JP6618602B2 - １−ｏ−アセチルブリタンニラトンスピロアリールイソオキサゾリン化合物およびその使用方法 - Google Patents

１−ｏ−アセチルブリタンニラトンスピロアリールイソオキサゾリン化合物およびその使用方法 Download PDF

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Description

本発明は、ここにすべての目的のためにその全体を参考として合体させる２０１７年１２月１５日に出願された中国特許出願第２０１７１１３４６２２７．１号の優先権を主張するものである。
本発明は、１−Ｏ−アセチルブリタンニラトンスピロアリールイソオキサゾリン化合物およびその使用方法に関する。
Inula japonica Thunb / Inula britannica Lは、Compositae属の伝統的な漢方薬である。１−Ｏ−アセチルブリタンニラトン（acetylbritannilatone）は、Inula japonica Thunb / Inula britannica Lの主成分である。そのアセチル化誘導体１，６−Ｏ，Ｏ−ジアセチルブリタンニラトンは、なんらかの抗腫瘍、抗喘息、抗炎症、およびその他の生理的活性を有すると報告されている。
炎症は、一般的であるが重要な基本的病理過程であり、様々な損傷因子に対する血管系を有する様々な組織の防御反応である。鼻炎、鼻炎、関節炎、アルツハイマー病、動脈硬化症、および癌を含む炎症および多くの疾患は、すべて密接に関連している。
喘息は、様々な炎症細胞に関与し得る複雑な気道炎症過程である。ロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）などの炎症因子が放出される。ＬＴＣ４産生の阻害は、喘息および気道炎症を制御するために重要である。新規なロイコトリエン産生阻害剤を開発する必要がある。
１つの実施形態において、本発明は、化学式Ｉまたは化学式ＩＩの化合物（１−Ｏ−アセチルブリタンニラトンスピロアリールイソオキサゾリン化合物）、または、薬学的に許容される当該化合物の塩を提供する。
Figure 0006618602
Figure 0006618602
ここで、Ｒ１はＯＨまたはＯＡｃであり；
ＸはＣまたはＮであり；
Ｒ２は、水素、アルキル基、アルコキシ基、ベンジルオキシ基、ハロアルキル基、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはハロゲンであり、ただし、ＸがＮである場合、Ｒ２には何の原子もない。
別実施例において、化学式Ｉまたは化学式ＩＩにおいて、
Ｘは、Ｃであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＮＯ２、またはＯＨである。
前述の一般的な説明および以下の詳細な説明の両方は、例示的かつ説明的であり、クレームされる本発明のさらなる説明を提供することを意図するものであると理解される。
以下、図面を参照して本発明の実施例について詳細に説明する。以下の実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
本発明は、１−Ｏ−アセチルブリタンニラトンスピロアリールイソオキサゾリン化合物または薬学的に許容される当該化合物の塩を提供する。当該化合物は化学式Ｉまたは化学式ＩＩを有する。
Figure 0006618602
Figure 0006618602
Ｒ１はＯＨまたはＯＡｃであり；
ＸはＣまたはＮであり；
Ｒ２は、水素、アルキル基、アルコキシ基、ベンジルオキシ基、ハロアルキル基、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはハロゲンであり、ただし、ＸがＮである場合、Ｒ２には何の原子もない。さらに、化学式Ｉおよび化学式ＩＩにおいて、スピロ炭素はキラル原子である。化学式Ｉおよび化学式ＩＩの化合物は、それらの個々のジアステレオ異性体に分離することができる。
１−Ｏ−アセチルブリタンニラトン（ＡＢＬ）は以下の構造を有する。
Figure 0006618602
化学式Ｉまたは化学式ＩＩの化合物は、以下の反応式１に従って調製することができる。
Figure 0006618602
（反応式１の試薬および条件）
（ａ）１）ＮＣＳ、ＤＭＦ、４０℃；２）ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ、Ｈ２Ｏ、室温；（ｂ）１ａ〜１ｊ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温；（ｃ）１）Ａｃ２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＡＰ、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２、室温；２）１ａ〜１ｊ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温；（ｄ）１）ＤＭＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温；２）１ａ〜１ｊ、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２、室温；
反応式中の化合物の置換基を以下の表１に列挙する。
Figure 0006618602
本発明の第２の目的は、抗炎症および抗喘息の分野における化学式Ｉおよび化学式ＩＩの化合物の使用を開示することである。それはこれらの化合物が肥満細胞ＬＴＣ４の産生を阻害することを特徴とする。試験濃度において、化合物２ｂ、２ｅ、２ｈ〜２ｊ、３ａ〜３ｅ、３ｈ〜３ｊ、４ｃ〜４ｅ、および４ｈ〜４ｉの阻害率は７０％を超える。炎症および喘息の病因におけるロイコトリエンの重要な役割を考慮して、上記の知見は、化学式Ｉおよび化学式ＩＩの化合物の抗炎症および抗喘息適用の可能性を示すものである。
