JP6786722B2 - プログラム化された細胞死蛋白質(pd−1)に対する新規抗体及びその用途 - Google Patents
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Description
配列番号31〜配列番号56で構成された群から選ばれる重鎖CDR2、及び
配列番号57〜配列番号79で構成された群から選ばれる重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに
配列番号198〜配列番号222で構成された群から選ばれる軽鎖CDR1、
配列番号223〜配列番号241で構成された群から選ばれる軽鎖CDR2、及び
配列番号242〜配列番号269で構成された群から選ばれる軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号59の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号60の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号61の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号62の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号3の重鎖CDR1、配列番号34の重鎖CDR2、及び配列番号63の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号4の重鎖CDR1、配列番号35の重鎖CDR2、及び配列番号64の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号5の重鎖CDR1、配列番号36の重鎖CDR2、及び配列番号65の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号6の重鎖CDR1、配列番号37の重鎖CDR2、及び配列番号66の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号67の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号7の重鎖CDR1、配列番号38の重鎖CDR2、及び配列番号68の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号8の重鎖CDR1、配列番号39の重鎖CDR2、及び配列番号69の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号9の重鎖CDR1、配列番号40の重鎖CDR2、及び配列番号70の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号10の重鎖CDR1、配列番号41の重鎖CDR2、及び配列番号71の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号11の重鎖CDR1、配列番号42の重鎖CDR2、及び配列番号72の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号12の重鎖CDR1、配列番号43の重鎖CDR2、及び配列番号73の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号13の重鎖CDR1、配列番号44の重鎖CDR2、及び配列番号74の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号14の重鎖CDR1、配列番号45の重鎖CDR2、及び配列番号75の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号15の重鎖CDR1、配列番号46の重鎖CDR2、及び配列番号76の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号8の重鎖CDR1、配列番号47の重鎖CDR2、及び配列番号77の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号16の重鎖CDR1、配列番号48の重鎖CDR2、及び配列番号78の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号17の重鎖CDR1、配列番号49の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号18の重鎖CDR1、配列番号50の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号19の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号20の重鎖CDR1、配列番号52の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号21の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号22の重鎖CDR1、配列番号53の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号23の重鎖CDR1、配列番号49の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号17の重鎖CDR1、配列番号54の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号24の重鎖CDR1、配列番号55の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号21の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号25の重鎖CDR1、配列番号56の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号26の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号27の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号28の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号29の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号30の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号79の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、又は
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域を含むことができる。
配列番号199の軽鎖CDR1、配列番号224の軽鎖CDR2、及び配列番号243の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号200の軽鎖CDR1、配列番号225の軽鎖CDR2、及び配列番号244の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号201の軽鎖CDR1、配列番号226の軽鎖CDR2、及び配列番号245の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号202の軽鎖CDR1、配列番号227の軽鎖CDR2、及び配列番号246の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号203の軽鎖CDR1、配列番号228の軽鎖CDR2、及び配列番号247の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号204の軽鎖CDR1、配列番号229の軽鎖CDR2、及び配列番号248の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号206の軽鎖CDR1、配列番号231の軽鎖CDR2、及び配列番号250の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号207の軽鎖CDR1、配列番号232の軽鎖CDR2、及び配列番号251の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号208の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号209の軽鎖CDR1、配列番号233の軽鎖CDR2、及び配列番号253の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号210の軽鎖CDR1、配列番