JP6607204B2 - アルカン合成能を有する組換え微生物及びアルカンの製造方法 - Google Patents
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Description
(1)藍藻由来のアシルACPレダクターゼ遺伝子及びデカルボニラーゼ遺伝子を外来遺伝子として有する組換え微生物において、
藍藻由来の4種類のフェレドキシン遺伝子をそれぞれFD遺伝子1、FD遺伝子2、FD遺伝子3及びFD遺伝子4とし、藍藻由来の3種類のフェレドキシンレダクターゼ遺伝子をそれぞれFDR遺伝子1、FDR遺伝子2及びFDR遺伝子3としたときに、以下の組み合わせでフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を有することを特徴とする、アルカン合成能を有する組換え微生物。
・FD遺伝子1及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子1及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子3の組み合わせ
・FD遺伝子3及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子3及びFDR遺伝子3の組み合わせ
・FD遺伝子4及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子4及びFDR遺伝子2の組み合わせ
FD遺伝子1は[a1]又は[b1]のタンパク質をコードし、
[a1]配列番号2のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b1]配列番号2のアミノ酸配列に対して61.2%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FD遺伝子2は[a2]又は[b2]のタンパク質をコードし、
[a2]配列番号4のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b2]配列番号4のアミノ酸配列に対して60%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FD遺伝子3は[a3]又は[b3]のタンパク質をコードし、
[a3]配列番号6のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b3]配列番号6のアミノ酸配列に対して62.9%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FD遺伝子4は[a4]又は[b4]のタンパク質をコードし、
[a4]配列番号8のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b4]配列番号8のアミノ酸配列に対して62.3%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FDR遺伝子1は[c1]又は[d1]のタンパク質をコードし、
[c1]配列番号10のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d1]配列番号10のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
FDR遺伝子2は[c2]又は[d2]のタンパク質をコードし、
[c2]配列番号12のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d2]配列番号12のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
FDR遺伝子3は[c3]又は[d3]のタンパク質をコードし、
[c3]配列番号14のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d3]配列番号14のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
(2) 上記藍藻由来のデカルボニラーゼ遺伝子は以下の[e]又は[f]のタンパク質をコードすることを特徴とする(1)記載の組換え微生物。
[e]配列番号16のアミノ酸配列を有するタンパク質
[f]配列番号16のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、デカルボニラーゼ活性を有するタンパク質
(3) 上記藍藻由来のアシルACPレダクターゼ遺伝子は以下の[g]又は[h]のタンパク質をコードすることを特徴とする(1)記載の組換え微生物。
[g]配列番号18のアミノ酸配列を有するタンパク質
[h]配列番号18のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、アシルACPレダクターゼ活性を有するタンパク質
(4) 大腸菌又はKlebsiella属細菌を宿主とすることを特徴とする(1)記載の組換え微生物。
(5) 上記(1)〜(4)のいずれかに記載の組換え微生物を培養する工程を含むアルカンの製造方法。
(6) 上記組換え微生物を培養する培地よりアルカンを回収する工程を更に含むことを特徴とする(5)記載のアルカンの製造方法。
(7) 上記組換え微生物を培養する培地よりアルカンを回収し、回収したアルカンを精製する工程を更に含むことを特徴とする(5)記載のアルカンの製造方法。
(8) 炭素数9〜20のアルカンを製造することを特徴とする(5)記載のアルカンの製造方法。
