JP6514680B2 - クマリン誘導体、ならびに嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、及びミスフォールドタンパク質障害の治療における使用方法 - Google Patents

クマリン誘導体、ならびに嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、及びミスフォールドタンパク質障害の治療における使用方法 Download PDF

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Description

優先権出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７８８，３５３号に対する優先権を主張するものであり、当該出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
連邦政府支援の研究に関する声明
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって授与された助成金番号ＮＩＤＤＫ Ｐｈａｓｅ ＩＩ ＳＢＩＲ ＤＫ０８４６５８−０３下で政府の支援でなされた。米国政府は、本発明においてある権利を有する。
嚢胞性線維症は、タンパク質フォールディング障害の一例である。これは、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）をコードする遺伝子の変異によって生じる遺伝性疾患である。ＣＦＴＲ遺伝子は、多重上皮細胞型において発現される塩化物チャネルをコードする。共通ＣＦＴＲ変異であるｄｅｌＦ５０８は、タンパク質ミスフォールディングのために、ＣＦＴＲの形質膜への正常な輸送の失敗を生じさせる。ｄｅｌＦ５０８変異は、変異誘発遺伝子の９０％を占めると推定される。嚢胞性線維症集団のその高い発生率のため、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲは、嚢胞性線維症治療学の主要な標的である。したがって、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲは広く研究されており、タンパク質フォールディング障害の研究のためのモデルである。
クマリン誘導体化合物、ならびに嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、及び稀なミスフォールドタンパク質障害等のタンパク質フォールディング障害の治療のための方法が、提供される。嚢胞性線維症（ＣＦ）は、このようなタンパク質フォールディング障害の一例として至る所で使用される。本方法は、ＣＦＴＲコレクター（すなわち、細胞内のハロゲン化物流出をレスキューするのに有効な化合物）を対象に投与することを含む。
ＣＦＴＲコレクターのクラスは、以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。化合物のこのクラスでは、Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルであり、Ｒ２は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アジド、チオシアネート、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のアルコキシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のカルボニル、または置換もしくは非置換のＣ１−６アルキルであり、Ｒ３は、水素または置換もしくは非置換のＣ１−６アルキルであり、Ｒ４は、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、置換もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、Ｘは、ＳまたはＯであり、Ｙは、ＯまたはＮＣＨ３である。随意に、化合物は、
からなる群から選択され、式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のカルボニル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、置換もしくは非置換のＣ２−６アルケニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のスルホンアミド、置換もしくは非置換のスルホニル、または置換もしくは非置換のチオから選択される。随意に、Ｒ１及びＲ２、Ｒ５及びＲ６、Ｒ６及びＲ７、Ｒ７及びＲ８、またはＲ８及びＲ９は、組み合わさって、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のシクロアルケニル、置換もしくは非置換のヘテロアリール、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルを形成する。
ＣＦＴＲコレクターのクラスは、以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。化合物のこのクラスでは、Ｌは、ヘテロアリールであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素及びメトキシから選択される。
ＣＦＴＲコレクターのクラスは、以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。化合物のこのクラスでは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、各々独立して、ＣＨ及びＮから選択され、Ｙは、ＯまたはＮＲであり、式中、Ｒは、水素またはメチルであり、Ｒ２は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、またはトリフルオロアルキルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素及びメトキシから選択される。
ＣＦＴＲコレクターのクラスは、以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。化合物のこのクラスでは、Ｘ１は、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｘ２は、ＣＨまたはＮであり、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＮＣＨ３であり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素及びメトキシから選択される。
