JP6728463B1 - 湖羊精液凍結保存液及びその用途 - Google Patents
湖羊精液凍結保存液及びその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6728463B1 JP6728463B1 JP2019223802A JP2019223802A JP6728463B1 JP 6728463 B1 JP6728463 B1 JP 6728463B1 JP 2019223802 A JP2019223802 A JP 2019223802A JP 2019223802 A JP2019223802 A JP 2019223802A JP 6728463 B1 JP6728463 B1 JP 6728463B1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- semen
- cryopreservation
- liquid
- goat
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 title claims abstract description 97
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title claims abstract description 94
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 241000283707 Capra Species 0.000 title claims abstract description 54
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 34
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims abstract description 28
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 241000045403 Astragalus propinquus Species 0.000 claims abstract description 19
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000004899 motility Effects 0.000 claims abstract description 15
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims abstract description 14
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 14
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims abstract description 14
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 14
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 14
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 14
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 claims description 5
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 238000010257 thawing Methods 0.000 abstract description 11
- 230000009027 insemination Effects 0.000 abstract description 10
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 12
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 8
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 5
- 241000218692 Cryptomeria Species 0.000 description 4
- 240000003243 Thuja occidentalis Species 0.000 description 3
- 235000008109 Thuja occidentalis Nutrition 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- SMDOOINVMJSDPS-UHFFFAOYSA-N Astragaloside Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)OC2C(C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(O)C(CO)O2)O)=C1 SMDOOINVMJSDPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 2
- 241000425037 Toona sinensis Species 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 2
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 2
- QMNWISYXSJWHRY-XWJCTJPOSA-N astragaloside Chemical compound O1[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@]34C[C@]4(CC[C@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO4)O)C4(C)C)C4[C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)CC3[C@]2(C)C[C@@H]1O QMNWISYXSJWHRY-XWJCTJPOSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 2
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 2
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 2