本発明は、藍藻由来のアシルACPレダクターゼ遺伝子及びデカルボニラーゼ遺伝子を外来遺伝子として有する組換え微生物であって、特定の組み合わせのフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を有する組換え微生物である。フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を特定の組み合わせで有する組換え微生物は、フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を異なる組み合わせで有する組換え微生物と比較してアルカン合成能が高いといった特徴を有する。
[フェレドキシン遺伝子]
フェレドキシンとは、内部に鉄-硫黄クラスター(Fe-Sクラスター)を含む鉄硫黄タンパク質であり、電子伝達体として機能するタンパク質である。上述した特定の組み合わせに用いることができるフェレドキシン遺伝子は、藍藻が有する多くのフェレドキシン遺伝子から選ばれる4種類のフェレドキシン遺伝子である。これら4種類のフェレドキシン遺伝子をそれぞれFD遺伝子1、FD遺伝子2、FD遺伝子3及びFD遺伝子4と称する。
[a1]配列番号2のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b1]配列番号2のアミノ酸配列に対して61.2%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
[a2]配列番号4のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b2]配列番号4のアミノ酸配列に対して60%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
[a3]配列番号6のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b3]配列番号6のアミノ酸配列に対して62.9%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
[a4]配列番号8のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b4]配列番号8のアミノ酸配列に対して62.3%より高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
フェレドキシンレダクターゼ遺伝子は、フェレドキシン-NADP+レダクターゼ(ferredoxin-NADP+ reductase、FNR)をコードする遺伝子である。上述した特定の組み合わせに用いることができるフェレドキシンレダクターゼ遺伝子は、藍藻が有する多くのフェレドキシンレダクターゼ遺伝子から選ばれる3種類のフェレドキシンレダクターゼ遺伝子である。これら3種類のフェレドキシン遺伝子をそれぞれFDR遺伝子1、FDR遺伝子2及びFDR遺伝子3と称す。
[c1]配列番号10のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d1]配列番号10のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
[c2]配列番号12のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d2]配列番号12のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
[c3]配列番号14のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d3]配列番号14のアミノ酸配列に対して60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
上述したフェレドキシン遺伝子(FD遺伝子1〜4)及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子(FDR遺伝子1〜3)の組み合わせは、以下の9通りである。
・FD遺伝子1及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子1及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子3の組み合わせ
・FD遺伝子3及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子3及びFDR遺伝子3の組み合わせ
・FD遺伝子4及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子4及びFDR遺伝子2の組み合わせ
以上の9通りの組み合わせのいずれかを有する組換え微生物は、いずれの組み合わせも有しない微生物(例えば、異なる組み合わせを有する組換え微生物)と比較して優れたアルカン生産能を有することとなる。
本発明において、上述したフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を導入する微生物は、アルカン合成能を有する微生物又はアルカン合成能を付与された組換え微生物である。
Aspergillus oryzae RIB40由来のXP_001822148、XP_001821214、XP_001826612、XP_001817160、XP_001817372、XP_001727192、XP_001826641、XP_001827501、XP_001825957、XP_001822309、XP_001727308、XP_001818713、XP_001819060、XP_001823047、XP_001817717及びXP_001821011;Zea mays由来のNP_001150417、NP_001105047、NP_001147173、NP_001169123、NP_001105781、NP_001157807、NP_001157804、NP_001105891、NP_001105046、NP_001105576、NP_001105589、NP_001168661、NP_001149126及びNP_001148092;Arabidopsis