ＣＦＴＲコレクターのクラスは、以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。化合物のこのクラスでは、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、水素、置換もしくは非置換のアミノ、及び置換もしくは非置換のカルボニルから選択される。
ＣＦＴＲコレクターのクラスは、以下の式の化合物、
及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む。化合物のこのクラスでは、Ｘは、ＣＨ２、ＮＨ、またはＯである。
更に本明細書に説明されるものは、本明細書に説明される化合物のうちの１つ以上及び薬学的に許容される担体を含む、組成物である。
対象のタンパク質フォールディング障害の治療のための方法がまた、本明細書に説明される。対象のタンパク質フォールディング障害の治療のための本方法は、本明細書に説明されるような化合物の有効量を対象に投与することを含む。随意に、タンパク質フォールディング障害は、嚢胞性線維症である。随意に、タンパク質フォールディング障害は、慢性閉塞性肺疾患である。
更に本明細書に説明されるものは、細胞内のハロゲン化物流出をレスキューする方法、細胞内のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質のプロセシング欠陥を修正する方法、及び細胞内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物チャネルを修正する方法である。細胞内のハロゲン化物流出をレスキューする方法は、ＣＦＴＲ変異を内因的に発現する細胞を本明細書に説明されるような化合物と接触させることを含む。随意に、ＣＦＴＲ変異は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲである。随意に、ハロゲン化物流出は、塩化物流出である。
細胞内のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質のプロセシング欠陥を修正する方法は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を発現する細胞を本明細書に説明されるような化合物と接触させることを含む。随意に、細胞は、ＣＦヒト気道上皮細胞またはＣＦヒト肺細胞である。
細胞内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物チャネルを修正する方法は、細胞が分極上皮細胞である、細胞を本明細書に説明されるような化合物と接触させることを含む。随意に、本方法は、インビトロで実施される。随意に、本方法は、インビボで実施される。
１つ以上の実施形態の詳細は、以下の図面及び記述において説明される。他の特徴、目的、及び利点は、記述及び図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲコレクターを特定するための一般的手法を示す概略図である。 ＳＰＱ蛍光バイオアッセイの一般的設計を示す概略図である。 化合物ＤＢＭ １０１を含む、いくつかの化合物のためのＳＰＱ蛍光バイオアッセイデータを示す。 上皮ボルトオームメータ（ＥＶＯＭ）電気アッセイの一般的設計を示す概略図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の業界標準ＶＸ−８０９の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ ２２８の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ ３０８の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ ７０１の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ ７０７の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ ７１５の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ ３２８の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０１の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０２の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０３の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０４の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０５の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０５．１の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−０８の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−９．１の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１０の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１１の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１２の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１３の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１４の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１６の抵抗を示す図である。 ＥＶＯＭ電気アッセイにおける異なる濃度の化合物ＤＢＭ−Ｅ−１７の抵抗を示す図である。 増加する投与量のＣｏｒｒ−４ａ及びＣｏｒｒ−１７に対する化合物ＤＢＭ １０１を用いた、ＣＦヒト気道上皮細胞のｄｅｌＦ５０８ ＣＦＴＲレスキューを示すウェスタンブロットを含む。ＷＴ−ＣＦＴＲ発現細胞、ＤＭＳＯ、及び低温が、対照として機能した。 増加する投与量（１０μＭ、０．１μＭ、１μＭ、０．０１μＭ、及び０．００１μＭ）の化合物ＤＢＭ １０１を用いた、ＣＦヒト気道上皮細胞のｄｅｌＦ５０８ ＣＦＴＲレスキューを示すウェスタンブロットを含む。ＷＴ−ＣＦＴＲ発現細胞、ＤＭＳＯ、及び低温（２７℃）が、対照として機能した。 化合物ＤＢＭ ２２８及び他の化合物を用いた、ＣＦヒト気道上皮細胞のｄｅｌＦ５０８ ＣＦＴＲレスキューを示すウェスタンブロットを含む。ＷＴ−ＣＦＴＲ発現細胞、ＤＭＳＯ、及び低温（２７℃）が、対照として機能した。 