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 230000019100 sperm motility Effects 0.000 description 2
- 102000016912 Aldehyde Reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 1
- 241000719837 Anoectochilus Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000336315 Cistanche salsa Species 0.000 description 1
- 240000005109 Cryptomeria japonica Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 1
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038468 Renal hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 201000008627 kidney hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 150000003893 lactate salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000003584 mesangial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
【課題】保存における生存率、運動性及び完全性を効果的に向上させることができ、保存された精液が融解後でも良好な授精能力を有し、受胎効果が安定し、湖羊凍結精液に対する人工授精の要求を満たす湖羊精液凍結保存液の提供。【解決手段】Ｔｒｉｓ、グルコース、トレハロース、卵黄液、クエン酸ナトリウム、グルタチオン、グリセロール、キバナオウギ抽出物、ペニシリン及びストレプトマイシンを成分として含む湖羊精液凍結保存液。【選択図】なし
Description
本発明は、湖羊養殖の技術分野に属し、具体的には、湖羊精液凍結保存液及びその用途に関する。
湖羊は、太湖平野の重要な家畜の１つであり、中国国家一級保護地方家畜・家禽種である。湖羊は、中柄であり、オスとメスの両方に角がなく、頭部が長くて狭く、鼻梁が高く、ほとんどの耳が垂れ下がっていて、首が細長く、体が長くて狭く、腰部や背部が平らでまっすぐであり、腹部がわずかに垂れ下がっており、尾が平たくて丸く、尾の先端が反っており、四肢が比較的細くて長い。体全体にわたって白い毛が被覆され、腹部の毛が粗くて薄く短く、体が丈夫である。湖羊は、希少な白色子羊皮用の品種であり、成熟が早く、一年中発情期であり、１年に２回の出産が可能であり、１腹当たりの産子数が多く、泌乳能力が高く、成長発育の速度が速く、改良後、優れた肉産量を示し、耐高温や耐湿度などの優良な性状を有し、中国の太湖地域で分布しており、一年中舎飼いされている子羊皮用の中国ヒツジの品種であり、出生後１〜２日で屠殺されて剥がれる子湖羊の羊皮は、美しい模様を有し、世界的に有名である。
精液の凍結保存及び人工授精技術は、現代の畜産生産において極めて重要な役割を果たし、凍結精液で人工授精を行うと、時間、地域、品種及び個体によって制限されず、雄家畜の飼育頭数を大幅に減少させ、生産コストを低減させ、種付け用の優良雄家畜の利用率を上昇させ、養殖業の経済的利益を向上させる。また、当該技術は、品種導入、交雑改良、及び繁殖性能の向上、疾患制御及び遺伝的多様性の保護に対しても重要な意味を持っている。羊の精子は、鶏や牛の精子よりも弱く、凍結と融解では損傷されて受精能を失うことが発生しやすい。従来の羊凍結精液は、融解後の運動率が低く、且つ多くの「老化」精子及び死んだ精子が存在し、有効精子が少なく、運動性が低く、品質が低く、人工授精の要求を満たしにくい。
以上に鑑み、本発明の目的は、上記従来技術の不備な点を克服するために、湖羊精液の保存における生存率、運動性及び完全性を効果的に向上させることができ、保存された精液が融解後でも良好な授精能力を有し、受胎効果が安定し、湖羊凍結精液に対する人工授精の要求を満たす湖羊精液凍結保存液を提供することである。
上記目的を達成させるために、本発明が採用する技術案は、以下のとおりである。湖羊精液凍結保存液は、Ｔｒｉｓ、グルコース、トレハロース、卵黄液、クエン酸ナトリウム、グルタチオン、グリセロール、キバナオウギ抽出物、ペニシリン及びストレプトマイシンを成分として含む。
キバナオウギ抽出物は、マメ科植物であるキバナオウギの根の抽出物であり、サポニン、フラボン、多糖やアミノ酸などの成分を含み、免疫力を高め、エネルギーを増やし、疲労を抑制し、突然変異を防止し、肝臓を保護して破骨細胞の働きを阻害するなどの作用を有する。キバナオウギ多糖類は、コレステロールとトリグリセリドである血中脂質を下げ、高密度リポタンパク質を増やすという作用を有し、たとえばアテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、末梢血管疾患や高脂血症などの心臓・脳血管疾患を予防及び治療することができる。アストラガロシドは、血糖、糖化ヘモグロビン、尿タンパク質を大幅に減少させる作用を有し、腎皮質及び血清におけるＡＧＥｓを減少させることができ、アストラガロシドは、抗酸化作用を有し、アルドース還元酵素に対して阻害作用を有し、さらにメサンギウム細胞の増殖を抑制し、腎肥大を軽減させるという作用を有する。本願の発明者は、研究したところ、キバナオウギ抽出物を含む凍結保存液が湖羊精液の凍結保存効果を効果的に向上でき、また凍結保存液における前記キバナオウギ抽出物の濃度が０．１ｇ／Ｌである場合、得られた凍結保存の効果が最適であることを見出した。
好ましくは、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３０〜３５ｇ／Ｌ、グルコース ８〜１５ｇ／Ｌ、トレハロース ３０〜５０ｇ／Ｌ、卵黄液 １５〜２０％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム １５〜２０ｇ／Ｌ、グルタチオン ０．５〜１ｇ／Ｌ、グリセロール ５〜８％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物 ０．０５〜０．１５ｇ／Ｌ、ペニシリン ０．８〜１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン ０．８〜１ｇ／Ｌを成分として含む。
好ましくは、前記湖羊精液凍結保存液におけるキバナオウギ抽出物の濃度は、０．１ｇ／Ｌである。