thaliana由来のNP_564204、NP_001185399、NP_178062、NP_001189589、NP_566749、NP_190383、NP_187321、NP_190400、NP_001077676及びNP_175812;Drosophila melanogaster由来のNP_733183、NP_609285、NP_001014665、NP_649099、NP_001189159、NP_610285及びNP_610107;Rattus norvegicus由来のNP_001006999、XP_001067816、XP_001068348、XP_001068253、NP_113919、XP_001062926、NP_071609、NP_071852、NP_058968、NP_001011975、NP_115792、NP_001178017、NP_001178707、NP_446348、NP_071992、XP_001059375、XP_001061872及びNP_001128170;Homo sapiens由来のNP_036322、NP_001193826、NP_001029345、NP_000684、NP_000680、NP_000683、NP_000681、NP_001071、NP_000687、NP_001180409、NP_001173、NP_000682、NP_000373、NP_001154976、NP_000685及びNP_000686;Klebsiella sp. NBRC100048株由来のKPN_02991、KPN_1455及びKPN_4772等を挙げることができる。
以上で説明したように、本発明によれば、アルカン合成能を有する微生物や、アルカン合成能を付与された組換え微生物に対して特定のフェレドキシン遺伝子やフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を導入した組換え微生物を使用することでアルカンを優れた生産性で合成できる。
[1.目的]
本実施例では、アルカン合成能を付与するために宿主に導入するデカルボニラーゼ遺伝子と同じ由来であるN. puntioforme PCC 73102株においてフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を予測し、これらを特定の組み合わせでE. coliに同時導入(共発現)して、アルカン生産に及ぼす影響を調べた。調べる遺伝子は、早くからゲノムが公開されているNostoc sp. PCC 7120において、フェレドキシンとアノテーションされているalr0784、all1430、asr2513、all2919及びall4148、フェレドキシンレダクターゼとアノテーションされているall4121、フェレドキシンオキシレダクターゼとアノテーションされているalr3707に対して、アミノ酸配列で70%以上の相同性を持つ遺伝子とした。
2.1 試薬
製造メーカを記載していない試薬は、ナカライテスクから購入した。
E. coli Rosetta (DE3)株はNovagen社より、 E. coli BL21 (DE3)とE. coli JM109はタカラバイオ社より購入した。Klebesiella sp. NBRC100048株は独立行政法人製品評価技術基盤機構から分譲を受けた。
10mlの Bacto Yeast extract(Difco社製)10%溶液、50mlの20%グルコース溶液、1mlの1M MgSO4、1mlの1%チアミン溶液、0.1mlの1M CaCl2溶液、100mlのMP biomedicals社製10X M9培地に、必要な抗生物質溶液を加え、滅菌水で1000mlにメスアップした。
N. punctiforme PCC 73102株のゲノム配列から、Nostoc sp. PCC 7120の、alr0784(アノテーション:フェレドキシン)、all1430(アノテーション:ヘテロシスト フェレドキシン、fdxH)、asr2513(アノテーション:フェレドキシン、fdxB)、all2919(アノテーション:フェレドキシン)、all4148(アノテーション:フェレドキシンI、petF)、all4121(アノテーション:フェレドキシン-NADP(+)レダクターゼ、petH)、alr3707(アノテーション:フィコシアノビリン、フェレドキシンオキシレダクターゼ)とアミノ酸配列で70%以上の相同性がある遺伝子として、YP_001865390、YP_001866231、YP_001868825、YP_001864061、YP_001864105、YP_001864826、YP_001865513、YP_001867060を選抜して、GeneScript社に合成委託した。合成に際しては、S. cerevisiae またはE. coli のコドン使用頻度に基づきコドンを最適化し、元のゲノム配列のIDと区別して、表1のように命名した。
2.5.1 pCDF-FDR類の作製
表4に示す鋳型DNAとプライマー(使用したプライマーの塩基配列は後述する。以下同様)の組み合わせでPCRを行い、増幅したDNA断片を制限酵素NdeIとPacIで消化したpCDFDuet-1(ノバジェン社製)にIn-Fusion HD Cloning kit(Invitrogen社製)を用いて挿入し、得られたプラスミドをそれぞれpCDF-FDR1、pCDF-FDR2、pCDF-FDR3と命名した。pCDFDuet-1はストレプトマイシン耐性遺伝子を持ち、pCDF-FDR類の形質転換体の培養には、50mg/Lのストレプトマイシンを添加して選択した。
GeneScript社で委託合成したフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を含む合成DNA(ベクターpUC57に乗っている)を鋳型に、表6に記載した組合せでPCRを行った。
後述するように、E. coli ではFDR2とFd7の組合せが最もアルカン生産性向上に効果があったので、その組合せをKlebliellaで評価できるようにプラスミドを構築した。