増加する投与量（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、及び１０μＭ）の化合物ＤＢＭ ２２８、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−Ｂｒ、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−Ｃｌ、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ３１、及び業界標準ＶＸ−８０９を用いた、ＣＦヒト気道上皮細胞のｄｅｌＦ５０８ ＣＦＴＲレスキューを示すウェスタンブロットを含む。ＤＭＳＯ及び低温（２７℃）が、対照として機能した。 増加する投与量（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、及び１０μＭ）の化合物ＤＢＭ ７０１、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０１、化合物ＤＢＭ ３０８、化合物ＤＢＭ ２２８、ＤＢＭ ７０７、ＤＢＭ−Ｅ−０３、ＤＢＭ−３１８、ＤＢＭ ７１５、及び業界標準ＶＸ−８０９を用いた、ＣＦヒト気道上皮細胞のｄｅｌＦ５０８ ＣＦＴＲレスキューを示すウェスタンブロットを含む。ＤＭＳＯ及び低温（２７℃）が、対照として機能した。 増加する投与量（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、及び１０μＭ）の化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ８、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−Ｂｒ、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−Ｃｌ、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−Ａｃ（ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−ＣＯＯＣＨ３）、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ１６−Ｆ、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ３１、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ２１、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ２１−Ｂｒ、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ２１−Ａｃ（ＤＢＭ−００３−ＴＵ２１−ＣＯＯＣＨ３）、化合物ＤＢＭ−００３−ＴＵ２１−Ｆ、及び業界標準ＶＸ−８０９を用いた、ＣＦヒト気道上皮細胞のｄｅｌＦ５０８ ＣＦＴＲレスキューを示すウェスタンブロットを含む。ＤＭＳＯ及び低温（２７℃）が、対照として機能した。 増加する投与量（１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、及び１０μＭ）のＶＸ−８０９、化合物ＤＢＭ ７０１、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０１、化合物ＤＢＭ ３０８、化合物ＤＢＭ ２２８、化合物ＤＢＭ ７０７、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０２、化合物ＤＢＭ ３２８、及び化合物ＤＢＭ ７１５のブロットのための濃度測定グラフを示す。ＤＭＳＯ及び低温（２７℃）が、対照として機能した。 ウッシングチャンバ電気データトレースの概略図である。 １００ｎＭのＶＸ−８０９（一番上の図）、ＤＭＳＯビヒクル対照群（真ん中の図）、及び１００ｎＭの化合物ＤＢＭ ２２８（一番下の図）を用いた、高抵抗ＣＦヒト気道上皮細胞単分子膜の機能的頂端膜常在性ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物イオンチャネルの修正を示すウッシングチャンバ由来短絡電流トレースの概略図である。 ０．３μＭの化合物ＤＢＭ ３０８、３μＭのＶＸ−８０９、３μＭのＶＸ−８０９と０．３μＭの化合物ＤＢＭ ３０８との組み合わせ、及びＤＭＳＯビヒクル対照群を用いた、高抵抗ＣＦヒト気道上皮細胞単分子膜の機能的頂端膜常在性ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物イオンチャネルの修正を示すウッシングチャンバ由来短絡電流トレースの概略図である。 ウッシングチャンバ内の化合物ＤＢＭ ３０８の濃度応答曲線図を示す。 化合物ＤＢＭ ３０８及び化合物ＤＢＭ ３２８を用いた、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を支持する一次ＣＦヒト気管支上皮細胞単分子膜のアミロライド感受性上皮ナトリウムチャネル電流の抑制を示すウッシングチャンバ由来トレースの図を示す。 化合物ＤＢＭ ３０８（左側の図）及び化合物ＤＢＭ ３２８（右側の図）の慢性治療を用いるｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を支持するＣＦ気管支上皮細胞単分子膜を用いた、電気実験から生成されるデータの図を示す。
本明細書に説明されるクマリン誘導体化合物及び方法は、タンパク質フォールディング障害の治療において有用である。本明細書に説明される化合物及び方法は、例えば、嚢胞性線維症、家族性高コレステロール血症、真性糖尿病、アルファ１抗トリプシン欠損症、ファブリー病、ゴーシェ病、ポンペ病、甲状腺機能低下症、アルツハイマー病、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療において有用であり得る。これらの化合物は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲのミスフォールディングまたは欠陥輸送を修正することができ、したがって、化合物は、ＣＦＴＲコレクターとして有効である（すなわち、化合物は、細胞内のハロゲン化物流出をレスキューするのに有効である）。ＣＦＴＲコレクター化合物のスクリーニングのための方法も、本明細書に説明される。
Ｉ．化合物
本明細書に説明されるクマリン誘導体のクラスは、式Ｉ：
によって表されるもの、及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
式Ｉでは、Ｒ１は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルである。