号234の軽鎖CDR2、及び配列番号254の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号211の軽鎖CDR1、配列番号235の軽鎖CDR2、及び配列番号255の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号212の軽鎖CDR1、配列番号236の軽鎖CDR2、及び配列番号256の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号213の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号257の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号214の軽鎖CDR1、配列番号237の軽鎖CDR2、及び配列番号258の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号211の軽鎖CDR1、配列番号238の軽鎖CDR2、及び配列番号259の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号216の軽鎖CDR1、配列番号238の軽鎖CDR2、及び配列番号260の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号217の軽鎖CDR1、配列番号239の軽鎖CDR2、及び配列番号261の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号218の軽鎖CDR1、配列番号240の軽鎖CDR2、及び配列番号262の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号219の軽鎖CDR1、配列番号241の軽鎖CDR2、及び配列番号263の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号264の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号265の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号221の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号266の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号257の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号222の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号268の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、又は
配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号269の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号62の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号201の軽鎖CDR1、配列番号226の軽鎖CDR2、及び配列番号245の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号3の重鎖CDR1、配列番号34の重鎖CDR2、及び配列番号63の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号202の軽鎖CDR1、配列番号227の軽鎖CDR2、及び配列番号246の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号4の重鎖CDR1、配列番号35の重鎖CDR2、及び配列番号64の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号203の軽鎖CDR1、配列番号228の軽鎖CDR2、及び配列番号247の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号5の重鎖CDR1、配列番号36の重鎖CDR2、及び配列番号65の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号204の軽鎖CDR1、配列番号229の軽鎖CDR2、及び配列番号248の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号6の重鎖CDR1、配列番号37の重鎖CDR2、及び配列番号66の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号206の軽鎖CDR1、配列番号231の軽鎖CDR2、及び配列番号250の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号67の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号207の軽鎖CDR1、配列番号232の軽鎖CDR2、及び配列番号251の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号208の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号7の重鎖CDR1、配列番号38の重鎖CDR2、及び配列番号68の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号209の軽鎖CDR1、配列番号233の軽鎖CDR2、及び配列番号253の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号8の重鎖CDR1、配列番号39の重鎖CDR2、及び配列番号69の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号210の軽鎖CDR1、配列番号234の軽鎖CDR2、及び配列番号254の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号11の重鎖CDR1、配列番号42の重鎖CDR2、及び配列番号72の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号213の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号257の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号13の重鎖CDR1、配列番号44の重鎖CDR2、及び配列番号74の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号211の軽鎖CDR1、配列番号238の軽鎖CDR2、及び配列番号259の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号15の重鎖CDR1、配列番号46の重鎖CDR2、及び配列番号76の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号217の軽鎖CDR1、配列番号239の軽鎖CDR2、及び配列番号336の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;又は
配列番号8の重鎖CDR1、配列番号47の重鎖CDR2、及び配列番号77の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号218の軽鎖CDR1、配列番号240の軽鎖CDR2、及び配列番号337の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域。
