JP6541158B2 - 粘膜ワクチン用アジュバント - Google Patents
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Description
(1)ボツリヌス毒素の赤血球凝集素(HA)のサブコンポーネントHA1、HA2、及びHA3から形成される複合体タンパク質を含むアジュバントであって、HA1が下記の(a)又は(b)に記載のタンパク質、HA2が下記の(c)又は(d)に記載のタンパク質、HA3が下記の(e)又は(f)に記載のタンパク質であることを特徴とする、アジュバント。
(a) 配列番号1に示すアミノ酸配列における第7番〜第294番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(b) 配列番号1に示すアミノ酸配列における第7番〜第294番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(a)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(c) 配列番号2に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(d) 配列番号2に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(c)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(e) 配列番号3に示すアミノ酸配列における第19番〜第626番のアミノ酸配列を含むタンパク質であって、配列番号3に示すアミノ酸配列の第473番のロイシン、第508番のメチオニン、第569番のフェニルアラニン、又は第607番のリシンのいずれか1つ以上のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたアミノ酸配列を含むタンパク質
(f) 前記(e)のタンパク質のアミノ酸配列の第473番、第508番、第569番、及び第607番のアミノ酸以外の部位において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(e)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(2)ボツリヌス毒素の赤血球凝集素(HA)のサブコンポーネントHA1、HA2、及びHA3から形成される複合体タンパク質を含むアジュバントであって、HA1が下記の(g)又は(h)に記載のタンパク質、HA2が下記の(i)又は(j)に記載のタンパク質、HA3が下記の(k)又は(l)に記載のタンパク質であることを特徴とする、アジュバント。
(g) 配列番号15に示すアミノ酸配列における第6番〜293番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(h) 配列番号15に示すアミノ酸配列における第6番〜293番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(g)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(i) 配列番号16に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(j) 配列番号16に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(i)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(k) 配列番号17に示すアミノ酸配列における第20番〜第626番のアミノ酸配列を含むタンパク質であって、配列番号17に示すアミノ酸配列の第473番のロイシン、第508番のメチオニン、第569番のフェニルアラニン、又は第607番のリシンのいずれか1つ以上のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたアミノ酸配列を含むタンパク質
(l) 前記(k)のタンパク質のアミノ酸配列の第473番、第508番、第569番、及び第607番のアミノ酸以外の部位において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(k)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(3)HA3が、配列番号3又は配列番号17に示すアミノ酸配列の第473番のロイシン、第508番のメチオニン、第569番のフェニルアラニン、又は第607番のリシンのいずれか1つのアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたアミノ酸配列を含むタンパク質である、(1)又は(2)に記載のアジュバント。