また、式Ｉでは、Ｒ２は、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アジド、チオシアネート、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のアルコキシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のカルボニル、または置換もしくは非置換のＣ１−６アルキルである。
加えて、式Ｉでは、Ｒ３は、水素または置換もしくは非置換のＣ１−６アルキルである。
更には、式Ｉでは、Ｒ４は、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、置換もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールである。
また、式Ｉでは、Ｘは、ＳまたはＯである。
加えて、式Ｉでは、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＮＣＨ３である。
本明細書で使用されるとき、アルキル及びアルケニルという用語は、直鎖及び分岐鎖一価置換基を含む。例としては、メチル、エチル、及びイソブチル等が挙げられる。本明細書に説明される化合物及び方法において有用なこれらの基の範囲は、Ｃ１−Ｃ８アルキル及びＣ３−Ｃ８アルケニルを含む。
ヘテロアルキル及びヘテロアルケニルは、アルキル及びアルケニルと同様に定義されるが、骨格内にＯ、Ｓ、またはＮヘテロ原子、またはこれらの組み合わせを含むことができる。本明細書に説明される化合物及び方法において有用なこれらの基の範囲は、Ｃ１−Ｃ８ヘテロアルキル及びＣ３−Ｃ８ヘテロアルケニルを含む。
シクロアルキルという用語は、単一の環式環または複数の縮合環を有する環式アルキル基を含む。例としては、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、及びアダマンタニルが挙げられる。本明細書に説明される化合物及び方法において有用なこれらの基の範囲は、Ｃ３−Ｃ９シクロアルキルを含む。
ヘテロシクロアルキルという用語は、シクロアルキルと同様に定義されるが、環式骨格内にＯ、Ｓ、またはＮヘテロ原子、またはこれらの組み合わせを含むことができる。本明細書に説明される化合物及び方法において有用なこれらの基の範囲は、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルを含む。
アリール基は、例えば、フェニル及び置換フェニルを含む。ヘテロアリール基は、単独でかまたは５または６員環の組み合わせのいずれかで、Ｏ、Ｎ、またはＳヘテロ原子を含有する。１個のヘテロ原子を有するヘテロアリール基の例としては、有効炭素原子のうちのいずれか上で置換または有効炭素原子のうちのいずれかによって結合する、ピリジル、チエニル、及びフリルが挙げられる。２個以上のヘテロ原子を有するヘテロアリール基の例としては、有効炭素原子のうちのいずれか上で置換または有効炭素原子のうちのいずれかによって結合する、ピリミジニル、オキサゾリル、及びチアゾリルが挙げられる。アリール基及びヘテロアリール基は、更なる縮合環を含むことができる。このような基の例としては、有効炭素原子のうちのいずれか上で置換または有効炭素原子のうちのいずれかによって結合する、インダニル、ナフチル、ベンゾチエニル、キノリニル、及びこれらの異性体が挙げられる。
上述の全ての基は、非置換であり得るか、または同じかまたは異なり得る次のもののうちの１つ以上で置換され得る。適切な置換基の例としては、次のもの、アルコキシ（例えば、メトキシ）、アルキル、アリール、カルボキシレート、カルボキシレートエステル、シアノ、ハロゲン（例えば、クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、ヘテロアリール、ニトロ、アミノ、アルキルスルホニル、スルホンアミド、逆スルホンアミド、及びチオが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施例では、式Ｉは、構造Ｉ−Ａによって表される。
構造Ｉ−Ａでは、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉのために上に定義される通りである。
また、構造Ｉ−Ａでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のカルボニル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、置換もしくは非置換のＣ２−６アルケニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のスルホンアミド、置換もしくは非置換のスルホニル、または置換もしくは非置換のチオから選択される。カルボニルは、カルボン酸または酸誘導体であり得る。本明細書に使用されるとき、酸誘導体は、例えば、エステルまたはアミド等のカルボン酸の機能的誘導体を指す。
いくつかの実施例では、式Ｉは、構造Ｉ−Ｂによって表される。
構造Ｉ−Ｂでは、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉのために上に定義される通りである。
また、構造Ｉ−Ｂでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、構造Ｉ−Ａのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式Ｉは、構造Ｉ−Ｃによって表される。
構造Ｉ−Ｃでは、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉのために上に定義される通りである。
また、構造Ｉ−Ｃでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、構造Ｉ−Ａのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式Ｉは、構造Ｉ−Ｄによって表される。
構造Ｉ−Ｄでは、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉのために上に定義される通りである。
また、構造Ｉ−Ｄでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、構造Ｉ−Ａのために上に定義される通りである。
随意に、例えば、Ｒ１及びＲ２、Ｒ５及びＲ６、Ｒ６及びＲ７、Ｒ７及びＲ８、またはＲ８及びＲ９等の構造Ｉ−Ａ、Ｉ−Ｂ、Ｉ−Ｃ、及びＩ−Ｄの隣接するＲ基は、組み合わさって、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のシクロアルケニル、置換もしくは非置換のヘテロアリール、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルを形成する。
式Ｉの例としては、次の化合物が挙げられる。
化合物Ｐ１〜Ｐ１０７では、Ｒは、ハロゲン（例えば、クロロ）であり得る。
本明細書に説明されるクマリン誘導体のクラスは、式ＩＩ：