好ましくは、前記卵黄液調製方法は、新鮮な無菌卵の卵黄を繰り返してピペットして均一に混合して、前記卵黄液を得るステップを含む。
本発明は、Ｔｒｉｓ、グルコース、トレハロース、クエン酸ナトリウム、グルタチオン及びキバナオウギ抽出物を所定の比率で秤取し、再蒸留水に加え、十分に溶解させて均一に混合した後、０．２ｕｍ濾過膜で濾過し、次にペニシリン及びストレプトマイシンを加え、均一に混合して、溶液Ａを得るステップ（１）と、溶液Ａに卵黄液を所定の比率で加え、均一に混合して、溶液Ｂを得るステップ（２）と、溶液Ｂにグリセロールを所定の比率で加え、均一に混合して、前記湖羊精液凍結保存液を得るステップ（３）と、を含む前記湖羊精液凍結保存液の調製方法をさらに提供する。
本発明は、湖羊精液凍結保存における前記湖羊精液凍結保存液の用途をさらに提供する。
本発明は、湖羊新鮮原精液を準備し、精液の運動率を評価し、運動率が０．８より大きいと凍結保存に用いるステップ（１）と、請求項１〜４のいずれか１項に記載の湖羊精液凍結保存液をステップ（１）で準備した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で１〜２ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に８〜１０ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存するステップ（２）と、を含む湖羊精液凍結保存方法をさらに提供する。
好ましくは、前記ステップ（２）の凍結保存管における精液の密度は、６×１０8個／ｍＬである。
従来技術に比べて、本発明の有益な効果は、以下のとおりである。（１）本発明に係る凍結保存液は、湖羊精液の保存過程における生存率、運動性及び完全性を効果的に向上させることができ、保存した精液は、融解後でも良好な授精能力を有し、受胎効果が安定し、湖羊凍結精液に対する人工授精の要件を満たすことができ、将来性が期待でき、（２）本願の発明者は、研究したところ、キバナオウギ抽出物を含む凍結保存液が湖羊精液の凍結保存効果を効果的に向上でき、また凍結保存液における前記キバナオウギ抽出物の濃度が０．１ｇ／Ｌである場合、得られた凍結保存の効果が最適であることを見出した。
以下、本発明を理解しやすくするために、本発明をさらに詳細に説明する。しかしながら、本発明は、さまざまな別の形態で実施されてもよく、本明細書に記載の実施例に制限されない。むしろ、これら実施例を提供することは、本発明の開示内容をより徹底的かつ全面的に理解できるようにするためである。
実施例１
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３０ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、トレハロース４０ｇ／Ｌ、卵黄液１６％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１８ｇ／Ｌ、グルタチオン０．６ｇ／Ｌ、グリセロール５％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．１ｇ／Ｌ、ペニシリン１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン１ｇ／Ｌを成分として含む。
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３０ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、トレハロース４０ｇ／Ｌ、卵黄液１６％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１８ｇ／Ｌ、グルタチオン０．６ｇ／Ｌ、グリセロール５％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．１ｇ／Ｌ、ペニシリン１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン１ｇ／Ｌを成分として含む。
前記湖羊精液凍結保存液の調製方法は、Ｔｒｉｓ、グルコース、トレハロース、クエン酸ナトリウム、グルタチオン及びキバナオウギ抽出物を所定の比率で秤取し、再蒸留水に加え、十分に溶解させて均一に混合した後、０．２ｕｍ濾過膜で濾過し、次にペニシリン及びストレプトマイシンを加え、均一に混合して、溶液Ａを得るステップ（１）と、溶液Ａに卵黄液を所定の比率で加え、均一に混合して、溶液Ｂを得るステップ（２）と、溶液Ｂにグリセロールを所定の比率で加え、均一に混合して、前記湖羊精液凍結保存液を得るステップ（３）と、を含む。
実施例２
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３３ｇ／Ｌ、グルコース１５ｇ／Ｌ、トレハロース３０ｇ／Ｌ、卵黄液１５％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム２０ｇ／Ｌ、グルタチオン１ｇ／Ｌ、グリセロール６％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０６ｇ／Ｌ、ペニシリン１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン１ｇ／Ｌを成分として含む。
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３３ｇ／Ｌ、グルコース１５ｇ／Ｌ、トレハロース３０ｇ／Ｌ、卵黄液１５％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム２０ｇ／Ｌ、グルタチオン１ｇ／Ｌ、グリセロール６％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０６ｇ／Ｌ、ペニシリン１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン１ｇ／Ｌを成分として含む。
前記湖羊精液凍結保存液の調製方法は、実施例１と同様であった。
実施例３
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３５ｇ／Ｌ、グルコース１２ｇ／Ｌ、トレハロース３５ｇ／Ｌ、卵黄液２０％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１６ｇ／Ｌ、グルタチオン０．８ｇ／Ｌ、グリセロール８％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．１３ｇ／Ｌ、ペニシリン０．８ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．８ｇ／Ｌを成分として含む。
