JP6794189B2 - キマーゼ阻害用組成物 - Google Patents

Description

本発明は、キマーゼ阻害用組成物に関する。より詳しく言うと、本発明は、キマーゼ活性に由来する高血圧や炎症等の各種疾患の予防、治療及び改善に有効なキマーゼ阻害用組成物に関する。

日本食は恒常的に塩分（ナトリウム）の使用量が多いため、食習慣により塩分過多となる傾向がある。塩分過多は高血圧に繋がりやすく、高血圧は心筋梗塞や脳卒中の原因となる。高血圧の患者は国内に約４，３００万人、日本人の約１／３とされており、その大多数は塩分の過剰摂取による食塩依存性の高血圧である。
このような食塩依存性高血圧の対策は、従来より、摂取する塩分量を減らすことに目が向けられていた。
しかし、減塩は味付けが薄味となるため、食事の楽しみが減り、長続きしないという問題がある。また、塩分（ナトリウム）も身体に必要なミネラル成分の一つである。

キマーゼは，肥満細胞が産生し、肥満細胞顆粒中に存在するキモトリプシン様セリンプロテアーゼである。この酵素は，アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）と同様、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンIIへ変換するアンジオテンシンII産生酵素である。アンジオテンシンIIは、血管収縮作用を有し、高血圧の主要な因子であることが知られている。そのため、キマーゼ活性を阻害することにより高血圧及び／又は高血圧性臓器障害を予防、改善することについての提案がある（特許文献１）。特許文献１には、キマーゼ阻害作用を有する特定の化合物を有効成分とするキマーゼ阻害剤が開示されている。
また、キマーゼは、高血圧のみならず、種々の病態組織で酵素的機能を発揮すると考えられている。例えば、アトピー性皮膚炎では、皮膚下層の真皮に存在する肥満細胞がキマーゼを産生し、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンIIへ変換することにより炎症が起こる。このような皮膚の炎症の対策として、キマーゼ活性阻害を介したアトピー性皮膚炎薬が開発されている（特許文献２、特許文献３）。
なお、ＡＣＥもアンジオテンシンII変換酵素であり、ＡＣＥ阻害剤を含有する機能性表示食品や特定保健用食品が既に存在している。しかし、ＡＣＥ阻害剤は、非食塩依存性高血圧には効果があるが、食塩依存性高血圧には効果があまりないという問題がある。
このように、塩分過多による高血圧やその他の疾患に有効なサプリメント商品開発のニーズはあったが、有効なサプリメント等の組成物は未だ報告がないのが現状である。

ＷＯ２０１５／０２５８１６Ａ１号公報 特開２０１２−１２１８９８号公報 再表２００６／０５９８０１号公報

本発明者らは、高血圧の対策について発想の転換を行い、体内に入る塩分量の排出を目的とするのではなく、摂取塩分量を減少させずに、体内に入った塩が誘発する高血圧や各種疾患を予防、治療、改善することを目的として、キマーゼ活性阻害作用を利用したサプリメントや健康食品等の組成物の研究を行うこととした。
すなわち、本発明は、キマーゼ活性阻害作用を有する成分を含有し、副作用の心配もない、高血圧及び炎症等の各種疾患に有効な組成物を提供することを課題とする。

その課題の解決のために、キマーゼ活性阻害作用を有する成分を有効成分とする組成物を開発するべく、種々の物質について検索・研究を重ねたところ、フェノール類がキマーゼ活性阻害作用を有することを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、以下のキマーゼ阻害用組成物を提供するものである。
（１） フェノール類を有効成分として含有するキマーゼ阻害用組成物。
（２） フェノール類を０．００１〜１００質量％含有する前記（１）記載のキマーゼ阻害用組成物。
（３） フェノール類が、セサモールである前記（１）または（２）に記載のキマーゼ阻害用組成物。
（４） フェノール類を有効成分とし、キマーゼに由来する気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、鼻炎、関節リウマチ、マストサイトーシス、強皮症、心不全、心肥大、うっ血性心疾患、高血圧、アテローム性動脈硬化、心筋虚血、心筋梗塞、経皮的冠動脈形成術後再狭窄、バイパスグラフト術後再狭窄、虚血性末梢循環障害、高アルドステロン症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎炎、腎炎、糸球体硬化症、腎不全、乾癬、固形腫瘍、手術後癒着、緑内障及び高眼圧症から選択される疾患の予防・治療用組成物。

本発明によれば、減塩をせずに食事の楽しみを維持しつつ、高血圧の予防や治療に有効なキマーゼ阻害用組成物が得られる。また、本発明のキマーゼ阻害用組成物は、高血圧以外のキマーゼに由来するいずれの疾患にも有効であるが、特に、上記の各種疾患に有効である。また、本発明のキマーゼ阻害用組成物は、フェノール類、特にセサモールを有効成分とするものであり、副作用の心配もなく安全性が高い。

