料を用いることができる。

＜経皮投与用ワクチン医薬組成物＞
上記経皮投与用ワクチン医薬組成物の剤形は、例えば、リニメント剤、ローション剤等の外用液剤；エアゾール剤等の外用スプレー剤；ゲル剤、テープ剤、パップ剤等の貼付剤；軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤であってよい。これらの組成物の区分、定義、性質、製法等は、当該技術分野において周知であり、例えば日本薬局方第１６版を参照されたい。また、これらの材料といては特に限定されず、従来公知のものが使用できる。
上記剤形のなかでも、クリーム剤、貼付剤（テープ剤、ハップ剤等）が好ましい。

上記リニメント剤に用いられる基材としては、水、エタノール、脂肪油、硬パラフィン、軟パラフィン、液パラフィン、グリセリン、パラフィン油、蜜蝋、金属石鹸、粘液（ｍｕｃｉｌａｇｅ）、天然油（例えば、アーモンド油、コーン油、ピーナッツ油、ヒマシ油、オリーブ油又はそれらの誘導体（例えば、ポリオキシルヒマシ油））、羊脂又はその誘導体、脂肪酸及び／又はそのエステル（例えば、ステアリン酸、オレイン酸、ミリスチン酸イソプロピル）が挙げられる。

上記ローション剤は、上記配合成分を水性の液中に微細に均質分散した製剤であり、懸濁性ローション剤と、乳濁性ローション剤とを含む。懸濁化剤としては、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ベントナイン等が挙げられる。乳化剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。

上記軟膏剤に用いられる基材としては、油脂類、ロウ、炭化水素化合物等の一般に疎水性基材として用いられるものが挙げられる。具体的には、黄色ワセリン、白色ワセリン、パラフィン、流動パラフィン、プラスチベース、シリコーン等の鉱物性基材、ミツロウ、動植物性油脂等の動植物性基材等が挙げられる。

上記クリーム剤に用いられる基材としては、親水軟膏、バニシングクリーム等の水／油型基材；親水ワセリン、精製ラノリン、アクアホール、オイセリン、ネオセリン、加水ラノリン、コールドクリーム、親水プラスチベース等の油／水型基材が挙げられる。

上記ゲル剤に用いられる基材としては特に限定されないが、例えば、カルボキシビニルポリマー、ゲルベース、無脂肪性軟膏、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、タラガム、タマリンドシードガム、サイリウムシードガム、寒天、ジェランガム、グルコマンナン、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマーＬＤ、メタクリル酸コポリマーＳ、メチルアクリレート−メタクリル酸−メチルメタアクリレートコポリマー、アクリル酸エチル−メタクリル酸メチルコポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル、ゼラチン、ポリエチレングリコール等のヒドロゲル基材等が挙げられる。

上記パップ剤に用いられる基材としては、ゼラチン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリアクリル酸ナトリウム、カオリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、グリセリン、プロピレングリコール、水等が挙げられる。

上記テープ剤は、配合成分（即ち、上記抗原、上記核内受容体リガンド剤である免疫誘導促進剤、必要に応じて上記第二の免疫誘導促進剤等）を含有する粘着剤層と、上記粘着剤層を支持する支持体とを有することが好ましい。使用前に上記粘着剤層を露出させず、使用時に上記粘着剤層から容易に剥離できる剥離ライナーを更に有していてもよい。

上記粘着剤層を形成する粘着剤は特に限定されず、例えば、アクリル系重合体を含有するアクリル系粘着剤；ゴム系エラストマーを含有するゴム系粘着剤；シリコーンゴム、ジメチルシロキサンベース、ジフェニルシロキサンベース等のシリコーン系粘着剤；ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルエチルエーテル、ポリビニルイソブチルエーテル等のビニルエーテル系粘着剤；酢酸ビニル−エチレン共重合体等のビニルエステル系粘着剤；ジメチルテレフタレート、ジメチルイソフタレート、ジメチルフタレート等のカルボン酸成分と、エチレングリコール等の多価アルコール成分とからなるポリエステル系粘着剤等が挙げられる。なかでも、アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤、シリコーン系粘着剤が好ましい。抗原の拡散・放出性が良好であることより、ポリアクリル酸ナトリウム等の親水性基材が好ましい。
上記粘着剤層中の上記粘着剤の含有量は特に限定されないが、固形分として、上記粘着剤層の総重量の１０〜９０重量％が好ましく、２０〜８０重量％がより好ましい。

上記アクリル系粘着剤は、（メタ）アクリル酸アルキルエステルを第１の単量体として含む重合体を主成分として含有することが好ましい。
上記第１の単量体としては、炭素数１〜１８の直鎖状、分岐鎖状又は環状アルキル基を有する（メタ）アクリル酸アルキルエステル等が挙げられる。なかでも、炭素数４〜１８の直鎖状、分岐鎖状又は環状アルキル基を有する（メタ）アクリル酸アルキルエステルが好ましい。更に、常温で粘着性を与えるために、重合体のガラス転移温度を低下させるモノマー成分の使用が更に好適であることから、炭素数４〜８の直鎖状、分岐鎖状又は環状アルキル基（例えば、ブチル、ペンチル、へキシル、シクロヘキシル、へプチル、オクチル、２−エチルヘキシル等が挙げられ、ブチル、２−エチルヘキシル、シクロヘキシルが好ましく、２−エチルヘキシルが特に好ましい）を有する（メタ）アクリル酸アルキルエステルがより好ましい。
上記第１の単量体として、具体的には、アクリル酸ブチル、アクリル酸２−エチルへキシル、メタクリル酸２−エチルへキシル、アクリル酸シクロへキシル、メタクリル酸シクロへキシルが好ましく、アクリル酸２−エチルへキシルが特に好ましい。これら第１の単量体は単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