によって表されるもの、及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
式ＩＩでは、Ｌは、ヘテロアリールである。
また、式ＩＩでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素及びメトキシから選択される。
いくつかの実施例では、式ＩＩは、構造ＩＩ−Ａによって表される。
構造ＩＩ−Ａでは、Ｘは、ＮＨまたはＯである。
また、構造ＩＩ−Ａでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式ＩＩは、構造ＩＩ−Ｂによって表される。
構造ＩＩ−Ｂでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式ＩＩは、構造ＩＩ−Ｃによって表される。
構造ＩＩ−Ｃでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩのために上に定義される通りである。
式ＩＩの例としては、次の化合物が挙げられる。
本明細書に説明されるクマリン誘導体のクラスは、式ＩＩＩ：
によって表されるもの、及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
式ＩＩＩでは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、各々独立して、ＣＨ及びＮから選択される。
また、式ＩＩＩでは、Ｙは、ＯまたはＮＲであり、式中、Ｒは、水素またはメチルである。
加えて、式ＩＩＩでは、Ｒ２は、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、またはトリフルオロアルキルである。随意に、Ｒ２は、Ｃｌまたはメチルである。
更には、式ＩＩＩでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素及びメトキシから選択される。
いくつかの実施例では、式ＩＩＩは、構造ＩＩＩ−Ａによって表される。
構造ＩＩＩ−Ａでは、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩＩのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式ＩＩＩは、構造ＩＩＩ−Ｂによって表される。
構造ＩＩＩ−Ｂでは、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩＩのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式ＩＩＩは、構造ＩＩＩ−Ｃによって表される。
構造ＩＩＩ−Ｃでは、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩＩのために上に定義される通りである。
いくつかの実施例では、式ＩＩＩは、構造ＩＩＩ−Ｄによって表される。
構造ＩＩＩ−Ｄでは、Ｒは、水素またはメチルである。
また、構造ＩＩＩ−Ｄでは、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、式ＩＩＩのために上に定義される通りである。
式ＩＩＩの例としては、次の化合物が挙げられる。
本明細書に説明されるクマリン誘導体のクラスは、式ＩＶ：
によって表されるもの、及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
式ＩＶでは、Ｘ１は、ＯまたはＮＣＨ３である。
また、式ＩＶでは、Ｘ２は、ＣＨまたはＮである。
加えて、式ＩＶでは、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＮＣＨ３である。
更には、式ＩＶでは、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、各々独立して、水素及びメトキシから選択される。
式ＩＶの例としては、次の化合物が挙げられる。
本明細書に説明されるクマリン誘導体のクラスは、式Ｖ：
によって表されるもの、及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
式Ｖでは、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、水素、置換もしくは非置換のアミノ、及び置換もしくは非置換のカルボニルから選択される。
式Ｖの例としては、次の化合物が挙げられる。
本明細書に説明されるクマリン誘導体のクラスは、式ＶＩ：
によって表されるもの、及びその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
式ＶＩでは、Ｘは、ＣＨ２、ＮＨ、またはＯである。
式ＶＩの例としては、次の化合物が挙げられる。
ＩＩ．化合物の作製方法
本明細書に説明される化合物は、様々な方法で調製され得る。化合物は、種々の合成方法を用いて合成され得る。これらの方法のうちの少なくともいくつかは、有機合成化学の分野で周知のものである。本明細書に説明される化合物は、容易に入手可能な出発材料から調製され得る。最適反応条件は、使用される特定の反応物または溶媒によって異なり得るが、このような条件は、ルーチン最適化手順によって当業者が決定できる。
式Ｉ−ＶＩの変分は、各化合物について説明されるように、種々の構成物の加算、減算、または移動を含む。同様に、１つ以上のキラル中心が分子内に存在する場合、全ての考えられるキラル変異形が含まれる。加えて、化合物合成は、種々の化学基の保護及び脱保護を含むことができる。保護及び脱保護の使用、及び適切な保護基の選択は、当業者によって決定され得る。保護基の化学は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９１に見出すことができ、当該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書に説明される化合物を生成するための反応は、有機合成の当業者によって選択され得る溶媒中で行われ得る。溶媒は、反応が行われる条件、すなわち、温度及び圧力下で、出発材料（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。反応は、１つの溶媒または２つ以上の溶媒の混合物中で行われ得る。生成物または中間体形成は、当該分野では周知の任意の好適な方法に従って、監視され得る。例えば、生成物形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）赤外分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ可視）、または質量分析法等の分光手段、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または薄層クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーによって監視され得る。