配列番号17の重鎖CDR1、配列番号49の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号18の重鎖CDR1、配列番号50の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号19の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号218の軽鎖CDR1、配列番号240の軽鎖CDR2、及び配列番号337の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号20の重鎖CDR1、配列番号52の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号264の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号21の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号265の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号22の重鎖CDR1、配列番号53の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号221の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号266の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号23の重鎖CDR1、配列番号49の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号17の重鎖CDR1、配列番号54の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号24の重鎖CDR1、配列番号55の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号21の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号221の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号266の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号25の重鎖CDR1、配列番号56の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号257の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号26の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号27の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号28の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;
配列番号29の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域;又は
配列番号30の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域。
配列番号96〜配列番号113で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR2、
配列番号114〜配列番号134で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR3、又は
配列番号135〜配列番号145で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR4を含むことができる。
配列番号295〜配列番号315で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR2、
配列番号316〜配列番号355で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR3、又は
配列番号356〜配列番号367で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR4を含むことができる。
配列番号152の重鎖可変領域及び配列番号372の軽鎖可変領域;
配列番号153の重鎖可変領域及び配列番号373の軽鎖可変領域;
配列番号154の重鎖可変領域及び配列番号374の軽鎖可変領域;
配列番号155の重鎖可変領域及び配列番号375の軽鎖可変領域;
配列番号156の重鎖可変領域及び配列番号376の軽鎖可変領域;
配列番号157の重鎖可変領域及び配列番号377の軽鎖可変領域;
配列番号158の重鎖可変領域及び配列番号378の軽鎖可変領域;
配列番号159の重鎖可変領域及び配列番号379の軽鎖可変領域;
配列番号160の重鎖可変領域及び配列番号380の軽鎖可変領域;
配列番号163の重鎖可変領域及び配列番号383の軽鎖可変領域;
配列番号165の重鎖可変領域及び配列番号385の軽鎖可変領域;
配列番号166の重鎖可変領域及び配列番号386の軽鎖可変領域;
配列番号168の重鎖可変領域及び配列番号388の軽鎖可変領域;
配列番号169の重鎖可変領域及び配列番号389の軽鎖可変領域;
配列番号171の重鎖可変領域及び配列番号391の軽鎖可変領域;
配列番号172の重鎖可変領域及び配列番号392の軽鎖可変領域;
配列番号173の重鎖可変領域及び配列番号393の軽鎖可変領域;
配列番号174の重鎖可変領域及び配列番号394の軽鎖可変領域;
配列番号175の重鎖可変領域及び配列番号395の軽鎖可変領域;
配列番号176の重鎖可変領域及び配列番号396の軽鎖可変領域;
配列番号177の重鎖可変領域及び配列番号397の軽鎖可変領域;
配列番号178の重鎖可変領域及び配列番号398の軽鎖可変領域;
配列番号179の重鎖可変領域及び配列番号399の軽鎖可変領域;
配列番号180の重鎖可変領域及び配列番号400の軽鎖可変領域;
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号401の軽鎖可変領域;
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号402の軽鎖可変領域;
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号403の軽鎖可変領域;
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号404の軽鎖可変領域;
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号405の軽鎖可変領域;
配列番号182の重鎖可変領域及び配列番号406の軽鎖可変領域;
配列番号182の重鎖可変領域及び配列番号407の軽鎖可変領域;
配列番号182の重鎖可変領域及び配列番号408の軽鎖可変領域;
配列番号182の重鎖可変領域及び配列番号409の軽鎖可変領域;
配列番号183の重鎖可変領域及び配列番号410の軽鎖可変領域;
配列番号184の重鎖可変領域及び配列番号411の軽鎖可変領域;
配列番号185の重鎖可変領域及び配列番号412の軽鎖可変領域;
配列番号186の重鎖可変領域及び配列番号413の軽鎖可変領域;
配列番号187の重鎖可変領域及び配列番号414の軽鎖可変領域;又は
配列番号188の重鎖可変領域及び配列番号415の軽鎖可変領域。
配列番号158の重鎖可変領域及び配列番号378の軽鎖可変領域;
配列番号165の重鎖可変領域及び配列番号385の軽鎖可変領域;
配列番号171の重鎖可変領域及び配列番号391の軽鎖可変領域;
配列番号175の重鎖可変領域及び配列番号395の軽鎖可変領域;
配列番号176の重鎖可変領域及び配列番号396の軽鎖可変領域;
配列番号178の重鎖可変領域及び配列番号398の軽鎖可変領域;
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号401の軽鎖可変領域;又は
配列番号181の重鎖可変領域及び配列番号405の軽鎖可変領域を含むことができる。
1.PD−L1蛋白質発現ベクターの作製
PD−1のクローニングはJurkat細胞cDNAライブラリー(Stratagene、米国)を用いて、細胞外ドメインだけを得るために5’と3’に制限酵素SfiIサイトが含まれたPD1に対するプライマ(表1)を用いて重合酵素連鎖反応(polymerase chain reaction,PCR)によって増幅させた。増幅されたPCR産物はN293Fベクターを用いてカルボキシ−末端にヒトFc(配列番号196)、マウスFc(配列番号197)を融合させて作製した(図1)。
抗原を動物細胞で発現させるために、HEK−293F細胞にプラスミドDNAを形質感染(transfection)させた。形質感染を行うためのポリプレクス(polyplex)反応液は、フリースタイル293発現培地3mlにプラスミドDNAを25μg入れて混ぜた後、さらに2mg/ml PEI(Polyethylenimine)(polyplUSA−形質感染、USA)50μlを入れて再び混ぜた。ポリプレクス反応液は15分間常温で反応させた後、1X106cells/mlに培養された40mlの培養液に入れ、120rpmで37℃、8% CO2で24時間培養した。形質感染24時間後に補強剤(supplement)のSoytone(BD,USA)を最終濃度が10g/Lになるように添加する。7日間HEK−293Fを用いた臨時発現システムを用いて抗体を生産した。培養液から抗原を得るために親和度クロマトグラフィー(affinity chromatography)を行った。7日目に回収した培養液から細胞と細胞残余物(debris)を除去するために5000rpmで10分間遠心分離し、上澄み液を得た。上澄み液をDPBSで洗浄した組換え蛋白質Aアガロースレジンと4℃で16時間反応させた。
