KR20020014435A - 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법 - Google Patents
레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20020014435A KR20020014435A KR1020000047715A KR20000047715A KR20020014435A KR 20020014435 A KR20020014435 A KR 20020014435A KR 1020000047715 A KR1020000047715 A KR 1020000047715A KR 20000047715 A KR20000047715 A KR 20000047715A KR 20020014435 A KR20020014435 A KR 20020014435A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- production
- cells
- retinic acid
- interleukin
- macrophages
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 12
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 title claims abstract description 10
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 title claims abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 title abstract description 8
- 230000030354 negative regulation of interleukin-12 production Effects 0.000 title 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 17
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- FOIVPCKZDPCJJY-JQIJEIRASA-N arotinoid acid Chemical compound C=1C=C(C(CCC2(C)C)(C)C)C2=CC=1C(/C)=C/C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 FOIVPCKZDPCJJY-JQIJEIRASA-N 0.000 claims abstract description 7
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 claims abstract description 4
- SHGAZHPCJJPHSC-ZVCIMWCZSA-N 9-cis-retinoic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(\C)/C=C/C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-ZVCIMWCZSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229960001445 alitretinoin Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 62
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 46
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 42
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 claims description 10
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 abstract description 39
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 abstract description 39
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract 1
- 210000002652 macrocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 24
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 8
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 4
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 2
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 2
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 2
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 2
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 241000282485 Vulpes vulpes Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 231100001039 immunological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 210000004765 promyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
- A61K31/203—Retinoic acids ; Salts thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
본 발명은 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시켜 Th1 세포의 생성 및 분화를 억제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 9-시스-레틴산, 트랜스-레틴산 또는 (E)-4-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-5,5,8,8-테트라메틸-2-나프틸레닐-1-프로페닐]벤조산((E)-4-[(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-naphthylenyl)-1-propenyl]) 등의 레틴산을 생체내에 처리할 경우, 대식세포의 IL-12의 생성을 감소시켜 Th1관련 사이토카인인 IFN-γ의 생성량을 저하시킴으로써, Th 세포가 더 이상 Th1으로 분화되는 과정을 억제함으로써 과다한 Th1의 생성을 억제하는 바, 이러한 면역반응의 과정을 면역 억제제의 개발에 효과적으로 이용할 수 있다.
Description
본 발명은 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시켜 Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 레틴산을 이용하여 대식세포의 인터루킨-12 생성을 감소시켜 인터페론 감마 및 인터루킨-4 생성량을 조절함으로써, 분화 전단계 T세포가 더 이상 Th1으로 분화되는 것을 막아, 체내 과도한 Th1 세포를 억제하는 방법에 관한 것이다.
레틴산(retinoic acid)은 지용성 비타민 A의 생물학적으로 활성화된 형태로서, 주로 생선간유, 달걀 노른자, 버터 등에서 발견된다. 이러한 레틴산은 녹황색 채소에 함유된 프로비타민 A인 베타카로틴 또는 카로티노이드가 작은 창자의 점막세포에서 레티놀을 거쳐 생합성된 것으로, 다양한 세포에서 생물학적 활성을 띠게 된다.
또한, 전기의 레틴산은 미성숙 혈구세포와 표피세포의 분화를 촉진하여 항암작용의 가능성를 가진 물질로, 원근육세포주(promyelocyte cell line)를 형태나 기능면에서 성숙한 과립세포(granulocyte)로 분화시키고(참조: Breitmanet al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77:2936-2948, 1980), 피부의 각질세포(keratinocyte)와 다른 종류의 층을 형성한 판상의 상피세포의 분화를 유도하며(참조 : Fuchs & Green, Cell,25:617-625, 1981), 카로티노이드와 함께 폐암과 심혈관계질환(cardiovascular disease)의 예방이나 치료에 효과가 있다고 알려진 바 있다(참조: Omennet al., N. Engl. J. Med.,334: 1150-1155, 1996).
한편, 레틴산은 건선(psoriasis), 다른 종류의 각질 증식증(hyperkeratosis), 부전각화 피부 장애(parakeratotic skin disorder), 심한 여드름과 여드름 관련 피부병 및 피부암과 T 세포 림프종을 포함한 이상 증식의 치료 또는 화학적 예방을 위하여 연고제나 주사 투여제로 사용되어 왔다(참조: Muindi JR, Cancer Treat Res.,87:305-342, 1996).
면역질환에 있어 주요한 역할을 하는 CD4+T 면역세포는 인터루킨-12(이하, 'IL-12'라 함), 인터페론 감마(이하, 'IFN-γ'라 함), 종양괴사인자 알파(tumor necrosis factor-α)의 사이토카인을 분비하여 세포내 병원체를 죽이는 세포면역반응을 유도하는 Th1 세포(helper T cell type 1)와, 인터루킨-4(이하, 'IL-4'라 함), 인터루킨-5(이하, 'IL-5'라 함), 인터루킨-10(이하, IL-10이라 함)을 분비하여 B 세포의 분화와 증식을 촉진하여 체액면역반응을 촉진하는 Th2 세포(helper T cell type 2)로 구성되고, 이 두 종류의 세포에서 분비되는 사이토카인은 각각 상대세포의 분화를 억제한다(참조: Mosmannet al., Immunol. Res.,123:209-229, 1991). 또한, 이 두 종류 T 헬퍼 림프구의 상대적 불균형이 이러한 질병의 발병이나 진행에 밀접한 관계가 있음이 알려진 바 있다(참조: Romagnani S., Clin. Immunol. Immunopathol.,80:225-235, 1996).
이러한 세포면역성 반응을 억제하기 위하여, 사이클로스포린 등을 면역억제제로 사용하여 왔으나, 이들은 약물이 존재하는 동안에만 효과가 있으므로(참조: Sorokinet al., J. Exp. Med.,164:1615-1625, 1986), 약물이 제거되는 순간 면역반응이 다시 시작된다는 단점이 있었다.
이러한 단점을 보완하기 위하여, Th1 또는 Th2와 관련된 사이토카인의 생성을 억제할 수 있는 방법이 제시되었으며, 이러한 방법의 원리는 다음과 같다. 즉, 현재까지 T 헬퍼 림프구의 분화에 영향을 주는 요인들로는 질병을 일으키는 항원들의 성질, 농도, 항원제시(antigen presenting cell) 세포와 T 헬퍼 림파구의 결합특성 및 주변에 존재하는 사이토카인의 종류에 의한다는 것이 알려져 왔으며(참조: Constant & Bottomly, Annu. Rev. Immunol.,15:297-322, 1997), 이 중 가장 중요한 요인으로는 T 헬퍼 림프구가 항원제시 세포의 항원을 인지할 때 주변에 어떠한 사이토카인들이 존재하느냐 하는 것으로, 특히 IL-12는 Th1 세포분화에 필수적인 것으로 알려져 있다. 예를 들어, IL-12의 활성 또는 생성을 억제하여 IFN-γ의 생성을 감소시킴으로써, Th1 면역반응을 저해하고 Th2 반응을 유도하여, Th2 세포에 의해 지속적으로 Th1 반응억제를 유지할 수가 있다(참조: Corealle et al., J. Immunol.,154:2959-2968, 1995). 따라서, 면역반응을 억제하기 위하여, Class II HLA의 발현을 억제하는 인터페론 베타(IFN-β)와 같은 사이토카인을 투여하는 방법이 사용되어 왔으나, 이러한 사이토카인의 투여는 생체내 순환기간이 짧고, 많은 부작용과 고비용이 소요된다는 단점을 내포하고 있었다.
결국, 생체내 면역조절체계를 이용함으로써, 전반적인 면역기능의 저하없이지속적인 면역체계를 변화시킬 수 있는 면역 억제제를 개발하여야 할 필요성과 함께, 이러한 면역 억제제의 개발에 있어서 면역질환과 관련된 과도한 면역반응을 선택적으로 억제할 수 있는 물질의 개발뿐만 아니라, 전기 물질에 의하여 억제되는 면역반응의 세부적인 과정 및 그 결과로 일어나는 생체내의 면역학적인 변화양상을 밝혀야 할 필요성이 끊임없이 대두되었다.
이에, 본 발명자들은 이러한 생체내 면역 조절체계를 조절할 수 있는 물질의 탐색과 그에 의하여 조절되는 면역반응의 전반적인 과정을 밝히고자 예의 노력한 결과, 레틴산을 사용하였을 경우에 인터루킨-12의 생성을 감소시켜, 체내 과도한 Th1 세포의 분화 및 생성이 억제됨을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
결국, 본 발명의 주된 목적은 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써 Th1 세포의 분화 및 생성을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.
도 1a는 생쥐의 대식세포에 3종류의 레틴산을 농도별로 처리하고, 리포 다당체로 자극하였을 때, 생성되는 인터루킨-12의 양을 나타낸 그래프이다.
도 1b는 생쥐의 대식세포에 3종류의 레틴산를 농도별로 처리하고, 열에 의해 사멸된 리스테리아균(heat-killed Listeria, HKL)으로 자극하였을 때, 생성되는 IL-12의 양은 나타낸 그래프이다.
도 2a는 레틴산을 처리한 생쥐의 대식세포에, 키홀 림페트 헤모시아닌 (Keyhole limpet hemocyanin, KLH)으로 활성화된 항원 특이적 CD4+T 세포와 KLH를 넣고 배양하였을 때, 생성되는 IL-12의 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 2b는 레틴산을 처리한 생쥐의 대식세포에, KLH로 활성화된 항원 특이적 CD4+T 세포와 키홀 림페트 헤모시아닌을 넣고 배양하였을 때, 생성되는 인터페론-감마(IFN-γ)의 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 2c는 레틴산을 처리한 생쥐의 대식세포에, KLH로 활성화된 항원 특이적CD4+T 세포와 KLH를 넣고 배양하였을 때, 생성되는 인터루킨-4의 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 3a는 레틴산을 처리한 생쥐의 대식세포에, KLH로 활성화된 항원 특이적 CD4+T 세포와 KLH를 넣고 배양한 후, 재조합 인터루킨-12를 첨가 하였을 때 생성되는 IFN-γ의 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 3b는 레틴산을 처리한 생쥐의 대식세포에, KLH로 활성화된 항원 특이적 CD4+T 세포와 KLH를 넣고 배양한 후, rIL-12를 첨가 하였을 때 생성되는 IL-4의 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 4는 생체내(in vivo)에서 9-시스-레틴산(9-cis-retinoic acid, 9-cis-RA)에 노출된 대식세포를 LPS와 HKL로 자극시킨 후에, IL-12 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 5a는 생체내에 9-시스-레틴산을 처리한 생쥐에서 분리한 대식세포의 IL-12 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 5b는 생체내에 9-시스-레틴산을 처리한 생쥐에서 분리한 대식세포를 KLH항원으로 활성화된 CD4+T 세포와 혼합하여 배양하였을 때, 인터페론 감마의 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 5c는 생체내에 9-시스-레틴산을 처리한 생쥐에서 분리한 대식세포를 KLH항원으로 활성화된 CD4+T 세포와 혼합하여 배양하였을 때, IL-4의 생성량을 나타낸그래프이다.
본 발명자들은 레틴산에 의하여 대식세포의 IL-12의 생성을 감소시켜 Th1관련 사이토카인인 IFN-γ의 생성량을 저하시키고, Th2 관련 사이토카인인 IL-4의 생성을 증가시킴으로써, Th 세포가 더 이상 Th1으로 분화되는 과정을 억제하므로, 과다한 Th1 세포의 생성을 억제할 수 있음을 확인하였다.
이하, 본 발명의 레틴산에 의한 Th1의 분화 및 생성을 억제하는 방법을 보다 구체적으로 설명하고자 한다.