ＩＩＩ．医薬製剤
本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグのうちの１つ以上は、薬学的担体を含む薬学的組成物中に提供され得る。更に、本明細書に説明される１つ以上の化合物は、肺、消化、肝臓、及び胆道関連の疾病及び疾患のための治療を含む他の薬剤と組み合され得る。例えば、嚢胞性線維症の場合、本明細書に説明される化合物は、粘液希釈性薬物（例えば、ドルナーゼアルファ、Ｎ−アセチルシステイン、及び高張食塩水）、気管支拡張薬（例えば、硫酸メタプロテレノール、ピルブテロールアセテート、サルメテロール、アルブテロール、及び硫酸テルブタリン）、Ｐ２Ｙ２−受容体刺激薬（例えば、デヌホソル）、及びナンセンス変異を標的とする薬剤（例えば、ＰＴＣ１２４）と組み合され得る。本明細書に説明される化合物と組み合され得る更なる薬剤の更なる例として、抗生物質（例えば、アミノグリコシド、抗シュードモナスペニシリン、及びセファロスポリン）、抗菌薬（例えば、リファブチン）、エタンブトール、クラリスロマイシン、クロファジミン、アズトレオナム、ステロイド性及び非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン及びプレドニゾン）、ペントキシフィリン、ドルナーゼアルファ、またはウルソデオキシコール酸が挙げられる。
本明細書に説明される１つ以上の化合物は、１つ以上の他の治療薬または予防薬と組み合わせて投与される薬学的組成物として提供され得る。全体を通して使用されるとき、治療薬剤は、病態を寛解させる際に効果的な化合物または組成物である。治療薬の実例は、化学療法剤、抗ウイルス剤、抗日和見感染剤、抗生物質、及び免疫賦活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。随意に、２つ以上の治療薬が、提供される組成物と組み合わせ投与される。
本明細書に説明される１つ以上の化合物は、更なる薬剤を使ってまたはそれ無しで、吸入療法用の吸入器または噴霧吸入器の形態で提供され得る。本明細書に使用されるとき、吸入療法は、エアロゾル形態での気道への本明細書に説明される化合物等の治療薬の送達（すなわち、肺送達）を指す。本明細書に使用されるとき、エアロゾルという用語は、圧力下で噴霧剤ガスによって治療適用の部位に担持される極微細液体または固体粒子を指す。薬学的エアロゾルが用いられる場合、エアロゾルは、流体担体及び噴霧剤の混合物中に溶解、懸濁、または乳化され得る、本明細書に説明される１つ以上の化合物を含有する。エアロゾルは、溶液、懸濁液、エマルション、粉末、または半流動性調製の形態であり得る。粉末の場合、装置が呼吸起動式乾燥粉末吸入器であると、噴霧剤ガスを必要としない。用いられるエアロゾルは、患者の気道を通る微細固体粒子としてまたは液体ミストとしての投与を意図している。
本明細書に説明される１つ以上の化合物を含有するエアロゾルパッケージの噴霧剤は、エアロゾルパッケージ上のバルブが開いている場合、化合物を排出するためにコンテナ内に圧力を発生させることができる。フッ素化炭化水素（例えば、トリクロロモノフルオロメタン、ジクロロジフィウオロメタン、及びジクロロテトラフルオロメタン）及び圧縮ガス（例えば、ニトロゲン、二酸化炭素、一酸化二窒素、またはＦｒｅｏｎ）等の種々の種類の噴霧剤が、利用できる。エアロゾルパッケージの蒸気圧は、用いられる噴霧剤（単数または複数）によって決定され得る。各成分の噴霧剤の割合を変えることによって、任意の所望の蒸気圧は、個別の噴霧剤の蒸気圧の制限内で得ることができる。
上に説明されるように、本明細書に説明される１つ以上の化合物は、ガス中の実質的に均一のサイズの極微細液体粒子を生成する器具である噴霧吸入器を用いて提供され得る。本明細書に説明される１つ以上の化合物を含有する液体は、ミストの形態で直径約５ｍｍ以下の液滴で分散され得る。小さい液滴は、噴霧吸入器の排出管を通る空気流または酸素流によって担持され得る。得られるミストは、患者の気道内に浸透できる。
本明細書に説明される化合物の送達に有用な更なる吸入剤としては、口腔内スプレー、ミスト、計量式吸入器、及び乾燥粉末発生器が挙げられる（Ｇｏｎｄａ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８９：９４０−９４５，２０００を参照されたく、少なくともその文献中に教示される吸入に関して、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。例えば、本明細書に説明されるような１つ以上の化合物を含有する粉末組成物は、滑沢剤、担体、または噴霧剤を使ってまたはそれ無しで、患者に投与することができる。粉末形態の１つ以上の化合物の送達は、吸入によって粉末薬学的組成物を投与するための従来の装置を使って行うことができる。
意図する投与の様式に応じて、薬学的組成物は、例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、粉末、液体、エアロゾル、または懸濁剤、好ましくは、正確な量の１回の投与に好適な単位剤形等の固体、半流動性、または液体剤形の形態であり得る。組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わされる本明細書に説明される化合物またはこれらの誘導体の治療有効量を含み、加えて、他の薬用薬剤、薬学的薬剤、担体、または希釈剤を含むことができる。薬学的に許容されるとは、生物学的に望ましくないか、または他の理由で望ましくないことがない材料を意味し、許容されない生物学的効果を引き起こすか、またはそれが含まれる薬学的組成物の他の成分と有害な方法で相互作用することなく、選択された化合物と一緒に個人に投与できることである。
本明細書に使用されるとき、担体という用語は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、リピド、安定剤、または医薬製剤を使用する当該分野で周知である他の材料を包括する。組成物中で使用する担体の選択は、組成物の意図する投与の経路に依存するであろう。これらの材料を含有する薬学的に許容される担体及び製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｐａ．，２００５に説明される。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、及び他の有機酸を含む緩衝剤等の緩衝剤；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残渣未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、またはイムノグロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）（ＩＣＩ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）（ＢＡＳＦ；Ｆｌｏｒｈａｍ Ｐａｒｋ，ＮＪ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