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３５ｇ／Ｌ、グルコース１２ｇ／Ｌ、トレハロース３５ｇ／Ｌ、卵黄液２０％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１６ｇ／Ｌ、グルタチオン０．８ｇ／Ｌ、グリセロール８％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．１３ｇ／Ｌ、ペニシリン０．８ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．８ｇ／Ｌを成分として含む。
前記湖羊精液凍結保存液の調製方法は、実施例１と同様であった。
実施例４
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３０ｇ／Ｌ、グルコース８ｇ／Ｌ、トレハロース５０ｇ／Ｌ、卵黄液２０％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム２０ｇ／Ｌ、グルタチオン０．５ｇ／Ｌ、グリセロール７％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．１５ｇ／Ｌ、ペニシリン０．８ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．８ｇ／Ｌを成分として含む。
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３０ｇ／Ｌ、グルコース８ｇ／Ｌ、トレハロース５０ｇ／Ｌ、卵黄液２０％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム２０ｇ／Ｌ、グルタチオン０．５ｇ／Ｌ、グリセロール７％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．１５ｇ／Ｌ、ペニシリン０．８ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．８ｇ／Ｌを成分として含む。
前記湖羊精液凍結保存液の調製方法は、実施例１と同様であった。
実施例５
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３５ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、トレハロース４５ｇ／Ｌ、卵黄液１８％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム２０ｇ／Ｌ、グルタチオン０．８ｇ／Ｌ、グリセロール５％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０５ｇ／Ｌ、ペニシリン０．９ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．９ｇ／Ｌを成分として含む。
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３５ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、トレハロース４５ｇ／Ｌ、卵黄液１８％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム２０ｇ／Ｌ、グルタチオン０．８ｇ／Ｌ、グリセロール５％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０５ｇ／Ｌ、ペニシリン０．９ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．９ｇ／Ｌを成分として含む。
前記湖羊精液凍結保存液の調製方法は、実施例１と同様であった。
実施例６
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３２ｇ／Ｌ、グルコース１５ｇ／Ｌ、トレハロース４０ｇ／Ｌ、卵黄液１５％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１８ｇ／Ｌ、グルタチオン０．６ｇ／Ｌ、グリセロール８％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０８ｇ／Ｌ、ペニシリン１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン１ｇ／Ｌを成分として含む。
本発明の湖羊精液凍結保存液の一実施例では、前記湖羊精液凍結保存液は、濃度でＴｒｉｓ ３２ｇ／Ｌ、グルコース１５ｇ／Ｌ、トレハロース４０ｇ／Ｌ、卵黄液１５％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１８ｇ／Ｌ、グルタチオン０．６ｇ／Ｌ、グリセロール８％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０８ｇ／Ｌ、ペニシリン１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン１ｇ／Ｌを成分として含む。
前記湖羊精液凍結保存液の調製方法は、実施例１と同様であった。
実施例７
凍結保存液の保存効果
偽膣法で大人の湖羊種雄羊の精液を採取し、精液の運動率を測定し、条件を満たすと凍結保存し、保存方法は、精液の密度が６×１０8個／ｍＬとなるように、実施例１〜６の前記湖羊精液凍結保存液を採取した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で２ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に１０ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存することであった。
凍結保存液の保存効果
偽膣法で大人の湖羊種雄羊の精液を採取し、精液の運動率を測定し、条件を満たすと凍結保存し、保存方法は、精液の密度が６×１０8個／ｍＬとなるように、実施例１〜６の前記湖羊精液凍結保存液を採取した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で２ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に１０ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存することであった。
融解及び検査
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して品質指標の検査を行った。
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して品質指標の検査を行った。