〔実施例１〕化合物１ａ〜１ｊの調製
反応フラスコ中のアセトニトリルと水の混合物（体積比＝１：１）にアリールアルデヒド（反応式１の化学式ＩＶの化合物）を溶解し、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１．１当量）を室温で反応フラスコに加えた。反応物を室温で撹拌し、薄層クロマトグラフ（ＴＬＣ）でモニターした。反応完了時、減圧下で溶媒を除去して中間体を得た。中間体をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、ＤＭＦ溶液にＮ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）（１当量）を少しずつ加えた。反応溶液を４０℃で撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応完了時、酢酸エチル（反応混合物の２０倍）を加えて反応混合物を希釈し、酢酸エチル溶液を水で洗浄した（２０ｍＬ、５回）。酢酸エチル層を収集し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して化合物１ａ〜１ｊとした。化合物１ａ〜１ｊを精製せずに次の工程で使用した。
〔実施例２〕化合物２ａ〜２ｊの調製
化合物１ａ〜１ｊ（０．１６ｍｍｏｌ）をフラスコ中の０．７５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。次に、０．７５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（０．１３ｍｍｏｌ）および１−Ｏ−アセチルブリタンニラトン（０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応完了時、反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（抽出溶媒 ＰＥ：ＥＡ＝６：１〜３：１、体積比）で精製して化合物２ａ〜２ｊを得た。
（２．１）化合物２ａ、無色油状物、収率：４４．７％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.69 (d, J = 7.4 Hz, 1.4 Hz, 2H), 7.40-7.47 (m, 3H), 5.17 (m, 1H), 4.13 (s, 1H), 4.01 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.63 (s, 2H), 2.93 (dd, J = 5.9 Hz, 2.0 Hz, 1H), 2.72-2.77 (m, 2H), 2.48-2.53 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.13 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 173.00, 171.27, 156.33, 135.52, 130.77, 130.61, 128.86, 128.34, 126.97, 88.89, 76.95, 64.21, 63.92, 50.60, 36.68, 33.88, 33.85, 31.87, 26.99, 20.97, 20.24, 19.74.
（２．２）化合物２ｂ、無色油状物、収率：８２．２％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.71-7.75 (m, 2H), 7.12-7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.20-5.23 (m, 1H), 4.14 (s, 1H), 4.05 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.96 (dd, J = 5.8, 2.1 Hz , 1H), 2.74-2.79 (m, 2H), 2.53-2.58 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.15 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.87, 171.34, 164.21 (d, J = 250.4 Hz), 155.38, 135.53, 130.53, 129.08, 129.00, 124.64 (d, J = 3.4 Hz), 116.20, 115.98, 89.02, 77.08, 64.16, 63.99, 50.49, 36.65, 33.78, 33.77, 31.87, 27.02, 21.02, 20.30, 19.82.
（２．３）化合物２ｃ、無色油状物、収率：４５．９％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.20 (m, 1H), 4.11 (s, 1H), 4.04 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.61 (s, 2H), 2.93 (dd, J = 5.8, 2.0 Hz, 1H), 2.72-2.79 (m, 2H), 2.50-2.55 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.53-1.62 (m, 2H), 1.33-1.49 (m, 2H), 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.80, 171.29, 155.46, 136.80, 135.54, 130.67, 129.16, 128.22, 126.90, 89.26, 64.13, 64.00, 50.51, 36.45, 33.80, 31.86, 27.04, 20.99, 20.26, 19.79.
（２．４）化合物２ｄ、無色油状物、収率：６８．８％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.58 (s, 4H), 5.19 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 4.06 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.62 (s, 2H), 2.94 (dd, J = 4.7, 2.2Hz, 1H), 2.75 (m, 2H), 2.52-2.57 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.14 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.68, 171.21, 155.50, 135.61, 132.11, 130.70, 128.41, 127.39, 125.12, 89.30, 64.08, 50.52, 36.40, 33.81, 31.87, 27.06, 20.95, 20.24, 19.81.
（２．５）化合物２ｅ、無色油状物、収率：７０．５％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.20 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 4.06 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.94 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.77 (m, 2H), 2.50-2.55 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.46, 171.30, 155.17, 135.57, 132.71, 132.58, 130.69, 127.49, 118.13, 114.07, 90.01, 77.22, 64.05, 63.99, 50.41, 35.96, 33.76, 33.72, 31.87, 27.11, 20.98, 20.20, 19.78.
（２．６）化合物２ｆ、無色油状物、収率：６７．６％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.17 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 4.01 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 2.93 (d, J = 5.92, 2.0Hz, 1H), 2.72-2.77 (m, 2H), 2.47-2.52 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.12 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 173.09, 171.27, 156.27, 141.13, 135.51, 130.58, 129.55, 126.90, 125.50, 88.68, 64.22, 63.92, 50.63, 36.78, 33.90, 33.86, 31.87, 26.98, 21.50, 20.97, 20.24, 19.74.
（２．７）化合物２ｇ、無色油状物、収率：６３．３％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.20 (m, 1H), 4.13 (s, 1H), 4.02 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.48 (s, 2H), 2.93 (dd, J = 5.9, 1.9Hz, 1H), 2.72-2.77 (m, 2H), 2.48-2.53 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.13 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 173.14, 171.29, 161.55, 155.87, 135.54, 130.61, 128.56, 120.83, 114.28, 88.57, 76.90, 64.22, 63.97, 55.39, 50.64, 36.90, 33.90, 33.85, 31.87, 26.99, 20.98, 20.24, 19.76.
（２．８）化合物２ｈ、無色油状物、収率：６０．４％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.28 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.20 (m, 1H), 4.11 (s, 1H), 4.05 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 2.94 (dd, J = 5.8, 2.2 Hz, 1H), 2.70-2.77 (m, 2H), 2.52-2.57 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.12 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.47, 171.37, 154.97, 148.84, 135.54, 134.43, 130.72, 127.85, 124.09, 90.18, 77.32, 64.06, 63.92, 50.39, 36.00, 33.75, 33.69, 31.87, 27.11, 21.01, 20.28, 19.77.
（２．９）化合物２ｉ、無色油状物、収率：３９．６％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.71 (d, J = 5.7Hz, 2H), 7.63 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 5.20 (m, 1H), 4.11 (s, 1H), 4.06 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.96 (dd, J = 5.8, 2.2Hz, 1H), 2.73-2.77 (m, 2H), 2.53-2.57 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.42-1.57 (m, 2H), 1.19-1.40 (m, 2H), 1.14 (d, J = 7 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 173.14, 171.29, 161.55, 155.87, 135.54, 130.61, 128.56, 120.83, 114.28, 88.57, 76.90, 64.22, 63.97, 55.39, 50.64, 36.90, 33.90, 33.85, 31.87, 26.99, 20.98, 20.24, 19.76.
（２．１０）化合物２ｊ、無色油状物、収率：５２．６％。1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 10.03 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.81 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.78 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.44 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.34 (s, 3H), 2.80 (dd, J = 5.8, 2.2 Hz, 1H), 2.72-2.62 (m, 2H), 2.30 (q, J = 4.1 Hz, 1H), 1.94 (s, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.46-1.40 (m, 2H), 1.14-1.35 (m, 3H), 1.05 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, DMSO): δ 173.59, 170.32, 159.64, 156.17, 135.23, 128.60, 127.75, 118.88, 115.64, 87.75, 76.38, 63.77, 62.13, 50.37, 36.75, 33.72, 33.29, 31.09, 26.55, 20.62, 19.74.
〔実施例３〕化合物３ａ〜３ｊの調製
１−Ｏ−アセチルブリタンニラトン（１当量）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１．１当量）および無水酢酸（１．５当量）を６ｍＬの新しい無水ＣＨ２Ｃｌ２にフラスコ中で溶解した。混合物を室温で２０分間反応させた。反応が完了した後、氷水１０ｍＬを反応混合物に加え、２０分間撹拌した。次いで、混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出（１５ｍＬ、３回）し、塩化メチレン溶液をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、粗製１，６−Ｏ，Ｏ−ジアセチルブリタンニラトン（ＯＢＡＬ）に濃縮した。粗製の１，６−Ｏ，Ｏ−ジアセチルブリタンニラトンを、次の工程で使用するために、新しいクロマトグラフによって精製した。化合物１ａ〜１ｊ（０．１６ｍｍｏｌ）をフラスコ中の０．３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。次いで、０．７５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（０．１３ｍｍｏｌ）および１，６−Ｏ，Ｏ−ジアセチルブリタンニラトン（０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応完了時、反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（抽出溶媒 ＰＥ：ＥＡ＝６：１〜３：１、体積比）で精製して化合物３ａ〜３ｊを得た。
（３．１）化合物３ａ、淡黄色油状物、収率：４０．７％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.73-7.75 (m, 2H), 7.43-7.44 (m, 3H), 5.25 (s, 1H), 5.19-5.22 (m, 1H), 4.03-4.06 (m, 2H), 4.01 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.63 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.72-2.79 (m, 1H), 2.68 (s, 1H), 2.59-2.64 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.41, 171.20, 171.00, 156.79, 134.41, 130.90, 130.70, 128.80, 128.39, 127.11, 89.96, 76.91, 64.99, 64.16, 49.48, 36.11, 33.83, 33.73, 32.20, 26.74, 21.16, 20.97, 20.76, 18.54.
（３．２）化合物３ｂ、無色油状物、収率：７５．６％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.75-7.78 (m, 2H), 7.12-7.17 (m, 2H), 5.23 (s, 1H), 5.2-5.22 (m, 1H), 4.04-4.08 (m, 2H), 4.00 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.63 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.73-2.80 (m, 1H), 2.69 (s, 1H), 2.61-2.66 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.93 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.36, 171.24, 171.12, 164.07 (d, J= 250.1 Hz), 155.88, 134.46, 130.79, 129.23, 129.15, 124.66 (d, J = 3.2 Hz), 116.13, 115.91, 89.11, 64.96, 64.13, 49.43, 36.11, 33.77, 33.68, 32.22, 26.76, 21.21, 21.00, 20.79, 18.55.
（３．３）化合物３ｃ、無色油状物、収率：８１．８％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.69 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.21 (d, J = 3.0Hz, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.00-4.08 (m, 2H), 3.98 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.71-2.78 (m, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.60-2.65 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.25, 171.20, 171.09, 155.95, 136.75, 134.42, 130.83, 129.11, 128.38, 126.92, 89.29, 64.95, 64.10, 49.43, 35.91, 33.77, 33.70, 32.22, 26.91, 26.78, 21.17, 20.98, 20.77, 18.54.
（３．４）化合物３ｄ、無色油状物、収率：６９．３％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.64 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.21 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.00-4.08 (m, 2H), 3.98 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.71-2.78 (m, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.60-2.65 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.23, 171.20, 171.09, 156.05, 134.42, 132.07, 130.83, 128.57, 127.35, 125.11, 89.32, 64.94, 64.09, 49.43, 35.83, 33.77, 33.70, 32.22, 26.91, 26.78, 21.17, 20.99, 20.77, 18.54.
（３．５）化合物３ｅ、無色油状物、収率：７４．８％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.88 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.21 (d, J = 3.0Hz, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.00-4.13 (m, 2H), 4.00 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 3.64 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 2.61-2.78 (m, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 171.95, 171.20, 155.63, 134.45, 132.69, 132.54, 130.78, 127.64, 118.18, 114.07, 89.97, 64.88, 64.01, 49.35, 35.46, 33.71, 33.69, 32.23, 26.85, 21.15, 20.96, 20.75, 18.52.
（３．６）化合物３ｆ、無色油状物、収率：７０．４％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.64 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.26 (s, 1H), 5.20-5.22 (m, 1H), 4.05-4.09 (m, 2H), 4.00 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 3.63 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.73-2.80 (m, 1H), 2.69 (s, 1H), 2.62-2.67 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.94 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.45, 171.15, 170.90, 156.73, 140.99, 134.36, 130.97, 129.47, 127.04, 125.59, 88.76, 65.04, 64.14, 49.51, 36.22, 33.87, 33.74, 32.19, 26.75, 26.78, 21.47, 21.13, 20.94, 20.73, 18.52.
（３．７）化合物３ｇ、無色油状物、収率：５５．２％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.27 (s, 1H), 5.20-5.23 (m, 1H), 4.07 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.00 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.62 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.73-2.80 (m, 1H), 2.67 (s, 1H), 2.61-2.66 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.94 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.51, 171.16, 170.90, 161.54, 156.33, 134.36, 130.98, 128.70, 120.95, 114.23, 88.65, 76.83, 65.07, 64.13, 55.37, 49.54, 36.32, 33.87, 33.74, 32.19, 26.77, 21.14, 20.94, 20.73, 18.52.
（３．８）化合物３ｈ、無色油状物、収率：７９．５％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.30 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.22-5.24 (m, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.05-4.15 (m, 2H), 4.04 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.84 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 2.73-2.79 (m, 1H), 2.69 (s, 1H), 2.62-2.67 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.93 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 171.92, 171.26, 155.43, 148.88, 134.48, 134.43, 130.75, 128.01, 124.06, 90.16, 77.12, 76.91, 64.88, 64.02, 49.33, 35.51, 33.68, 32.25, 26.88, 21.18, 21.00, 20.78, 18.55.
（３．９）化合物３ｉ、無色油状物、収率：４９．７％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.73 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 5.21-5.22 (m, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.04-4.10 (m, 2H), 4.00 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 3.64 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.73-2.78 (m, 1H), 2.68 (s, 1H), 2.61-2.66 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 171.89, 171.24, 171.21, 155.39, 150.24, 136.06, 134.46, 130.79, 121.07, 90.08, 77.09, 64.86, 64.04, 49.35, 35.16, 33.72, 33.70, 32.24, 26.86, 21.17, 20.99, 20.77, 18.54.
（３．１０）化合物３ｊ、無色油状物、収率：５７．１％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.56 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.25 (s, 1H), 5.22-5.19 (m, 1H), 4.05 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.58 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.79-2.72 (m, 1H), 2.67 (brs, 1H), 2.65-2.60 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.51-1.57 (m, 1H), 1.26-1.43 (m, 2H), 1.05-1.08 (m, 1H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 172.72, 171.51, 171.40, 158.12, 156.37, 134.57, 130.84, 128.89, 120.64, 115.73, 88.59, 77.23, 65.23, 64.28, 49.48, 36.33, 33.85, 33.72, 32.20, 26.73, 21.23, 21.01, 20.78, 18.54.
〔実施例４〕
デス−マーチンペルヨージナン（１．１当量）を、０．３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に０℃で溶解した。０．６ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１−Ｏ−アセチルブリタンニラトン（１当量）を、ペルヨージナン溶液に添加した。次いで、混合物を室温で１８時間反応させ、ＴＬＣでモニターした。反応が完了した後、混合物を減圧下で濃縮して、１−Ｏ−アセチル−６−オキソブリタンニラトン粗生成物を得た。１−Ｏ−アセチル−６−オキソブリタンニラトン粗生成物を、次の工程で使用するために新しいクロマトグラフィー（抽出溶媒 ＰＥ：ＥＡ＝８：１〜４：１、体積比）により精製した。化合物１ａ〜１ｊ（０．１６ｍｍｏｌ）をフラスコ中の０．３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。次いで、０．７５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中のトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（０．１３ｍｍｏｌ）および１−Ｏ−アセチル−６−オキソブリタンニラトン（０．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、ＴＬＣでモニターした。反応完了時、反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をシリカカラムクロマトグラフィー（抽出溶媒 ＰＥ：ＥＡ＝６：１〜３：１、体積比）で精製して化合物４ａ〜４ｊを得た。
（４．１）化合物４ａ、無色油状物、収率：３５．１％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.712-7.73 (m, 2H), 7.40-7.45 (m, 3H), 5.29-5.31 (m, 1H), 4.09 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.95-4.05 (m, 2H), 3.53 (d, J = 17.5Hz, 1H), 3.17 (d, J = 4.7Hz, 1H), 2.79-2.93 (m, 2H), 2.66-2.75 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.42-1.61 (m, 3H), 1.24-1.30 (m, 1H), 1.19 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 191.24, 171.76, 171.16, 157.79, 151.09, 139.32, 130.33, 128.82, 128.26, 127.17, 89.10, 76.70, 64.09, 52.67, 36.68, 33.87, 33.47, 30.01, 27.50, 21.69, 20.98, 19.12.
（４．２）化合物４ｂ、無色油状物、収率：３３．６％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.73-7.78 (m, 2H), 7.13-7.17 (m, 2H), 5.30-5.33 (m, 1H), 4.08 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.96-4.09 (m, 2H), 3.53 (d, J = 17.5Hz, 1H), 3.18 (d, J = 4.7Hz, 1H), 2.81-2.95 (m, 2H), 2.68-2.77 (m, 1H), 2.06 (s, 6H), 1.43-1.62 (m, 3H), 1.22-1.29 (m, 1H), 1.21 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 190.20, 171.65, 171.09, 164.21 (d, J = 250.4 Hz), 156.82, 151.13, 139.34, 129.26, 129.18, 124.57 (d, J = 3.1 Hz), 116.12, 115.90, 89.21, 75.06, 64.02, 52.60, 36.72, 33.86, 33.45, 30.02, 27.53, 21.67, 20.94, 19.08.
（４．３）化合物４ｃ、無色油状物、収率：５０．４％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 5.28-5.31 (m, 1H), 4.06 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.94-4.07 (m, 2H), 3.50 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.16 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.79-2.93 (m, 2H), 2.66-2.75 (m, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.40-1.63 (m, 3H), 1.22-1.29 (m, 1H), 1.19 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 191.17, 171.63, 171.16, 156.91, 151.25, 139.32, 136.87, 129.14, 128.42, 126.79, 89.35, 75.11, 64.05, 52.55, 36.50, 33.84, 33.47, 29.99, 27.53, 21.71, 20.99, 19.11.
（４．４）化合物４ｄ、無色油状物、収率：６３．６％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 5.28-5.30 (m, 1H), 4.06 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 3.94-4.07 (m, 2H), 3.50 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 3.15 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.79-2.93 (m, 2H), 2.65-2.74 (m, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.40-1.63 (m, 3H), 1.22-1.30 (m, 1H), 1.19 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 191.14, 171.60, 171.14, 157.00, 151.25, 139.30, 132.09, 128.60, 127.22, 125.21, 89.36, 75.11, 64.03, 52.52, 36.43, 33.83, 33.46, 29.99, 27.53, 21.70, 20.99, 19.09.
（４．５）化合物４ｅ、無色油状物、収率：５７％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.30-5.32 (m, 1H), 4.09 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.94-4.15 (m, 2H), 3.53 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.17 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.81-2.95 (m, 2H), 2.66-2.75 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.43-1.62 (m, 3H), 1.22-1.29 (m, 1H), 1.19 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 190.97, 171.36, 171.16, 156.57, 151.50, 139.27, 132.57, 127.67, 118.18, 114.16, 89.89, 75.18, 63.99, 52.39, 36.06, 33.79, 33.48, 29.94, 27.59, 21.74, 21.05, 20.99, 19.08.
（４．６）化合物４ｆ、無色油状物、収率：２６．８％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.63 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 5.30-5.33 (m, 1H), 4.01 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 3.97-4.08 (m, 2H), 3.52 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 3.18 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.80-2.94 (m, 2H), 2.68-2.77 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.42-1.67 (m, 3H), 1.25-1.34 (m, 1H), 1.21 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 191.29, 171.81, 171.09, 157.70, 150.94, 141.10, 139.36, 129.49, 127.09, 125.45, 88.93, 75.03, 64.08, 52.70, 36.79, 33.89, 33.45, 30.06, 27.49, 21.65, 21.47, 20.94, 19.10.
（４．７）化合物４ｇ、無色油状物、収率：５２．９％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.28-5.31 (m, 1H), 4.05 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 3.94-4.06 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.50 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 3.15 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.78-2.92 (m, 2H), 2.67-2.73 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.40-1.63 (m, 3H), 1.22-1.29 (m, 1H), 1.20 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 191.37, 171.91, 171.18, 161.59, 157.33, 151.05, 139.33, 128.77, 120.76, 114.23, 88.84, 75.06, 64.10, 55.40, 52.72, 36.88, 33.47, 30.01, 27.50, 21.70, 21.00, 19.14.
（４．８）化合物４ｈ、無色油状物、収率：４７．６％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.3 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.30-5.33 (m, 1H), 4.12 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 3.94-4.08 (m, 2H), 3.57 (d, J = 17.5Hz, 1H), 3.19 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.82-2.95 (m, 2H), 2.67-2.76 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.40-1.63 (m, 3H), 1.22-1.29 (m, 1H), 1.20 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 190.93, 171.31, 171.16, 156.33, 151.52, 148.94, 139.28, 134.30, 128.02, 124.06, 90.04, 76.71, 63.97, 52.36, 36.13, 33.79, 33.48, 29.96, 27.60, 21.73, 20.98, 19.07.
（４．９）化合物４ｉ、無色油状物、収率：１８．３％。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.73 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 5.30-5.33 (m, 1H), 4.08 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.93-4.10 (m, 2H), 3.53 (d, J = 17.6Hz, 1H), 3.18 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.81-2.95 (m, 2H), 2.66-2.75 (m, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.40-1.63 (m, 3H), 1.22-1.29 (m, 1H), 1.19 (d, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 190.86, 171.24, 171.20, 156.24, 151.50, 149.76, 139.27, 136.42, 121.25, 124.06, 90.07, 76.19, 63.98, 52.34, 35.68, 33.77, 33.50, 29.93, 27.60, 21.74, 19.09, 17.46.
〔実施例５〕
マウス骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）におけるロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）産生に対する化合物の阻害効果
（５．１）ＢＭＭＣの抽出
（１）実験動物
６週齢の雌Ｂａｌｂ／Ｃマウス（特定の病原体なし）。
（２）抽出工程
頸部脱臼によりマウスを屠殺した。マウスの死を確認した後、アルコールに３〜５分間浸漬した。クリーンベンチ上でピンセットとはさみでマウスの背中の皮膚を切断した。脾臓を取り出し、フィルターに入れた。フィルターを無血清培地を含むペトリ皿に入れた。脾臓を２×１０６細胞／ｍＬの細胞濃度を有する細胞懸濁液に粉砕した。２．５μｇ／ｍＬのレクチンを加え、細胞懸濁液をＲＰＭＩ１６４０培地で５日間培養した。上清を回収した。マウスの大腿骨を除去し、骨の関節を切断した。無血清培地を用いて骨髄を遠心チューブに洗浄した。次いで、骨髄含有培地を遠心分離し、上清を捨て、ペレットを赤色骨髄とした。
（３）細胞培養
ＲＰＭＩ１６４０、１０％ Ｇｉｂｃｏ ＦＢＳ、２０％脾臓上清、１％ＡＥＰＳ、１％ＭＥＭ、１％二重抗体で４週間培養した。
（５．２）化合物の非細胞傷害性濃度を決定するためのＭＴＴアッセイ
（１）ＭＴＴ溶液の調製ＭＴＴ（（２−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−３，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾールの量を秤量し、５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液を調製した。ＭＭＴをＰＢＳ（溶媒）に溶解し、０．２２μｍの微多孔膜を用いて濾過した。溶液は淡黄色で−２０℃で保存した。
（２）方法
ウェル当り１００μＬで２×１０５／ｍＬの密度で９６ウェルプレートにＢＭＭＣを播種し、異なる濃度の化合物を添加した。ブランク対照として１００μＬの培養培地および１００μＬのＰＢＳを使用した。７時間後、２０μＬのＭＭＴ（５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加した。次いで、プレートをインキュベーター（５％ＣＯ２、３７℃）中に４時間置いた。反応が完了した後、上清を捨て、１５０μＬのＤＭＳＯを各ウェルに添加した。混合後、吸光度（ＯＤ値）をマイクロプレートリーダーを用いて、波長４９０ｎｍにおいて測定した。
細胞生存率＝（ＯＤ化合物 − ＯＤ培養培地）／（ＯＤＰＢＳ−ＯＤ培養培地）×１００％
１０μＭでの化合物のＢＭＭＣの増殖に対する阻害率を表２に示す。
表２：化合物によるＢＭＭＣの増殖に対する阻害
Figure 0006618602
（５．３）ＢＭＭＣからの炎症因子ＬＴＣ４の放出に対する化合物の効果
（１）原理
この実験は、ＬＴＣ４抗血清の量を決定するための、ＬＴＣ４のＬＴＣ４−アセチルコリンエステラーゼコンジュゲート（ＬＴＣ４トレーサー）への競合的結合に基づくものである。ＬＴＣ４トレーサーの濃度は一定であり、ＬＴＣ４の濃度は変化するので、ＬＴＣ４抗血清に結合したＬＴＣ４トレーサーの量は、ＬＴＣ４の量に反比例する。抗体−ＬＴＣ４複合体はネズミモノクローナル抗ウサギＩｇＧに結合するが、ネズミモノクローナル抗ウサギＩｇＧはあらかじめキットにコンジュゲートされている。反応系が安定化した後、未結合試薬を洗い流した。エルマン試薬（アセチルコリンエステラーゼを含む基質）を添加した。酵素反応は明確な黄色反応を示し、４０５ｎｍにおいて強い吸収を示した。色深度を分光光度法により測定し、ここで色深度はＬＴＣ４トレーサーの量に比例し、ＬＴＣ４トレーサーの量はＬＴＣ４の量に反比例する。
（２）方法：
（ａ）サンプルの調製
成熟ＢＭＭＣを培養し、一晩ＩｇＥを添加し、ＰＢＳで３回洗浄し、次いで９６ウェルプレート（１×１０６細胞／ウェル）に広げた。試験化合物溶液をプレートに添加し、プレートを１〜１．５時間インキュベートし、ＤＮＰ−ＨＳＡで１５分間刺激した。次いで、溶液を３０００ｒｐｍで３分間、４℃で遠心分離し、上清を回収し、ＲＰＭＩ１６４０で５倍に希釈して試料溶液を得た。
（ｂ）ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ反応
キット説明書に従って試薬を添加し、４℃で１８時間反応させ、洗浄緩衝液で洗浄した。エルマン試薬２００μＬを各ウェルに添加し、４０分間反応させた。
（ｃ）吸光度の測定
吸光度を４０５ｎｍにおいて測定した。
（３）結果
１０μＭの濃度でのＢＭＭＣによるＬＴＣ４の産生に対する前記化合物の阻害率を表３に示す。
表３：ＢＭＭＣ（１０μＭ）によるＬＴＣ４産生に対する化合物の阻害率（％）
Figure 0006618602
本発明の要旨または範囲から逸脱することなく、本発明において様々な変更および変形が可能であることは、当業者には明らかであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内に入るならば、本発明の改変および変形を包含することが意図される。

Claims (2)

  1. 化学式Ｉもしくは化学式ＩＩの化合物、または、薬学的に許容される当該化合物の塩であって、
    Ｒ１はＯＨまたはＯＡｃであり；
    ＸはＣまたはＮであり；
    Ｒ２はＨ、アルキル基、アルコキシ基、ベンジルオキシ基、ハロアルキル基、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２またはハロゲンであり、ただし、ＸがＮである場合、Ｒ２には何の原子もない化合物。
    Figure 0006618602
    Figure 0006618602
  2. Ｘは、Ｃであり、
    Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、ＮＯ２、またはＯＨである請求項１に記載の化合物。
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