非経口注射に好適な本明細書に説明される化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含有する組成物は、生理学的に許容される滅菌水溶性または非水溶性溶液、分散液、懸濁剤またはエマルション、及び滅菌注射剤または分散液中に再構築される滅菌粉末を含むことができる。好適な水性または非水性の担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例として、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、及びオレイン酸エチル等の注射用有機エステルが挙げられる。適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散の場合には要求される粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び予製剤等のアジュバントも含有できる。微生物の作用の予防は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の種々の抗菌剤及び抗真菌剤によって促進することができる。例えば、糖、塩化ナトリウム等の等張剤がまた、含まれてもよい。注射用薬学的形態の遷延吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅らせる薬剤の使用によってもたらされ得る。
本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの経口投与のための固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末、及び顆粒剤が挙げられる。このような固体剤形では、本明細書に説明される化合物またはその誘導体は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、または（ａ）例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸等の充填剤もしくは増量剤、（ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アリグネート（ａｌｉｇｎａｔｅｓ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシア等の結合剤、（ｃ）例えば、グリセロール等の湿潤剤、（ｄ）例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複雑珪酸塩、及び炭酸ナトリウム等の崩壊剤、（ｅ）例えば、パラフィン等の溶液遅延剤、（ｆ）例えば、四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、（ｇ）例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール等の湿潤剤、（ｈ）例えば、カオリン及びベントナイト等の吸着剤、及び（ｉ）例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤、またはそれらの混合物等である少なくとも１つの不活性の通例賦形剤（もしくは担体）と混合される。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含むことができる。
同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の賦形剤ならびに高分子量ポリエチレングリコール等を用いて軟充填及び硬充填のゼラチンカプセル剤の充填剤として用いることができる。
錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤等の固体剤形は、腸溶コーティング及び当該分野で周知の他のもの等のコーティング及びシェルで調製することができる。それらは、不透明化剤を含有してもよく、腸管の特定の部分において、活性化合物（単数または複数）を遅延様式で放出するような組成物であってもよい。使用することができる包埋組成物の例は、ポリマー物質及びワックスである。活性化合物はまた、適切な場合、上述の賦形剤のうちの１つ以上と共にマイクロカプセル化された形態であってもよい。
本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの経口投与のための液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルション、溶液、懸濁剤、シロップ、及びエリキシル剤が挙げられる。活性化合物に加えて、液体剤形は、水、または、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、特に、綿実油、落花生油、コーン胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物等の、他の溶媒、可溶化剤、及び乳化剤等の当該分野で一般に使用される不活性希釈剤を含有することができる。
このような不活性希釈剤以外に、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、または芳香剤等の更なる薬剤も含むことができる。
活性化合物に加えて、懸濁剤は、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ ｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、ベントナイト、寒天及びトラガント、またはこれらの物質の混合物等の更なる薬剤を含有することができる。
直腸投与のための本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの組成物は、随意に、化合物を好適な非刺激性賦形剤、またはココアバター、ポリエチレングリコール、もしくは坐剤ワックス等の担体と共に混合することによって調製され得、常温では固体であるが体温では液体であり、よって、直腸または膣腔で融解し、活性成分を放出する坐剤である。
本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの局部投与のための剤形としては、軟膏剤、粉末、スプレー、エアロゾル、及び吸入剤（例えば、口腔内スプレー、ミスト、計量式吸入器、噴霧吸入器、及び乾燥粉末発生器）が挙げられる。本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグは、生理学的に許容される担体及び必要とされ得るように任意の保存剤、緩衝剤、または噴霧剤と共に滅菌条件下で混合される。眼部用製剤、軟膏剤、粉末、及び溶液もまた、組成物の範囲内に属するとして企図される。