(4)他のアミノ酸がアラニンである、(3)に記載のアジュバント。
(5)ワクチン抗原と同時、又はワクチン抗原投与前又は抗原投与後に使用する、(1)〜(4)のいずれかに記載のアジュバント。
(6)前記ワクチン抗原が、サブユニット抗原又は不活化抗原である、(5)に記載のアジュバント。
(7)前記ワクチン抗原が、粘膜感染症の病原体由来の抗原である、(5)又は(6)に記載のアジュバント。
(8)前記粘膜感染症の病原体が、ウイルス又は細菌である、(7)に記載のアジュバント。
(9)前記ウイルスが、インフルエンザウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、水痘ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、RSウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、重症急性呼吸器感染症候群(SARS)ウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バール(EB)ウイルス、又は肝炎ウイルス(A型、B型、C型)である、(8)に記載のアジュバント。
(10)前記細菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザb型菌、肺炎球菌、結核菌、破傷風菌、又はコレラ菌である、(8)に記載のアジュバント。
(11)経粘膜投与される、(1)〜(10)のいずれかに記載のアジュバント。
(12)経粘膜投与が、鼻腔内投与である、(11)に記載のアジュバント。
(13)ワクチン抗原と、(1)〜(12)のいずれかに記載のアジュバントを含む、粘膜ワクチン製剤。
本願は、2014年6月4日に出願された日本国特許出願2014−116241号の優先権を主張するものであり、該特許出願の明細書に記載される内容を包含する。
1)アラニン、グリシン;
2)アスパラギン酸、グルタミン酸;
3)アスパラギン、グルタミン;
4)アルギニン、リシン;
5)イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン;
6)フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン;
7)セリン、スレオニン;及び
8)システイン、メチオニン。
A.野生型ボツリヌスB型HA(野生型BHA)及び野生型A型HA(野生型AHA)複合体の作製
(1) プラスミドの作製
ボツリヌスB型HAサブコンポーネント(BHA1、BHA2、BHA3)のそれぞれのタンパク質(BHA1:配列番号1のアミノ酸配列の7-294位のアミノ酸配列からなるタンパク質、BHA2:配列番号2のアミノ酸配列の2-146位のアミノ酸配列からなるタンパク質、BHA3: 配列番号3のアミノ酸配列の19-626位のアミノ酸配列からなるタンパク質)をコードする遺伝子、及びボツリヌスA型HAサブコンポーネント(AHA1、AHA2、AHA3)のそれぞれのタンパク質(AHA1:配列番号15のアミノ酸配列の6-293位のアミノ酸配列からなるタンパク質、AHA2:配列番号 のアミノ酸配列16の2-146位のアミノ酸配列からなるタンパク質、AHA3: 配列番号17のアミノ酸配列の20-626位のアミノ酸配列からなるタンパク質)をコードする遺伝子を、それぞれ下記のプライマーを用いてClostridium botulinum B-Okra株のゲノムDNAをテンプレートとして、PCR法により増幅した。
BHA1 フォワードプライマー:cactataagcttatccaaaattcattaaatg (配列番号9)
BHA1 リバースプライマー:gttgataggtaccttatgggttactcatag (配列番号10)
(BHA2増幅用プライマー)
BHA2 フォワードプライマー:tgaataagctttcagctgaaagaacttttc (配列番号11)
BHA2 リバースプライマー:cactttggtaccttatattttttcaagtttga (配列番号12)
(BHA3増幅用プライマー)
BHA3 フォワードプライマー:gaaaaagggtaccaatatagtgatactattg (配列番号13)
BHA3 リバースプライマー:cgtgtcgacttaattagtaatatctatatgc (配列番号14)
(AHA1増幅用プライマー)
AHA1 フォワードプライマー:catgccatggtaatccaaaattcattaaa(配列番号23)
AHA1 リバースプライマー:cgggatccttacttgtcatcgtcatccttgtagtctgggttacgaatattccatttc(配列番号24)
(AHA2増幅用プライマー)
