JP6789214B2

JP6789214B2 - 血管弛緩作用を有する酵母エキス

Info

Publication number: JP6789214B2
Application number: JP2017521885A
Authority: JP
Inventors: 知美佐伯; 允人大前; 和弘濱澤
Original assignee: Mitsubishi Corp Life Sciences Ltd
Current assignee: Mitsubishi Corp Life Sciences Ltd
Priority date: 2015-05-29
Filing date: 2016-05-26
Publication date: 2020-11-25
Anticipated expiration: 2036-05-26
Also published as: JPWO2016194778A1; TW201701890A; KR20180012755A; CN107613996A; WO2016194778A1

Description

本発明はトルラ酵母由来の水性溶媒抽出物を有効成分として含有し、血管弛緩作用に優れた食品組成物および医薬組成物を提供するものである。

高血圧症は自覚症状に乏しく、気づかないうちに進行するため、他の臓器にも悪影響を及ぼし、合併症として様々な血管性疾患を併発することがある。合併症の主なものとしては、狭心症、心筋梗塞、脳梗塞、腎機能の低下、解離性大動脈瘤などが挙げられる。これらの中には、進行すると重篤で致命的なものもある。

高血圧症の治療方法としては、生活習慣の改善と薬物治療とがある。生活習慣の改善としては一般的に、食事コントロール、減量、アルコールの制御、適度な運動、禁煙などが挙げられる。これらは、薬物を使用しないために副作用の懸念や経済的負担が少ないという点が利点であるが、食塩制限のような食事コントロールや減量は、症状改善に至るまでに長期間を要し、患者の負担となることもある。

一方、薬物療法としては、対象者の血圧の程度や合併症の有無により適切な薬剤が選択され、利尿剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウム拮抗剤、交感神経遮断薬などが挙げられる。これら医薬品は、主として医療機関において重傷な高血圧患者に使用されるものであり有効性は高いが、長期にわたり服用しなければならず、自己判断での服用や中止が出来ない。さらに、少なからず副作用がある、といった課題が存在した。

そこで、高血圧患者、高血圧予備軍が高血圧症の予防、改善のために副作用が少なく、安全で継続的に実施可能な方法が求められており、これまでに数多くの健康食品が開発されている。例えば、わかめペプチド（特許文献１）、杜仲葉配糖体（特許文献２）、鰹節ペプチド（特許文献３）、ラクトトリペプチド（特許文献４）、サーデンペプチド（特許文献５）、γ―アミノ酪酸配合食品などが知られていた。

特開２００２−１３８１００号公報特開２００８−１０６００８号公報特開２０１４−５２４３号公報特開平１１−９８９７８号公報特開２００６−５６８０５号公報

高血圧患者、高血圧予備軍に対して副作用が少なく、安全、安価であり、食品分野や医薬品分野にて有用な食物由来の血管弛緩剤を提供することである。

本発明では、ラットから摘出した胸部大動脈血管における血管弛緩作用を確認したところ、酵母を熱水処理、酸又はアルカリ処理、酵素処理するという簡単な操作により得られる酵母エキスが、血管弛緩作用を有することを見出した。具体的な本願発明は、グルタチオン含量が１５質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．１質量％以上の酵母エキスを有効成分として含有する血管弛緩作用剤及び血管弛緩作用を有する血管弛緩作用用酵母エキス、さらに好ましいものとして、グルタチオン含量１５質量％以上、アデニン含量０．１質量％以上、アデノシン含量０．１質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．２質量％以上の酵母エキスを有効成分として含有するものである。

本発明の血管弛緩剤は、食品として知られている酵母から抽出されるエキスであるため、比較的容易かつ安価に生産できる上、高血圧患者、高血圧予備軍が高血圧症の予防、改善のために、食品として安全に長期継続的に摂取することが可能である。