試験例１におけるセサモールのキマーゼ活性阻害率を示すグラフである。

以下、本発明について、例を挙げながら詳しく説明する。
本発明のキマーゼ阻害用組成物の有効成分はキマーゼ活性を阻害する作用を有するフェノール類である。フェノール類としては、特に限定されないが、セサモールが好ましい例として挙げられる。セサモールは、ゴマに含まれるリグニンであるセサモリンの加水分解により生成され、強い抗酸化作用を有することで知られる。セサモールはゴマ油に含まれる安全性の高い物質であり、摂取による副作用の心配もない。
本発明のキマーゼ阻害用組成物は、有効成分であるフェノール類を１種または２種以上含有することができる。

本発明のキマーゼ活性阻害用組成物は、フェノール類を０．００１〜１００質量％含有することが好ましい。すなわち、フェノール類のみを本発明の組成物の唯一の成分とすることもできるが、組成物に含まれる各種成分のうちの１成分として用いることもできる。

本発明のキマーゼ阻害用組成物は、キマーゼの酵素作用によるアンジオテンシンＩのアンジオテンシンIIへの変換によりもたらされる疾患の予防や治療に有効である。このような疾患としては、高血圧が挙げられるが、高血圧のみならず、気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、鼻炎、関節リウマチ、マストサイトーシス、強皮症、心不全、心肥大、うっ血性心疾患、アテローム性動脈硬化、心筋虚血、心筋梗塞、経皮的冠動脈形成術後再狭窄、バイパスグラフト術後再狭窄、虚血性末梢循環障害、高アルドステロン症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎炎、腎炎、糸球体硬化症、腎不全、乾癬、固形腫瘍、手術後癒着、緑内障及び高眼圧症などの各種疾患に対して有効である。
なお、本発明のキマーゼ阻害用組成物は、特に、食塩の過剰摂取に起因する食塩依存性高血圧に有効である。
また、本明細書における「高血圧」は一過性の高血圧のみならず、高血圧の状態が持続した高血圧症も含む。

本発明におけるキマーゼ阻害用組成物は、サプリメント、健康食品、医薬品等の種々の形態として用いることができる。
本発明のキマーゼ阻害用組成物は、フェノール類だけでなく、キマーゼ活性阻害作用を有するその他の有効成分を含有することもできる。キマーゼ活性阻害作用を有するその他の有効成分としては、ＡＣＥ阻害剤や既知の成分等いずれを用いてもよい。特に、本発明のキマーゼ阻害用組成物は、フェノール類とともにＡＣＥ阻害剤を有効成分とすることにより、さらに優れた効果を得ることができ、食塩依存性高血圧にも非食塩依存性高血圧にも有効なものとなる。
また、本発明の組成物は、サプリメント、健康食品、医薬品等において通常用いられる各種の機能成分や有効成分等を含有してもよく、それらの種類や配合量は限定されない。
本発明のキマーゼ阻害用組成物の投与経路は、経口投与としても非経口投与としてもよい。経口投与とする場合は、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、ゼリー剤、錠剤、半固形剤等のいかなる形態としてもよい。本発明のキマーゼ阻害用組成物は、有効成分のみを用いて製造してもよいが、通常用いられる添加剤を添加して製造することもできる。添加剤としては、任意の賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、香料等が挙げられる。なお、錠剤とする場合に用いるコーティング剤は、キマーゼ活性阻害剤の放出を制御するために腸溶性コーティング剤や徐放化コーティング剤等を用いることもできる。なお、これらの添加剤の種類やそれらの配合量は限定されない。

本発明のキマーゼ阻害組成物の製造方法は特に限定されず、各形態の製造において慣用されている方法を用いることができる。

以下、実施例、試験例等を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらは単なる例示であり、本発明を限定するものではない。

（試験例１：キマーゼ活性阻害作用の測定）
本試験例においては、セサモールのキマーゼ活性阻害作用を調べた。
（方法）
試験は、キマーゼ活性アッセイキット（シグマ−アルドリッチ社製）を用いて行った。酵素、基質、アッセイバッファ等は、同キットに含まれているものを使用し、測定は同キットの測定手順に従って行った。
・酵素
キマーゼ（Chymase）
・基質Ａ（Substrate A）
Ｎ-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe p-nitroanilide

（事前準備）
下記表１に示すＡとＢはブランク、ＣとＤはサンプルを用いたものである。ＡとＣにはキマーゼを添加し、ＢとＤにはキマーゼを添加しなかった。

最初に、測定キットとサンプルを常温で溶解させた。
サンプルは、セサモール（和光純薬工業社製）及び比較例としてのチロソール（シグマ社製）を用いた。
プレートリーダーの設定（キマーゼ：３７℃、吸光度：４０５ｎｍ、２０秒間隔１０分間）を行った。インキュベータは３７℃に設定した。
Ａ〜Ｄに、それぞれ、基質Ａと、アッセイバッファを添加し、混合した（基質Ａ：３μＬ＋アッセイバッファ：１１μＬ）。
Ｃ、Ｄに、それぞれ、サンプルとアッセイバッファを添加し、混合した（サンプル：１μＬ＋アッセイバッファ：１１μＬ）。
Ａ、Ｃに、それぞれ、キマーゼとアッセイバッファを添加し、混合した（キマーゼ：０．３μＬ＋バッファ：１１μＬ）
測定前に、Ａ〜Ｄをクラッシュアイスで冷やしておいた。

