JP6715431B2 - ウレアーゼ生成微生物の製造方法及び地盤改良方法 - Google Patents
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Description
本発明は、ウレアーゼ生成微生物の大量製造に適したウレアーゼ生成微生物の製造方法及び地盤改良方法を提供することを課題とする。
<1>栄養源及び尿素を含む第一の培養液中でウレアーゼを生成する微生物を増殖させることと、
第一の培養液から前記微生物を分離することと、
第一の培養液から分離した前記微生物と、栄養源と、尿素とを含む第二の培養液とを混合することと、
第二の培養液中で前記微生物を増殖させることと、を含む集積培養工程を有し、
前記集積培養工程は、第一の培養液及び第二の培養液のアンモニア濃度が10000ppm以下となる条件で行われる、ウレアーゼ生成微生物の製造方法。
本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。
本明細書において組成物中の各成分の含有量は、組成物中に各成分に該当する物質が複数種存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する当該複数種の物質の合計量を意味する。
本発明のウレアーゼ生成微生物の製造方法は、
栄養源及び尿素を含む第一の培養液中でウレアーゼを生成する微生物を増殖させることと、
第一の培養液から前記微生物を分離することと、
第一の培養液から分離した前記微生物と、栄養源及び尿素を含む第二の培養液とを混合することと、
第二の培養液中で前記微生物を増殖させることと、を含む集積培養工程を有し、
前記集積培養工程は、第一の培養液及び第二の培養液のアンモニア濃度が10000ppm以下となる条件で行われる。
集積培養工程は、(1)栄養源及び尿素を含む第一の培養液中でウレアーゼを生成する微生物を増殖させることと、(2)第一の培養液から前記微生物を分離することと、(3)第一の培養液から分離した前記微生物と、栄養源及び尿素を含む第二の培養液とを混合することと、(4)第二の培養液中で前記微生物を増殖させることと、を含む。
本発明のウレアーゼ生成微生物の製造方法は、集積培養工程で増殖させたウレアーゼ生成微生物を、尿素を含む培養液に添加して、ウレアーゼ生成微生物を増殖させる大量培養工程をさらに含むことが好ましい。
本発明の地盤改良方法は、本発明のウレアーゼ生成微生物の製造方法により製造されたウレアーゼ生成微生物を地盤に添加する工程を含む。
(参考例)
土壌試料(富津市において採取)に滅菌した蒸留水を質量比(土壌試料:蒸留水)が1:10となるように加え、2分間激しく振とうした。10分間静置後、上澄みを採取した。この上澄みを培養液に質量比(上澄み:培養液)が1:100となるように加え、30℃のインキュベータ内で3日間培養を行った。培養開始から3日後、培養液のウレアーゼ活性、アンモニア濃度、濁度、TOC(全有機炭素)及びpHを測定した。結果を表1の「EC変化率」、「アンモニア濃度」、「濁度」、「TOC」及び「pH」の欄にそれぞれ示す。
(1)滅菌した蒸留水に食品添加物用酵母エキス(富士食品工業社製、商品名「YP−21CM」)を濃度が20g/Lとなるように添加し、さらに農業資材用尿素を濃度が0.15mol/Lとなるように添加して、第一の培養液を調製した。これを用いて、参考例と同じ条件でウレアーゼ生成微生物の培養を3日間行った。その後、参考例と同様にしてウレアーゼ活性、濁度、TOC及びpHを測定した。結果を表1に示す。
培養液中の酵母エキスの濃度を6.7g/Lとした以外は実施例1の(1)〜(4)と同様にしてウレアーゼ生成微生物の培養を行い、ウレアーゼ活性、アンモニア濃度、濁度、TOC及びpHを測定した。結果を表1に示す。
酵母エキスを培養液に添加しなかった以外は実施例1の(1)〜(4)と同様にしてウレアーゼ生成微生物の培養を行い、ウレアーゼ活性、アンモニア濃度、濁度、TOC及びpHを測定した。結果を表1に示す。
実施例2において(2)及び(3)の工程を行わない以外は同様にして培養を行い、3日後、6日後、9日後及び12日後にそれぞれウレアーゼ活性、アンモニア濃度、濁度、TOC及びpHを測定した。
これに対して酵母エキスを培養液に添加しなかった比較例1では、遠心分離及び培養を繰り返してもEC変化率が上昇せず、ウレアーゼ生成微生物の集積的な増殖は認められなかった。遠心分離を行わずに培養を行った比較例2でも、6日目から9日目にかけてEC変化率が低下し、ウレアーゼ生成微生物の集積的な増殖は認められなかった。
尿素及び酵母エキスを濃度がそれぞれ0.15mol/L、2.0g/Lとなるように添加した精製水(20L)に、実施例2において遠心分離・培養工程を計4回行った後の培養液を20mL添加し、ウレアーゼ活性、アンモニア濃度及びpHを上記と同じ方法で測定した。次いでこれを25℃〜30℃の暗所に静置し、12日後に上記と同じ方法でウレアーゼ活性、アンモニア濃度及びpHを測定した。結果を表2に示す。
Claims (4)
- 地盤に添加するためのウレアーゼ生成微生物の製造方法であり、
栄養源及び尿素を含む第一の培養液中でウレアーゼを生成する微生物を増殖させることと、
第一の培養液から前記微生物を分離することと、
第一の培養液から分離した前記微生物と、栄養源及び尿素を含む第二の培養液とを混合することと、
第二の培養液中で前記微生物を増殖させることと、を含む集積培養工程を有し、
前記集積培養工程は、第一の培養液及び第二の培養液のアンモニア濃度が10000ppm以下となる条件で行われる、ウレアーゼ生成微生物の製造方法。 - 前記集積培養工程で増殖させた前記微生物を、尿素を含む培養液に添加して、前記微生物を増殖させる大量培養工程をさらに含む、請求項1に記載のウレアーゼ生成微生物の製造方法。
- 前記微生物は、前記微生物を地盤に添加して前記地盤を改良するために使用されるものであり、かつ前記地盤から採取した微生物を培養して増殖させた微生物である、請求項1又は請求項2に記載のウレアーゼ生成微生物の製造方法。
- 請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載のウレアーゼ生成微生物の製造方法によりウレアーゼ生成微生物を製造する工程と、前記ウレアーゼ生成微生物を地盤に添加する工程とを含む、地盤改良方法。
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