JP6829483B2 - 形質転換体およびその利用 - Google Patents
形質転換体およびその利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6829483B2 JP6829483B2 JP2018564104A JP2018564104A JP6829483B2 JP 6829483 B2 JP6829483 B2 JP 6829483B2 JP 2018564104 A JP2018564104 A JP 2018564104A JP 2018564104 A JP2018564104 A JP 2018564104A JP 6829483 B2 JP6829483 B2 JP 6829483B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polynucleotide
- seq
- nucleotide sequence
- gene
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 214
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 214
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 214
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 149
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 106
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 106
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 79
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims description 71
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 58
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 57
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 55
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 claims description 38
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 33
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 claims description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 28
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 21
- KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N (R)-mevalonic acid Chemical compound OCC[C@](O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N 0.000 claims description 19
- KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N DL-mevalonic acid Natural products OCCC(O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 18
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 18
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 17
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 17
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 11
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 claims description 10
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 8
- 241001149691 Lipomyces starkeyi Species 0.000 claims description 7
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 claims description 7
- 229930003658 monoterpene Natural products 0.000 claims description 6
- 150000002773 monoterpene derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 235000002577 monoterpenes Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000013076 target substance Substances 0.000 claims description 4
- 101710158485 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase Proteins 0.000 claims description 3
- 101710118490 Copalyl diphosphate synthase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004286 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 claims description 3
- 101710174833 Tuberculosinyl adenosine transferase Proteins 0.000 claims description 3
- 101710093888 Pentalenene synthase Proteins 0.000 claims description 2
- 101710115850 Sesquiterpene synthase Proteins 0.000 claims description 2
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 claims 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 106
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 84
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 77
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 61
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 59
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 53
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 description 37
- 108010004621 phosphoketolase Proteins 0.000 description 35
- UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N Lycopene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1C(=C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=C)CCCC2(C)C UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 32
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 32
- JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N Lycophyll Natural products OC/C(=C/CC/C(=C\C=C\C(=C/C=C/C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=C(/CC/C=C(/CO)\C)\C)/C)\C)/C)\C)/C)/C JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N 0.000 description 31
- 235000012661 lycopene Nutrition 0.000 description 31
- 239000001751 lycopene Substances 0.000 description 31
- OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N lycopene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N 0.000 description 31
- 229960004999 lycopene Drugs 0.000 description 31
- ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N trans-isorenieratene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/c1c(C)ccc(C)c1C)C=CC=C(/C)C=Cc2c(C)ccc(C)c2C ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N 0.000 description 31
- -1 isoprenoid compounds Chemical class 0.000 description 30
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 19
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 14
- 241001149698 Lipomyces Species 0.000 description 13
- 101150011633 crtI gene Proteins 0.000 description 13
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010072039 Histidine kinase Proteins 0.000 description 12
- 101150081158 crtB gene Proteins 0.000 description 11
- 101150000046 crtE gene Proteins 0.000 description 11
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101100061456 Streptomyces griseus crtB gene Proteins 0.000 description 9
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 9
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 9
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 9
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 8
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 8
- 101150078565 TEF gene Proteins 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 7
- 101100114901 Streptomyces griseus crtI gene Proteins 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 description 7
- 101150015622 pyk gene Proteins 0.000 description 7
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- OINNEUNVOZHBOX-QIRCYJPOSA-N 2-trans,6-trans,10-trans-geranylgeranyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C(C)=C\COP(O)(=O)OP(O)(O)=O OINNEUNVOZHBOX-QIRCYJPOSA-N 0.000 description 5
- VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 2-trans,6-trans-farnesyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VWFJDQUYCIWHTN-FBXUGWQNSA-N Farnesyl diphosphate Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CC\C(C)=C/COP(O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-FBXUGWQNSA-N 0.000 description 5
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JSNRRGGBADWTMC-UHFFFAOYSA-N (6E)-7,11-dimethyl-3-methylene-1,6,10-dodecatriene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(=C)C=C JSNRRGGBADWTMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000580885 Cutaneotrichosporon curvatus Species 0.000 description 4
- GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N Geraniol Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCO GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 4
- QMVPMAAFGQKVCJ-UHFFFAOYSA-N citronellol Chemical compound OCCC(C)CCC=C(C)C QMVPMAAFGQKVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- GVVPGTZRZFNKDS-JXMROGBWSA-N geranyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O GVVPGTZRZFNKDS-JXMROGBWSA-N 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- NUHSROFQTUXZQQ-UHFFFAOYSA-N isopentenyl diphosphate Chemical compound CC(=C)CCO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O NUHSROFQTUXZQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XMGQYMWWDOXHJM-UHFFFAOYSA-N limonene Chemical compound CC(=C)C1CCC(C)=CC1 XMGQYMWWDOXHJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- CBIDRCWHNCKSTO-UHFFFAOYSA-N prenyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O CBIDRCWHNCKSTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 3
- GVVPGTZRZFNKDS-YFHOEESVSA-N Geranyl diphosphate Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/COP(O)(=O)OP(O)(O)=O GVVPGTZRZFNKDS-YFHOEESVSA-N 0.000 description 3
- OINNEUNVOZHBOX-XBQSVVNOSA-N Geranylgeranyl diphosphate Natural products [P@](=O)(OP(=O)(O)O)(OC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)/C)O OINNEUNVOZHBOX-XBQSVVNOSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100037116 Transcription elongation factor 1 homolog Human genes 0.000 description 3
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 3
- 125000002339 acetoacetyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C(=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 3
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 3
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- CDOSHBSSFJOMGT-UHFFFAOYSA-N linalool Chemical compound CC(C)=CCCC(C)(O)C=C CDOSHBSSFJOMGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 101150047627 pgk gene Proteins 0.000 description 3
- 101150093033 pk gene Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 101150058720 tdh gene Proteins 0.000 description 3
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 2
- OPFTUNCRGUEPRZ-UHFFFAOYSA-N (+)-beta-Elemen Natural products CC(=C)C1CCC(C)(C=C)C(C(C)=C)C1 OPFTUNCRGUEPRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPFTUNCRGUEPRZ-QLFBSQMISA-N (-)-beta-elemene Chemical compound CC(=C)[C@@H]1CC[C@@](C)(C=C)[C@H](C(C)=C)C1 OPFTUNCRGUEPRZ-QLFBSQMISA-N 0.000 description 2
- CRDAMVZIKSXKFV-FBXUGWQNSA-N (2-cis,6-cis)-farnesol Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C/CC\C(C)=C/CO CRDAMVZIKSXKFV-FBXUGWQNSA-N 0.000 description 2
- 239000000260 (2E,6E)-3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trien-1-ol Substances 0.000 description 2
- CXENHBSYCFFKJS-UHFFFAOYSA-N (3E,6E)-3,7,11-Trimethyl-1,3,6,10-dodecatetraene Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCC=C(C)C=C CXENHBSYCFFKJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QMVPMAAFGQKVCJ-SNVBAGLBSA-N (R)-(+)-citronellol Natural products OCC[C@H](C)CCC=C(C)C QMVPMAAFGQKVCJ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 2
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKZYCXHTTZZYSK-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-3-methyl-5-phosphonooxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C)CCOP(O)(O)=O OKZYCXHTTZZYSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 description 2
- YWLXLRUDGLRYDR-ZHPRIASZSA-N 5beta,20-epoxy-1,7beta,10beta,13alpha-tetrahydroxy-9-oxotax-11-ene-2alpha,4alpha-diyl 4-acetate 2-benzoate Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](O)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 YWLXLRUDGLRYDR-ZHPRIASZSA-N 0.000 description 2
- OVMSOCFBDVBLFW-VHLOTGQHSA-N 5beta,20-epoxy-1,7beta,13alpha-trihydroxy-9-oxotax-11-ene-2alpha,4alpha,10beta-triyl 4,10-diacetate 2-benzoate Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@H](O)C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 OVMSOCFBDVBLFW-VHLOTGQHSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000308595 Buckleyzyma aurantiaca Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- LLKXNMNOHBQSJW-UHFFFAOYSA-N Elemol Natural products CCC(=C)C1CC(C=CC1(C)C)C(C)(C)O LLKXNMNOHBQSJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N Epioleonolsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4CCC3C21C JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005792 Geraniol Substances 0.000 description 2
- GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N Geraniol Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CO GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001506030 Microstroma bacarum Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N Oleanolic acid Natural products CC1(C)CC2C3=CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC4(C)C3(C)CCC2(C1)C(=O)O YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N Oleanolinsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- 101150033985 TPI gene Proteins 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000223230 Trichosporon Species 0.000 description 2