本発明の酵母エキスの製造に用いられる酵母は、一般的に用いられている酵母であれば使用することができる。具体的には、パン酵母、ビール酵母、トルラ酵母などを挙げることができる。この中でも、特にトルラ酵母（Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ）が望ましい。
本発明に用いた酵母エキスは、グルタチオン含量１５質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．１質量％以上の酵母エキスである。さらには、グルタチオン含量１５質量％以上、アデニン含量０．１質量％以上、アデノシン含量０．１質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．２質量％以上の酵母エキスがより望ましい。

このような酵母エキスは、グルタチオンを含有する酵母菌体から酵母エキスを抽出することで、グルタチオンを１５質量％以上含有する酵母エキスが得られる。酵母の培養形式に特に制限はないが、一般にバッチ培養、あるいは連続培養のいずれかが用いられる。培地も一般に使用されているものが使用できる。例えば、炭素源としてブドウ糖、酢酸、エタノール、グリセロール、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩等が使用される。リン酸、カリウム、マグネシウム源としては例えば過リン酸石灰、リン酸アンモニウム、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等が使用でき、その他亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩を添加する。その他、ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等を添加したり、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトンなどの有機物を添加したりしてもよい。培養温度は２１〜３７℃、好ましくは２５〜３４℃で、ｐＨは３．０〜８．０、特に３．５〜７．０が好ましい。

酵母菌体培養後に本発明の酵母エキスの抽出を行う。酵母エキスの抽出法は、特に制限がないが、一般的に、自己消化法、熱水抽出法、酵素抽出法、酸若しくはアルカリ抽出法、又はこれらの組み合わせにより行うことが可能である。

自己消化により酵母エキスを抽出する場合は、例えば５５℃で４時間撹拌する。酵素抽出法であれば、細胞壁溶解酵素又はプロテアーゼ等で撹拌抽出する。酸抽出法であれば、硫酸等で酸性に調整後、抽出する。アルカリ抽出法であれば、アルカリに調整後、抽出する。又は、自己消化後に、酵素抽出をするなどの組み合わせも可能である。

酵母エキス抽出後は遠心分離で酵母残残渣を分離し、濃縮後、凍結乾燥又は熱風乾燥することでグルタチオン含有酵母エキスを得ることができる。酵母エキス中に含まれるグルタチオンは、還元型グルタチオンのことを指す。

本発明の酵母エキスは、酵母エキス中にグルタチオンを１５質量％以上含有するものである。酵母エキス中のグルタチオン含量が１５％以上になるようにするには、培養酵母中のグルタチオン含量ができるだけ高いものを用い、その酵母菌体から、前述の抽出法により酵母エキスを抽出するほうが効率良い。酵母中のグルタチオン含量を高める方法としては、公知の方法でよい。例えば、培地中に亜鉛イオンを添加する方法（特開２０００−２７９１６４号公報）、カドミウム耐性、マクロライド系抗生物質耐性を指標としたグルタチオン高含有酵母株の取得方法（特開２００６−４２６３７号公報、特開２００６−４２６３８号公報）がある。特開２０１１−１０３７８９号公報のように変異酵母菌体から抽出することでも得ることができる。また、一般に販売されている酵母エキスであれば、例えば、興人ライフサイエンス社製の「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５などがある。

本願発明のグルタチオン濃度の測定方法は、ＤＴＮＢ−ＨＰＬＣ法（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９４（１９８０）４２４−４２８）で行った。なお、本願のグルタチオン含量は、還元型グルタチオン含量のことをいう。

アデニン、アデノシン、メチルチオアデノシン濃度は、下記の測定方法・条件によって定量を行うことが出来る。すなわち、試料２０ｍｇを０．１ｗ／ｗ％ギ酸溶液で１００ｍＬにメスアップし、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により分析する。アデニン、アデノシン、メチルチオアデノシン（いずれもフリー）の各試薬を標品として同じ条件でＬＣ−ＭＳ／ＭＳにかけ、そのピーク面積により検量線を作製し、試料中のアデニン、アデノシン、メチルチオアデノシンの含量を算出する。
分析条件は以下のように設定することが出来る。
＜ＬＣ条件＞
・カラム：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−３（２．１ｍｍ×１５０ｍｍ）
・移動相：Ａ；０．１ｗ／ｗ％ギ酸、Ｂ；０．１ｗ／ｗ％ギ酸／アセトニトリル、Ａ→Ｂ；２０ｍｉｎリニアグラジエント
・流量：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
・カラム温度：４５℃
＜ＭＳ／ＭＳ条件＞
・測定機器：ａｍａｚｏｎ（Ｂｒｕｋｅｒｄａｌｔｏｎｉｃｓ社）
・イオン化法：ＥＳＩ−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ
・モニターイオン：アデニン；ｍ／ｚ１３６→１３６、アデノシン；ｍ／ｚ２６８→１３６、メチルチオアデノシン；ｍ／ｚ２９８→１３６