1.抗原準備
実施例1で作製したPD1−hFc、PD1−mFc及びSino Biological Inc.から購入したPD1−his(Catalog Number,10377−H08H)蛋白質抗原50ugを免疫吸着(immunosorb)チューブにコーティングした後、ブロッキング(blocking)を行った。
ヒト抗体ライブラリーファージは2.7×1010の多様性を持つヒトscFvライブラリーをバクテリアに感染させた後、バクテリアを30℃で16時間培養した。培養後に遠心分離して上澄み液をPEGで濃縮した後、これをPBS緩衝溶液に溶かしてヒト抗体ライブラリーを準備した。免疫チューブにライブラリーファージを入れて室温で2時間反応させた後、1XPBS/Tと1XPBSで洗浄後、抗原に特異的に結合したscFv−ファージだけを溶出した。
実施例2の各ラウンドのパンニング過程で収得した陽性ポリscFv−ファージ抗体プールに対する抗原との特異性を調べるためにポリファージELISA(enzyme linked immunoassay)を行った。
結合能の大きい多クローンファージ抗体群(3次パンニング)から得たコロニーを2xYTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地に入れた後、1ml 96−深ウェルプレート(パイオニア90030)に37℃で16時間培養した。このように育てた細胞からOD600で値が0.1となるように100〜200ulを取って1mlの2xYTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地に入れた後、96−深ウェルプレートに37℃でOD600でその値が0.5〜0.7となるように2〜3時間培養した。M1ヘルパーファージをMOI値が1:20となるように感染し、2xYTCMK、5mM MgCl2 1mM IPTG培地に30℃で16時間培養した。
前記選別された単一クローンに対してDNA精製キット(Qiagen、ドイツ)を用いてDNA−prepを行ってDNAを得、配列分析を依頼した(ソルジェント社)。配列分析結果から、選別された抗体のVHとVLのCDR部位を確認し、それらの抗体とジャームライン(germ line)抗体群の類似性をNCBIのウェブページhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/のIg BLASTプログラムを用いて調査した。その結果、15種のPD1に特異的なファージ抗体を得た。これを下記表3に整理して提示する。
1.scFv形態をIgG形態に転換(conversion)
選別された15種のPD1に対する単一クローンファージ抗体をファージからIgG全体ベクター(whole vector)に転換するために重鎖と軽鎖に対してPCR(iCycler iQ,BIO−RAD)を行った。その結果、重鎖と軽鎖を得、制限酵素でベクターと各クローンの重鎖、軽鎖を切断した。ベクターと重鎖はそれぞれDNA−gel extraction kit(Qiagen)でDNAを溶出した。ライゲーション(Ligation)はvector 1ul(10ng)重鎖(100〜200ng)15ul、10x Buffer 2ul、ligase(1U/ul)1ul、蒸溜水を混合して室温で1〜2時間放置後、形質転換細胞(competent cell)(XL1−blue)に入れて氷に5分間置き、42℃で90秒間熱衝撃(heat shock)を与えた。
クローニングされたpNATVHとpNATVLベクターは6:4の割合でHEK293F細胞に同時形質感染(co−形質感染)して7日目の上澄み液を回収し、遠心分離と0.22μmTop−フィルターを用いて細胞と浮遊物を除去した後、上澄み液を集めて蛋白質A親和度クロマトグラフィーを行ってIgG抗体を精製した。精製後にグリシンバッファー(glycine buffer)を用いて抗体を分離し、最終再サスペンションバッファー(resuspension buffer)はPBSとなるようにバッファーを交換した。精製された抗体をBCA及びナノドロップ(nano drop)を用いて定量し、15種の抗体を還元、非還元条件で各5ugずつローディングし、SDS−PAGE分析して精製蛋白質の純度及び移動度(mobility)状態を確認した(図5)。
1.抗体の活性評価
選別された抗体の活性評価実験はPD1/PD−L1遮断バイオアッセイキット(promega,J1250)を用いて進行した。PD−L1が高発現しているCHO細胞株を96−ウェルプレートに塗抹し、16時間以上培養後に、一定濃度に連続希釈された各抗体を処理して、ヒトPD−1が高発現するJurkat細胞株を6時間一緒に培養した。抗体の阻害回復程度は、ルシフェラーゼ(luciferase)が基質を分解して生じる発光強度から分かり、分光光度計(SpectraMax M5 spectraphotometer,Molecular Devices、米国)で測定した。対照抗体を含む16種のPD−1抗体は、PD−1/PD−L1複合体形成によって減少していたシグナルを回復させる値から抗体の活性を確認し、41C9、45D6、49A2が対照抗体と類似した活性度を示した(図6)。
PD−1を高発現させる形質転換細胞プールは、ヒトPD−1(NM_005018.2)を含んでいるpcDNA3.1プラスミドをHEK293Eに形質転換させ、150ug/ml Zeocin(#R25001,Thermo Fisher)の入っている選択的培地で選別した。各細胞プールは各anti−PD−1(#557860,BD)を用いたFACS(fluorescence activated cell sorting)分析で確認されて選択され、FACS結合アッセイやFACS競合アッセイのような機能評価法に使用された。
活性度評価及びFACSにおける結合力に優れたものと評価された41C9の他にも45D6及び49A2に対して追加の抗体選別を進行した。
ProteOn XPR36(BioRad)機器で行った。GLCセンサーチップ(BioRad)を機器に装着し、PBST緩衝溶液で洗浄をした後、EDC/sulfo−NHS混合液でカルボキシメチルデキストランの表面を活性化させた。10mM酢酸ナトリウム(sodium acetate)緩衝液(pH5.0)に5ug/ml濃度で溶かしたPD1−hFcを注入してGLCセンサーチップに固定化させた。
1.PD1−45D6、49A2抗体の最適化のためのライブラリーの作製
抗体最適化は、重鎖は固定し、ワイバイオロジックスで保有している105〜106軽鎖(LC)プール(pool)を入れて新しいLCシャフリングライブラリー(LC shuffling library)を作製し、LCシャフリング、重鎖の疎水性コア(hydrophobic core)、露出残基(exposed residue)、電荷クラスター(charge cluster)、塩ブリッジ(salt bridge)などのように構造的に重要な部位の残基と比較分析をして保存された残基(conserved residue)に変異させた後にLCシャフリングを進行するコアパッキング(core packing)+LCシャフリング、抗体可変領域(antibody variable region)のDNAはin vivo親和度成熟(affinity maturation)過程で頻繁に変異(mutation)され得る変異ホットスポット(mutational hot spot)をランダムに変異させた後にLCシャフリングを進行するCDRホットスポット+LCシャフリングなどの3つの方法で進行した。
1.抗原準備
ワイバイオロジックスで生産したPD1−hFc、PD1−mFcとSino Biological Inc.から購入したPD1−his(Catalog Number,10377−H08H)蛋白質抗原50ugを免疫吸着チューブでコーティングした後、ブロッキング(blocking)を行った。
ヒト抗体ライブラリーファージは、2.7×1010の多様性を持つヒトscFvライブラリーをバクテリアに感染させた後、バクテリアを30℃で16時間培養した。培養後に遠心分離して上澄み液をPEGで濃縮した後、これをPBS緩衝溶液に溶かしてヒト抗体ライブラリーを準備した。免疫チューブにライブラリーファージを入れて室温で2時間反応させた後、1XPBS/Tと1XPBSで洗浄後に抗原に特異的に結合したscFv−ファージだけを溶出した。
パンニングから得たコロニーを2xYTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地に入れた後、1ml 96−深ウェルプレート(96−deep well plate:パイオニア90030)に37℃で16時間培養した。このように育てた細胞からOD600で値が0.1となるように100〜200ulを取って1mlの2xYTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地に入れた後、96−深ウェルプレートに37℃でOD600でその値が0.5〜0.7となるように2〜3時間培養した。M1ヘルパーファージをMOI値が1:20となるように感染し、2xYTCMK、5mM MgCl2 1mM IPTG培地に30℃で16時間培養した。
選別された単一クローンに対してDNA精製キット(Qiagen、ドイツ)を用いてDNA−prepを行ってDNAを得、配列分析を依頼した(ソルジェント社)。配列分析結果から、選別された抗体のVHとVLのCDR regionを確認し、それら抗体とジャームライン(germ line)抗体群の類似性をNCBIのウェブページhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/のIg BLASTプログラムを用いて調査し、その結果、25種(49A2:10種、45D6:15種)の親抗体よりも結合力の高い特異的なファージ抗体を得た。これを次表8に整理して提示する。
1.scFv形態をIgG形態に転換(conversion)
選別された25種のPD1に対する単一クローンファージ抗体をファージからIgG全体ベクターに転換するために重鎖と軽鎖に対してPCR(iCycler iQ,BIO−RAD)を行った。その結果、重鎖と軽鎖を得、制限酵素でベクターと各クローンの重鎖、軽鎖を切断した。ベクターと重鎖はそれぞれDNA−ゲル抽出キット(DNA−gel extraction kit:Qiagen)でDNA溶出した。ライゲーション(ligation)はベクター1ul(10ng)重鎖15ul(100〜200ng)、10xバッファー2ul、リガーゼ(1U/ul)1ul、蒸溜水を混合して室温で1〜2時間放置後、形質転換細胞(competent cell:XL1−blue)に入れて氷に5分間置き、42℃で90秒間熱衝撃(heat shock)を与えた。
クローニングされたpNATVHとpNATVLベクターは6:4の割合でHEK293F細胞に同時形質感染(co−形質感染)して7日目の上澄み液を回収し、遠心分離と0.22μmTop−フィルターを用いて細胞と浮遊物を除去した後、上澄み液を集めて蛋白質A親和度クロマトグラフィーを行ってIgG抗体を精製した。精製後にグリシンバッファー(glycine buffer)を用いて抗体を分離し、最終再サスペンションバッファー(resuspension buffer)はPBSとなるようにバッファーを交換した。精製された抗体をBCA及びナノドロップ(nano drop)を用いて定量し、25種の抗体を還元、非−還元条件で各5ugずつローディングし、SDS−PAGE分析して精製蛋白質の純度及び移動度(mobility)状態を確認した。また、上澄み液の一部は親抗体との発現率を比較するためにSDS−PAGEにローディングしたし、大部分の抗体が親抗体に比べて発現率が増加した。その結果は図11から確認できる。
1.抗体の活性評価
選別された抗体の活性評価実験はPD1/PD−L1遮断バイオアッセイキット(blockade bioassay kit:promega,J1250)を用いて進行した。PD−L1が高発現しているCHO細胞株を96−ウェルプレートに塗抹し、16時間以上培養後、一定濃度で連続希釈された各抗体を処理して、ヒトPD−1が高発現するJurkat細胞株を6時間共に培養した。抗体の阻害回復程度は、ルシフェラーゼが基質を分解して生じる発光強度から分かり、分光光度計(SpectraMax M5 spectraphotometer,Molecular Devices、米国)で測定した。24種のPD−1抗体は、PD−1/PD−L1複合体形成によって減少していたシグナルを回復させる値で抗体の活性を確認した。その結果、45D6抗体では45D6−3D2、45D6−3H7、45D6−5B2、45D6−5B5が、49A2抗体では49A2−1B2、49A2−1H8、49A2−2A6、49A2−2B9が親抗体に比べて活性が増加したし、対照抗体と類似した活性度を示した(図12)。
ヒトPD−1を高発現させる形質転換細胞プールはヒトPD−1(NM_005018.2)或いはヒトPD−L1(NM_014143.2)を含んでいるpcDNA3.1プラスミドをHEK293Eに形質転換させ、400ug/ml Zeocin(#R25001,Thermo Fisher)の入っている選択的培地で選別した。各細胞プールはそれぞれanti−PD−1(#557860,BD)を用いたFACs(fluorescence activated cell sorting)分析によって確認されて選択され、FACs結合アッセイやFACs競合アッセイ(Competition assay)のような機能評価法に使用された。ヒトPD1を高発現させる形質転換細胞プールのそれぞれを試料当たり0.5〜1×106の細胞を準備し、抗体をそれぞれ一定の希釈倍数で連続的に希釈して、準備した細胞と4℃で20分間反応させた。その後、細胞は2%ウシ胎児血清(fetal bovine serum)の含まれたPBS(#LB001−02,welgene)で3回洗浄し、FITC(fluorescein isothiocyanate)蛍光物質が結合された抗−ヒトIgG抗体(#FI−3000、Vectorlabs)を用いて4℃で20分間反応後、同じ洗浄過程を経た後に0.5mlの2% FBS(#26140−079,Thermo fisher)の入っているPBSで懸濁させた後、流細胞分析機であるFACSCanto II flow cytometer(BD Biosciences、米国)を用いて分析した。
ヒトPD−1−Fc(S1420,Y−Biologics)或いはPD−L2−Fc(#10292−H02H,Sino)を96−ウェル免疫マイクロプレート(96−well immuno microplate:#439454,Thermo)のウェルに4℃で16時間固定させ、0.05% tween−20(#P9416,Sigma−Aldrich)の入っているPBSで3回洗浄後、4%スキムミルク(#232120,Becton,Dickinson and Company)の含まれた洗浄液で常温に1時間放置することによって非特異的結合を遮断した。その間に一定希釈倍数で連続希釈された各抗体とヒトPD−L1−His(S1479,Y−Biologics)或いはPD−1−His(S1352,Y−Biologics)を常温に1時間反応させた後、準備したマイクロプレートに入れて常温に1時間放置する。同じ洗浄方法を適用した後、anti−Biotin−His抗体(#MA1−21315−BTIN,Thermo)を1:2000に希釈してマイクロプレートのウェルに入れて常温に1時間反応させ、同じ方法で洗浄した後にStreptavidin poly−HRP抗体(#21140、Pierce)を1:5000に希釈してマイクロプレートのウェルに入れて常温に1時間反応させた後、同じ方法で洗浄した。100ul TMB基質溶液(#T0440,Sigma−Aldrich)を入れた後、光を遮断して常温で3分間放置後に50ul 2.5M硫酸(#S1478,Samchun)を入れて反応を中断させ、分光光度計(#GM3000、Glomax(登録商標) Discover System Promega)を用いて450nmで吸光度を測定した。その結果を図16に示した。
ProteOn XPR36(BioRad)機器で行った。GLCセンサーチップ(BioRad)を機器に装着し、PBST緩衝溶液で洗浄した後、EDC/sulfo−NHS混合液でカルボキシメチルデキストランの表面を活性化させた。10mM酢酸ナトリウム(sodium acetate)緩衝液(pH5.0)に5ug/ml濃度で溶かしたPD1−hFcを注入してGLCセンサーチップに固定化させた。
PD1抗原に結合する単一クローンscFv−phageを2xYTCM、2%グルコース(glucose)、5mM MgCl2培地に37℃で16時間培養した。このように育てた細胞をOD600で値が0.1となるように2xYTCM、2%グルコース、5mM MgCl2培地に入れた後、37℃でOD600でその値が0.5〜0.7となるように2〜3時間培養した。M1ヘルパーファージ(helper phage)をMOI値が1:20となるように感染し、2xYTCMK、5mM MgCl2 1mM IPTG培地に30℃で16時間培養した。
PD1親抗体と対照抗体(Nivolumab)に対してPD1抗原以外の多数の抗原(表15)との結合力を調べるために、精製された約90個の不特定抗原を96ウェル免疫−プレートにウェル当たり100ngずつ4℃で16時間コーティングした後、PBSに溶かした4%スキムミルクを用いて各ウェルを遮断(blocking)した。各ウェルごとに0.2ml PBS/Tを使って洗った後、親抗体及び対照抗体を各ウェルに100ngずつ入れて常温で2時間反応させた。さらに、各ウェルごとに0.2ml PBS/Tを使って4回洗った後、二次抗体であるanti−kappa−HRPを1/1000に希釈して室温で1時間反応させた。0.2ml PBS/Tで洗った後に発色して吸光度490nmで測定した。
最適化された抗体を臨時発現システムを用いて生産し、精製時に優れた物性によって比較的均一で且つ高い生産量を有することが分かる。一部の抗体は既存に商用化された抗体よりも高い生産を有することが分かる(図22)。
