JP6801201B2 - 熱ショックタンパク質及び/又はセラミド産生促進剤 - Google Patents
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Description
(1)タウリンを含有し、pHが7より大きい熱ショックタンパク質及び/又はセラミド産生促進剤。
(2)タウリンの配合量が0.5質量%以上である請求項1に記載の熱ショックタンパク質及び/又はセラミド産生促進剤。
試験例1 熱ショックタンパク質産生促進
ヒト3次元培養表皮モデル(J−TEC製)をアッセイ培地にて、24穴(1穴2cm2)のプレートを用いて、5%CO2存在下、37℃で培養を開始した。翌日にヒト3次元培養表皮モデルの角層側から、試験物質を50μL添加し、15分間静置した後に試験物質を吸引除去し、再びCO2インキュベータにアッセイプレートを戻した。試験物質は水酸化ナトリウム水溶液(pH10)、炭酸塩緩衝液(pH10)、タウリン3%水溶液(pH4.9)、タウリン3%水溶液(水酸化ナトリウムにてpH10に調製)、タウリン1%水溶液(水酸化ナトリウムにてpH7に調製)。6時間後に、CO2インキュベータからアッセイプレートを取り出し、ヒト3次元培養表皮モデルをRNA Stabilization Reagentに浸漬し回収した。回収したヒト3次元培養表皮モデルからRNAを抽出し、リアルタイムPCRシステムを用いてHSP70ファミリーのひとつであるHSP70−1A(HSPA1A)のmRNAの測定を行なった。また、標的HSPA1Aの相対的な発現を決定するためのハウスキーピング遺伝子として働く、グリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼ1A(GAPDH)のmRNAを内部標準として測定した。用いたプライマー配列は以下の通りである。
HSPA1A-R:5’-CTGGGAAGCCTTGGGACAAC-3’(配列番号2)
GAPDH-F:5’-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’(配列番号3)
GAPDH-R:5’-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3’(配列番号4)
ヒト3次元培養表皮モデル(J−TEC製)をアッセイ培地にて、24穴(1穴2cm2)のプレートを用いて、5%CO2存在下、37℃で培養を開始した。翌日にヒト3次元培養表皮モデルの角層側から、試験物質を50μL添加し、15分間静置した後に試験物質を吸引除去し、再びCO2インキュベータにアッセイプレートを戻した。試験物質はタウリン0.5%水溶液、タウリン1%水溶液、タウリン3%水溶液(水酸化ナトリウムにてpH7、8、9、10に調製)。6時間後に、CO2インキュベータからアッセイプレートを取り出し、ヒト3次元培養表皮モデルをRNA Stabilization Reagentに浸漬し回収した。回収したヒト3次元培養表皮モデルからRNAを抽出し、リアルタイムPCRシステムを用いてHSP70ファミリーのひとつであるHSP70−1A(HSPA1A)のmRNAの測定を行なった。また、標的HSPA1Aの相対的な発現を決定するためのハウスキーピング遺伝子として働く、グリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼ1A(GAPDH)のmRNAを内部標準として測定した。用いたプライマー配列は以下の通りである。
HSPA1A-R:5’-CTGGGAAGCCTTGGGACAAC-3’(配列番号2)
GAPDH-F:5’-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’(配列番号3)
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ヒト3次元培養表皮モデル(J−TEC製)をアッセイ培地にて、24穴(1穴2cm2)のプレートを用いて、5%CO2存在下、37℃で培養を開始した。翌日にヒト3次元培養表皮モデルの角層側から、試験物質を50μL添加し、15分間静置した後に試験物質を吸引除去し、再びCO2インキュベータにアッセイプレートを戻した。試験物質はタウリン3%水溶液(pH4.9)、タウリン3%水溶液(水酸化ナトリウムにてpH10に調製)、タウリン0.5%水溶液(水酸化ナトリウムにてpH7、8、9、10に調製)。1時間後に、CO2インキュベータからアッセイプレートを取り出し、ヒト3次元培養表皮モデルをRNA Stabilization Reagentに浸漬し回収した。回収した3次元培養表皮モデルからRNAを抽出し、リアルタイムPCRシステムを用いてGBA2のmRNAの測定を行なった。また、標的GBA2の相対的な発現を決定するためのハウスキーピング遺伝子として働く、グリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼ1A(GAPDH)のmRNAを内部標準として測定した。用いたプライマー配列は以下の通りである。
GBA2-R:5’-TGGAAGCCCTCCCAAGTCAG-3’(配列番号6)
GAPDH-F:5’- GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’(配列番号3)
GAPDH-R:5’- TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3’(配列番号4)
Claims (2)
- タウリンを含有し、pHが8〜10である熱ショックタンパク質及び/又はセラミド産生促進剤。
- タウリンの配合量が0.5質量%以上である請求項1に記載の熱ショックタンパク質及び/又はセラミド産生促進剤。
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