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- OJFDKHTZOUZBOS-CITAKDKDSA-N acetoacetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 OJFDKHTZOUZBOS-CITAKDKDSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N all-trans-alpha-carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1C(C)=CCCC1(C)C ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- TUFPZQHDPZYIEX-UHFFFAOYSA-N alpha-Santonin Natural products C1CC2(C)C=CC(=O)C=C2C2C1C(C)C(=O)O2 TUFPZQHDPZYIEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XJHDMGJURBVLLE-BOCCBSBMSA-N alpha-santonin Chemical compound C([C@]1(C)CC2)=CC(=O)C(C)=C1[C@@H]1[C@@H]2[C@H](C)C(=O)O1 XJHDMGJURBVLLE-BOCCBSBMSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- FSRZGYRCMPZNJF-UHFFFAOYSA-N beta-Cubebene Natural products C12C(C(C)C)CCC(C)C32C1C(=C)CC3 FSRZGYRCMPZNJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPNUFJAVOOONJE-UHFFFAOYSA-N beta-cariophyllene Natural products C1CC(C)=CCCC(=C)C2CC(C)(C)C21 NPNUFJAVOOONJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGQFVRIQXUFPAH-UHFFFAOYSA-N beta-citronellol Natural products OCCC(C)CCCC(C)=C JGQFVRIQXUFPAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAHWPYUMFXYFJY-UHFFFAOYSA-N beta-myrcene Chemical compound CC(C)=CCCC(=C)C=C UAHWPYUMFXYFJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 150000001746 carotenes Chemical class 0.000 description 2
- 235000005473 carotenes Nutrition 0.000 description 2
- GFJIQNADMLPFOW-UHFFFAOYSA-N cis-Elemol Natural products CC(=C)C1CC(C(C)(C)O)CCC1(C)C=C GFJIQNADMLPFOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000000484 citronellol Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- WGIYGODPCLMGQH-UHFFFAOYSA-N delta-carotene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1C(C)=CCCC1(C)C WGIYGODPCLMGQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000567 diterpene group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- GFJIQNADMLPFOW-VNHYZAJKSA-N elemol Chemical compound CC(=C)[C@@H]1C[C@H](C(C)(C)O)CC[C@@]1(C)C=C GFJIQNADMLPFOW-VNHYZAJKSA-N 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 229930009668 farnesene Natural products 0.000 description 2
- 229930002886 farnesol Natural products 0.000 description 2
- 229940043259 farnesol Drugs 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 101150073818 gap gene Proteins 0.000 description 2
- 229940113087 geraniol Drugs 0.000 description 2
- TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb2 Natural products CC(=CCCC(OC1OC(COC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 235000001510 limonene Nutrition 0.000 description 2
- 229940087305 limonene Drugs 0.000 description 2
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 229940100243 oleanolic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N prosapogenin PS-A Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(O)=O)CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OCC(O)C(O)C1O HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009790 rate-determining step (RDS) Methods 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- QSRAJVGDWKFOGU-WBXIDTKBSA-N rebaudioside c Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]1(CC[C@H]2[C@@]3(C)[C@@H]([C@](CCC3)(C)C(=O)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)CC3)C(=C)C[C@]23C1 QSRAJVGDWKFOGU-WBXIDTKBSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229940074353 santonin Drugs 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 2
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000004084 sesquiterpene group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 235000019202 steviosides Nutrition 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CRDAMVZIKSXKFV-UHFFFAOYSA-N trans-Farnesol Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCO CRDAMVZIKSXKFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N vitamin A aldehyde Natural products O=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPNUFJAVOOONJE-ZIAGYGMSSA-N β-(E)-Caryophyllene Chemical compound C1CC(C)=CCCC(=C)[C@H]2CC(C)(C)[C@@H]21 NPNUFJAVOOONJE-ZIAGYGMSSA-N 0.000 description 2
- GAIBLDCXCZKKJE-QRYCCKSOSA-N (-)-Germacrene D Natural products C(C)(C)[C@H]1/C=C/C(=C)CC/C=C(/C)\CC1 GAIBLDCXCZKKJE-QRYCCKSOSA-N 0.000 description 1
- CKUVNOCSBYYHIS-SUEBGMEDSA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-2-[[(3s,5r,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-12-hydroxy-17-[(2r)-2-hydroxy-6-methylhept-5-en-2-yl]-4,4,8,10,14-pentamethyl-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O([C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3C[C@@H](O)[C@H]4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@@H]4[C@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O CKUVNOCSBYYHIS-SUEBGMEDSA-N 0.000 description 1
- 239000001490 (3R)-3,7-dimethylocta-1,6-dien-3-ol Substances 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N (3R,3'R)-beta,beta-carotene-3,3'-diol Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N 0.000 description 1
- WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N (3beta)-3-hydroxyurs-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDOSHBSSFJOMGT-JTQLQIEISA-N (R)-linalool Natural products CC(C)=CCC[C@@](C)(O)C=C CDOSHBSSFJOMGT-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016219 Acetyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 101100288313 Arabidopsis thaliana KTI4 gene Proteins 0.000 description 1
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 description 1
- HRQKOYFGHJYEFS-UHFFFAOYSA-N Beta psi-carotene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C HRQKOYFGHJYEFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108030003507 Beta-eudesmol synthases Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 101100480861 Caldanaerobacter subterraneus subsp. tengcongensis (strain DSM 15242 / JCM 11007 / NBRC 100824 / MB4) tdh gene Proteins 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 101100447466 Candida albicans (strain WO-1) TDH1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 241001527609 Cryptococcus Species 0.000 description 1
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- YJHVMPKSUPGGPZ-UHFFFAOYSA-N Dihydro-beta-eudesmol Natural products C1CC(C(C)(C)O)CC2C(C)CCCC21C YJHVMPKSUPGGPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000001512 FEMA 4601 Substances 0.000 description 1
- 239000001776 FEMA 4720 Substances 0.000 description 1
- 108010007508 Farnesyltranstransferase Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100039291 Geranylgeranyl pyrophosphate synthase Human genes 0.000 description 1