結果を表１に示す。
表１ 品質指標の検査結果
上記結果からわかるように、本発明の実施例１〜６の上記凍結保存液は、湖羊精液に対して良好な保存効果を有し、融解後でも精子の運動率、運動性及び先体の完全率がいずれも高いレベルに維持され、冷凍した精子の品質を向上させた。
表１ 品質指標の検査結果
実施例８
本発明の前記凍結保存液は、キバナオウギ抽出物を含み、キバナオウギ抽出物は、サポニン、フラボン、多糖類やアミノ酸などの複数種の成分を含むキバナオウギの乾燥根の抽出物であり、湖羊精液の凍結保存効果を効果的に向上できる。
本発明の前記凍結保存液は、キバナオウギ抽出物を含み、キバナオウギ抽出物は、サポニン、フラボン、多糖類やアミノ酸などの複数種の成分を含むキバナオウギの乾燥根の抽出物であり、湖羊精液の凍結保存効果を効果的に向上できる。
実験群１及び２を設計し、実験群１は、実施例１の前記凍結保存液で湖羊精液を保存し、実験群２で使用される凍結保存液は、キバナオウギ抽出物を含まない以外、残りの成分が実施例１と同様であった。
偽膣法で大人の湖羊種雄羊精液を採取し、精液の運動率を測定し、条件を満たすと凍結保存し、保存方法は、精液の密度が６×１０8個／ｍＬとなるように、実験群１及び２の前記湖羊精液凍結保存液を採取した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で１．５ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に８ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存することであった。
融解及び検査
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して品質指標の検査を行った。
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して品質指標の検査を行った。
結果を表２に示す。
表２ 品質指標の検査結果
上記結果からわかるように、キバナオウギ抽出物を含む実験群１の前記凍結保存液の湖羊精液に対する保存効果は、キバナオウギ抽出物を含まない実験群２の前記凍結保存液の湖羊精液に対する保存効果よりも顕著に優れ、実験群１の前記凍結保存液で保存された湖羊精液は、融解後でも精子の運動率、運動性及び先体の完全率が実験群２より大幅に高く、キバナオウギ抽出物が凍結保存液の湖羊精液に対する凍結保存効果を効果的に向上できることを示した。
表２ 品質指標の検査結果
実施例９
本発明の前記凍結保存液におけるキバナオウギ抽出物の濃度は、０．０５〜０．１５ｇ／Ｌであり、本実施例では、キバナオウギ抽出物の濃度による凍結保存液の保存効果に対する影響を研究した。
本発明の前記凍結保存液におけるキバナオウギ抽出物の濃度は、０．０５〜０．１５ｇ／Ｌであり、本実施例では、キバナオウギ抽出物の濃度による凍結保存液の保存効果に対する影響を研究した。
実験群３〜９を設計し、各実験群の前記凍結保存液は、キバナオウギ抽出物の濃度が異なる以外、残りの成分がいずれも同じであり、具体的には、表３に示された。
表３ 凍結保存液におけるキバナオウギ抽出物の濃度の設計
偽膣法で大人の湖羊種雄羊精液を採取し、精液の運動率を測定し、条件を満たすと凍結保存し、保存方法は、精液の密度が６×１０8個／ｍＬとなるように、実験群３〜９の前記湖羊精液凍結保存液を採取した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で１ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に１０ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存することであった。
表３ 凍結保存液におけるキバナオウギ抽出物の濃度の設計
融解及び検査
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して品質指標の検査を行った。
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して品質指標の検査を行った。
結果を表４に示す。
表４ 品質指標の検査結果
上記結果からわかるように、前記凍結保存液におけるキバナオウギ抽出物の濃度が０．０５〜０．１５ｇ／Ｌ（実験群４〜８）である場合、凍結保存液の湖羊精液に対する凍結保存効果が好適であり、特にキバナオウギ抽出物の濃度が０．１ｇ／Ｌである場合、融解後の精液の品質指標が最適であり、キバナオウギ抽出物の濃度が０．０５ｇ／Ｌ（実験群３）より低く又は０．１５ｇ／Ｌ（実験群９）より高い場合、凍結保存液の保存効果に影響を与えて、保存品質が低下した。
表４ 品質指標の検査結果
実施例１０
本実施例は、実施例１の前記凍結保存液で保存される湖羊精液を例として、本発明の前記凍結保存液で保存される湖羊精液の融解後の授精効果を研究した。
本実施例は、実施例１の前記凍結保存液で保存される湖羊精液を例として、本発明の前記凍結保存液で保存される湖羊精液の融解後の授精効果を研究した。
偽膣法で大人の湖羊種雄羊精液を採取し、精液の運動率を測定し、条件を満たすと凍結保存し、保存方法は、精液の密度が６×１０8個／ｍＬとなるように、実施例１の前記湖羊精液凍結保存液を採取した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で２ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に１０ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存することであった。
融解
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して人工授精を行った。
上記凍結保存した凍結保存管を液体窒素から取り出した直後、３７℃の水浴鍋に入れ、精液が溶けて透明になるまで振とうさせ、精液を取り出して人工授精を行った。
検査した結果、上記融解後の湖羊精液は、授精能力を有する時間が２６ｈに達し、発情期の雌の湖羊の受胎率が８５％に達した。
なお、以上の実施例は、本発明の技術案を説明するために過ぎず、本発明の特許範囲を制限するものではなく、好適実施例を参照しながら本発明を詳細に説明したが、当業者であれは、本発明の技術案の趣旨及び範囲から逸脱することなく本発明の技術案に対して修正又は同等置換を行えることが理解できる。
Claims (6)
- 湖羊精液凍結保存液であって、Ｔｒｉｓ、グルコース、トレハロース、卵黄液、クエン酸ナトリウム、グルタチオン、グリセロール、キバナオウギ抽出物、ペニシリン及びストレプトマイシンを成分として含むことを特徴とする湖羊精液凍結保存液である。
- 濃度でＴｒｉｓ ３０〜３５ｇ／Ｌ、グルコース８〜１５ｇ／Ｌ、トレハロース３０〜５０ｇ／Ｌ、卵黄液１５〜２０％（ｖ／ｖ）、クエン酸ナトリウム１５〜２０ｇ／Ｌ、グルタチオン０．５〜１ｇ／Ｌ、グリセロール５〜８％（ｖ／ｖ）、キバナオウギ抽出物０．０５〜０．１５ｇ／Ｌ、ペニシリン０．８〜１ｇ／Ｌ及びストレプトマイシン０．８〜１ｇ／Ｌを成分として含むことを特徴とする請求項１に記載の湖羊精液凍結保存液である。
- 前記キバナオウギ抽出物の濃度は０．１ｇ／Ｌであることを特徴とする請求項２に記載の湖羊精液凍結保存液である。
- Ｔｒｉｓ、グルコース、トレハロース、クエン酸ナトリウム、グルタチオン及びキバナオウギ抽出物を所定の比率で秤取し、再蒸留水に加え、十分に溶解させて均一に混合した後、０．２ｕｍ濾過膜で濾過し、次にペニシリン及びストレプトマイシンを加え、均一に混合して、溶液Ａを得るステップ（１）と、溶液Ａに卵黄液を所定の比率で加え、均一に混合して、溶液Ｂを得るステップ（２）と、溶液Ｂにグリセロールを所定の比率で加え、均一に混合して、前記湖羊精液凍結保存液を得るステップ（３）と、を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の湖羊精液凍結保存液の調製方法である。
- 湖羊精液凍結保存方法であって、
湖羊の新鮮原精液を準備し、精液の運動率を評価し、運動率が０．８より大きいと凍結保存に用いるステップ（１）と、（２）請求項１〜４のいずれか１項に記載の湖羊精液凍結保存液をステップ（１）で準備した精液に加え、均一に混合した後、凍結保存管に加え、凍結保存管を４℃で１〜２ｈ放置し、次に液体窒素の液面から４〜６ｃｍ離れる箇所に８〜１０ｍｉｎ放置し、最後に液体窒素に投入して保存するステップと、を含むことを特徴とする湖羊精液凍結保存方法である。 - 前記ステップ（２）の凍結保存管における精液の密度は６×１０８個／ｍＬであることを特徴とする請求項５に記載の湖羊精液凍結保存方法である。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911031372.X | 2019-10-28 | ||
| CN201911031372.XA CN110604129B (zh) | 2019-10-28 | 2019-10-28 | 一种湖羊精液冷冻保存液及其用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP6728463B1 true JP6728463B1 (ja) | 2020-07-22 |
| JP2021066719A JP2021066719A (ja) | 2021-04-30 |
Family
ID=68895307
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019223802A Expired - Fee Related JP6728463B1 (ja) | 2019-10-28 | 2019-12-11 | 湖羊精液凍結保存液及びその用途 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6728463B1 (ja) |
| CN (1) | CN110604129B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114304136A (zh) * | 2021-12-09 | 2022-04-12 | 北京大北农动物保健科技有限责任公司 | 一种精液保护液及其制备方法与应用 |
| CN116369308A (zh) * | 2023-04-20 | 2023-07-04 | 河北农业大学 | 一种绵羊精液抗冻保护剂及其制备方法和使用方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111374124A (zh) * | 2020-05-15 | 2020-07-07 | 辽宁省现代农业生产基地建设工程中心 | 一种驴的冷冻精液稀释液配方及其制备方法 |
| CN111436421A (zh) * | 2020-05-21 | 2020-07-24 | 新乡医学院三全学院 | 一种人类精子冷冻保存方法 |
| CN117256604B (zh) * | 2023-11-23 | 2024-03-01 | 中国海洋大学三亚海洋研究院 | 一种宽吻海豚精液冷冻保存剂及精液冷冻保存方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102960336A (zh) * | 2012-11-09 | 2013-03-13 | 镇江万山红遍农业园 | 一种波杂山羊冻精稀释液 |
| CN103392692A (zh) * | 2013-08-14 | 2013-11-20 | 镇江万山红遍农业园 | 一种山羊精液冷冻保存液 |
| ES2787200T3 (es) * | 2014-07-14 | 2020-10-15 | Politecnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid | Diluyente para la conservación de semen |
-
2019
- 2019-10-28 CN CN201911031372.XA patent/CN110604129B/zh active Active
- 2019-12-11 JP JP2019223802A patent/JP6728463B1/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114304136A (zh) * | 2021-12-09 | 2022-04-12 | 北京大北农动物保健科技有限责任公司 | 一种精液保护液及其制备方法与应用 |
| CN116369308A (zh) * | 2023-04-20 | 2023-07-04 | 河北农业大学 | 一种绵羊精液抗冻保护剂及其制备方法和使用方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2021066719A (ja) | 2021-04-30 |
| CN110604129A (zh) | 2019-12-24 |
| CN110604129B (zh) | 2020-12-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6728463B1 (ja) | 湖羊精液凍結保存液及びその用途 | |
| Willier | The endocrine glands and the development of the chick. I. The effects of thyroid grafts | |
| Chao et al. | The properties of tilapia sperm and its cryopreservation | |
| Fukui et al. | Fertility after artificial insemination using a soybean-based semen extender in sheep | |
| Yodmingkwan et al. | Effects of extenders on fresh and freezing semen of boer goat | |
| Yildiz et al. | Effect of cholesterol-loaded cyclodextrin on cryosurvival and fertility of cryopreserved carp (Cyprinus carpio) sperm | |
| Chelmonska et al. | Semen collection from Japanese quail (Coturnix japonica) using a teaser female | |
| US20100143877A1 (en) | Composition for preserving reproductive cells and method of using | |
| Łukaszewicz | Artificial insemination in geese | |
| Ramukhithi et al. | Cryopreservation of South African indigenous goat semen | |
| CN102960279A (zh) | 一种黄颡鱼在低渗溶液中的人工授精方法 | |
| CN103329889B (zh) | β-胡萝卜素用于制备猪精液冷冻保护剂的应用 | |
| Ratky et al. | Saving genetic resources of native pigs in Occidental and Oriental countries—Practical examples of the characterization and utilization of native pigs in Hungary and Laos | |
| Yaman et al. | Sperm quality of hybrid chicken affected by propolis, honey, or royal jelly as organic diluent materials and storage periods during sperm preservation | |
| CN116103226B (zh) | 一种胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用 | |
| CN107980765A (zh) | 一种提高驴精液低温保存品质的精液稀释液及其制备方法与应用 | |
| CN103563848A (zh) | 一种用于藏鸡的受精方法 | |
| Handayani et al. | Exploration of the natural extender for dilution of walking catfish Clarias batrachus sperm in refrigerated storage | |
| Majhi et al. | Non-invasive method for collection of Clarias magur (Hamilton, 1822) spermatozoa: A novel approach for catfish domestication, aquaculture and conservation | |
| Macpherson et al. | Frozen turkey semen | |
| Avlar et al. | Protective effects of different egg yolk sources on cryopreservation of scaly carp (Cyprinus carpio) sperm | |
| Cejko et al. | Application of sodium alginate solution for short-term storage of different volumes of sex-reversed rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) testicular sperm | |
| Umaa Rani et al. | Fertilizability of cryopreserved and cadaveric fish spermatozoa of freshwater catfish P angasius sutchi (F owler, 1937) | |
| Kim et al. | Effect of maternal administration of salbutamol to sows on post-natal growth and carcass characteristics in the progeny | |
| Balogun et al. | Optimizing dilution rate of cock semen with natural based extender for optimum fertility |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20191211 |
|
| A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20191211 |
|
| A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20200109 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200218 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200423 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200625 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200701 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6728463 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |