JP6687937B2 - 分析用基板の製造方法 - Google Patents
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Description
図1は、本発明の実施形態に係る分析用基板の平面図、側面図および裏面図を示す。
次に、本発明の実施形態に係る分析用基板の製造方法について説明する。
カバーシート貼付工程は、分析用基板1(円板状チップとも称する)の一方の面(例えば、表側の面)にカバーシートを貼り付けて、液体槽10等や流路13等の上側の面を塞ぐ工程である。ただし、分析用基板1の上側の面を別の手段で塞いでいる場合、例えば、液体槽10等や流路13等を分析用基板1の内部に形成しているような場合には、この工程は、必ずしも要せず、本発明の分析用基板の製造方法にとって必須の工程ではない。
ダミー分析部取付工程は、分析用基板1の貫通穴5に、ダミー分析部34を取り付ける工程である。ダミー分析部34は、図6に示すように、好ましくは、略円板形状の台座37と、台座37の上方に形成される円錐台38とを連接して成る。台座37は、好適には、その裏面に、内方に向かって窪む凹部36を備える。ダミー分析部34における台座37の形状は、分析部4の台座7と略同形状である。ダミー分析部34における円錐台38の形状は、分析部4の円錐台8と略同形状である。ダミー分析部34における凹部36の形状は、分析部4の凹部6と略同形状である。ただし、ダミー分析部34は、分析部4と異なり、円錐台38の上面35に、コート層9を備えていない。このように、ダミー分析部34は、コート層9を備えていない点を除き、分析部4と略同一の形態を有する。ただし、ダミー分析部34は、貫通穴5に取り付けられる形態を備える限り、分析部4と略同一の形態を備えている必要はない。ダミー分析部34を貫通穴5に取り付けた状態で、その後の撥水処理および/またはブロッキング処理を行うと、分析部4のコート層9に同処理を行うことを防止でき、もって高精度な分析が可能となる。
表面処理工程は、分析部4以外の液状物の接触可能な領域(少なくとも、液体槽10等の一部若しくは全部と、流路13等の一部若しくは全部を含む)に表面処理を施す工程である。ここでいう表面処理は、この実施形態において、撥水処理および/またはブロッキング処理を含むように解釈され、さらに好ましくは、少なくとも撥水処理を含むように解釈される。ブロッキング処理とは、ブロッキング溶液を液体槽10等の一部若しくは全部、および流路13等の一部若しくは全部に接触せしめて行う非特異吸着処理を意味する。ダミー分析部34の上面35にも上記表面処理が施されるが、ダミー分析部34は、分析用基板1の製造工程中、上記表面処理の後に、分析部4と取り換えられる。このため、ダミー分析部34への表面処理は、分析に影響を及ぼさない。
ダミー分析部の取り外し工程は、表面処理工程の後に行われる工程である。
乾燥工程は、分析部4にコート層9を形成する前および/または後に洗浄し、その洗浄液を乾燥させる工程である。乾燥工程は、コート層9の種類によっては省略でき、また、分析部4の準備を前もって行うことによって、ダミー分析部34の取り外し工程の後に行う必要もない。かかる意味で、乾燥工程は、本発明の分析用基板の製造方法にとって必須の工程ではない。
分析部取付工程は、ダミー分析部の取り外し工程の後に、貫通穴5に分析部4を取り付ける工程である。この段階では、分析部4以外の、液状物の接触領域に表面処理が施されており、分析部4のコート層9には該表面処理が行われていない。なお、この実施形態では、コート層9は、抗体を固定化した部位である。
以上、本発明の分析用基板およびその製造方法の好適な各実施形態について説明したが、本発明は、上記各実施形態に限定されず、種々変更して実施可能である。
図1に示す形状の分析用基板(以後、円板状チップという)、図3に示す分析部および図6に示すダミー分析部を、市販のPMMA樹脂(アクリペット/三菱レイヨン製)を材料として射出成形によりそれぞれ製造した。円板状チップの流路が形成されている片面に、円板状チップの外径にあわせてカットしたポリジメチルシロキサン(以後、PDMSという)製カバーシートを貼り付け、分析部以外の一連の送液流路を形成した。次に、抗体などを固定していない、いわゆる、ダミー分析部を用意し、該ダミー分析部を、円板状チップのPDMS製カバーシートを貼り付けた反対側の面から装着し、さらに液体槽の小口径部位、および凹部16,18,22の部位(図2を参照)に相当するPDMS製カバーシートに、空気抜きのための適宜の大きさの開口部を、生検トレパンを用いてあらかじめ加工し、円板状チップを完成した。
実施例1において、インスリンの抗原抗体試薬を用いる工程に、インスリンと並び生活習慣病診断のマーカーとされるレプチンについて同様の処理を行い、検出試験としてレプチン標準物質濃度に対する発光強度の濃度依存性を求めた。実施例1と同様の手順で、円板状チップとダミー分析部を用意し、流路全体の撥水処理を行った。一方、レプチン抗体を固定化した分析部は、以下のような手順で作製した。新たに別の分析部を用意し、純水で30分間の超音波洗浄を行い、風乾後、一次抗体として使用するレプチン抗体をPBS(−)で1μg/mlに希釈した溶液に分析部を浸漬し、温度4℃において一晩静置し、1次抗体を分析部に固定化した。次に、PBS−Tによる洗浄の後、非特異吸着処理として、円板状チップの流路処理に用いた同じ4%ブロックエースPBS(−)溶液に分析部を浸漬し、室温で1時間振とう後、PBS(−)溶液を用いて洗浄し、レプチン抗体を固定化した分析部を作製した。こうして作製したレプチン抗体固定化分析部を、先に円板状チップに装着していたダミー分析部を取り外してから装着した。
実施例1において、円板状チップにダミー分析部の装着に代えて、実施例1と同様の方法で作製したインスリン抗体を固定した分析部を装着し、以降の流路処理、免疫反応、測定までこれを付け替えることなく、一貫して処理、測定を行う以外については、実施例1と同じ工程を経て、抗原抗体反応および測定を行った。表1に示すように、比較例1では、実施例1に比べて発色状態は悪く、また、図7に示すように、濃度10ng/ml及び100ng/mlインスリン標準液に対するシグナルは、実施例1に比較して顕著な低下が認められ、あらかじめ分析部に固定されたインスリン抗体が、その後の処置によって悪影響を受け、正確な測定に支障をきたしたものと推察された。
実施例1において、円板状チップにダミー分析部の装着に代えて、実施例1と同様の方法で作製したインスリン抗体を固定した分析部を装着し、円板状チップの流路処理について、実施例1と同様の流路の撥水処理およびブロッキング処理手順を、ブロッキング処理、撥水処理、ブロッキング処理の3工程の処理に変え、抗原抗体反応および測定を行った。表1に示すように、比較例2では、実施例1に比べて発色状態は悪く、また、図7に示すように、濃度10ng/ml及び100ng/mlインスリン標準液に対するシグナルは、実施例1に比較して顕著な低下が認められるとともにシグナルのムラが生じ、あらかじめ分析部に固定されたインスリン抗体が、その後の一連の処理によって悪影響を受け、正確な測定に支障をきたしたものと推察された。
実施例1において、円板状チップにダミー分析部の装着に代えて、実施例1と同様の方法で作製したインスリン抗体を固定した分析部を装着し、円板状チップの流路処理について、実施例1と同様の流路の撥水処理およびブロッキング処理手順を、ブロッキング処理、撥水処理の2工程の処理を経て、抗原抗体反応および測定を行った。表1に示すように、比較例3では、実施例1に比べて発色状態は悪く、また、図7に示すように、濃度10ng/ml及び100ng/mlインスリン標準液に対するシグナルは、実施例1に比較して低下が認められ、あらかじめ分析部に固定されたインスリン抗体が、その後の処理によって悪影響を受け、正確な測定に支障をきたしたものと推察された。
実施例2において、円板状チップにダミー分析部の装着に代えて、実施例2と同様の方法で作成したレプチン抗体を固定した分析部を装着し、以降の流路処理、免疫反応、測定までこれを付け替えることなく、一貫して処理、測定を行う以外については、実施例2と同じ工程を経て、抗原抗体反応および測定を行った。表2および図8に示すように、比較例4では、3水準のレプチン濃度に対して発光強度の良好な直線性が得られたものの、実施例1に比較して、顕著な発光強度の低下が認められ、あらかじめ分析部に固定されたレプチン抗体が、その後の処理によって影響を受け、正確な測定に支障をきたしたものと推察された。
4 分析部
9 コート層(抗体を固定した層)
10,11,12 液体槽
13,14,15,17,19,21,23 流路
20 廃液槽(液体槽の一例)
34 ダミー分析部
Claims (3)
- 液状物を分析するための分析用基板の製造方法であって、
前記分析用基板に、
前記液状物を貯留する1または2以上の液体槽と、
前記液状物を検出、反応、吸着、脱離もしくは分解する分析部位となる1または2以上の分析部と、
前記液体槽と前記分析部とを繋ぎ、前記液体槽と前記分析部との間で前記液状物を流すための1または2以上の流路と、
を備え、
前記分析部は、その内側の面に、前記液状物を検出、反応、吸着、脱離もしくは分解する分析に要するコート層を備え、かつ前記分析用基板の一方の表面から着脱自在に構成され、
前記分析部を除く少なくとも前記液体槽および前記流路に、撥水処理およびブロッキング処理の少なくともいずれか1つを含む表面処理がなされており、
前記分析部の位置に、前記コート層の存在しないダミー分析部を取り付けるダミー分析部取付工程と、
前記ダミー分析部を取り付けた状態にて、少なくとも前記液体槽および前記流路に、前記表面処理に要する処理剤を流して、前記表面処理を施す表面処理工程と、
前記表面処理工程の後に、前記ダミー分析部を取り外して、前記分析部を取り付ける分析部取付工程と、
を含む分析用基板の製造方法。 - 前記表面処理工程は、前記分析用基板を自転させて、その径方向外側に向かって遠心力を生じせしめて、前記表面処理に要する前記処理剤を流す工程である請求項1に記載の分析用基板の製造方法。
- 前記表面処理工程は、その自転中心から、前記液体槽、前記流路、前記ダミー分析部、前記流路、前記液体槽の順に径方向外側に向かって、前記表面処理に要する前記処理剤を流す工程である請求項2に記載の分析用基板の製造方法。
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