- GAIBLDCXCZKKJE-YZJXYJLZSA-N Germacren D Chemical compound CC(C)C/1CC\C(C)=C\CCC(=C)\C=C\1 GAIBLDCXCZKKJE-YZJXYJLZSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 description 1
- 101000579123 Homo sapiens Phosphoglycerate kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000642268 Homo sapiens Speckle-type POZ protein Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000503332 Lipomyces doorenjongii Species 0.000 description 1
- 241000503338 Lipomyces kockii Species 0.000 description 1
- 241000557055 Lipomyces mesembrius Species 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 241001443590 Naganishia albida Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 101150043338 Nmt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- KJWZYMMLVHIVSU-IYCNHOCDSA-N PGK1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@@H]1[C@@H](CCCCCCC(O)=O)C(=O)CC1=O KJWZYMMLVHIVSU-IYCNHOCDSA-N 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000588696 Pantoea ananatis Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100028251 Phosphoglycerate kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N Rebaudioside A Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@]1(C)[C@@H]2[C@](C)([C@H]3[C@@]4(CC(=C)[C@@](O[C@H]5[C@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)(C4)CC3)CC2)CCC1 HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000223253 Rhodotorula glutinis Species 0.000 description 1
- 241001149408 Rhodotorula graminis Species 0.000 description 1
- 241000223254 Rhodotorula mucilaginosa Species 0.000 description 1
- 241000221523 Rhodotorula toruloides Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100036422 Speckle-type POZ protein Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N Stevioside Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UEDUENGHJMELGK-HYDKPPNVSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101150032817 TPI1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 102100033598 Triosephosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 239000004213 Violaxanthin Substances 0.000 description 1
- SZCBXWMUOPQSOX-LOFNIBRQSA-N Violaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C12OC1(C)CC(O)CC2(C)C)C=CC=C(/C)C=CC34OC3(C)CC(O)CC4(C)C SZCBXWMUOPQSOX-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 1
- 241000222057 Xanthophyllomyces dendrorhous Species 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N Z-zeaxanthin Natural products C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1C=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N 0.000 description 1
- QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCC(O)C1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N all-trans-Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 1
- 229930002945 all-trans-retinaldehyde Natural products 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- IGABZIVJSNQMPZ-UHFFFAOYSA-N alpha-Zeacarotene Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1C(C)=CCCC1(C)C IGABZIVJSNQMPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSLPMRQHCOLESF-UHFFFAOYSA-N alpha-amyrenol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C)C(C)C5C4=CCC3C21C FSLPMRQHCOLESF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011795 alpha-carotene Substances 0.000 description 1
- 235000003903 alpha-carotene Nutrition 0.000 description 1
- ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N alpha-carotene Natural products C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=1C(C)(C)CCCC=1C)/C)\C)(\C=C\C=C(/C=C/[C@H]1C(C)=CCCC1(C)C)\C)/C ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N 0.000 description 1
- IPZIYGAXCZTOMH-UHFFFAOYSA-N alpha-eudesmol Natural products CC1=CCCC2CCC(CC12)C(C)(C)O IPZIYGAXCZTOMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150010487 are gene Proteins 0.000 description 1
- BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N artemisinin Chemical compound C([C@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2OC(=O)[C@@H]4C BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N 0.000 description 1
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 description 1
- 229960004191 artemisinin Drugs 0.000 description 1
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 description 1
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 description 1
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 description 1
- 229930014667 baccatin III Natural products 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- XFSVWZZZIUIYHP-UHFFFAOYSA-N beta-Eudesmol Natural products CC(C)(O)C1CCC2CCCC(=C)C2C1 XFSVWZZZIUIYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JFSHUTJDVKUMTJ-QHPUVITPSA-N beta-amyrin Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C JFSHUTJDVKUMTJ-QHPUVITPSA-N 0.000 description 1
- QQFMRPIKDLHLKB-UHFFFAOYSA-N beta-amyrin Natural products CC1C2C3=CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC4(C)C3(C)CCC2(C)CCC1(C)C QQFMRPIKDLHLKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PDNLMONKODEGSE-UHFFFAOYSA-N beta-amyrin acetate Natural products CC(=O)OC1CCC2(C)C(CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C)(C)CC5C4=CCC23C)C1(C)C PDNLMONKODEGSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- BOPIMTNSYWYZOC-VNHYZAJKSA-N beta-eudesmol Chemical compound C1CCC(=C)[C@@H]2C[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]21C BOPIMTNSYWYZOC-VNHYZAJKSA-N 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 235000012682 canthaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- FDSDTBUPSURDBL-DKLMTRRASA-N canthaxanthin Chemical compound CC=1C(=O)CCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)C(=O)CCC1(C)C FDSDTBUPSURDBL-DKLMTRRASA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- NPNUFJAVOOONJE-UONOGXRCSA-N caryophyllene Natural products C1CC(C)=CCCC(=C)[C@@H]2CC(C)(C)[C@@H]21 NPNUFJAVOOONJE-UONOGXRCSA-N 0.000 description 1