본 발명자들은 우선, 3 종류의 레틴산 즉, 9-시스-레틴산, 트랜스-레틴산 또는 (E)-4-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-5,5,8,8-테트라메틸-2-나프틸레닐-1-프로페닐]벤조산((E)-4-[(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-naphthylenyl)-1-propenyl], 이하, 'TTNPB'라 함)이 대식세포의 면역반응에 있어서, IL-12의 생성에 어떠한 영향을 줄 수 있는지를 알아보기 위하여, 전기 레틴산을 생쥐의 대식세포에 농도별로 처리한 후 리포다당체(lipopolysaccharide, 이하 'LPS'라 함)나 열에 의해 사멸된 리스테리아균(heat killed Listeria, 이하 'HKL'이라 함)로 자극했을 때, IL-12의 변화를 측정하였다. 그 결과, 전기 레틴산은 10-7M 농도 이상에서 Th1 관련 사이토카인인 IL-12의 생성을 효과적으로 저해한다는 것을 확인하였다. 이어, 레틴산이 처리된 대식세포를 키홀 림페트 헤모시아닌(Keyhole Limpet Hemocyanin, 이하 'KLH'라 함)에 의해 활성화된 CD4+T 세포와 KLH를 혼합하여 배양한 다음, 배지 상등액으로 IL-12, IFN-γ, IL-4의 생성량을 조사한 결과, 레틴산에 의해 Th1 관련 사이토카인인 IL-12 및 IFN-γ의 생성이 저해되고, Th2 관련 사이토카인인 IL-4는 그 생성량이 증가됨을 확인하였다.
전기의 결과로 확인된 레틴산에 의한 Th1과 Th2 관련 사이토카인의 생성조절이 IL-12의 생성과 관련성이 있는지 여부를 확인하기 위하여 KLH로 활성화된 CD4+T 세포를 10-7M 레틴산이 처리된 생쥐의 대식세포와 혼합한 다음, 재조합 인터루킨-12(recombinant IL-12, 이하 'rIL-12'라 함)를 넣어 배양하고, 배지 상등액으로 IFN-γ와 IL-4의 생성량을 조사하였다. 그 결과, rIL-12가 첨가된 경우에 레틴산에 의해 생성이 저해되었던 IFN-γ는 다시 생성이 증가하였고, 생성이 증가되었던 IL-4은 생성이 감소됐다는 것을 확인하였다.
또한, 생체내에서도 레틴산이 IL-12의 생성을 저해하는지를 알아보기 위하여, 생쥐에게 레틴산을 투여하고 분리한 대식세포로부터 IL-12 생성량을 조사하였다. 그 결과, LPS와 HKL로 활성화된 모두의 경우에 IL-12의 생성량이 감소함을 확인하였고, 생체내에서도 생체외에서와 마찬가지로 IL-12의 생성 저하에 의해 IFN-γ역시 생성이 저하되고 IL-4는 생성이 증가되었음을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명의 레틴산 즉, 9-시스-레틴산, 트랜스-레틴산 또는 TTNPB를 사용하여 항원 특이적 T 헬퍼 세포를 Th2 세포로의 분화를 유도함으로써, Th1 세포의 분화 및 생성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 레틴산이 처리된 대식세포에서의 IL-12의 생성억제
DBA/2 생쥐에서 비장세포를 분리하여(참조: Kang BYet al., Br. J. Pharmacol.,128:380-384, 1999), 106세포/㎖의 농도로 10%의 우태아혈청(fetal calf serum)이 첨가된 둘베코의 변형된 이글스 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium, DMEM)에서 37℃, 3시간동안 배양하였다. 비부착 세포들을 제거한 후, 부착세포는 4℃의 인산염 완충용액(ice-cold phosphate-buffered saline)으로 15분간 처리하고 수확하였다. 준비한 부착세포에 3종류의 레틴산, 즉 9-시스-레틴산, 트랜스-레틴산, TTNPB를 0, 10-10, 10-9, 10-8, 10-6M농도로 처리하였다. 4시간 배양 후, 레틴산이 함유된 배지를 완전히 제거하고 새로운 배지를 첨가하고, 5㎍/㎖의 LPS 또는 HKL 2x106을 대식세포에 첨가하여 48시간 배양하였다. 48시간 경과 후, 배지의 상등액을 수확하여, IL-12의 농도를 ELISA 방법으로 측정하였다. 도 1a는 생쥐의 대식 세포에 3종류의 레틴산을 농도별로 처리하고, LPS로 자극하였을 때 생성되는 IL-12의 양을 나타낸 그래프이고, 도 1b는 대식세포에 3종류의 레틴산을 농도별로 처리하고, HKL로 자극하였을 때 생성되는 IL-12의 양을 나타낸 그래프이다: 이때, (--)은 9-시스-레틴산을 나타내고, (--)은 트랜스-레틴산을 나타내며, (-▲-)은 TTNPB를 각각 나타낸다. 도 1a 및 1b에서 보듯이, 레틴산이 10-7M농도 이상으로 처리된 대식세포에서 IL-12의 생성이 급격히 저하되었음을 알 수 있다. 그러나, IL-10의 생성은 심하게 저하되지 않았는 바, 레틴산 처리에 의한 IL-12 생성 저해는 일반적인 세포활성의 약화에 의한 결과가 아님을 알 수 있다.