AHA2 フォワードプライマー:tgaataagctttcagttgaaagaacttttctac(配列番号25)
AHA2 リバースプライマー:ctttggtaccttatattttttcaagtttgaac(配列番号26)
(AHA3増幅用プライマー)
AHA3 フォワードプライマー:aaagttaggtaccctagtgatactattgatttag(配列番号27)
AHA3リバースプライマー:cgtgtcgacttaattagtaatatctatatgc(配列番号28)
作製したプラスミドはそれぞれ単独で大腸菌株Rosetta2(DE3) (Novagen)にトランスフォームした。タンパク質発現誘導はOvernight Express Autoinduction system 1 (Novagen)を用いて行った。BHA1及びBHA3は30℃で36時間、BHA2については18℃で40時間、タンパク質発現誘導を行った。AHA1及びAHA3は30℃で36時間、AHA2については18℃で40時間、タンパク質発現誘導を行った。大腸菌は遠心により回収し、-80℃で保存した。
BHA1、BHA2は、Anti-FLAG M2 agarose (Sigma)を用いて精製を行った。BHA3はStrepTrap HP (GE Healthcare) を用いて精製した。精製した組換え体タンパク質FLAG-BHA1、FLAG-BHA2、Strep-BHA3のアミノ配列を図1に示す。AHA1、AHA2は、Anti-FLAG M2 agarose (Sigma)を用いて精製を行った。AHA3はStrepTrap HP (GE Healthcare) を用いて精製した。精製した組換え体タンパク質AHA1-FLAG、FLAG-AHA2、Strep-AHA3のアミノ配列を図2に示す。それぞれ精製した組換え体タンパク質を、BHA1:BHA2: BHA3=4:4:1、AHA1:AHA2: AHA3=4:4:1のモル比で混合し、37℃で3時間インキュベートした後、StrepTrap HPにより精製することにより、BHA複合体(BHA)を得た。
BHA3のE-カドヘリン結合性欠失変異体(BHA3 L473A、BHA3 M508A、BHA3 F569A、BHA3 K607A) を発現するプラスミドについては、上記pET-BHA3をテンプレートとしてPCR法により変異導入を行うことにより得た。続いて、上記(2)及び(3)と同様の方法を用いて4種の変異型BHA複合体を得た。Strep-BHA3変異型(L473A、M508A、F569A、 K607A)のアミノ配列を図3に示す。AHA3のE-カドヘリン結合性欠失変異体(AHA3 L473A、AHA3 M508A、AHA3 F569A、AHA3 K607A) についても、同様の方法を用いて4種の変異型AHA複合体を得た。Strep-AHA3変異型(L473A、M508A、F569A、K607A)のアミノ配列を図4に示す。
A.で作製した野生型BHA複合体及び野生型AHA複合体、ならびに、B.で作製した変異型BHA複合体及び変異型AHA複合体を、Superdex 200 10/300 GL (GE Healthcare) により分離した。本試験のBHA複合体(BHA)のHA1、HA2、HA3は、それぞれN末端FLAGタグHA1、N末端FLAGタグHA2、N末端StrepタグHA3、AHA複合体(AHA)のHA1、HA2、HA3は、それぞれC末端FLAGタグHA1、N末端FLAGタグHA2、N末端StrepタグHA3を用いた。野生型複合体(BHA)ならびに変異型(K607A)BHA複合体の結果を図5に示す。
血清型B型であるボツリヌスHA複合体(BHA)は、マウス、又はヒトのE-カドヘリンに結合して細胞間接着を破壊する特性を有する。一方、血清型C型のボツリヌスHA(CHA)には、E-カドヘリン結合活性が無い。そこで、BHA複合体とE-カドヘリンの相互作用に重要なサブコンポーネントを同定するため、BHAとCHAのサブコンポーネントの組み合わせを変え、キメラボツリヌスHA複合体を作製し、E-カドヘリンとの相互作用をプルダウン(Pull-down)アッセイを用いて解析した。Pull-down アッセイは、キメラボツリヌスHAをStrepTactin superflow agarose (Novagen)に吸着させた後、大腸菌発現系から精製したE-カドヘリン(EC1/2)又はHEK293細胞発現系を用いて精製したE-カドヘリン全長タンパク質を反応させ、共沈降したタンパク質を抗E-カドヘリン抗体(ECCD-2, Takara)を用いたウェスタンブロッティング法によって解析した。結果を図6に示す。図6に示すように、ボツリヌスHA3サブコンポーネントが血清型Bである場合に、E-カドヘリンとの結合が認められた。つまり、BHA3サブコンポーネントがE-カドヘリンへの結合に重要であることが示唆された。