- IRAQOCYXUMOFCW-CXTNEJHOSA-N cedrene Chemical compound C1[C@]23[C@H](C)CC[C@H]3C(C)(C)[C@H]1C(C)=CC2 IRAQOCYXUMOFCW-CXTNEJHOSA-N 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N chikusetsusaponin LM5 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OC(CO)C(O)C1O CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- WGIYGODPCLMGQH-ZNTKZCHQSA-N delta-Carotene Natural products C(=C\C=C\C(=C/C=C/C=C(\C=C\C=C(/C=C/[C@H]1C(C)=CCCC1(C)C)\C)/C)\C)(\C=C\C=C(/CC/C=C(\C)/C)\C)/C WGIYGODPCLMGQH-ZNTKZCHQSA-N 0.000 description 1
- 235000001581 delta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- IRAQOCYXUMOFCW-UHFFFAOYSA-N di-epi-alpha-cedrene Natural products C1C23C(C)CCC3C(C)(C)C1C(C)=CC2 IRAQOCYXUMOFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004141 diterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N entered according to Sigma 01432 Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- SJWWTRQNNRNTPU-ABBNZJFMSA-N fucoxanthin Chemical compound C[C@@]1(O)C[C@@H](OC(=O)C)CC(C)(C)C1=C=C\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)C(=O)C[C@]1(C(C[C@H](O)C2)(C)C)[C@]2(C)O1 SJWWTRQNNRNTPU-ABBNZJFMSA-N 0.000 description 1
- AQLRNQCFQNNMJA-UHFFFAOYSA-N fucoxanthin Natural products CC(=O)OC1CC(C)(C)C(=C=CC(=CC=CC(=CC=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C(=O)CC23OC2(C)CC(O)CC3(C)C)C)CO)C(C)(O)C1 AQLRNQCFQNNMJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011663 gamma-carotene Substances 0.000 description 1
- 235000000633 gamma-carotene Nutrition 0.000 description 1
- HRQKOYFGHJYEFS-RZWPOVEWSA-N gamma-carotene Natural products C(=C\C=C\C(=C/C=C/C=C(\C=C\C=C(/C=C/C=1C(C)(C)CCCC=1C)\C)/C)\C)(\C=C\C=C(/CC/C=C(\C)/C)\C)/C HRQKOYFGHJYEFS-RZWPOVEWSA-N 0.000 description 1
- WWULHQLTPGKDAM-UHFFFAOYSA-N gamma-eudesmol Natural products CC(C)C1CC(O)C2(C)CCCC(=C2C1)C WWULHQLTPGKDAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- OJIGFVZZEVQUNV-UHFFFAOYSA-N germacrene D Natural products CC(C)C1CCC=C(/C)CCC(=C)C=C1 OJIGFVZZEVQUNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 description 1
- NODILNFGTFIURN-GZPRDHCNSA-N ginsenoside Rb2 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NODILNFGTFIURN-GZPRDHCNSA-N 0.000 description 1
- PFSIGTQOILYIIU-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb3 Natural products CC(=CCCC(C)(O)C1CCC2(C)C3CCC4C(C)(C)C(CCC4(C)C3CC(OC5OC(COC6OCC(O)C(O)C6O)C(O)C(O)C5O)C12C)OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C PFSIGTQOILYIIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N ginsenoside Rc Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N 0.000 description 1
- SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rc Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC2OC(CO)C(O)C2O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTQSADJAYQOCDD-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rd2 Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OCC(O)C(O)C1O ZTQSADJAYQOCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000007852 inverse PCR Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- GAIBLDCXCZKKJE-UHFFFAOYSA-N isogermacrene D Natural products CC(C)C1CCC(C)=CCCC(=C)C=C1 GAIBLDCXCZKKJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003049 isoprene rubber Polymers 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 229930007744 linalool Natural products 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- MQYXUWHLBZFQQO-QGTGJCAVSA-N lupeol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C MQYXUWHLBZFQQO-QGTGJCAVSA-N 0.000 description 1
- PKGKOZOYXQMJNG-UHFFFAOYSA-N lupeol Natural products CC(=C)C1CC2C(C)(CCC3C4(C)CCC5C(C)(C)C(O)CCC5(C)C4CCC23C)C1 PKGKOZOYXQMJNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- 108060004506 lycopene beta-cyclase Proteins 0.000 description 1
- 108060004507 lycopene cyclase Proteins 0.000 description 1
- GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H magnesium phosphate Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[Mg+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O GVALZJMUIHGIMD-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000004137 magnesium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000157 magnesium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002261 magnesium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000010994 magnesium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000018791 negative regulation of catalytic activity Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 108010071062 pinene cyclase I Proteins 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 125000000905 polyterpene group Polymers 0.000 description 1
- 150000003097 polyterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 1
- 235000019203 rebaudioside A Nutrition 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N retinal group Chemical group C\C(=C/C=O)\C=C\C=C(\C=C\C1=C(CCCC1(C)C)C)/C NCYCYZXNIZJOKI-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229940013618 stevioside Drugs 0.000 description 1
- OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N stevioside Natural products CC1(CCCC2(C)C3(C)CCC4(CC3(CCC12C)CC4=C)OC5OC(CO)C(O)C(O)C5OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C(=O)OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O OHHNJQXIOPOJSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 101150088047 tdh3 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229940096998 ursolic acid Drugs 0.000 description 1
- PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N ursolic acid Natural products CC1CCC2(CCC3(C)C(C=CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C)C2C1C)C(=O)O PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 235000019245 violaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- SZCBXWMUOPQSOX-PSXNNQPNSA-N violaxanthin Chemical compound C(\[C@@]12[C@](O1)(C)C[C@H](O)CC2(C)C)=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(\C)/C=C/C=C(\C)/C=C/[C@]1(C(C[C@@H](O)C2)(C)C)[C@]2(C)O1 SZCBXWMUOPQSOX-PSXNNQPNSA-N 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 235000008210 xanthophylls Nutrition 0.000 description 1
- 150000003735 xanthophylls Chemical class 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
- 235000010930 zeaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001775 zeaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940043269 zeaxanthin Drugs 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