上記第１の単量体は、第２の単量体と共重合されていてもよく、このような第２の単量体としては、架橋剤を用いる際の架橋点となりうる官能基を有する単量体が挙げられる。架橋反応に関与できる官能基としては、水酸基、カルボキシル基、ビニル基等が挙げられ、水酸基、カルボキシル基が好ましい。
上記第２の単量体として、具体的には、（メタ）アクリル酸ヒドロキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸ヒドロキシプロピルエステル、Ｎ−ヒドロキシアルキル（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリル酸、イタコン酸、マレイン酸、無水マレイン酸、メサコン酸、シトラコン酸、グルタコン酸等が挙げられる。なかでも、入手の容易性の観点から、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸ヒドロキシエチルエステル（特に、アクリル酸２−ヒドロキシエチル）が好ましく、アクリル酸が特に好ましい。これら第２の単量体は単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

上記第１の単量体及び第２の単量体は、更に、第３の単量体と共重合されていてもよい。
上記第３の単量体としては、例えば、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等のビニルエステル類；メチルビニルエーテル、エチルビニルエーテル等のビニルエーテル類；Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、Ｎ−ビニルカプロラクタム等のビニルアミド類；（メタ）アクリル酸メトキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸エトキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸テトラヒドロフルフリルエステル等の（メタ）アクリル酸アルコキシエステル；ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、α−ヒドロキシメチルアクリレート等の水酸基含有モノマー（第３の単量体としての使用なので架橋点とはしない）；（メタ）アクリルアミド、ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチロール（メタ）アクリルアミド等のアミド基を有する（メタ）アクリル酸誘導体；（メタ）アクリル酸アミノエチルエステル、（メタ）アクリル酸ジメチルアミノエチルエステル、（メタ）アクリル酸ｔ−ブチルアミノエチルエステル等の（メタ）アクリル酸アミノアルキルエステル；（メタ）アクリル酸メトキシエチレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸メトキシジエチレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸メトキシポリエチレングリコールエステル、（メタ）アクリル酸メトキシポリプロピレングリコールエステル等の（メタ）アクリル酸アルコキシアルキレングリコールエステル；（メタ）アクリロニトリル；スチレンスルホン酸、アリルスルホン酸、スルホプロピル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリロイルオキシナフタレンスルホン酸、アクリルアミドメチルスルホン酸等のスルホン酸を有するモノマー；ビニルピペリドン、ビニルピリミジン、ビニルピペラジン、ビニルピロール、ビニルイミダゾール、ビニルオキサゾール、ビニルモルホリン等のビニル基含有モノマー等が挙げられる。なかでも、ビニルエステル類、ビニルアミド類が好ましく、ビニルエステル類は酢酸ビニルが好ましく、ビニルアミド類はＮ−ビニル−２−ピロリドンが好ましい。これら第３の単量体は単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

上記（メタ）アクリル酸アルキルエステル（第１の単量体）と、上記架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマー（第２の単量体）との共重合体の場合、上記（メタ）アクリル酸アルキルエステルと、上記架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマーとの重量比は、９９〜８５：１〜１５が好ましく、９９〜９０：１〜１０がより好ましい。
上記（メタ）アクリル酸アルキルエステル（第１の単量体）と、上記架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマー（第２の単量体）と、これら以外の他のモノマー（第３の単量体）との共重合体の場合、上記（メタ）アクリル酸アルキルエステルと、上記架橋反応に関与できる官能基を有するビニルモノマーと、これら以外の他のモノマーとの重量比は、４０〜９４：１〜１５：５〜５０が好ましく、５０〜８９：１〜１０：１０〜４０がより好ましい。

重合反応は特に限定されず、従来公知の方法で行えばよく、例えば、重合開始剤（例えば、過酸化ベンゾイル、アゾビスイソブチロニトリル）を添加して、溶媒（例えば、酢酸エチル）中で上述した単量体を５０〜７０℃で５〜４８時間反応させる方法が挙げられる。

上記アクリル系粘着剤は、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸／Ｎ−ビニル−２−ピロリドンの共重合体、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド／Ｎ−ビニル−２−ピロリドンの共重合体、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸２−ヒドロキシエチルエステル／酢酸ビニルの共重合体、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸の共重合体を含有することがより好ましく、アクリル酸２−エチルへキシルエステル／アクリル酸／Ｎ−ビニル−２−ピロリドンの共重合体を含有することが特に好ましい。

上記アクリル系粘着剤には、紫外線照射、電子線照射等の放射線照射による物理的架橋処理を施してもよく、三官能性イソシアネート等のイソシアネート系化合物、有機過酸化物、有機金属塩、金属アルコラート、金属キレート化合物、多官能性化合物（例えば、多官能性外部架橋剤、ジ（メタ）アクリレート等の多官能性内部架橋用モノマー）等の架橋剤を用いた化学的架橋処理を施してもよい。

上記ゴム系粘着剤を形成するゴム系エラストマーとしては特に限定されないが、例えば、ポリイソブチレン−ポリブテン系、スチレン−ジエン−スチレンブロック共重合体、スチレン−ブタジエン系、ニトリル系、クロロプレン系、ビニルピリジン系、ポリイソブチレン系、ブチル系、イソプレン−イソブチレン系等が挙げられる。なかでも、上記配合成分に対する溶解性及び皮膚接着性の点から、ポリイソブチレン（ＰＩＢ）、スチレン−ジエン−スチレンブロック共重合体（例えば、スチレン−ブタジエン−スチレンブロック共重合体（ＳＢＳ）、スチレン−イソプレン−スチレンブロック共重合体（ＳＩＳ））が好ましい。これらゴム系エラストマーは単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

上記ゴム系粘着剤には、適度な粘着力及び上記配合成分に対する溶解性を得るために、同一成分又は異なる成分で平均分子量の異なるゴム系エラストマーを混合して使用することができる。例えば、平均分子量１５万〜５５０万の高分子量のポリイソブチレンと、平均分子量１万〜１５万の中分子量のポリイソブチレン及び／又は平均分子量５００〜４０００の低分子量のポリイソブチレンとの混合物が好ましい。ポリイソブチレンの全体量に対して、高分子量のポリイソブチレンの配合量は１０〜８０重量％であり、好ましくは２０〜７０重量％である。ポリイソブチレンの全体量に対して、中分子量のポリイソブチレンの配合量は０〜９０重量％であり、好ましくは１０〜８０重量％である。ポリイソブチレンの全体量に対して、低分子量のポリイソブチレンの配合量は０〜８０重量％であり、好ましくは１０〜６０重量％である。