個別のヒトから分離された単球由来樹状細胞(monocyte derived dendritic cell)にT細胞を1:10の割合で混ぜ、5日培養後に培養液のインターフェロンガンマの量を測定すると、45D6、49A2の親抗体を入れたものにおいて濃度に依存してインターフェロンガンマの量が増加することを確認した(図23)。
抗体蛋白質をDPBSに希釈して3uM、45ulを作り、200x sypro orange dye(#S6650,Thermo)5ulと混ぜてqPCR Tube(#B77009,B57651,bioplastics)に50ulずつ分注する。Biorad CFX96 real time PCR機器を用いてqPCRを実施した。qPCR条件は次のように25℃で30秒間反応後、99℃まで1度ずつ増加させるが、各温度で1分間反応させ、最後の25℃で10秒反応をさせて終えた。抗体構造が解かれる速度定数としてはTm(Melting temperature、溶融温度)を使用した。その結果は次表16の通りである。
本発明は一態様において、以下を提供する。
[項目1]
配列番号1〜配列番号30で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む重鎖CDR1、
配列番号31〜配列番号56で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む重鎖CDR2、及び
配列番号57〜配列番号79で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに
配列番号198〜配列番号222で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む軽鎖CDR1、
配列番号223〜配列番号241で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む軽鎖CDR2、及び
配列番号242〜配列番号269で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域を含む、PD−1に結合する抗体又はその抗原結合断片。
[項目2]
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号59の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号60の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号61の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号2の重鎖CDR1、配列番号33の重鎖CDR2、及び配列番号62の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号3の重鎖CDR1、配列番号34の重鎖CDR2、及び配列番号63の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号4の重鎖CDR1、配列番号35の重鎖CDR2、及び配列番号64の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号5の重鎖CDR1、配列番号36の重鎖CDR2、及び配列番号65の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号6の重鎖CDR1、配列番号37の重鎖CDR2、及び配列番号66の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号67の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号7の重鎖CDR1、配列番号38の重鎖CDR2、及び配列番号68の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号8の重鎖CDR1、配列番号39の重鎖CDR2、及び配列番号69の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号9の重鎖CDR1、配列番号40の重鎖CDR2、及び配列番号70の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号10の重鎖CDR1、配列番号41の重鎖CDR2、及び配列番号71の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号11の重鎖CDR1、配列番号42の重鎖CDR2、及び配列番号72の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号12の重鎖CDR1、配列番号43の重鎖CDR2、及び配列番号73の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号13の重鎖CDR1、配列番号44の重鎖CDR2、及び配列番号74の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号14の重鎖CDR1、配列番号45の重鎖CDR2、及び配列番号75の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号15の重鎖CDR1、配列番号46の重鎖CDR2、及び配列番号76の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号8の重鎖CDR1、配列番号47の重鎖CDR2、及び配列番号77の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号16の重鎖CDR1、配列番号48の重鎖CDR2、及び配列番号78の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号17の重鎖CDR1、配列番号49の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号18の重鎖CDR1、配列番号50の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号19の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号20の重鎖CDR1、配列番号52の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号21の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号22の重鎖CDR1、配列番号53の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号23の重鎖CDR1、配列番号49の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号17の重鎖CDR1、配列番号54の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号24の重鎖CDR1、配列番号55の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号21の重鎖CDR1、配列番号51の重鎖CDR2、及び配列番号58の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号25の重鎖CDR1、配列番号56の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号26の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号27の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号28の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号29の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号30の重鎖CDR1、配列番号31の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号79の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、又は
配列番号1の重鎖CDR1、配列番号32の重鎖CDR2、及び配列番号57の重鎖CDR3を含む重鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
[項目3]