BHA3のどの領域がE-カドヘリン結合に重要かを検討するため、C型ボツリヌスHA3サブコンポーネント(CHA3)とB型ボツリヌスHA3サブコンポーネント(BHA3)を用いて、キメラボツリヌスHA3サブコンポーネントを作製し、E-カドヘリンとの相互作用をPull-downアッセイを用いて解析した。結果を図7に示す。図7に示すように、BHA3の第473番目以降の領域を融合したキメラボツリヌスHA複合体はE-カドヘリン結合能が有るのに対し、BHA3の485番目以降の領域を融合したキメラボツリヌスHA複合体ではE-カドヘリン結合能が消失した。以上のことから、BHA3の第473番目のアミノ酸からC末にかけた領域が、E-カドヘリンとの相互作用に重要であることが示唆された。
B型ボツリヌスHA3サブコンポーネント(BHA3)の第473番目のアミノ酸からC末にかけた領域において、どのアミノ酸がE-カドヘリンとの相互作用に重要であるかを検討した。C型ボツリヌスHA(CHA)と異なるアミノ酸を、配列アライメントから見出し、そのアミノ酸をアラニンに変えたBHA3点変異体を実施例1と同様の方法を用いて作製し(L473A、E501A、D503A、L504A、R505A、N506A、M508A、N509A、H534A、D535A、F569A、T574A、D576A、N582A、Q584A、Q585A、N586A、L587A、N588A、K607A、E609A)、E-カドヘリンとの相互作用をPull-downアッセイを用いて解析した。結果を図8Aに示す。図8Aに示すように、L473A、M508A、F569A、K607Aの変異体において、E-カドヘリンとの結合能が減弱していることが明らかとなった。特に、L473A、M508A、K607Aにおいては、劇的にE-カドヘリン結合能が低下していると考えられた。
BHA複合体と細胞間接着の構成要素であるE-カドヘリンとの相互作用を、ヒト結腸癌由来Caco-2細胞の1%Triton X-100抽出液とHA複合体を固定化した樹脂とを混合しPull-down アッセイとウェスタンブロッティング(western blotting)法によって解析した。結果を図9に示す。図9に示すように、野生型BHA複合体はCaco-2細胞のE-カドヘリンと直接結合することが確認された。一方、変異型(K607A)BHA複合体は、Caco-2細胞のE-カドヘリンと結合しないことが明らかとなった。
変異型(K607A)BHA複合体の細胞間接着に与える影響を、Caco-2細胞のTERアッセイにおいて、高用量処理(1μM)を行うことによって評価した。結果を図10に示す。図10に示すように、野性型BHA複合体(WT)を頂端側(Apical)から処理したCaco-2培養wellでは、処理後12時間以内に大幅なTER値減少を示した。一方、変異型BHA複合体(Mut)では24時間経過後もTER値に変化は認められず、2回の独立した検討結果で、ほぼ同一の結果が認められた。
ボツリヌスA型又はB型のHA2をAlexa 568でラベルし、HA1、HA3と複合化して野性型HA複合体(A型、B型)を作製した。同様に、ボツリヌスA型又はB型のHA2をAlexa 568でラベルし、HA1、HA3(K607A変異)と複合化して変異型HA複合体(A型、B型)を作製した。これらの野性型HA複合体又は変異型HA複合体それぞれ600 nMをマウス結紮腸管に注入し、2時間後のHA複合体の局在をコンフォーカル顕微鏡で観察した。M細胞は、FITC-labeled UEA-1で染色した。その結果を図12に示す。図12に示されるとおり、野性型HA複合体はM細胞への結合とトランスサイトーシスが観察された。また、変異型(K607A)HA複合体は野生型HA複合体と同様に高いM細胞配向性を示すことが明らかとなった。
野性型HA複合体(A型、B型)又は変異型(K607A)HA複合体(A型、B型)がマウス粘膜上皮組織の細胞間接着に与える影響を検討するため、マウス結紮腸管に5μMの各HA複合体と2 mg/mLのFITC-labeled dextran (10 K)の混合液を注入し、2時間後の細胞間隙に入り込んだデキストラン(dextran)をコンフォーカル顕微鏡で観察した。M細胞は、Rhodamine-labeled UEA-1で染色した。結果を図13に示す。図13に示すように、血清型A、B双方とも、野生型HA複合体(HAwt)で処理した腸管上皮層において、dextranの残留(緑色ドット:図中、白色の点に見える部分)が認められた。また、HAwtでは、UEA-1陽性細胞の形態異常が認められた(図中、白色枠で囲った部分)。一方、変異型(K607A)HA複合体(HAmut)においては、dextran残留は認められず、かつUEA-1陽性細胞の形態も正常であった。以上の結果から、HAwtは結紮腸管の上皮層に存在するUEA-1陽性細胞近隣の細胞間接着を破壊するのに対し、HAmutは粘膜上皮の細胞間接着に影響を与えない安全な粘膜アジュバント候補であることが示唆された。