本明細書にいう「平均分子量」とは、Ｆｌｏｒｙの粘度式から計算される粘度平均分子量を意味し、シュタウディンガーインデックス（Ｊ_０）を、２０℃にてウベローデ粘度計のキャピラリー１のフロータイムからＳｃｈｕｌｚ−Ｂｌａｓｃｈｋｅ式により算出し、このＪ_０値を用いて下記式により求めるものである。

上記ゴム系粘着剤には、適度な粘着性を付与するために、例えば、ロジン系樹脂、ポリテルペン樹脂、クマロン−インデン樹脂、石油系樹脂、テルペン−フェノール樹脂、キシレン樹脂、脂環族飽和炭化水素樹脂等の粘着付与剤が配合されていてもよい。これら粘着付与剤は単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
上記粘着付与剤の含有量は、上記ゴム系粘着剤の総重量に基づいて５０重量％以下が好ましく、５〜４０重量％がより好ましい。

上記シリコーン系粘着剤としては、ポリオルガノシロキサン系、ポリジメチルシロキサン系、ポリジメチルジフェニル−シロキサン系等からなるシリコーン系粘着剤が挙げられる。なかでも、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社製のＢＩＯ ＰＳＡのような商業的に入手可能なシリコーン系粘着剤が好ましく使用される。

上記粘着剤層は、皮膚透過性増強剤を更に含有していてもよい。
本明細書にいう「皮膚透過性増強剤」とは、経皮投与される抗原が皮膚を透過する効率を改善しうるあらゆる物質を指す。
上記皮膚透過性増強剤としては、室温（２５℃）で液状である（即ち、流動性を有する）ことが好ましい。２種以上の皮膚透過性増強剤を混合して用いる場合には、最終的に混合物が室温（２５℃）で液状となり、皮膚透過促進効果を有することが好ましい。このような有機液状成分としては、上記粘着剤層における相溶性の観点から、疎水性液状成分が好ましい。

上記皮膚透過性増強剤としては、高級アルコール、脂肪酸エステル、多価アルコール脂肪酸エステルが挙げられる。
上記高級アルコールとしては、炭素数８〜１８の高級アルコールが好ましく、炭素数８〜１４の高級アルコールがより好ましい。上記脂肪酸エステルとしては、炭素数８〜１８の脂肪酸と炭素数１〜１８の１価アルコールとの脂肪酸エステルが好ましく、炭素数１２〜１６の脂肪酸と炭素数１〜１８の１価アルコールとの脂肪酸エステルがより好ましい。なかでも、脂肪酸エステルが好ましく、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、セバシン酸ジエチルが特に好ましい。

上記皮膚透過性増強剤は、具体的には、オレイルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール；グリセリン、エチレングリコール、ポリプロピレングリコール等の多価アルコール；オレイン酸、カプリル酸等の高級脂肪酸；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸エチル等の脂肪酸エステル；セバシン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピル等の多塩基酸エステル；トリイソステアリン酸ジグリセリル、モノオレイン酸ソルビタン、ジカプリル酸プロピレングリコール、モノラウリン酸ポリエチレングリコール、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット等の多価アルコール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンラウリルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルエーテル；スクアラン、流動パラフィン等の炭化水素；オリーブ油、ヒマシ油等の植物油；シリコーン油；Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−ドデシルピロリドン等のピロリドン類；デシルメチルスルホキシド等のスルホキシドが挙げられる。これら皮膚透過性増強剤は単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

上記アクリル系粘着剤又は上記ゴム系粘着剤を用いる場合、上記皮膚透過性増強剤として、例えば、ポリビニルピロリドン、クロスポビドン、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース、又は、それらの混合物を用いることができる。なかでも、ポリビニルピロリドン、クロスポビドン、ポリプロピレングリコールが好ましい。

上記粘着剤層中の上記皮膚透過性増強剤の含有量は特に限定されないが、上記粘着剤層の総重量の０．１〜７０重量％が好ましく、１〜６５重量％がより好ましく、５〜６０重量％が更に好ましい。上記皮膚透過性増強剤の含有量が０．１重量％以上である場合、高い皮膚透過促進効果が得られる。上記皮膚透過性増強剤の含有量が７０重量％以下である場合、上記粘着剤層全体の粘着力、凝集力の低下を抑制しつつ、高い皮膚透過促進効果が得られる。

上記粘着剤層の厚みは特に限定されないが、１０〜１０００μｍが好ましい。上記範囲の厚みとすることにより、上記粘着剤層に有効量の上記配合成分を含有させること、充分な粘着力を発揮させること、上記粘着剤層を形成すること等が容易となる。

上記支持体は特に限定されないが、実質的に上記配合成分に対して不透過性を有するもの、即ち、上記粘着剤層に含まれる上記抗原、上記核内受容体リガンド剤である免疫誘導促進剤、必要に応じて上記第二の免疫誘導促進剤等が支持体を通って背面から失われて含有量の低下を引き起こさないものが好ましい。
上記支持体としては、例えば、ポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、エチレン−アクリル酸エチル共重合体、ポリテトラフルオロエチレン、アイオノマー樹脂、金属箔等の単独フィルム又はこれらの積層フィルム等が挙げられる。なかでも、上記支持体は、上記粘着剤層との接着性（投錨性）を向上させるために、上述した材質からなる無孔のプラスチックフィルムと、多孔質フィルムとの積層フィルムであることが好ましい。この場合、上記粘着剤層は、多孔質フィルム側に形成されることが好ましい。

上記多孔質フィルムとしては、上記粘着剤層との投錨性が向上するものであれば特に限定されず、例えば、紙、織布、不織布、編布、機械的に穿孔処理を施したシート等が挙げられる。なかでも、取り扱い性等の観点から、紙、織布、不織布が好ましい。上記多孔質フィルムの厚みは、投錨性向上、テープ剤の柔軟性及び貼付操作性等の点から、１〜２００μｍが好ましい。また、織布又は不織布の場合、上記多孔質フィルムの目付量は５〜３０ｇ／ｍ^２が好ましく、６〜１５ｇ／ｍ^２がより好ましい。
特に上記支持体としては、厚さ１．５〜６μｍのポリエステルフィルム（好ましくは、ポリエチレンテレフタレートフィルム）と、目付量６〜１５ｇ／ｍ^２のポリエステル（好ましくは、ポリエチレンテレフタレート）製不織布との積層フィルムが好ましい。

上記剥離ライナーとしては、剥離処理が施され、充分に軽い剥離力を確保できれば特に限定されず、例えば、上記粘着剤層との接触面にシリコーン樹脂、フッ素樹脂等を塗布することによって剥離処理が施された、ポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレンテレフタレート等のフィルム、上質紙、グラシン紙等の紙、上質紙又はグラシン紙等とポリオレフィンとのラミネートフィルム等が挙げられる。
上記剥離ライナーの厚みは、１０〜２００μｍが好ましく、２５〜１００μｍがより好ましい。
特に上記剥離ライナーとしては、バリアー性、価格等の点から、ポリエステル（特に、ポリエチレンテレフタレート）樹脂からなるものが好ましい。この場合、取り扱い性の点から、厚みは２５〜１００μｍ程度であることが好ましい。

＜経皮投与用免疫誘導促進用組成物＞
本発明の経皮投与用免疫誘導促進用組成物は、対象における種々の核内受容体リガンドの経皮投与において、共に又は別々に投与される種々の抗原が誘導する免疫をより効果的に発揮するものである。

上記経皮投与用免疫誘導促進用組成物の製剤としては、上記経皮投与用ワクチン医薬組成物と同様の製剤を用いることができる。更に、上記経皮投与用免疫誘導促進用組成物の製剤の調製については、上記経皮投与用ワクチン医薬組成物の製剤調製において用いる材料と同様の材料を用いることができる。

＜皮内、皮下又は筋肉内投与用ワクチン医薬組成物＞
上記皮内、皮下又は筋肉内投与用ワクチン医薬組成物の剤型は、例えば、液剤、水溶性又は疎水性の懸濁剤、クリーム剤等の注射投与可能なある程度の流動性を有する剤型であればよい。これらの組成物の区分、定義、性質、製法等は、当該技術分野において周知であり、例えば日本薬局方第１６版を参照されたい。また、これらの材料としては特に限定されず、従来公知のものが使用できる。

上記液剤に用いられる溶媒としては、適量の水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール等が挙げられる。これらの溶媒に上記配合成分を分散又は溶解させることで、液剤を調製することができる。

上記水溶性懸濁剤に用いられる基材としては特に限定されないが、例えば、カルボキシビニルポリマー、ゲルベース、無脂肪性軟膏、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、タラガム、タマリンドシードガム、サイリウムシードガム、寒天、ジェランガム、グルコマンナン、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、オイドラギット、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル、ゼラチン、ポリエチレングリコール、等のヒドロゲル基材等が挙げられる。これらの基材を溶媒に溶解し、上記配合成分を配合することで、流動性のある懸濁剤を調製することができる。溶媒としては、好ましくは生理食塩水であるが、グリセリン、プロピレングリコール等も用いることができる。

上記疎水性懸濁剤に用いられる基材としては、親水軟膏、バニシングクリーム等の水／油型基材；親水ワセリン、精製ラノリン、アクアホール、オイセリン、ネオセリン、加水ラノリン、コールドクリーム、親水プラスチベース等の油／水型基材が挙げられる。これらの基材を油脂系溶媒又は水に入れてホモジナイザー等で高速攪拌させ、上記配合成分を配合することで、油脂系懸濁剤を調製することができる。

＜皮内、皮下又は筋肉内投与用免疫誘導促進用組成物＞
本発明の皮内、皮下又は筋肉内投与用免疫誘導促進用組成物は、対象における種々の核内受容体リガンドの皮内、皮下又は筋肉内投与において、共に又は別々に投与される種々の抗原が誘導する免疫をより効果的に発揮するものである。

上記皮内、皮下又は筋肉内投与用免疫誘導促進用組成物の製剤としては、上記皮内、皮下又は筋肉内投与用ワクチン医薬組成物と同様の製剤を用いることができる。更に、上記皮内、皮下又は筋肉内投与用免疫誘導促進用組成物の製剤の調製については、上記皮内、皮下又は筋肉内投与用ワクチン医薬組成物の製剤調製において用いる材料と同様の材料を用いることができる。

本発明のワクチン医薬組成物を対象に投与する際、上記抗原の治療上有効量は、疾患の重症度、対象の年齢及び相対的な健康、他の既知の要因等に依存して広範に変化しうるが、一般に、１日用量約０．１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤は、上記抗原と同時又は逐次的に、好ましくは同時に投与される。
また、本発明の免疫誘導促進用組成物を対象に投与する際、及び免疫誘導促進用組成物を含有するワクチン医薬組成物を対象に投与する際、上記核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤の治療上有効量は、用いる具体的な核内受容体リガンド、他の免疫誘導促進剤の有無等に依存して広範に変化しうるが、一般に、１日用量約０．０１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。

なお、１日用量を１回で投与してもよいが、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回等）の複数回に分けて投与してもよい。１回あたりの連続投与時間は、１分間〜７日間の間で適宜選択されることが好ましい。投与間隔は、毎日〜１年に１回（例えば、１日１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１月に１回、３月に１回、６月に１回、１年に１回）又はそれより長期の投与間隔から、患者の状態、疾患の重症度、治療目的か予防目的か等に応じて、適宜選択されることが好ましい。一般に、重度の疾患を現実に有する患者の治療目的では、より高頻度及び／又は高用量で本発明のワクチン医薬組成物を投与し、疾患を有さない患者の予防目的では、より低頻度及び／又は低用量で本発明のワクチン医薬組成物を投与することが好ましい。

本発明の免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物は、非侵襲的な体表面上の投与（例えば、経皮投与又は経粘膜投与）あるいは低侵襲的な皮膚表面上の投与（例えば、テープストリッピング等の角質剥離処理、及び、マイクロニードルやエレクトロポレーション等の角質穿孔処理を行った皮膚表面への投与等）が可能であるため、優れたコンプライアンスが得られる。即ち、痛み、恐怖心、注射痕及びそれに続く瘢痕化、繰返し投与を行う場合は通院が患者の生活の負担となること等の患者のＱＯＬの観点からの問題が低減される。また、投与が簡便なため患者が自ら投与可能であり、医療従事者の針刺し感染事故のリスクを回避でき、注射針等の特殊廃棄の必要な医療廃棄物が生じない。
本発明の免疫賦活化組成物及びワクチン医薬組成物は、テープ剤、パップ剤等の貼付剤の形態であれば、所定の投与量を確実に投与でき、薬物放出速度を任意に制御でき、また、投与に際して他の部位に付着することがないという利点がある。更に、貼付剤は容易に着脱可能であるため、副作用が生じた場合等に適用部位から貼付剤を除去することによって患者自らが即座に投与を中止することができるという利点も有する。
本発明の免疫誘導促進用組成物又はワクチン医薬組成物を投与することで、抗原の単独投与と比較して、抗体産生誘導効果が顕著に向上する。

実施例１〜８、比較例１〜２で得られた経皮投与用クリーム剤を経皮投与したときのマウス脾細胞中のＩＦＮ−γ産生細胞スポット数の評価結果を示すグラフである。 実施例９〜２０、比較例３〜８で得られた経皮投与用テープ剤を経皮投与したときのマウス脾細胞中のＩＦＮ−γ産生細胞スポット数の評価結果を示すグラフである。 実施例２１〜２８、比較例９で得られた経鼻投与用液剤を経鼻投与したときのマウス血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の結果を示すグラフである。 実施例２９〜３６、比較例１０で得られた舌下投与用液剤を舌下投与したときのマウス血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の結果を示すグラフである 実施例３７〜５２、比較例１１〜１２で得られた舌下投与用固形製剤を舌下投与したときのマウス血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の結果を示すグラフである。 実施例５３〜５６、比較例１３で得られた皮下投与用液剤を皮下投与したときのマウス血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の結果を示すグラフである。 実施例５７〜６０、比較例１４で得られた経皮投与用クリーム剤を経皮投与したときのマウス血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体価の結果を示すグラフである。

以下に実施例を示して本発明を更に詳細かつ具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。

（実施例１〜８、比較例１〜２）
（経皮投与用クリーム剤の調製）
下記表１の組成を有する経皮投与用クリーム剤を調製した。具体的には、下記表１中に示した配合量で、下記に示した抗原ペプチド５重量％、核内受容体リガンド３重量％、必要に応じてヘルパーペプチド１重量部及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１５重量％を配合し、そこに基材（ベースクリーム）を加えて全１００重量％とし、混和して、経皮投与用クリーム剤を得た。用いたベースクリームは、表１４に記載の組成にて材料を配合し、混和して調製したものとした。白色ワセリン、モノステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸、ベンジルアルコール、ステアリルアルコール、ポリソルベート６０、濃グリセリン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は和光純薬工業から購入した。セタノールは東京化成工業から購入した。
ＰＥＴフィルム／ＰＥＴ不織布積層品（面積０．７ｃｍ^２）を固定用粘着テープの中央部にＰＥＴフィルム側をテープ側にして貼り合わせた複合基材を用意した。この複合基材の不織布部分に経皮投与用クリーム剤４ｍｇを塗布し、これを免疫試験の投与サンプルとした。

（核内受容体リガンド）
トレチノイン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、和光純薬工業社製）
イソトレチノイン（１３−ｃｉｓレチノイン酸、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
アリトレチノイン（９−ｃｉｓレチノイン酸、和光純薬工業社製）
ベキサロテン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
（抗原ペプチド）
ＯＶＡｐ（ＯＶＡペプチド、配列Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ（配列番号１３）の８アミノ酸のペプチド）
（ヘルパーペプチド）
ＰＡＤＲＥ

＜評価１＞
実施例、比較例で得られた経皮投与用クリーム剤について、以下の評価を行った。

（細胞性免疫誘導効果の評価）
以下の手順に従って、経皮投与用クリーム剤を用いて、免疫評価用モデル動物を用いたマウス免疫試験を行った。その後、ＥＬＩＳＰＯＴ法により、抗原特異的な細胞性免疫の誘導レベルを評価した。評価結果を図１に示した。

（１）免疫評価用モデル動物
ここにいう「免疫評価用モデル動物」は、ワクチン医薬組成物（ここでは経皮投与用クリーム剤）の免疫誘導特性を評価するためのモデル動物を意味し、具体的には、経皮投与用クリーム剤の細胞性免疫誘導レベルを評価するためのモデル動物を意味する。
免疫評価用モデル動物としては、経皮投与用クリーム剤中の抗原と、動物のＭＨＣクラス１分子との適合性を考慮し、経皮投与用クリーム剤中の抗原による細胞性免疫誘導が評価可能な動物を用いた。
即ち、抗原がＨＬＡ−Ａ^＊２４型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドの場合は、ＢＡＬＢ／ｃマウスで評価した。抗原がＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドの場合は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスで評価した。抗原が他のＨＬＡ型のＭＨＣ拘束性ペプチドの場合は、そのＨＬＡ型のＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な動物で評価した。

（２）経皮投与用クリーム剤のマウス免疫試験
下記表１中に示したマウスの背部を毛刈りし、毛刈りによる皮膚ダメージを回復させるための飼育期間を設けた後、マウスの背部皮膚に経皮投与用クリーム剤４ｍｇを２４時間投与して除去し、６日間の飼育を行った。投与から６日間経過後に脾臓を摘出し、脾細胞懸濁液を調製した。抗マウスＩＦＮ−γ抗体を固定化したＥＬＩＳＰＯＴプレートのウェルに、脾細胞（１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）と抗原ペプチド（１００μＭ）とを培養液とともに入れ、３７℃、５％ＣＯ_２の培養条件にて２０時間、共培養し、ＥＬＩＳＰＯＴ法にてＩＦＮ−γ産生細胞スポット数を評価した。ＩＦＮ−γ産生細胞スポット数を「免疫結果」として下記表１に示した。

