JP6649920B2 - 免疫調節用組成物、免疫調節用組成物の製造のための使用、免疫調節用組成物の製造方法、該免疫調節用組成物を用いる食品、医薬品、動物食餌製品の製造方法 - Google Patents
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炎、関節リュウマチ、全身性エリテマトーデス、尋常性乾癬、慢性胃炎、自己免疫性肝炎、バセドウ病などの自己免疫疾患や、スギ花粉症、アトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患などが挙げられる。
[微生物の培養]
微生物は、Enterococcus faecalis KH2(受託番号:NITE P-14444)(以下、「EF菌」とする。)、又はLactobacilus plantarum KS-1(日本DNAデータバンク LC042605)(以下、「KS−1菌」とする。)を用いた。EF菌の培地及びKS−1菌の培地は、いずれもDifco Lactobacilli MRS Broth(商品名、日本ベクトン・ディツキンソン株式会社)を使用し、37℃で培養を行なった。
上記EF菌又はKS−1菌の培養液を回収し、更に遠心にて集菌し、菌体濃度が20%となるようにリン酸緩衝液に懸濁した。これをテフロン(登録商標)ホモジナイザーにかけ、菌体同士が凝集するのを避け、できるだけ分散させるようにした。
IL−10、及びIL−12産生誘導能の試験にはマウス脾臓細胞の試験管内培養系を用いた。具体的には、8週齢のBALB/cマウスから脾臓細胞を採取し、常法に従い、10% FBS、50μM 2-メルカプトエタノール、100U/mL ペニシリン、100μg/mL ストレプトマイシンを含むRPMI1640培地で細胞浮遊液(2.5×106 cells/mL)を調製した。これに上記の処理をしたEF菌、KS−1菌、又はOK432を乾燥物換算で終濃度1μg/mLとなるように添加して細胞/菌体混合液を調製し、96穴プレートの各ウェルに0.2mLずつ撒いた。温度37℃、5%CO2の条件下で、IL−10の場合は3日間、IL−12の場合は1日間培養し、培養後の培養上清を回収して、培養上清中のIL−10、及びIL−12量を測定した。IL−10量の測定には、キット「DuoSet IL-10」(商品名、R&D社)を使用し、ELISA法で測定した。IL−12量の測定には、一次抗体として「capture Ab」、二次抗体として「detection Ab」、検出試薬として「HRP-Avidin」(それぞれ商品名、BioLegend Inc.社)、発色基質として「TMB(3,3’,5,5’tetramethylbenzidin)」(商品名、Sigma. Life Scienc社)を使用し、サンドイッチELISA法で測定した。結果はイムノプレートの6ウェルの平均として求めた。
上記方法で、IL−10産生誘導活性及びIL−12産生誘導活性を測定した。そして、IL−10産生誘導活性については、同濃度でのOK432のIL−10産生誘導活性を100%として、それに対する相対値で求めた。同様に、IL−12産生誘導活性については、同濃度でのOK432のIL−12産生誘導活性を100%として、それに対する相対値で求めた。
Claims (15)
- エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)及び/又はラクトバチラス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)に属する乳酸菌の菌体及び/又はその処理物であって、pH4.5〜2.0の酸性条件下で120〜140℃の熱処理を施されたものからなり、OK432のIL−10産生誘導能を基準にして20%以上のIL−10産生誘導能を有し、且つ、OK432のIL−12産生誘導能を基準にして30%を超えないIL−12産生誘導能を有する、該菌体及び/又はその処理物を有効成分とすることを特徴とする免疫調節用組成物。
- 前記乳酸菌の菌体及び/又はその処理物は、OK432のIL−10産生誘導能を基準にして30%以上のIL−10産生誘導能を有し、且つ、OK432のIL−12産生誘導能を基準にして30%を超えないIL−12産生誘導能を有する、請求項1記載の免疫調節用組成物。
- 前記乳酸菌の菌体及び/又はその処理物は、IL−12産生誘導能が殆ど消失している、請求項1又は2記載の免疫調節用組成物。
- 食品用、医薬用、又は動物食餌用である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の免疫調節用組成物。
- エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)及び/又はラクトバチラス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)に属する乳酸菌の菌体及び/又はその処理物であって、pH4.5〜2.0の酸性条件下で120〜140℃の熱処理を施されたものからなり、OK432のIL−10産生誘導能を基準にして20%以上のIL−10産生誘導能を有し、且つ、OK432のIL−12産生誘導能を基準にして30%を超えないIL−12産生誘導能を有する、該菌体及び/又はその処理物の免疫調節用組成物の製造のための使用。
- 前記乳酸菌の菌体及び/又はその処理物は、OK432のIL−10産生誘導能を基準にして30%以上のIL−10産生誘導能を有し、且つ、OK432のIL−12産生誘導能を基準にして30%を超えないIL−12産生誘導能を有する、請求項5記載の使用。
- 前記乳酸菌の菌体及び/又はその処理物は、IL−12産生誘導能が殆ど消失している、請求項5又は6記載の使用。
- 前記免疫調節用組成物は、食品用、医薬用、又は動物食餌用である、請求項5〜7のいずれか1項に記載の使用。
- エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)及び/又はラクトバチラス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)に属する乳酸菌の菌体及び/又はその処理物に、pH4.5〜2.0の酸性条件下で120〜140℃の熱処理を行い、OK432のIL−10産生誘導能を基準にして20%以上のIL−10産生誘導能を有し、且つ、OK432のIL−12産生誘導能を基準にして30%を超えないIL−12産生誘導能を有する該菌体及び/又はその処理物を得ることを特徴とする免疫調節用組成物の製造方法。
- 前記熱処理を行い、OK432のIL−10産生誘導能を基準にして30%以上のIL−10産生誘導能を有し、且つ、OK432のIL−12産生誘導能を基準にして30%を超えないIL−12産生誘導能を有する該菌体及び/又はその処理物を得る、請求項9記載の免疫調節用組成物の製造方法。
- 前記乳酸菌の菌体及び/又はその処理物に、pH2.0〜3.5の酸性条件下で、120〜125℃の温度で、15〜30分間熱処理を行う、請求項9又は10記載の免疫調節用組成物の製造方法。
- 前記乳酸菌の菌体及び/又はその処理物に、pH2.0〜4.5の酸性条件下で、120〜125℃の温度で、20〜60分間熱処理を行う、請求項9又は10記載の免疫調節用組成物の製造方法。
- 請求項9〜12のいずれかの製造方法で得られた免疫調節用組成物を用いることを特徴とする食品の製造方法。
- 請求項9〜12のいずれかの製造方法で得られた免疫調節用組成物を用いることを特徴とする医薬品の製造方法。
- 請求項9〜12のいずれかの製造方法で得られた免疫調節用組成物を用いることを特徴とする動物食餌製品の製造方法。
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