(1)真核宿主に、イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子と、当該遺伝子の上流に以下の(a)〜(d)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドとを含むポリヌクレオチド構築物が、導入されていることを特徴とする、形質転換体:
(a)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(b)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
(e)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(f)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチドまたはその一部;
(g)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(h)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド。
(a´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(b´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
(e´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(f´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(g´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(h´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド。
培養後の培地および/又は当該形質転換体内より目的物質を回収する回収工程と、を含むことを特徴とする、イソプレノイド前駆体またはイソプレノイドの製造方法。
本発明の一実施形態に係る形質転換体は、真核宿主に、イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子と、当該遺伝子の上流に、(動作可能、又は、機能可能に連結された)以下の(a)〜(d)または(a´)〜(d´)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドとを含むポリヌクレオチド構築物が、導入されていることを特徴とする。
(a)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(b)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
(a´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(b´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
(a)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(b)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d)配列番号1に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのプロモーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
(a´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(b´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d´)配列番号5に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのプロモーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
(e)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(f)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチドまたはその一部;
(g)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(h)配列番号2に記載の塩基配列もしくはピルビン酸キナーゼのターミネーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド。
(e´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部;
(f´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列からなるポリヌクレオチドまたはその一部と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(g´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列において、1または数個の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(h´)配列番号6に記載の塩基配列もしくはホスホケトラーゼのターミネーター配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドまたはその一部からなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド。
本発明の一実施形態に係るイソプレノイド前駆体またはイソプレノイド(本明細書中、イソプレノイド化合物ともいう)の製造方法は、上記形質転換体を培養する培養工程と、培養後の培地および/又は当該形質転換体内より目的物質を回収する回収工程と、を含むことが好ましい。
油性酵母リポマイセス・スターキー株を脂質生産培地にて30℃、180rpmの回転振とうにより5日間培養後、菌体を採取し、トータルRNAを調製した。脂質生産培地は40g/lのグルコース、0.5g/lの(NH4)2SO4、1g/lのKH2PO4、0.5g/lのMgSO4・7H2O、0.1g/lのCaCl2・2H2O、0.1g/lのNaClおよび1.5g/lの酵母の抽出物(Yeast extract)から構成される。RNAの調製にはアイソジェンII(ISOGEN II)(ニッポンジーン社製)を用いた。得られたトータルRNAについて、RNAシークエンス解析を外注し、各遺伝子の発現量を示すFPKM値データを取得した。取得したFPKM値および既に解読していた、リポマイセス・スターキー株のゲノム塩基配列情報から、脂質生産培地で発現している遺伝子とその発現量とをリスト化した。
RNAシークエンス解析によって、脂質生産培地で発現している遺伝子を選抜した。選抜した遺伝子の中から発現強度が高い遺伝子5種について、リアルタイムPCR法により各遺伝子の発現量を確認した。次に、プライムスクリプト(登録商標)逆転写酵素(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase)(タカラバイオ株式会社製)用いて、トータルRNA 0.5μgを逆転写反応させ、1本鎖cDNAを調製した。調製したcDNA溶液1μlとTHUNDERBIRD SYBR qPCR Mix(TOYOBO社製)とを混合し、Stratagene Mx3005P(アジレントテクノロジー(Agilent technologies)株式会社製)による定量的PCR解析を行った。これらの結果を図1に示す。図1に示すように、グリセルアルデヒド3−リン酸脱水素酵素遺伝子の発現強度に対して、ホスホケトラーゼ遺伝子の発現強度は800倍に相当し、翻訳伸長因子遺伝子の発現強度は600倍に相当し、ヒスチジンキナーゼ遺伝子の発現強度は300倍に相当し、アセチル補酵素Aカルボキシラーゼ遺伝子の発現強度は120倍に相当し、ピルビン酸キナーゼ遺伝子の発現強度は、120倍に相当した。
以下に、本実施例におけるベクター構築の詳細を図2および図3に基づいて説明するが、ベクター構築の手順はこれに限定されるものではない。図2は、本願の実施例における、短縮型ヒドロキシメチルグルタリル補酵素A還元酵素(tHMGR)遺伝子発現ベクターの構築方法を示す図である。それぞれ、PYK:ピルビン酸キナーゼ(Pyruvate kinase)、TEF:翻訳伸長因子(Translation elongation factor 1)、PK:ホスホケトラーゼ(Phosphoketolase)、HK:ヒスチジンキナーゼ(Histidine kinase)、ACC:アセチル補酵素Aカルボキシラーゼ(Acetyl Co-A carboxylase)の各遺伝子のプロモーター配列およびターミネーター配列をベクターに導入した。図3は、本願の実施例における、リコペン生合成ベクター(pUC−lyc)の構築方法を示す図である。PGK:ホスホグリセリン酸キナーゼ(Phosphoglycerate kinase)、TPI:Triosephosphate isomerase、TEF:翻訳伸長因子(Translation elongation factor 1)の各遺伝子のプロモーター配列およびターミネーター配列を、crtE、crtBおよびcrtIの各遺伝子の発現に用いた。なお、ベクター構築における一連の反応操作は、当業者に標準的な方法である、制限酵素処理とライゲーションとによるクローニング、オーバーラップエクステンションPCRクローニング(非特許文献6参照)、およびHifi DNAクローニングキット(NEB社製)の各方法に準じて行った。その他、一般的なクローニング法において、一連の酵素類はNEB社製の製品を使用した。なお、本キットを用いたDNA構築物についてはNEB社の利用許諾権利が及ばないことが、使用説明書に明記されている。
pUC19ベクター内のBspQIサイトの削除および、NotIサイトの新たな導入を行うため、プライマーとして、pUC−Not−F(配列番号7)およびpUC−Not−R(配列番号8)を用いてインバースPCRを行った。使用した各プライマー配列の詳細を、表1に記載する。PCR反応には増幅酵素として、増幅断片の正確性が高いとされる、プライムスター HS DNA ポリメラーゼ(PrimStar HS DNA polymerase)(タカラバイオ社製)を使用した。プライマーDNA50pmol×2、5倍濃縮酵素反応用バッファー10μl、2.5mMのdNTPmix4μlおよびプライムスター HS DNA ポリメラーゼ1.25ユニットを加えた溶液を作製した。サーマルサイクラーPCR(製品名:Thermal Cycler DiceR Gradient、タカラバイオ社製)にpUC19プラスミドDNA10ngと、上記溶液50μlとをセットし、pUC19プラスミドDNAを鋳型に用いてDNA断片を増幅した。サーマルサイクラーの反応条件は、94℃1分の熱処理を行った後、98℃で10秒、55℃で15秒および72℃で2分40秒(伸長時間1分/1kb)の3つの温度変化を1サイクルとし、これを35サイクル繰り返し、最後に4℃で反応試料を保存した。この反応試料5μlを0.8%TAEアガロースゲル(含有)にて電気泳動し、0.5μg/mlのエチジウムブロマイド溶液に浸漬した。その後、このゲルを254nmの紫外線照射(紫外線照射機はニッポンジーン社製)によってDNAのバンドを検出し、遺伝子増幅の確認を行った。増幅したDNA断片をセルフライゲーションしてベクター上にNotIサイトを導入した。ライゲーション反応液を大腸菌コンピテント細胞に導入し、大腸菌を形質転換した。大腸菌コンピテント細胞は、DH5α株(東洋紡社製)を使用し、詳細な取り扱いは付属のプロトコールに従った。抗生物質であるアンピシリン50μg/mlを含有したLBプレートを用いてコロニー選抜を行い、各選抜コロニーから、エタノール沈殿処理によってプラスミドDNAを調製した。なお、エタノール沈殿処理および制限酵素処理等の一連操作の詳細なマニュアルは、Molecular Cloning : A Laboratory Manual second edition(Maniatisetal., Cold Spring Harbor Laboratory press. 1989)に従った。
TEF遺伝子のプロモーター配列(配列番号3)およびTDH遺伝子のターミネーター配列を、リポマイセス・スターキー株から精製したゲノムDNAを鋳型に用いて、PCRにより増幅した。プライマーは、TEF遺伝子のプロモーター配列に対して、pTEF−F1(配列番号9)とpTEF−R1(配列番号10)とを用い、TDH遺伝子のターミネーター配列に対して、tTDH3−F1(配列番号11)とtTDH3−R1(配列番号12)とを用いた。primestar HSによるPCR反応で、プロモーター配列およびターミネーター配列のDNA断片を調製した。以降、全ての発現制御配列はリポマイセス・スターキー株のゲノムDNAを鋳型に用いて調製した。G418遺伝子についても、pUC19ベクターを鋳型に用いてG418遺伝子をPCRにより増幅した。プライマーはG418−F(配列番号13)およびG418−R(配列番号14)を用いた。増幅した3断片を利用してオーバーラップPCRを行い、プロモーター配列およびターミネーター配列をG418遺伝子に機能的に連結した。オーバーラップPCRは、非特許文献6に記載の方法に従い行った。作製したG418カセットの両端に、ベースベクターへの連結のためにNotIサイトが付加されるようにプライマーを設計した。次に、連結したDNA断片をpCR−BluntII−TOPOベクター(Thermo Fisher Scientific社製)へサブクローニングした。サブクローニングの一連の反応操作は、一般的なDNAサブクローニング法に準じて行った。DNAサブクローニング法の詳細は付属のプロトコールに従った。次に、NotI処理したpUC19−NotIおよびG418カセットをライゲーションすることにより、G418選抜マーカーを持つベースベクターpUC−G418を構築した。