（実施例９〜２０、比較例３〜８）
（経皮投与用テープ剤の調製）
下記表２の組成を有する経皮投与用テープ剤を調製した。具体的には、下記表２中に示した配合量で、下記に示した抗原ペプチド、核内受容体リガンドおよびヘルパーペプチドを配合し、そこに下記表２中に示した粘着基材及び有機溶媒（酢酸エチル）を、有機溶媒乾燥後の各成分と粘着基材との合計が１００重量％となるように配合し、混和して、粘着剤溶液を調製した。得られた粘着剤溶液を乾燥後の厚みが約８０μｍになるように剥離ライナーに展延し、乾燥により有機溶媒を除去して、粘着剤層を形成した。剥離ライナーには、シリコーン剥離処理を施したポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）製ライナー（厚さ７５μｍ）を用いた。得られた粘着剤層に支持体を貼り合わせて経皮投与用テープ剤を得た。支持体には、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（厚さ２５μｍ）を用いた。
この経皮投与用テープ剤を面積０．７ｃｍ^２になるようカットし、これを免疫実験の投与サンプルとした。投与時には剥離ライナーを剥して投与した。

（核内受容体リガンド）
トレチノイン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、和光純薬工業社製）
（抗原ペプチド）
ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５（ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチド、癌抗原ペプチド）
ＩＰＥＰ８７（ＩＰＥＰ８７ペプチド、感染性病原体由来抗原）
ＭＡＧＥ−Ａ３＿Ａ０２（ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、癌抗原ペプチド）
（ヘルパーペプチド）
ＰＡＤＲＥ
（粘着基材）
アクリル（不活性ガス雰囲気下、アクリル酸２−エチルへキシル７５部、Ｎ−ビニル−２−ピロリドン２２部、アクリル酸３部およびアゾビスイソブチロニトリル０．２部を酢酸エチル中６０℃にて溶液重合させて得られたアクリル系粘着剤溶液）
ＰＩＢ（ポリイソブチレン（オパノールＢ２００、ＢＡＳＦ社製）２４部、ポリイソブチレン（オパノールＢ１２、ＢＡＳＦ社製）３６部および脂環族系石油樹脂（アルコンＰ−１００、荒川化学社製）４０部をトルエンに溶解して得られたＰＩＢ粘着剤溶液）

＜評価２＞
実施例、比較例で得られた経皮投与用テープ剤について、以下の評価を行った。

（細胞性免疫誘導効果の評価）
経皮投与用クリーム剤の評価と同様の操作により、抗原特異的な細胞性免疫の誘導レベルを評価した。評価結果を図２に示した。

（実施例２１〜３６、比較例９〜１０）
（経粘膜投与用液剤の調製）
下記表３及び４の組成を有する経粘膜投与（経鼻投与又は舌下投与）用液剤を調製した。具体的には、下記表３及び４中に示した配合量で、抗原（オボアルブミン（ＯＶＡ））、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤を配合し、そこに生理食塩水を加え、経鼻投与では１０μＬ又舌下投与では３０μＬとし、混和して、経粘膜投与（経鼻投与又は舌下投与）用液剤を得た。

（核内受容体リガンド）
トレチノイン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、和光純薬工業社製）
イソトレチノイン（１３−ｃｉｓレチノイン酸、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
アリトレチノイン（９−ｃｉｓレチノイン酸、和光純薬工業社製）
レボチロキシンナトリウム水和物（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
リオチロニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
クロミフェンクエン酸塩（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）
ラロキシフェン塩酸塩（ＬＫＴ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）
タモキシフェンクエン酸塩（和光純薬工業社製）

（実施例３７〜５２、比較例１１〜１２）
（舌下投与用固形製剤の調製）
下記表５の組成を有する舌下投与用固形製剤（凍結乾燥製剤又はフィルム剤）を調製した。具体的には、下記表５中に示した配合量で、抗原（オボアルブミン（ＯＶＡ））、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤、基材であるヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−ＳＳＬ、日本曹達社製）を配合し、そこに生理食塩水を加え、混和して、製剤溶液を得た。その後、製剤溶液２５ｍｇを分注し、凍結乾燥を行なって凍結乾燥製剤を得るか又は減圧乾燥を行なってフィルム剤を得た。核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤としては、経粘膜投与用液剤の調製に用いた免疫誘導促進剤と同様のものを用いた。

＜評価３＞
実施例、比較例で得られた経粘膜投与用液剤又は舌下投与用固形製剤について、以下の評価を行った。

（液性免疫誘導効果の評価）
以下の手順に従って、経粘膜投与用液剤又は舌下投与用固形製剤を用いて、免疫評価用モデル動物を用いたマウス免疫試験を行った。その後、マウス血清中の抗原（ＯＶＡ）特異的ＩｇＧ抗体を測定することにより、全身性免疫応答を評価した。評価結果を図３〜５に示した。

（１）経粘膜投与用液剤又は舌下投与用固形製剤のマウス免疫試験
予め準備したマウス（ＢＡＬＢ／ｃマウス、メス７週齢）に麻酔処理を行った後、それぞれのマウスに対し、経鼻投与（実施例２１〜２８、比較例９）では１０μＬ、舌下投与（実施例２９〜３６、比較例１０）では３０μＬの経粘膜投与用液剤を投与し、また、舌下投与用固形製剤（実施例３７〜５２、比較例１１〜１２）を投与した。た。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれ同様の投与を行った。２度目の投与から更に１週間後に、マウス血清を採取した。

（２）ＥＬＩＳＡ法
（マウス血清中の抗原特異的ＩｇＧ抗体価測定方法（ＥＬＩＳＡ法））
ＥＬＩＳＡ用９６ウェルプレートに炭酸緩衝液にて希釈したＯＶＡ含有溶液（１００μｇ／ｍＬ）を１００μＬずつ添加し、一晩放置した。
予め準備した洗浄液（Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ）で３回ウェルを洗浄し、ブロッキング剤（Ｂｌｏｃｋ Ａｃｅ、大日本住友製薬社製）を精製水で４ｇ／１００ｍＬに希釈したブロッキング溶液をウェルに２００μＬずつ添加し、２時間室温で放置した。その後、洗浄液で３回ウェルを洗浄した。
採取したマウス血清を４℃、３０００ｇで１０分間遠心分離し、上清を回収した。ブロッキング剤をリン酸緩衝液（ナカライテスク社製）で０．４ｇ／１００ｍＬに希釈した溶液を用いて、上清を２倍ずつ段階希釈し、その溶液をウェルにそれぞれ５０μＬずつ添加し、２時間室温で放置した。
その後、洗浄液で３回ウェルを洗浄した。ブロッキング剤をリン酸緩衝液（ナカライテスク社製）で０．４ｇ／１００ｍＬに希釈した溶液でＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体（Ｇｏａｔ−ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆｃ ＨＲＰ、ＢＥＴＨＹＬ）を１００００倍に希釈し、その溶液をウェルに１００μＬずつ添加し、１時間室温で放置した。
その後、洗浄液で３回ウェルを洗浄し、ＴＭＢ溶液（ＥＬＩＳＡ ＰＯＤ ＴＭＢキット、ナカライテスク社製）をウェルに１００μＬずつ添加し、暗所にて３０分放置した。
その後、１Ｍ硫酸用液をウェルに１００μＬずつ添加し、当該９６ウェルプレートについてマイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２^ｅ、モレキュラーデバイス社製）で４５０ｎｍの吸光度を測定した。段階希釈時の吸光度を基に、マウス血清中のＩｇＧ抗体価をＬｏｇ２で求めた。

（実施例５３〜５６、比較例１３）
（皮下投与用液剤の調製）
下記表６の組成を有する皮下投与用製剤を調製した。具体的には、下記表６中に示した配合量で、抗原（オボアルブミン（ＯＶＡ））、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤を配合し、そこに生理食塩水を加え２００μＬとし、混和して、皮下投与用液剤を得た。

＜評価４＞
実施例、比較例で得られた皮下投与用製剤について、以下の評価を行った。

（液性免疫誘導効果の評価）
以下の手順に従って、皮下投与用製剤を用いて、免疫評価用モデル動物を用いたマウス免疫試験を行った。その後、マウス血清中の抗原（ＯＶＡ）特異的ＩｇＧ抗体を測定することにより、全身性免疫応答を評価した。評価結果を図６に示した。

（１）皮下投与用製剤のマウス免疫試験
予め準備したマウス（ＢＡＬＢ／ｃマウス、メス７週齢）に麻酔処理を行った後、それぞれのマウスに対し、２００μＬをマウス背部皮下に投与した。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれ同様の投与を行った。２度目の投与から更に１週間後に、マウス血清を採取した。

（２）ＥＬＩＳＡ法
＜評価３＞と同様の操作により、マウス血清中の抗原（ＯＶＡ）特異的ＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡ法により測定した。

（実施例５７〜６０、比較例１４）
（経皮投与用クリーム剤の調製）
下記表７の組成を有する経皮投与用クリーム剤を調製した。具体的には、下記表７中に示した配合量で、抗原（オボアルブミン（ＯＶＡ））、核内受容体リガンドを配合し、そこに基材（ベースクリーム）を加えて全１００重量部とし、混和して、経皮投与用クリーム剤を得た。用いたベースクリームは、表１４に記載の組成にて材料を配合し、混和して調製したものとした。
核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤としては、経鼻又は舌下投与用液剤の調製に用いた免疫誘導促進剤と同様のものを用いた。白色ワセリン、モノステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸、ベンジルアルコール、ステアリルアルコール、ポリソルベート６０、濃グリセリンは和光純薬工業から購入した。セタノールは東京化成工業から購入した。
ＰＥＴフィルム／ＰＥＴ不織布積層品（面積０．７ｃｍ^２）を固定用粘着テープの中央部にＰＥＴフィルム側をテープ側にして貼り合わせた複合基材を用意した。この複合基材の不織布部分に経皮投与用クリーム剤４ｍｇを塗布し、これをマウス免疫試験の投与サンプルとした。
＜評価５＞
実施例、比較例で得られた経皮投与用クリーム剤について、以下の評価を行った。

（液性免疫誘導効果の評価）
以下の手順に従って、経皮投与用クリーム剤を用いて、免疫評価用モデル動物を用いたマウス免疫試験を行った。その後、マウス血清中の抗原（ＯＶＡ）特異的ＩｇＧ抗体を測定することにより、全身性免疫応答を評価した。評価結果を図７に示した。

（１）経皮投与用クリーム剤のマウス免疫試験
予めマウス（Ｃ５７ＢＬ６ ＮＣｒマウス、メス７週齢）右背部を毛刈りし、毛刈りによる皮膚ダメージを回復させるための飼育期間を設けた後、マウスの右背部皮膚に経皮投与用クリーム剤４ｍｇを投与した。同時に左背部を毛刈りした。２４時間後、右背部の経皮投与用クリーム剤を除去した。当該投与から１週間後、マウスの左背部皮膚に同様に経皮投与用クリーム剤を投与し、２４時間後に除去した。２度目の投与から更に１週間後に、マウス血清を採取した。

（２）ＥＬＩＳＡ法
＜評価３＞と同様の操作により、マウス血清中の抗原（ＯＶＡ）特異的ＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡ法により測定した。

（実施例６１〜１８０、比較例１５〜５４）
下記表８〜１２の組成を有する経粘膜投与（経鼻投与又は舌下投与）用液剤を調製した。具体的には、下記表８〜１２中に示した配合量で、抗原及び核内受容体リガンドを配合し、そこに経鼻投与では生理食塩水を加えて１０μＬとし、舌下投与では生理食塩水を加えて３０μＬとし、混和して、経粘膜投与（経鼻投与又は舌下投与）用液剤を得た。
抗原としては、インフルエンザワクチン抗原として、インフルエンザワクチン抗原含有溶液Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９、阪大微生物病研究会製）、Ｈ３Ｎ２（Ａ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ３６１／２０１１、阪大微生物病研究会）、Ｂ型（Ｂ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／１／２０１０、阪大微生物病研究会）、Ｂ型（Ｂ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８、阪大微生物病研究会）を用いた。また、肺炎球菌莢膜ポリサッカライド含有溶液（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ ＮＰ、ＭＳＤ社製）、ＨＰＶ１６組換えタンパク質含有溶液（ＨＰＶ１６、ＰＲＯＳＰＥＣ社製）、弱毒生ロタウイルス含有溶液（ロタテック内用液、ＭＳＤ社製）、不活化ポリオウイルス含有溶液（イモバックスポリオ皮下注、サノフィ社製）、不活化Ａ型肝炎ウイルス含有溶液（エイムゲン、化学及血清療法研究所社製）、不活化日本脳炎ウイルス含有溶液（エンセバック皮下注用、化学及血清療法研究所社製）、弱毒生ムンプスウイルス含有溶液（おたふくかぜ生ワクチン、北里第一三共ワクチン社製）、弱毒生麻疹ウイルス含有溶液（はしか生ワクチン、北里第一三共ワクチン社製）、弱毒生風疹ウイルス含有溶液（乾燥弱毒生風しんワクチン、北里第一三共ワクチン社製）、破傷風トキソイド結合インフルエンザ菌ｂ型多糖含有溶液（アクトヒブ、サノフィ社製）、組換えＨＢｓ抗原タンパク質含有溶液（ビームゲン、化学及血清療法研究所社製）、弱毒生黄熱ウイルス含有溶液（黄熱ワクチン、サノフィ社製）、破傷風トキソイド含有溶液（破傷風トキソイド、デンカ生研社製）、弱毒生水痘ウイルス含有溶液（乾燥弱毒生水痘ワクチン、阪大微生物病研究会社製）、生ＢＣＧ含有溶液（乾燥ＢＣＧワクチン、日本ビーシージー製造社製）、不活化狂犬病ウイルス含有溶液（組織培養不活化狂犬病ワクチン、化学及血清療法研究所社製）を用いた。
核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤としては、トレチノイン（ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、和光純薬工業社製）、リオチロニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）、タモキシフェンクエン酸塩（和光純薬工業社製）を用いた。

＜評価６＞
実施例、比較例で得られた経粘膜投与用液剤について、以下の評価を行った。

（液性免疫誘導効果の評価）
以下の手順に従って、経粘膜投与用液剤を用いて、免疫評価用モデル動物を用いたマウス免疫試験を行った。その後、マウス血清中の抗原特異的ＩｇＧ抗体を測定することにより、全身性免疫応答を評価した。

（１）経粘膜投与用液剤のマウス免疫試験
経粘膜投与用液剤又は舌下投与用固形製剤の評価である＜評価３＞と同様の操作により、マウス血清を採取した。

（２）ＥＬＩＳＡ法
経粘膜投与用液剤又は舌下投与用固形製剤の評価である＜評価３＞と同様の操作により、マウス血清中の抗原特異的ＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡ法により測定した。

上記の液性免疫誘導効果の評価により、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤を含む経粘膜投与用液剤（実施例２１〜３６）を経粘膜投与（経鼻投与又は舌下投与）した場合には、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤を含まない経粘膜投与用液剤（比較例９、１０）と比較して高い抗原特異的ＩｇＧ抗体価が得られることが判る。
即ち、下記表８〜１２に示すような抗原を使用した場合にも、核内受容体リガンドである免疫誘導促進剤を使用することで高い抗原特異的ＩｇＧ抗体価を得ることができる。

（実施例１８１〜１８４、比較例５５）
表７の経皮投与用クリーム剤と同じ要領にて、表１３の組成を有する経皮投与用クリーム剤を調製した。マウス（Ｃ５７ＢＬ６ ＮＣｒマウス、メス７週齢）の右背部を毛刈りし、日東電工製ＯＰＰテープ（ＥＺダンプロン Ｎｏ．３３０１ＥＺ）にて角質剥離処理を５回実施した皮膚にクリーム剤を投与する（低侵襲投与）。同時に左背部を毛刈りする。２４時間後、右背部の経皮投与用クリーム剤を除去する。当該投与から１週間後、マウスの左背部皮膚に同様に角質剥離処理を行い、経皮投与用クリーム剤を投与し、２４時間後に除去する。２度目の投与から更に１週間後に、マウス血清を採取し、マウス血清中の抗原（ＯＶＡ）特異的ＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡ法により測定する。この低侵襲投与による免疫方法でも投与抗原に対して特異的な液性免疫を誘導することができる。

本発明の免疫誘導促進用組成物及びワクチン医薬組成物は、様々な抗原に対する免疫誘導のために普遍的に使用可能であり、皮下投与だけでなく経皮投与又は経粘膜投与に好適に用いられるものである。

Claims (7)

1. 核内受容体リガンドを含み、
   前記核内受容体リガンドは、レチノイドＸ受容体作動薬、甲状腺ホルモン受容体作動薬及びエストロゲン受容体調節薬からなる群より選択される少なくとも１種であり、
   前記レチノイドＸ受容体作動薬は、ベキサロテン及びその薬理学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
   前記甲状腺ホルモン受容体作動薬は、レボチロキシン、リオチロニン及びそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種であり、
   前記エストロゲン受容体調節薬は、クロミフェン、ラロキシフェン、タモキシフェン及びそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である
   ことを特徴とする免疫誘導促進用組成物。
2. 核内受容体リガンドは、甲状腺ホルモン受容体作動薬及びエストロゲン受容体調節薬からなる群より選択される少なくとも１種であり、液性免疫誘導用である請求項１記載の免疫誘導促進用組成物。
3. 核内受容体リガンドは、レチノイドＸ受容体作動薬であり、細胞性免疫誘導用である請求項１記載の免疫誘導促進用組成物。
4. ヘルパーペプチドを更に含む請求項１、２又は３記載の免疫誘導促進用組成物。
5. 免疫誘導のための抗原と、請求項１、２、３又は４記載の免疫誘導促進用組成物とを含むことを特徴とするワクチン医薬組成物。
6. 体表面上に投与されるものである請求項５記載のワクチン医薬組成物。
7. 皮内注射、皮下注射又は筋肉内注射により投与されるものである請求項５記載のワクチン医薬組成物。

Images