실시예 2: 레틴산이 처리된 대식세포에 의한 항원특이적 T 세포의 사이토카인 생성변화
면역학적으로 활성화된 항원 특이적 CD4+T 세포를 분리하기 위해, DBA/2 생쥐의 발바닥에 100㎍의 KLH을 완전 프루언트 아주반트(Complete Freund's adjuvant)에 혼합하여 주입하고, 9일 후에 겨드랑이, 무릎 후면, 서혜부의 림프선을 분리하였다. 림프선 세포를 염소에서 만든 항-생쥐 Ig(goat anti-mouse Ig)이 코팅되어 있는 배양접시에 4℃에서 1시간 배양하여 B 세포를 제거하였고, 이 세포에 항-CD8 항체와 항-class II 단일항체를 넣고 4℃에서 30분간 처리한 후, 저독성의 토끼 보체(low toxicity rabbit complement, Pel Freeze, Rogers, U.S.A.)를 넣고 37℃에서 45분간 처리하여, 다른 종류의 항원 제시세포와 CD8+T 세포를 제거하였다. 형광을 이용한 세포형광(cytofluorometric) 분석법을 이용하여, 분리된 세포의 95% 이상이 CD4+T 세포임을 확인하였다.
순수분리된 CD4+T 세포를 96-웰 플레이트에 4x103세포/웰로 분주하고, 3종류의 레틴산이 처리된 대식세포(1x105/웰)와 KLH(10㎍/㎖)을 넣고 배양하였다. IL-12는 배양 2일 후, IL-4와 IFN-γ는 배양 4일 후에 배지 상등액을 수집하여 ELISA방법으로 생성량을 조사하였다. 도 2a는 IFN-γ의 생성량을 나타낸 그래프이고, 도 2b는 IL-12의 양을 나타낸 그래프이며, 도 2c는 IL-4의 생성량을 나타낸 그래프이다. 도 2a, 2b 및 2c에서 보는 바와 같이, 레틴산을 처리한 경우는 처리하지 않은 경우에 비해 IFN-γ와 IL-12의 생성은 감소하고 IL-4의 생성은 촉진되었다. 결국, 레틴산이 처리된 대식세포는 Th1 사이토카인 합성을 저해하고, Th2 사이토카인의 합성을 향상시킨다는 것을 알 수 있었다.
실시예 3: rIL-12의 첨가에 의한 레틴산이 처리된 대식세포와 항원특이적 CD4+T 세포에서의 사이토카인 생성의 변화
실시예 2에서 보여준 IFN-γ증가와 IL-4감소가 레틴산에 의한 대식세포에서의 IL-12생성 감소에 기인한다는 것을 증명하기 위하여, 레틴산이 처리된 대식세포와 KLH로 활성화된 항원특이적 CD4+T 세포를 혼합하고, rIL-12(10pg/㎖)와 KLH(10㎍/㎖)를 첨가하여 배양하였다. 4일 경과 후, 배지의 상등액을 수확하여 IFN-γ와 IL-4의 양을 ELISA 방법으로 조사하였다. 도 3a는 IFN-γ의 생성량을 나타낸 그래프이고, 도 3b는 IL-4의 생성량을 나타낸 그래프이다. 도 3a 및 3b에서 보는 바와 같이, rIL-12이 첨가되었을 때는, 레틴산이 처리된 대식세포에 의해 생성이 억제되었던 IFN-γ의 양이 현저하게 증가하였고, 생성이 촉진되었던 IL-4는 그 양이 현저하게 감소하였음을 알 수 있다. 이러한 결과는, 레틴산으로 처리된 대식세포에 의한 항원특이적 CD4+T 세포의 사이토카인 생성의 변화는 대식세포에서 발현되는 IL-12의 억제에 의한 것임을 보여준다.
실시예 4: 9-시스-레틴산이 투여된 생쥐의 대식세포에 의한 IL-12 생성의 저해효과
레틴산이 생체내에서도 대식세포의 사이토카인 생성에 영향을 주는지를 알아보기 위하여, DBA/2 생쥐에 100㎍의 9-시스-레틴산을 복강내에 주입하였다. 24시간 경과 후, 실시예 1에서 보여준 것과 같이, 쥐의 비장에서 대식세포를 추출하여 5㎍/㎖의 LPS 또는 2x106KLH를 첨가하여 배양하였다. 48시간 경과 후, 배지의 상등액을 수확하여 IL-12의 함량을 ELISA로 조사하였다. 도 4에서 보는 바와 같이, 9-시스-레틴산의 생체내 투여는 대식세포의 IL-12 생성량을 급격히 감소시켰음을 알 수 있었다.
실시예 5: 9-시스-레틴산이 투여된 생쥐의 대식세포에 의한 Th1 관련 사이토카인의 생성변화
DBA/2 생쥐에 100㎍의 9-시스-레틴산과 생리식염수(음성 대조군)를 복강내에 주입한 뒤, 각각의 생쥐에서 대식세포를 추출하여 KLH로 활성화된 항원 특이적 T 세포와 혼합하고 KLH(10㎍/㎖)를 첨가하였다. 4일 경과 후, 배지 상등액을 수확하여 IL-12, IFN-γ의 생성량을 ELISA 방법으로 측정하였다. 도 5a는 IL-12의 생성량을 나타낸 그래프이고, 도 5b는 IFN-γ의 생성량을 나타낸 그래프이다. 도 5a 및 5b에서 보는 바와 같이, 생체내에서 레틴산에 노출된 대식세포 역시 생체외에서 레틴산에 노출된 대식세포와 마찬가지로 항원특이적 CD4+T 세포의 Th1 관련 사이토카인인 IL-12와 IFN-γ의 생성을 억제하였고, Th2관련 사이토카인인 IL-4의 생성을 증가시켰다.
상술한 결과에 의하여, 9-시스- 틴산, 트랜스-레틴산 또는 TTNPB를 사용하여 대식세포의 IL-12의 생성을 감소시켜 Th1관련 사이토카인인 IFN-γ의 생성량을 저하시킴으로써, Th2 관련 사이토카인인 IL-4의 생성을 증가시키므로, Th 세포가 더 이상 Th1으로 분화되는 과정 및 Th1의 생성을 억제함을 확인할 수 있다.
이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시켜 Th1의 분화 및 생성을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명에 의하면, 레틴산을 이용하여 대식세포의 IL-12의 생성을 감소시켜 Th1관련사이토카인인 IFN-γ의 생성량을 저하시킴으로써, Th2 관련 사이토카인인 IL-4의 생성을 증가시키므로, Th 세포가 더 이상 Th1으로 분화되는 과정을 억제하므로, 이를 통하여 생체내의 과다한 Th1 세포의 생성을 억제할 수 있는 바, 이러한 면역반응의 과정을 면역 억제제의 개발에 효과적으로 이용할 수 있다.
Claims (2)
- 레틴산을 이용하여 대식세포의 인터루킨-12 생성을 감소시켜 인터페론 감마 및 인터루킨-4 생성량을 조절함으로써, 분화 전단계 T세포의 분화 및 체내 과도한 Th1 세포의 생성을 억제하는 방법.
- 제 1항에 있어서,레틴산은 9-시스-레틴산(9-cis-retinoic acid),트랜스-레틴산(all-trans-retinoic acid) 또는(E)-4-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로- 5,5,8,8-테트라메틸-2-나프틸레닐-1-프로페닐] 벤조산((E)-4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-naphthylenyl)-1-propenyl]benzoic acid, TTNPB)인 것을 특징으로 하는방법.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020000047715A KR20020014435A (ko) | 2000-08-18 | 2000-08-18 | 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020000047715A KR20020014435A (ko) | 2000-08-18 | 2000-08-18 | 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20020014435A true KR20020014435A (ko) | 2002-02-25 |
Family
ID=19683711
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020000047715A KR20020014435A (ko) | 2000-08-18 | 2000-08-18 | 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR20020014435A (ko) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016144976A1 (en) * | 2015-03-09 | 2016-09-15 | Kings College London | Combination therapy with rar alpha agonists for enhancing th1 response |
CN106535933A (zh) * | 2014-08-04 | 2017-03-22 | 日东电工株式会社 | 包含核受体配体的免疫诱导促进用组合物以及疫苗药物组合物 |
-
2000
- 2000-08-18 KR KR1020000047715A patent/KR20020014435A/ko not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Eur J Immunol,Cantorna MT et al.,Vol 25(6),p1673-1679,1995 * |
J Biol Chem,Na SY et al.,Vol 274(12),p7674-7680,1999 * |
대한미생물학회지,강인천 et al.,Vol 31(4),p399-404,1996 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106535933A (zh) * | 2014-08-04 | 2017-03-22 | 日东电工株式会社 | 包含核受体配体的免疫诱导促进用组合物以及疫苗药物组合物 |
CN106535933B (zh) * | 2014-08-04 | 2021-09-17 | 日东电工株式会社 | 包含核受体配体的免疫诱导促进用组合物以及疫苗药物组合物 |
WO2016144976A1 (en) * | 2015-03-09 | 2016-09-15 | Kings College London | Combination therapy with rar alpha agonists for enhancing th1 response |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Grimble | Nutritional modulation of immune function | |
O'Shea et al. | Immunomodulatory properties of conjugated linoleic acid | |
Klasing et al. | Monokines in growth and development | |
Corwin et al. | Influence of vitamin E on the mitogenic response of murine lymphoid cells | |
De Pablo et al. | Modulatory effects of dietary lipids on immune system functions | |
Bieri et al. | Vitamin E activity of γ-tocopherol in the rat, chick and hamster | |
Bun et al. | Influence of organic zinc supplementation on the antioxidant status and immune responses of broilers challenged with Eimeria tenella | |
Jiang et al. | The effect of vitamin E on laying performance and egg quality in laying hens fed corn dried distillers grains with solubles | |
EP0831804B1 (en) | Methods for maintaining or elevating the cd-4 or cd-8 cell levels comprising the administration of conjugated linoleic acid; a new process for the manufacture of conjugated linoleic acid using lactobacillus sp | |
Huang et al. | Dietary fat influences Ia antigen expression and immune cell populations in the murine peritoneum and spleen | |
JP4201349B2 (ja) | 動物の寄生虫症に対する予防的または治療的薬剤として使用するためのオメガ―3―脂肪酸を含む微生物製剤 | |
Friedman et al. | Effect of dietary fatty acids on antibody production and fatty acid composition of lymphoid organs in broiler chicks | |
Arechavaleta et al. | A Taenia solium metacestode factor nonspecifically inhibits cytokine production | |
Hunsche et al. | Immune dysfunction and increased oxidative stress state in diet-induced obese mice are reverted by nutritional supplementation with monounsaturated and n-3 polyunsaturated fatty acids | |
Wang et al. | Docosahexenoic acid treatment ameliorates cartilage degeneration via a p38 MAPK-dependent mechanism | |
Lim et al. | Dietary (n-6) and (n-3) fatty acids and energy restriction modulate mesenteric lymph node lymphocyte function in autoimmune-prone (NZB× NZW) F1 mice | |
MORIGuCHI et al. | Vitamin E is an important factor in T cell differentiation in thymus of F344 rats | |
EA036724B1 (ru) | Смесь жирных кислот и её применение для лечения воспалительных патологий | |
Meydani et al. | Antioxidants and the aging immune response | |
Wilsher et al. | Immunosuppression by pulmonary surfactant: mechanisms of action. | |
Thomas et al. | Lipid modulation of mammary tumor cell cytolysis: direct influence of dietary fats on the effector component of cell-mediated cytotoxicity | |
Bedford et al. | The effect of retinoids on dendritic cell function. | |
Geng et al. | α-Difluoromethylornithine suppresses inflammatory arthritis by impairing myeloid-derived suppressor cells | |
KR20020014435A (ko) | 레틴산을 이용하여 인터루킨-12의 생성을 감소시킴으로써Th1의 생성 및 분화를 억제하는 방법 | |
JP2003500362A (ja) | 免疫反応の調節および炎症性疾患の治療のための方法および組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E601 | Decision to refuse application |