本発明において、酵母エキスは、グルタチオン含量１５質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．１質量％以上の酵母エキスを使用する。さらには、グルタチオン含量１５質量％以上、アデニン含量０．１質量％以上、アデノシン含量０．１質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．２質量％以上含有する物を使用することが好ましい。この含量であれば、使用する酵母エキスに制限はなく、例えば二種以上の酵母エキスを混合して、グルタチオン含量１５質量％以上、メチルチオアデノシン含量０．１質量％以上の酵母エキスとしたものでもよい。より好ましい酵母エキス中の含量は、グルタチオンを１５質量％以上、アデニンを０．１質量％以上、アデノシンを０．１質量％以上、メチルチオアデノシンを０．２質量％以上になるように調整などした酵母エキスである。

本発明の血管弛緩剤の有効成分は、酵母エキスであるため、酵母エキスをそのまま血管弛緩剤として摂取することもでき、また他の素材との混合物にして摂取してもよい。

本発明の血管弛緩剤は、上記の酵母エキスを有効成分として含むものであり、食料品、飲料品、嗜好品、サプリメント、医薬品等として、経口摂取するものを指す。その形態は特に限定されるものではない。また、サプリメントや医薬品としての形態も特に限定されるものではなく、錠剤、カプセル、ソフトカプセル、栄養ドリンク状の形態をとることもできる。

飲食品における上記組成物の配合量は血管弛緩作用を有する限り特に限定されるものではなく、例えば本発明の酵母エキスが飲食品の質量１００ｇに対して１０μｇ〜２０ｇ含まれていればよい。中でも１００μｇ〜２ｇが好適であり、１ｍｇ〜１ｇはさらに好適である。

医薬品における組成物の配合量は特に限定されるものではなく、例えば本発明の酵母エキスが組成物の質量１００ｇに対し１０μｇ〜２０ｇ含まれていればよい。中でも１００μｇ〜２ｇが好適であり、１ｍｇ〜１ｇは更に好適である。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

（実施例１）
１．血管張力測定方法
ａ．試薬・材料
・ラット：雄性ＳＤラット（８〜１１ｗｅｅｋｓ）
・バッファー：ＰＳＳ（ｐＨ７．４）［ＮａＣｌ１４５，ＫＣｌ５，Ｎａ_２ＨＰＯ_４１，ＣａＣｌ_２２．５，ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ０．５，Ｇｌｕｃｏｓｅ１０，ＨＥＰＥＳ５（ｍＭ）］
・収縮刺激剤：１．０ μＭフェニレフリン（ＰＥ）
ｂ．調製
・ＰＥ：１０ μＭとなるようにＰＳＳに溶解した。
・「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５：調製した１０ μＭＰＥに溶解した。用いた「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５は、グルタチオン含量が１９．０質量％、アデニン含量が０．２質量％、アデノシン含量が０．１質量％、メチルチオアデノシン含量が０．４質量％であった。