N. punctiforme PCC 73102株由来のデカルボニラーゼ遺伝子とSynechococcus elongatus PCC7942株由来のアシル-ACPレダクターゼ遺伝子がpRSF-1b(ノバジェン社製)に乗ったpRSF-NpAD-SeARを準備した。なお、pRSF-NpAD-SeARの作製方法については後述する実験例1に記載した。
N. punctiforme PCC 73102株由来のデカルボニラーゼ遺伝子とSynechococcus elongatus PCC7942株由来のアシル-ACPレダクターゼ遺伝子がpTV118N(タカラバイオ社製)に乗ったpTV-NpAD-SeAR-amp及びpTV-NpAD-SeAR-kanを準備した。なお、pTV-NpAD-SeAR-ampとpTV-NpAD-SeAR-kanの作製方法については後述する実験例1に記載した。
表8に示した組合せで形質転換体を作製した。本実施例で作製したpCDF-FDR-Fd類は酵母のコドン使用頻度に最適化してあるので、大腸菌のコドン使用頻度との違いの影響を抑えるため、pCDF Duet-FDR-Fd類はE. coli Rosetta(DE3)株をホストに用いた。一方、Klebsiella sp. 100048株はT7 RNA polymeraseを保有していないのでlacプロモーターを用い、E. coli JM109を比較として用いた。それぞれ、Rosetta(DE3) Competent Cells (ノバジェン社製)またはECOS Competent E.coli JM109 (ニッポンジーン社製)を、添付のマニュアルに従って形質転換した。Klebesiella sp.100048株の形質転換方法については後述する実験例1に記載した。
必要な抗生物質を含むLB Broth Miller培地(Difco社製 Luria-Bertani)3mlを含むBD Falcon社製14mlラウンドチューブに形質転換体を植菌し、ABLE社製三段式培養器MW-312を用い、100ストローク/分で18時間、37℃で振盪培養した。得られた前培養液を抗生物質を含む3mlのM9YE培地に1%植菌し、ディスポーザブルガラス試験管(IWAKI社製f16mm x 150mm)で同培養装置を用い、30℃、90ストローク/分で2〜3日間培養した。本培養においては、植菌後4時間に、IPTGを終濃度が1mMになるように添加した。
菌株No.2〜17について培養をn=2またはn=3で行い、アルカンの生産量をGC/MSにより測定し、平均値で表した結果を図11及び12に示した。図11及び12に示すように、8-ヘプタデカンとペンタデカン及び微量のトリデカンの生産が観測された。8-ヘプタデカンとペンタデカンの比率に変動はあるが、オレイン酸由来の8-ヘプタデカンが主要産物であった。比率は、培養2日目と培養3日目で菌株によらず同じである一方、フェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子の導入により、ペンタデカンの割合が増える傾向であった。
本実施例で使用したプライマーの塩基配列を表10に纏めた。
・pRSF-NpAD-SeARの作製方法
先ず、Synechococcus elongatus PCC 7942株由来のアシル-ACPレダクターゼ遺伝子(YP_400611)とNostoc punctiforme PCC 73102株由来のデカルボニラーゼ遺伝子(YP_001865325)を化学合成した。これらの合成遺伝子はpUC57のEcoRVサイトに挿入し、それぞれpUC57-SeAAR、pUC57-NpADと命名した。
Primer pRSF-NpAS-inf-F:5’-cgagctcggcgcgcctgcagATGCAGCAGCTTACAGACCA-3’(配列番号51)
Primer pRSF-NpAS-inf-R:5’-gcaagcttgtcgacctgcagTTAAGCACCTATGAGTCCGT-3’(配列番号52)
Primer pRSF-SeAR-inf-F:5’-aaggagatatacatatgATGTTCGGTCTTATCGGTCA-3’(配列番号53)
Primer pRSF-SeAR-inf-R:5’-ttgagatctgccatatgTCAAATTGCCAATGCCAAGG-3’(配列番号54)
先ず、上記で作製したpRSF-NpAD-SeARを鋳型にし、Pfu Ultra II Fusion HS DNA Polymerase (Agilent社製)を用いて下記PCRを行なった。フォワードプライマー及びリバースプライマーとしてPrimer NpAD Fw及びPrimer NpAD Rvを使用することでフラグメントNpADvo2を増幅し、フォワードプライマー及びリバースプライマーとしてPrimer SeAR Fw及びPrimer SeAR Rvを使用することでフラグメントSeAAvo2を増幅した。
Primer NpAD Fw:5’-AGGAAACAGACGTACATGCAGCAGCTTACAGACCAATC-3’(配列番号55)
Primer NpAD Rv:5’-GAAATTGTTATCCGCTTAAGCACCTATGAGTCCGTAG-3’(配列番号56)
Primer SeAR Fw:5’-GCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGACATGTTCGGTCTTATCGGTCATC-3’(配列番号57)
Primer SeAR Rv:5’-GTAATCATGGCGTACTCAAATTGCCAATGCCAAGG-3’(配列番号58)
Klebesiella sp.100048株を、培地3mlを入れた14mlラウンドチューブ(BD Falcon社製)に植菌し、37℃、18時間培養し前培養液を調製した。培地組成は、Polypeptone(和光純薬社製)を10g、Yeast extract(Difco社製)を2g及びMgSO4・7H2Oを1gとした。この培地組成を0.8Lの脱イオン水に溶解し、1N塩酸または1N水酸化ナトリウム溶液でpH7.0に調整した後に脱イオン水で1Lにし121℃、15分間オートクレーブした。