配列番号198の軽鎖CDR1、配列番号223の軽鎖CDR2、及び配列番号242の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号199の軽鎖CDR1、配列番号224の軽鎖CDR2、及び配列番号243の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号200の軽鎖CDR1、配列番号225の軽鎖CDR2、及び配列番号244の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号201の軽鎖CDR1、配列番号226の軽鎖CDR2、及び配列番号245の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号202の軽鎖CDR1、配列番号227の軽鎖CDR2、及び配列番号246の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号203の軽鎖CDR1、配列番号228の軽鎖CDR2、及び配列番号247の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号204の軽鎖CDR1、配列番号229の軽鎖CDR2、及び配列番号248の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号206の軽鎖CDR1、配列番号231の軽鎖CDR2、及び配列番号250の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号207の軽鎖CDR1、配列番号232の軽鎖CDR2、及び配列番号251の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号208の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号209の軽鎖CDR1、配列番号233の軽鎖CDR2、及び配列番号253の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号210の軽鎖CDR1、配列番号234の軽鎖CDR2、及び配列番号254の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号211の軽鎖CDR1、配列番号235の軽鎖CDR2、及び配列番号255の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号212の軽鎖CDR1、配列番号236の軽鎖CDR2、及び配列番号256の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号213の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号257の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号214の軽鎖CDR1、配列番号237の軽鎖CDR2、及び配列番号258の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号249の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号211の軽鎖CDR1、配列番号238の軽鎖CDR2、及び配列番号259の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号216の軽鎖CDR1、配列番号238の軽鎖CDR2、及び配列番号260の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号217の軽鎖CDR1、配列番号239の軽鎖CDR2、及び配列番号261の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号218の軽鎖CDR1、配列番号240の軽鎖CDR2、及び配列番号262の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号219の軽鎖CDR1、配列番号241の軽鎖CDR2、及び配列番号263の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号215の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号264の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号265の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号221の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号266の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号252の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号205の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号257の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号267の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、
配列番号222の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号268の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域、又は
配列番号220の軽鎖CDR1、配列番号230の軽鎖CDR2、及び配列番号269の軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗体又はその抗原結合断片
。
[項目4]
配列番号80〜配列番号95で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR1、
配列番号96〜配列番号113で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR2、
配列番号114〜配列番号134で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR3、又は
配列番号135〜配列番号145で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR4を含む、項目1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
[項目5]
配列番号270〜配列番号294で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR1、
配列番号295〜配列番号315で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR2、
配列番号316〜配列番号355で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR3、又は
配列番号356〜配列番号367で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR4を含む、項目1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
[項目6]
配列番号146〜配列番号193で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
[項目7]
配列番号368〜配列番号420で構成された群から選ばれる配列と90%以上の配列相同性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
[項目8]
項目1〜7のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸。
[項目9]
項目8の核酸を含む発現ベクター。
[項目10]
項目9の発現ベクターで形質転換された細胞。
[項目11]
次の段階を含むPD−1に結合する抗体又はその抗原結合断片の製造方法:
(a)項目10の細胞を培養する段階;及び
(b)前記培養された細胞から抗体又はその抗原結合断片を回収する段階。
[項目12]
項目1〜7のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片を有効成分として含む癌予防又は治療用組成物。
[項目13]
前記癌は黒色腫、肺癌、肝癌、膠細胞腫、卵巣癌、大腸癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎臓細胞癌、胃癌、乳癌、転移癌、前立腺癌及び膵贓癌で構成された群から選ばれることを特徴とする、項目12に記載の癌予防又は治療用組成物。
Claims (11)
- (1)配列番号1の配列を含む重鎖CDR1、配列番号32の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号58の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号205の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号249の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(2)配列番号1の配列を含む重鎖CDR1、配列番号31の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号57の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号208の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号252の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(3)配列番号1の配列を含む重鎖CDR1、配列番号32の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号58の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号215の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号249の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(4)配列番号1の配列を含む重鎖CDR1、配列番号31の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号57の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号205の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号252の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(5)配列番号1の配列を含む重鎖CDR1、配列番号31の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号57の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号220の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号252の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(6)配列番号26の配列を含む重鎖CDR1、配列番号31の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号57の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号220の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号267の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(7)配列番号27の配列を含む重鎖CDR1、配列番号31の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号57の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号205の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号252の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(8)配列番号17の配列を含む重鎖CDR1、配列番号49の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号58の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号220の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号252の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(9)配列番号21の配列を含む重鎖CDR1、配列番号51の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号58の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号221の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号266の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
(10)配列番号22の配列を含む重鎖CDR1、配列番号53の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号58の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号205の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号252の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:または、
(11)配列番号17の配列を含む重鎖CDR1、配列番号54の配列を含む重鎖CDR2、及び配列番号58の配列を含む重鎖CDR3を含む重鎖可変領域、並びに、配列番号205の配列を含む軽鎖CDR1、配列番号230の配列を含む軽鎖CDR2、及び配列番号267の配列を含む軽鎖CDR3を含む軽鎖可変領域:
含む、PD−1に結合する抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号80〜配列番号95で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR1、
配列番号96〜配列番号113で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR2、
配列番号114〜配列番号134で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR3、又は
配列番号135〜配列番号145で構成された群から選ばれる重鎖可変領域FR4を含む、請求項1に記載の抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号270〜配列番号294で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR1、
配列番号295〜配列番号315で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR2、
配列番号316〜配列番号355で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR3、又は
配列番号356〜配列番号367で構成された群から選ばれる軽鎖可変領域FR4を含む、請求項1に記載の抗体又はその抗原結合断片。 - 配列番号146、147、155、181、184、185、171、175、176及び178で構成された群から選ばれる配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
- 配列番号375、378、385、391、395、396、398、401、405、411及び412で構成された群から選ばれる配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1〜5のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸。
- 請求項6の核酸を含む発現ベクター。
- 請求項7の発現ベクターで形質転換された細胞。
- 次の段階を含むPD−1に結合する抗体又はその抗原結合断片の製造方法:
(a)請求項8の細胞を培養する段階;及び
(b)前記培養によって得られた培養液から抗体又はその抗原結合断片を回収する段階。 - 請求項1〜5のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片を有効成分として含む癌予防又は治療用組成物。
- 前記癌は黒色腫、肺癌、肝癌、膠細胞腫、卵巣癌、大腸癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎臓細胞癌、胃癌、乳癌、転移癌、前立腺癌及び膵贓癌で構成された群から選ばれることを特徴とする、請求項10に記載の癌予防又は治療用組成物。
Applications Claiming Priority (5)
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