ｃ．測定手順
ラット胸部大動脈血管を摘出後、３７℃のＰＳＳ中で混合ガス（９５％Ｏ_２，５％ＣＯ_２）によりバブリングしながら４５分間平衡化した。その後、脂肪組織を除去し、２〜３ｍｍに切断したものを血管リング標本とした。４．５ｍＬのＰＳＳを満たしたＯｒｇａｎＢａｔｈ中のフック対に血管リング標本をマウントし、２ｇの負荷をかけて４５分間平衡化した。なお、平衡化中は１５分ごとにバブリング処理したＰＳＳでＯｒｇａｎＢａｔｈ中の溶液を交換した。平衡化後、１０ μＭＰＥを０．５ｍＬ（終濃度：１ μＭ）添加し、血管を収縮させた。収縮後の張力が安定した後、ＯｒｇａｎＢａｔｈ中の溶液を「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５溶液と一定量ずつ等量置換することにより、張力変化測定を開始した。結果を図１に示す。血管弛緩率は、１ μＭＰＥ添加後の張力増加量（ΔＴ_Ｃ）を１００としたときの「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５溶液添加後の張力減少量（ΔＴ_Ｓ）の割合として、以下の式により算出した。
血管弛緩率（％）＝ΔＴ_Ｓ／ΔＴ_Ｃ×１００
「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５の濃度と血管弛緩率との関係を図２に示す。

２．血管張力測定結果
酵母エキス「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５に、濃度依存的に血管弛緩作用が認められた（図１および図２）。また、１．０ μＭＰＥの作用を５０％阻害する濃度であるＥＣ_５０値として７．１６±５．４８ｍｇ／ｍＬが得られた。すなわち、血管弛緩作用を有する酵母エキスを得ることが出来た。なお、ポジティブコントロールとして同様に評価した血管弛緩薬剤ヴェラパミルについても血管弛緩作用が認められた（図３および図４）。ＥＣ_５０値は１．６６±０．７４ μｇ／ｍＬであった。

（比較例１）
実施例１の酵母エキスとして「ハイチオンキス」ＹＨ−１５の代わりに「ヌクレアミン」（興人ライフサイエンス株式会社製）を用いた以外は、実施例１と同様に試験を行った。なお、酵母エキス「ヌクレアミン」は、グルタチオン含量が０．８質量％、アデニン含量が０．１質量％、アデノシン含量が０．６質量％、メチルチオアデノシン含量が０．２質量％であった。「ヌクレアミン」による血管弛緩作用を評価したところ、血管弛緩作用は認められなかった。

（比較例２）
実施例１の酵母エキスとして「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５の代わりに「アロマイルドＧ」（興人ライフサイエンス株式会社製）を用いた以外は、実施例１と同様に試験を行った。なお、酵母エキス「アロマイルドＧ」は、グルタチオン含量が０．１質量％、アデニン含量が０．１％、アデノシン含量が０．２％、メチルチオアデノシンは未検出であった。「アロマイルドＧ」による血管弛緩作用を評価したところ、血管弛緩作用は認められなかった。

本発明の酵母エキスは、大動脈弛緩作用を有すること、さらに発明者らの鋭意研究の結果、本酵母エキスのうちＯＤＳカラムに吸着した分子量５００以下の低分子画分に強い作用があることがわかった。血管平滑筋の緊張性と血管障害性の疾患（例えば、血管萎縮、高血圧、動脈硬化症など）または状態との関係はよく知られており、血管弛緩作用を有する薬剤は、高血圧症、心不全、狭心症、虚血性心疾患もしくは心筋梗塞の治療・予防に有効とされていることから本発明の酵母エキスにおいてもこれらの疾患または状態に対して有効であると考えられる。

「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５添加時の血管張力クロマトグラム「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５添加時の血管弛緩率（％）ヴェラパミル添加時の血管張力クロマトグラムヴェラパミル添加時の血管弛緩率（％）

Claims

酵母エキスを有効成分として含有する血管弛緩剤であって、
グルタチオン含量が１５質量％以上、メチルチオアデノシン含量が０．１質量％以上の酵母エキスを有効成分として含有する、血管弛緩剤。
血管弛緩剤用酵母エキスであって、
グルタチオン含量が１５質量％以上、メチルチオアデノシン含量が０．１質量％以上の血管弛緩剤用酵母エキス。
前記酵母がキャンディダ・ユティリス又はサッカロマイセス・セレビシエである、請求項２記載の血管弛緩用酵母エキス。