アガロースプレート上で生育した組換え体を、上記培地3mlを含むBD Falcon社製14mlラウンドチューブに植菌し、ABLE社製三段式培養器MW-312を用い、130ストローク/分で18時間所定の温度で培養した。こうして得られた前培養液を抗生物質を含む3mlのM9YE培地を含むディスポーザブルガラス試験管(IWAKI社製φ16×150mm)に1%植菌し、同様に90ストローク/分で4時間培養後、終濃度1mMのIPTGを添加し3日間培養した。
Claims (8)
- 藍藻由来のアシルACPレダクターゼ遺伝子及びデカルボニラーゼ遺伝子を外来遺伝子として有する組換え微生物において、
藍藻由来の4種類のフェレドキシン遺伝子をそれぞれFD遺伝子1、FD遺伝子2、FD遺伝子3及びFD遺伝子4とし、藍藻由来の3種類のフェレドキシンレダクターゼ遺伝子をそれぞれFDR遺伝子1、FDR遺伝子2及びFDR遺伝子3としたときに、以下の組み合わせでフェレドキシン遺伝子及びフェレドキシンレダクターゼ遺伝子を有することを特徴とする、アルカン合成能を有する組換え微生物。
・FD遺伝子1及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子1及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子2及びFDR遺伝子3の組み合わせ
・FD遺伝子3及びFDR遺伝子2の組み合わせ
・FD遺伝子3及びFDR遺伝子3の組み合わせ
・FD遺伝子4及びFDR遺伝子1の組み合わせ
・FD遺伝子4及びFDR遺伝子2の組み合わせ
FD遺伝子1は[a1]又は[b1]のタンパク質をコードし、
[a1]配列番号2のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b1]配列番号2のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FD遺伝子2は[a2]又は[b2]のタンパク質をコードし、
[a2]配列番号4のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b2]配列番号4のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FD遺伝子3は[a3]又は[b3]のタンパク質をコードし、
[a3]配列番号6のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b3]配列番号6のアミノ酸配列に対して90%以上の高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FD遺伝子4は[a4]又は[b4]のタンパク質をコードし、
[a4]配列番号8のアミノ酸配列を有するタンパク質
[b4]配列番号8のアミノ酸配列に対して90%以上の高い同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンとして機能するタンパク質
FDR遺伝子1は[c1]又は[d1]のタンパク質をコードし、
[c1]配列番号10のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d1]配列番号10のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
FDR遺伝子2は[c2]又は[d2]のタンパク質をコードし、
[c2]配列番号12のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d2]配列番号12のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質
FDR遺伝子3は[c3]又は[d3]のタンパク質をコードし、
[c3]配列番号14のアミノ酸配列を有するタンパク質
[d3]配列番号14のアミノ酸配列に対して90%以上のの同一性を有するアミノ酸配列を有し、フェレドキシンレダクターゼとして機能するタンパク質 - 上記藍藻由来のデカルボニラーゼ遺伝子は以下の[e]又は[f]のタンパク質をコードすることを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
[e]配列番号16のアミノ酸配列を有するタンパク質
[f]配列番号16のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、デカルボニラーゼ活性を有するタンパク質 - 上記藍藻由来のアシルACPレダクターゼ遺伝子は以下の[g]又は[h]のタンパク質をコードすることを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
[g]配列番号18のアミノ酸配列を有するタンパク質
[h]配列番号18のアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、アシルACPレダクターゼ活性を有するタンパク質 - 大腸菌又はKlebsiella属細菌を宿主とすることを特徴とする請求項1記載の組換え微生物。
- 請求項1〜4いずれか一項記載の組換え微生物を培養する工程を含むアルカンの製造方法。
- 上記組換え微生物を培養する培地よりアルカンを回収する工程を更に含むことを特徴とする請求項5記載のアルカンの製造方法。
- 上記組換え微生物を培養する培地よりアルカンを回収し、回収したアルカンを精製する工程を更に含むことを特徴とする請求項5記載のアルカンの製造方法。
- 炭素数9〜20のアルカンを製造することを特徴とする請求項5記載のアルカンの製造方法。
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