(発現制御配列(プロモーターDNAおよびターミネーターDNA)のクローニング)
実施例1および2において脂質生産培地で発現を示した遺伝子について、高い発現活性を示す遺伝子を5種類選定し、選定した遺伝子の発現制御配列(プロモーターDNA(1.5kb)およびターミネーターDNA(0.5kb))をクローニングした。当該発現制御配列の取得における遺伝子資源は、油性酵母リポマイセス・スターキー株のゲノムDNAを鋳型とするPCR増幅法によって単離した。本株をYPD培養液5mlで2晩培養した後、ゲノムDNA調製キット(製品名:Genとるくん(商標)−酵母用−、タカラバイオ社製)を用いて、ゲノムDNAを調製した。また、調製したゲノムDNAは、分光光度計(製品名:UVmini−1240、株式会社島津製作所製)によりDNA濃度を測定した。各遺伝子の発現制御配列は、リポマイセス・スターキー株のゲノムDNA配列を鋳型に用いて、プライムスター HS DNAポリメラーゼを用いてPCR増幅により取得した。各遺伝子のプロモーター配列およびターミネーター配列の増幅に用いたプライマーは以下である:ピルビン酸キナーゼ(PYK)遺伝子発現制御配列のプロモーター配列に対しては、pPYK−F(配列番号17)とpPYK−R(配列番号18);ピルビン酸キナーゼ(PYK)遺伝子発現制御配列のターミネーター配列に対しては、tPYK−F(配列番号19)とtPYK−R(配列番号20);ヒスチジンキナーゼ(Histidine kinase)(HK)遺伝子発現制御配列のプロモーター配列に対しては、pHK−F(配列番号21)とpHK−R(配列番号22);ヒスチジンキナーゼ(Histidine kinase)(HK)遺伝子発現制御配列のターミネーター配列に対しては、tHK−F(配列番号23)とtHK−R(配列番号24);ホスホケトラーゼ(Phosphoketolase)(PK)遺伝子発現制御配列のプロモーター配列に対しては、pPK−F(配列番号25)とpPK−R(配列番号26);ホスホケトラーゼ(Phosphoketolase)(PK)遺伝子発現制御配列のターミネーター配列に対しては、tPK−F(配列番号27)とtPK−R(配列番号28);アセトアセチル補酵素Aカルボキシラーゼ(Acetoacetyl Co-A carboxylase)(ACC)遺伝子発現制御配列のプロモーター配列に対しては、pACC−F(配列番号29)とpACC−R(配列番号30);アセトアセチル補酵素Aカルボキシラーゼ(Acetoacetyl Co-A carboxylase)(ACC)遺伝子発現制御配列のターミネーター配列に対しては、tACC−F(配列番号31)とtACC−R(配列番号32);翻訳伸長因子(Translation elongation factor 1)(TEF)遺伝子発現制御配列のプロモーター配列に対しては、pTEF−F(配列番号33)とpTEF−R(配列番号34);翻訳伸長因子(Translation elongation factor 1)(TEF)遺伝子発現制御配列のターミネーター配列に対しては、tTEF−F(配列番号35)とtTEF−R(配列番号36)であった。各プライマー配列の詳細を表2に記載する。油性酵母リポマイセス・スターキー株のゲノムDNA100ngを鋳型に用いて、プライマーDNA50pmol×2、5倍濃縮酵素反応用バッファー×10μl、2.5mMのdNTPmix4μlおよびプライムスター HS DNAポリメラーゼ1.25ユニットを加えた50μlの反応液を、サーマルサイクラーPCR(製品名:Thermal Cycler DiceR Gradient、タカラバイオ社製)にセットしてDNA断片を得た。サーマルサイクラーの反応条件は、94℃2分間の熱処理を行った後、98℃で10秒、55℃で15秒、72℃で1分30秒の3つの温度変化を1サイクルとし、これを35サイクル繰り返し、最後に4℃で反応試料を保存した。当該反応試料5μlを0.8%TAEアガロースゲル(含有)にて電気泳動し、0.5μg/mlのエチジウムブロマイド溶液に浸漬した。その後、本ゲルを254nmの紫外線照射(紫外線照射機はニッポンジーン社製)によってDNAのバンドを検出し、遺伝子増幅の確認を行った。
実施例1において脂質生産培地での培養で比較的高い発現を示した5種の遺伝子から発現制御配列を取得し、リポマイセス・スターキー用コドンに最適化した、出芽酵母由来の短縮型ヒドロキシメチルグルタリル補酵素A還元酵素(tHMGR)遺伝子のDNA断片を遺伝子合成により準備した。合成した遺伝子断片を、プライマーとして、tHMGR−PYK−F(配列番号37)およびtHMGR−PYK−R(配列番号38)を用いてプライムスターHS DNAポリメラーゼでPCRにより増幅した。これをBspQI処理したpUC−ptPYKおよびHifi DNA cloning Kit(NEB社)を用いてライゲーションした(図3参照)。そして、DH5α株へ形質転換し、50mg/Lのアンピシリン含有LB寒天培地で選抜することによってpUC−ptPYK−tHMGRを持つクローンを得た(コンストラクトの詳細は、図2の下段参照)。
パントエア・アナティス(Patoea ananatis)由来のリコペン生合成経路遺伝子(crtE,crtBおよびcrtI)発現カセットを下記のように構築した。
油性酵母リポマイセス・スターキー株へのリコペン生合成遺伝子の導入は、非特許文献7に記載されている方法に従い、酢酸リチウム法による核ゲノムへの遺伝子導入によって行った。pUC−lycを鋳型に用いて、プライマーとして、pUC−F(配列番号65)およびpUC−R(配列番号66)を用いて、リコペン生合成遺伝子と選抜マーカーとを含む領域11kbpをPCRにより増幅し、形質転換に用いるDNA断片を調製した(各プライマーの塩基配列は、表5参照)。PCRにはTks Gflex(タカラバイオ社製)を用いた。プライマーDNA50pmol×2、2倍濃縮酵素反応用バッファー25μlおよびTks Gflex DNAポリメラーゼ1.25ユニットを加えた50μlの反応液をサーマルサイクラーにセットして、pUC−lycプラスミドDNA10ngを鋳型に用いて、DNA断片を調製した。サーマルサイクラーの反応条件は、94℃1分の熱処理を行った後、98℃で10秒、55℃で15秒、68℃で5分30秒(伸長時間30秒/1kb)の3つの温度変化を1サイクルとし、これを35サイクル繰り返し、最後に4℃で反応試料を保存した。25mg/lのG418を含むYPD寒天培地でG418耐性を示すコロニーを30℃、7日間培養して取得し、コロニーPCRによりcrtE遺伝子(0.91kb)、crtB遺伝子(0.93kb)およびcrtI遺伝子(1.48kb)を保持していることを確認した。コロニーPCRにはKODFx酵素(TOYOBO社)を使用し、リコペン生合成に必要な3遺伝子を検出するためのプライマーとして、それぞれ以下を使用した;crtE遺伝子に対して、crtE−F(配列番号59)とcrtE−R(配列番号60)、crtB遺伝子に対して、crtB−F(配列番号61)とcrtB−R(配列番号62)、およびcrtI遺伝子に対して、crtI−F(配列番号63)とcrtI−R(配列番号64)。プライマーDNA50pmol×2、2倍濃縮酵素反応用バッファー5μl、2mM dNTPmix0.4μlおよびKOD Fx DNAポリメラーゼ0.1ユニットを加えた10μlの反応液をサーマルサイクラーにセットし、菌体懸濁液1μlを鋳型に用いて、DNA断片を調製した。サーマルサイクラーの反応条件は、95℃5分の熱処理を行った後、98℃で10秒、55℃で30秒、68℃で1分30秒(伸長時間1分/1kb)の3つの温度変化を1サイクルとし、これを35サイクル繰り返し、最後に4℃で反応試料を保存した。リコペン生合成遺伝子導入株は野生株と比べて、薄い赤色を呈色していることから、呈色を指標にスクリーニングすることも可能である。
リコペン生合成遺伝子と、各遺伝子の発現制御配列とを連結させた短縮型ヒドロキシメチルグルタリル補酵素A還元酵素遺伝子発現カセットを導入した遺伝子組換え体において、リコペン生産量を定量した。これにより、短縮型ヒドロキシメチルグルタリル補酵素A還元酵素遺伝子の発現に適した発現制御配列を選抜した。それぞれの菌株を2mlのYPD培地に植菌後、30℃、180rpmの振とう培養により2日間、前培養した。その後、50mlの脂質生産培地を入れた三角フラスコに前培養液を500μl植菌した。30℃、180rpmの回転振とう培養を5日間行い、培養液5mlから菌体ペレットを回収した。上記菌体ペレットに0.5mlのDMSOと2mlの酢酸エチルとを添加して1分間ボルテックスした後、2時間静置した。次に、塩化ナトリウム飽和水溶液2mlを添加して1分間ボルテックスした後、2000×G 5分の遠心分離により、有機層と水層とに分離した。リコペンは有機層(酢酸エチル)に分配されることから、上層の有機層1mlを回収し、回収した有機層をHPLC(株式会社島津製作所製)に供した。逆相カラム(COSMSIL 5C18−MS−II 4.6ID×150mm)、移動相(アセトニトリル:エタノール=7:3)および流速1ml/minというHPLCでの検出条件下、吸収波長 452nmでリコペンの検出を行った。濃度既知のリコペン標品を用いた検量線からサンプル濃度を定量した(図4参照)。図4に、短縮型ヒドロキシメチルグルタリル補酵素A還元酵素遺伝子の発現調節株におけるリコペン生産量の比較の結果を示す。図4中、pUC−ptPYK−tHMGRは、ピルビン酸キナーゼ(Pyruvate kinase)遺伝子の発現制御配列を用いてtHMGR遺伝子を発現させた結果を示し、pUC−ptTEF−tHMGRは、翻訳伸長因子(Translation elongation factor 1)遺伝子の発現制御配列を用いてtHMGR遺伝子を発現させた結果を示し、pUC−ptPK−tHMGRは、ホスホケトラーゼ(Phosphoketolase)遺伝子の発現制御配列を用いてtHMGR遺伝子を発現させた結果を示し、pUC−ptACC−tHMGRは、アセチル補酵素Aカルボキシラーゼ(Acetyl Co-A carboxylase)遺伝子の発現制御配列を用いてtHMGR遺伝子を発現させた結果を示し、pUC−ptHK−tHMGRは、ヒスチジンキナーゼ(Histidine kinase)遺伝子の発現制御配列を用いてtHMGR遺伝子を発現させた結果を示す。図4に示すように、ピルビン酸キナーゼ(PYK)遺伝子の発現制御配列を用いた場合のリコペン生産量が最も高く、次に翻訳伸長因子(TEF)遺伝子の発現制御配列を用いた場合のリコペン生産量が高く、3番目に、ホスホケトラーゼ(PK)遺伝子の発現制御配列を用いた場合のリコペン生産量が高いことが分かった。
Claims (9)
- 油性酵母に、イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子と、当該遺伝子の上流に以下の(a)〜(d)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドとを含むポリヌクレオチド構築物が、導入されていることを特徴とする、形質転換体:
(a)配列番号1に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(b)配列番号1に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c)配列番号1に記載の塩基配列において、50個以内の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドからなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d)配列番号1に記載の塩基配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドからなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。 - 真核宿主に、イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子と、当該遺伝子の上流に以下の(a)〜(d)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドとを含むポリヌクレオチド構築物が、導入されており、
上記ポリヌクレオチド構築物は、更に、上記イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子の下流に以下の(e)〜(h)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドを含んでいることを特徴とする、形質転換体:
(a)配列番号1に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(b)配列番号1に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c)配列番号1に記載の塩基配列において、50個以内の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドからなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d)配列番号1に記載の塩基配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドからなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド、
(e)配列番号2に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(f)配列番号2に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(g)配列番号2に記載の塩基配列において、50個以内の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドからなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(h)配列番号2に記載の塩基配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドからなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド。 - 真核宿主に、イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子と、当該遺伝子の上流に以下の(a´)〜(d´)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドとを含むポリヌクレオチド構築物が、導入されていることを特徴とする、形質転換体:
(a´)配列番号5に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(b´)配列番号5に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(c´)配列番号5に記載の塩基配列において、50個以内の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドからなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド;
(d´)配列番号5に記載の塩基配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドからなり、かつ、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。 - 上記ポリヌクレオチド構築物は、更に、上記イソプレノイド生合成酵素をコードする遺伝子の下流に以下の(e´)〜(h´)からなる群より選択される少なくとも1つのポリヌクレオチドを含んでいることを特徴とする、請求項3に記載の形質転換体:
(e´)配列番号6に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(f´)配列番号6に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(g´)配列番号6に記載の塩基配列において、50個以内の塩基が置換、欠失、挿入および/または付加されたポリヌクレオチドからなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド;
(h´)配列番号6に記載の塩基配列と90%以上の同一性を有するポリヌクレオチドからなり、かつ、ターミネーター活性を有するポリヌクレオチド。 - 上記真核宿主が、油性酵母であることを特徴とする、請求項2〜4のいずれか1項に記載の形質転換体。
- 上記油性酵母が、リポマイセス・スターキー(Lipomyces starkeyi)であることを特徴とする、請求項1または5に記載の形質転換体。
- 上記イソプレノイド生合成酵素は、メバロン酸経路酵素、カロテノイド生合成酵素、モノテルペン生合成酵素、セスキテルペン合成酵素、トリテルペン合成酵素、またはジテルペン合成酵素であることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載の形質転換体。
- 上記メバロン酸経路酵素は、ヒドロキシメチルグルタリル補酵素A還元酵素(HMG−CoA Reductase、HMGR)であることを特徴とする、請求項7に記載の形質転換体。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の形質転換体を培養する培養工程と、培養後の培地および/又は当該形質転換体内より目的物質を回収する回収工程と、を含むことを特徴とする、イソプレノイド前駆体またはイソプレノイドの製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017013696 | 2017-01-27 | ||
JP2017013696 | 2017-01-27 | ||
PCT/JP2017/034751 WO2018138966A1 (ja) | 2017-01-27 | 2017-09-26 | 形質転換体およびその利用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018138966A1 JPWO2018138966A1 (ja) | 2019-11-07 |
JP6829483B2 true JP6829483B2 (ja) | 2021-02-10 |
Family
ID=62978522
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018564104A Active JP6829483B2 (ja) | 2017-01-27 | 2017-09-26 | 形質転換体およびその利用 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6829483B2 (ja) |
WO (1) | WO2018138966A1 (ja) |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9376702B2 (en) * | 2008-04-24 | 2016-06-28 | The City University Of New York | Regulating the production of isoprenoids in algal cells |
WO2015011209A1 (en) * | 2013-07-23 | 2015-01-29 | Dsm Ip Assets B.V. | Diterpene production in yarrowia |
CA2924885A1 (en) * | 2013-09-18 | 2015-03-26 | The Governors Of The University Of Alberta | Genetically engineered saccharomyces cerevisiae and yarrowia lipolytica and production of fatty alcohols |
CN106414744B (zh) * | 2014-01-31 | 2020-11-06 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 适于酵母中的异源基因表达的启动子 |
US9914932B2 (en) * | 2014-11-13 | 2018-03-13 | Battelle Memorial Institute | Agrobacterium-mediated transformation of lipomyces |
-
2017
- 2017-09-26 JP JP2018564104A patent/JP6829483B2/ja active Active
- 2017-09-26 WO PCT/JP2017/034751 patent/WO2018138966A1/ja active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018138966A1 (ja) | 2018-08-02 |
JPWO2018138966A1 (ja) | 2019-11-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Nogueira et al. | Construction of a fusion enzyme for astaxanthin formation and its characterisation in microbial and plant hosts: A new tool for engineering ketocarotenoids | |
Frohwitter et al. | Production of the sesquiterpene (+)-valencene by metabolically engineered Corynebacterium glutamicum | |
WO2013021261A2 (en) | Methods and materials for recombinant production of saffron compounds | |
Park et al. | Heterologous production of squalene from glucose in engineered Corynebacterium glutamicum using multiplex CRISPR interference and high-throughput fermentation | |
Lee et al. | Molecular cloning and biochemical characterization of a novel erythrose reductase from Candida magnoliae JH110 | |
WO2018111194A1 (en) | Targets for improving terpene production in rhodosporidium toruloides | |
JP2019530478A (ja) | 組換え宿主におけるシトロネラール及びシトロネロールの生産 | |
US11584941B2 (en) | Terpene synthase producing patchoulol and elemol, and preferably also pogostol | |
BR112019017561A2 (pt) | sintase de santaleno | |
JP2016182044A (ja) | ベタシアニン類の製造方法 | |
WO2021042057A1 (en) | Systems and methods for preparing cannabinoids and derivatives | |
WO2013053824A1 (en) | New biosynthesis pathway for prenol in a recombinant microorganism | |
CN111527203B (zh) | 细胞色素p450单加氧酶催化的倍半萜的氧化 | |
EP3234105B1 (en) | Methods for tuning carotenoid production levels and compositions in rhodosporidium and rhodotorula genera | |
EP3121275A1 (en) | Method for producing aniline derivative by fermentation from carbon source | |
JP2015192669A (ja) | 微生物、および微生物の培養方法 | |
ES2759724T3 (es) | Drimenol sintasas y procedimiento de producción de drimenol | |
WO2016056610A1 (ja) | 7デヒドロコレステロール及びビタミンd3の製造法 | |
JP6829483B2 (ja) | 形質転換体およびその利用 | |
BR112019013014A2 (pt) | produção de manool | |
EP2570485B1 (en) | Process for production of isopropanol, and genetically modified yeast capable of producing isopropanol | |
US11293040B2 (en) | Methods of producing sesquiterpene compounds | |
JP6644797B2 (ja) | 形質転換体、およびテルペノイドの製造方法 | |
WO2015199043A1 (ja) | カロテノイド合成酵素およびその利用 | |
JP6748108B2 (ja) | 芳香性化合物の製造 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190614 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190702 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200421 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200609 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200630 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200806 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201222 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210107 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6829483 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |