JP6609399B2 - アッセイを行うための組成物および方法 - Google Patents
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Description
a.
i.少なくとも1つの酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含む、少なくとも1つの酵素反応性の潜在的なフルオロフォア、および
ii.少なくとも1つの接合基によって潜在的なフルオロフォアに接続可能な担持部を含むフルオロフォア組成物を与えること;
b.分析対象の試験サンプルおよび分析対象の参照サンプルを与えること;
c.試験サンプルと潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の消光しない酵素は、潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第2の酵素は、検体と反応することが可能であること;
d.参照サンプルと、潜在的なフルオロフォア組成物および少なくとも1つの第1の消光しない酵素とを接触させること;
e.試験サンプルの蛍光シグナルおよび参照サンプルの蛍光シグナルを測定すること;および
f.試験サンプルの蛍光シグナルと、参照サンプルの蛍光シグナルとを比較すること。
a.
i.少なくとも1つの酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含む、少なくとも1つの酵素反応性の潜在的なフルオロフォア、および
ii.少なくとも1つの接合基によって潜在的なフルオロフォアに接続可能な担持部を含むフルオロフォア組成物を与えること;
b.分析対象の試験サンプルおよび分析対象の参照サンプルを与え、ここで、参照サンプルは、既知の量の検体を含んでいること;
c.試験サンプルと潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の消光しない酵素は、潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第2の酵素は、検体と反応することが可能であること;
d.参照サンプルと、潜在的なフルオロフォア組成物および少なくとも1つの第1の消光しない酵素とを接触させること;
e.試験サンプルの蛍光シグナルおよび参照サンプルの蛍光シグナルを測定すること;および
f.試験サンプルの蛍光シグナルと、参照サンプルの蛍光シグナルとを比較すること。
a.
i.少なくとも1つの第1の酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含む、少なくとも1つの第1の酵素反応性の潜在的なフルオロフォア、および
ii.少なくとも1つの接合基によって少なくとも1つの第1の潜在的なフルオロフォアに接続可能な少なくとも1つの担持部を含む第1のフルオロフォア組成物を与えること;
b.
i.少なくとも1つの第2の酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含み、前記第1のフルオロフォア組成物中で、前記第1の酵素反応性の潜在的なフルオロフォアとは異なる、少なくとも1つの第2の酵素反応性の潜在的なフルオロフォア、および
ii.少なくとも1つの接合基によって少なくとも1つの第1の潜在的なフルオロフォアに接続可能な、少なくとも1つの担持部を含む、第2のフルオロフォア組成物を与えること;
c.分析対象の試験サンプルおよび分析対象の参照サンプルを与えること;
d.試験サンプルと、第1の潜在的なフルオロフォア組成物および第2の潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の消光しない酵素は、第1の潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第2の消光しない酵素は、第2の潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であること;
e.参照サンプルと、第1の潜在的なフルオロフォア組成物および第2の潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させること;
f.試験サンプルの蛍光シグナルおよび参照サンプルの蛍光シグナルを測定すること;および
g.試験サンプルの蛍光シグナルと、参照サンプルの蛍光シグナルとを比較すること。
a.
i.少なくとも1つの酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含む、少なくとも1つの潜在的なフルオロフォアと、
ii.少なくとも1つの接続基によって潜在的なフルオロフォアに接続可能な担持部とを含む、フルオロフォア組成物を調製すること;
b.分析対象の試験サンプルおよび分析対象の参照サンプルを与え、参照サンプルは、既知の量の検体を含むこと;
c.試験サンプルと潜在的なフルオロフォア組成物を接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の消光しない酵素は、潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第2の酵素は、検体と反応することが可能であること;
d.参照サンプルと、潜在的なフルオロフォア組成物および少なくとも1つの第1の消光しない酵素とを接触させることと;
e.試験サンプルの蛍光シグナルおよび参照サンプルの蛍光シグナルを測定すること;および
f.試験サンプルの蛍光シグナルと、参照サンプルの蛍光シグナルを比較すること。
a.
i.少なくとも1つの第2の酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含み、前記第1のフルオロフォア組成物中で、前記第1の酵素反応性の潜在的なフルオロフォアとは異なる、少なくとも1つの第2の酵素反応性の潜在的なフルオロフォア、および
ii.少なくとも1つの接合基によって少なくとも1つの第1の潜在的なフルオロフォアに接続可能な、少なくとも1つの担持部を含む、第2のフルオロフォア組成物を与えること;
b.試験サンプルと、第1の潜在的なフルオロフォア組成物および第2の潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の消光しない酵素は、第1の潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第2の消光しない酵素は、第2の潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であること;
c.参照サンプルと、第1の潜在的なフルオロフォア組成物および第2の潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させること。
Claims (5)
- a.
i.少なくとも1つの酵素反応性消光基、および
ii.少なくとも1つの接合基を含む、少なくとも1つの潜在的なフルオロフォアと;
b.少なくとも1つの潜在的なフルオロフォアに接続可能な少なくとも1つの担持部とを含み、
少なくとも1つの担持部は、ピロール−2,5−ジオン基を含む生物接続基、PEGリンカー、ビオチン基、およびこれらの組み合わせから選択される少なくとも1つの接合基によって、少なくとも1つの潜在的なフルオロフォアに接続し、
少なくとも1つの潜在的なフルオロフォアは、トリメチルロックフルオロフォア、化学式1、化学式2、化学式3の化合物、およびこれらの組み合わせから選択され、
担持部は、微小球から選択される、組成物。 - サンプル中の検体を検出および/検体の濃度を測定する方法であって、この方法は、
a.請求項1に記載の組成物を与えることと;
b.試験サンプルおよび参照サンプルを与えることと;
c.試験サンプルと前記組成物とを接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の酵素反応性消光基を放出させる酵素は、潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第1の酵素反応性消光基を放出させる酵素は、検体と反応すると、NADHまたはNADPHを作ることができ、デヒドロゲナーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、およびこれらの組み合わせから選択され、少なくとも1つの第2の酵素は、検体と反応することが可能であり、少なくとも1つの第2の酵素は、ジアホラーゼ、エステラーゼ、ホスファターゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、およびこれらの組み合わせから選択されることと;
d.参照サンプルと、潜在的なフルオロフォア組成物および少なくとも1つの第1の酵素反応性消光基を放出させる酵素とを接触させることと;
e.試験サンプルの蛍光シグナルおよび参照サンプルの蛍光シグナルを測定することと;
f.試験サンプルの蛍光シグナルと、参照サンプルの蛍光シグナルとを比較することと;
g.潜在的なフルオロフォアを、微小球から選択される担持部に接続することと、
h.前記サンプルから、潜在的なフルオロフォア組成物を単離することと
を含む、方法。 - 前記少なくとも1つの第1の酵素反応性消光基を放出させる酵素と前記少なくとも1つの第2の酵素が同じである、請求項2に記載の方法。
- サンプル中の少なくとも2種類の酵素を測定する方法であって、この方法は、
a.請求項1に記載の第1のフルオロフォア組成物を与えることと;
b.
i.少なくとも1つの第2の酵素反応性消光基および少なくとも1つの接合基を含み、前記第1のフルオロフォア組成物中で、第1の酵素反応性の潜在的なフルオロフォアとは異なる、少なくとも1つの第2の酵素反応性の潜在的なフルオロフォア、および
ii.少なくとも1つの接合基によって少なくとも1つの第1の潜在的なフルオロフォアに接続可能な、少なくとも1つの微小球から選択される担持部、
を含む、第2のフルオロフォア組成物を与えることと、
c.分析対象の試験サンプルおよび分析対象の参照サンプルを与えることと;
d.試験サンプルと、第1の潜在的なフルオロフォア組成物および第2の潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させ、ここで、少なくとも1つの第1の酵素反応性消光基を放出させる酵素は、第1の潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であり、少なくとも1つの第2の酵素反応性消光基を放出させる酵素は、第2の潜在的なフルオロフォアから酵素反応性消光基を放出させることが可能であることと;
e.参照サンプルと、第1の潜在的なフルオロフォア組成物および第2の潜在的なフルオロフォア組成物とを接触させることと;
f.試験サンプルの蛍光シグナルおよび参照サンプルの蛍光シグナルを測定することと;
g.試験サンプルの蛍光シグナルと、参照サンプルの蛍光シグナルとを比較することと;
h.少なくとも1つの第1の酵素の蛍光シグナルと、少なくとも1つの第2の酵素の蛍光シグナルを区別することとを含む、方法。 - 担持部が磁性微小球から選択される、請求項1に記載の組成物。
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