（測定）
測定の手順は下記の通りとした。
１．Ａに６３．７μＬ、Ｂに６４μＬ、Ｃに６２．７μＬ、Ｄに６３μＬの純水を添加した。
２．Ａ〜Ｄに、それぞれ、基質Ａ３μＬとアッセイバッファ１１μＬ（合計１４μＬ）を添加した。
３．Ａ、Ｂに、それぞれ、アッセイバッファ１１μＬを添加した。
４．Ｃ、Ｄに、それぞれ、サンプル１μＬとアッセイバッファ１１μＬ（合計１２μＬ）を添加した。
５．Ａ〜Ｄをそれぞれ３７℃で１〜２分間インキュベートした。
６．Ｂ、Ｄに、それぞれ、アッセイバッファ１１μＬを添加した。
７．Ａ、Ｃに、それぞれ、キマーゼ０．３μＬとバッファ１１μＬ（合計１１．３μＬ）を添加した。この添加のタイミングはプレートリーダーで読み込む３秒前とした。
８．吸光度４０５ｎｍとして、プレートリーダーでＡ〜Ｄの測定を行った。
９．キマーゼ活性阻害率を、下記式に従って算出した。
キマーゼ活性阻害率＝（（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ））／（Ａ−Ｂ）×１００

（結果）
上記式に従い、セサモール及びチロソールの最終濃度を８ｍＭとしてキマーゼ活性阻害率を算出した。セサモールの結果は８４．２％であり、チロソールの結果は１５％であった。結果を図１に示す。
これにより、セサモールは優れたキマーゼ活性阻害作用を有することが明らかとなった。これに対して、チロソールにはキマーゼ活性阻害作用があまり認められなかった。

（実施例１）
セサモール（岩井の胡麻油社製）４０００ｇ、粉末還元麦芽糖水飴３５１ｇ及び結晶セルロース２４０．８ｇを流動層造粒機（ＦＤ−５Ｓ：パウレック社製）にて、６％ヒドロキシプロピルセルロース水溶液２７００ｇを噴霧することにより、流動層造粒した。
流動層造粒後、給気温度７０℃で、排気温度４８℃まで乾燥を行い、造粒末を得た。その後、整粒機（パワーミル：昭和化学機械社製）にて整粒し、整粒末を得た。得られた整粒末３３１８ｇ、パントテン酸カルシウム１８４．８ｇ、結晶セルロース３４５．２ｇ、低置換度ヒドロキシプルピルセルロース２４０ｇ、特殊ケイ酸カルシウム（フローライトＲＥ：エーザイフード・ケミカル社製）２４ｇ及びステアリン酸マグネシウム４８ｇを混合機（タンブラー混合機：昭和化学機械社製）にて混合し、得られた混合末をハードカプセル充填機に充填してハードカプセル剤（350ｍｇ）を得た。

（実施例２）
セサモール（岩井の胡麻油社製）４０００ｇ、粉末還元麦芽糖水飴３５１ｇ及び結晶セルロース２４０．８ｇを流動層造粒機（ＦＤ−５Ｓ：パウレック社製）にて、６％ヒドロキシプロピルセルロース水溶液２７００ｇを噴霧することにより、流動層造粒した。
流動層造粒後、給気温度７０℃で、排気温度４８℃まで乾燥を行い、造粒末を得た。その後、整粒機（パワーミル：昭和化学機械社製）にて整粒し、整粒末を得た。得られた整粒末３３１８ｇ、パントテン酸カルシウム１８４．８ｇ、結晶セルロース３４５．２ｇ、低置換度ヒドロキシプルピルセルロース２４０ｇ、特殊ケイ酸カルシウム（フローライトＲＥ：エーザイフード・ケミカル社製）２４ｇ及びステアリン酸マグネシウム４８ｇを混合機（タンブラー混合機：昭和化学機械社製）にて混合し、得られた混合末をロータリー式打錠機で直径８．８ｍｍの臼、曲率半径７．０ｍｍのＲ面杵にて、１錠当たりの重量３００ｍｇ、厚み５．２ｍｍとなるように製錠し、素錠を得た。

本発明のキマーゼ阻害用組成物は、フェノール類、特にセサモールを成分とし、キマーゼ活性に起因する高血圧や各種疾患を抑制できるため、それらの疾患の予防・治療・改善用の安全なサプリメント、健康食品、医薬品等として、広い利用が期待される。

Claims (2)

1. セサモールを有効成分として含有するキマーゼ阻害用組成物（高血圧及びアトピー性皮膚炎に対する用途を除く）。
2. セサモールを０．００１〜１００質量％含有する請求項１記載のキマーゼ阻害用組成物（高血圧及びアトピー性皮膚炎に対する用途を除く）。