未処理のマウス脾臓細胞を用いて、野生型BHA複合体及び変異型(K607A)BHA複合体アジュバント処理によるIL-6サイトカインの産生量を測定し、BHA複合体アジュバントの自然免疫活性化能を評価した。
インフルエンザスプリットワクチンを抗原として用いて、BHA複合体のアジュバント効果を評価した。
BALB/cマウス及びC57BL/6マウス(6週齢、雌性) は、日本クレア株式会社から購入した。飼育はSPF環境下で行った。
スプリット型ワクチン抗原1μgと、BHA複合体(BHA)アジュバント20μg、又はコレラ毒素混合(CTB)アジュバント1.001μgをPBS(-)で12μLになるよう調製し、一匹あたりのワクチン製剤とした。6週齢のマウスに、各ワクチン製剤を6μLずつ両鼻腔内に投与した。2週間隔で計4回(0日、14日、28日、42日)投与した。14日、28日、42日の追加免疫直前に、ケタラール(第一三共株式会社)/セラクタール(バイエル株式会社)を用いて麻酔し、眼窩静脈叢から採血した。得られた血液は、4℃で一晩静置し、卓上冷却遠心分離機により血清分離を行った(9100g、10分、4℃)。得られた血清検体は−20℃で冷凍保管した。BHA複合体のアジュバント効果を評価するため、血清検体のIgG(Total IgG、IgG1、IG2a、IG2c)を測定した。
インフルエンザ抗原に特異的な血中IgGの測定結果(免疫開始56日目)を図16に示す。図16に示されるように、野生型BHA複合体(BHAwt)アジュバント、変異型BHA複合体(BHAmut:K607A)アジュバントとインフルエンザ抗原で免疫した群では、インフルエンザ抗原単独で免疫した群に比べ、有意に高い抗原特異的血中抗体反応を誘導した。これは、評価した全てのIgGサブクラスで確認された。
インフルエンザスプリットワクチンを抗原として用いて、BHA複合体のアジュバント効果を評価した。
BALB/cマウス (6週齢、雌性) は、日本クレア株式会社から購入した。飼育はSPF環境下で行った。
スプリット型ワクチン抗原1μgと、AHA複合体(AHA)アジュバント20μg、BHA複合体(BHA)アジュバント20μg、又はコレラ毒素混合(CTB)アジュバント1.001μgをPBS(-)で12μLになるよう調製し、一匹あたりのワクチン製剤とした。6週齢のマウスに、各ワクチン製剤を6μLずつ両鼻腔内に投与した。2週間隔で計3回(0日、14日、28日)投与した。免疫開始42日目にケタラール/セラクタールによる麻酔後、心臓穿刺により全採血を行い安楽殺処分とした。得られた血液は、4℃で一晩静置し、卓上冷却遠心分離機により血清分離を行った(9100g、10分、4℃)。得られた血清検体は−20℃で冷凍保管した。AHA複合体、又はBHA複合体のアジュバント効果を評価するため、血清検体のIgG(Total IgG)を測定した。安楽殺処分の後に、鼻腔洗浄液を採取した。鼻腔洗浄液は採取後、氷上又はELISAアッセイまで冷蔵保存した。
インフルエンザ抗原に特異的な血中IgGの測定結果を図18Aに示す。図18Aに示されるように、野生型AHA複合体(AHAwt)アジュバント、野生型BHA複合体(BHAwt)アジュバント、変異型AHA複合体(AHA L473A、AHA M508A、AHA F569A、AHA K607A)アジュバント、又は変異型BHA複合体(BHA K607A)アジュバントとインフルエンザ抗原で免疫した群では、インフルエンザ抗原単独で免疫した群に比べ、高い抗原特異的血中抗体反応を誘導した。また、野生型AHA複合体アジュバント、野生型BHA複合体アジュバント、変異型AHA複合体アジュバント、及び変異型BHA複合体アジュバントの抗原特異的血中抗体の増強活性は同等であった。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書に組み入れるものとする。
Claims (11)
- ボツリヌス毒素の赤血球凝集素(HA)のサブコンポーネントHA1、HA2、及びHA3から形成される複合体タンパク質を含むアジュバントであって、HA1が下記の(a)又は(b)に記載のタンパク質、HA2が下記の(c)又は(d)に記載のタンパク質、HA3が下記の(e)又は(f)に記載のタンパク質であることを特徴とする、アジュバント。
(a) 配列番号1に示すアミノ酸配列における第7番〜第294番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(b) 配列番号1に示すアミノ酸配列における第7番〜第294番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(a)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(c) 配列番号2に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(d) 配列番号2に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(c)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(e) 配列番号3に示すアミノ酸配列における第19番〜第626番のアミノ酸配列を含むタンパク質であって、配列番号3に示すアミノ酸配列の第473番のロイシン、第508番のメチオニン、又は第607番のリシンのいずれか1つ以上のアミノ酸がアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むタンパク質
(f) 前記(e)のタンパク質のアミノ酸配列の第473番、第508番、及び第607番のアミノ酸以外の部位において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(e)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質 - ボツリヌス毒素の赤血球凝集素(HA)のサブコンポーネントHA1、HA2、及びHA3から形成される複合体タンパク質を含むアジュバントであって、HA1が下記の(g)又は(h)に記載のタンパク質、HA2が下記の(i)又は(j)に記載のタンパク質、HA3が下記の(k)又は(l)に記載のタンパク質であることを特徴とする、アジュバント。
(g) 配列番号15に示すアミノ酸配列における第6番〜293番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(h) 配列番号15に示すアミノ酸配列における第6番〜293番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(g)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(i) 配列番号16に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列を含むタンパク質
(j) 配列番号16に示すアミノ酸配列における第2番〜第146番のアミノ酸配列において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(i)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質
(k) 配列番号17に示すアミノ酸配列における第20番〜第626番のアミノ酸配列を含むタンパク質であって、配列番号17に示すアミノ酸配列の第473番のロイシン、第508番のメチオニン、又は第607番のリシンのいずれか1つ以上のアミノ酸がアラニンに置換されたアミノ酸配列を含むタンパク質
(l) 前記(k)のタンパク質のアミノ酸配列の第473番、第508番、及び第607番のアミノ酸以外の部位において1から数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつ前記(k)のタンパク質と同等の活性を有するタンパク質 - ワクチン抗原と同時、又はワクチン抗原投与前又は抗原投与後に使用する、請求項1又は2に記載のアジュバント。
- 前記ワクチン抗原が、サブユニット抗原又は不活化抗原である、請求項3に記載のアジュバント。
- 前記ワクチン抗原が、粘膜感染症の病原体由来の抗原である、請求項3又は4に記載のアジュバント。
- 前記粘膜感染症の病原体が、ウイルス又は細菌である、請求項5に記載のアジュバント。
- 前記ウイルスが、インフルエンザウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、水痘ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、RSウイルス、デングウイルス、日本脳炎ウイルス、重症急性呼吸器感染症候群(SARS)ウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バール(EB)ウイルス、又は肝炎ウイルス(A型、B型、C型)である、請求項6に記載のアジュバント。
- 前記細菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザb型菌、肺炎球菌、結核菌、破傷風菌、又はコレラ菌である、請求項6に記載のアジュバント。
- 経粘膜投与される、請求項1〜8のいずれかに記載のアジュバント。
- 経粘膜投与が、鼻腔内投与である、請求項9に記載のアジュバント。
- ワクチン抗原と、請求項1〜10のいずれかに記載のアジュバントを含む、粘膜ワクチン製剤。
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