本明細書に使用されるとき薬学的に許容される塩という用語は、健全な医療判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、及びアレルギー反応等無しに対象の皮膚と接触させて使用するのに好適であり、合理的な利益／リスク比につり合い、本明細書に説明される化合物のそれらの意図する使用、ならびに可能な場合、双性イオン形態に関して有効である、本明細書に説明される化合物またはその誘導体のそれらの塩を指す。塩という用語は、本明細書に説明される化合物の比較的無毒の無機及び有機酸付加塩を指す。これらの塩は、化合物の単離及び精製中に生体内原位置で、または、精製した化合物をその遊離塩基形態で好適な有機または無機酸と別個に反応させること、及びこのようにして形成された塩を単離することによって、調製され得る。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸エステル、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、メタンスルホン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる。これらのものは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ及びアルカリ性土類金属ベースのカチオン、ならびに限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン等を含む、非毒性アンモニウム、４級アンモニウム、及びアミンカチオンを含むことができる。（Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８を参照されたく、少なくともその文献中に教示される組成物に関して、当該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）
本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの投与は、神経障害の治療に有効な期間にわたって、本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの治療有効量を用いて行われ得る。本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの有効量は、当業者によって決定でき、１日当たり１〜４回等の単回用量でまたは個々の分割量の形態で投与され得る、１日当たり哺乳類の約０．５〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物の例示的な用量を含む。あるいは、用量は、１日当たり約０．５〜約１５０ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約０．５〜約７５ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約０．５〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約０．５〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約２０ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、１日当たり約１０ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物、または１日当たり約５ｍｇ／ｋｇ体重の活性化合物であってもよい。当業者は、特定の用量レベル及び任意の特定の対象のための投与量の頻度が変化し得、用いられる特定の化合物の活量、その化合物の代謝安定性及び作用の長さ、対象の種、年齢、体重、健康状態、性別、及び食事、投与の様式及び時期、排泄作用の割合、合剤、及び特定の状態の重症度を含む様々な要因に依存するであろうことを理解するであろう。
ＩＶ．使用方法
本明細書に説明される本方法は、対象のタンパク質フォールディング障害（例えば、嚢胞性線維症）を治療する方法を含む。これらの方法は、本明細書に説明される構造の化合物を対象に投与するステップを含む。更なるステップが、本明細書に説明される本方法内に含まれ得る。例えば、本方法は、嚢胞性線維症等のタンパク質フォールディング障害を持つ対象を選択し、本明細書に説明されるＣＦＴＲコレクターのうちの１つ以上を対象に投与するステップを更に含み得る。
本明細書に説明される本方法では、治療される対象は、１つ以上の更なる薬剤を使って更に治療され得る。１つ以上の更なる薬剤及び本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグは、単一の組成物中（例えば、混合物として）に、または同時投与を含む任意の順でならびに最大数日間あける時間的に離れた順で別個の組成物中に、一緒に投与されてもよい。本方法はまた、１つ以上の更なる薬剤及び／または本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの２回以上の投与を含むことができる。１つ以上の更なる薬剤及び本明細書に説明される化合物またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグの投与は、同じかまたは異なる経路によって、かつ同時または順次であり得る。
上述のように、本明細書に説明される化合物は、タンパク質フォールディング障害の治療において有用である。タンパク質フォールディング障害の例としては、嚢胞性線維症；アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルトヤコブ病、クールー病、ＧＳＳ病、ハンチントン病、ポリグルタミン病、プリオン病、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、筋萎縮性側索硬化症、アレキサンダー病、原発性全身性アミロイドーシス、続発性全身性アミロイドーシス、老人性全身性アミロイドーシス、及び老化のアミロイドーシス等の神経変性疾患；白内障、網膜色素変性症、及び黄斑変性症等の眼疾患、及び膵島アミロイド、甲状腺の髄様癌、遺伝腎臓アミロイドーシス、血液透析関連アミロイドーシス、デスミン関連ミオパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病インシピジス（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎｓｉｐｉｄｉｓ）、糖尿病インシピジス、アルファ１抗トリプシン欠損症、ファブリー病、ゴーシェ病、ポンペ病、及びシャルコー・マリー・トゥース病等の他の疾患が挙げられる。本明細書に説明される化合物はまた、慢性気管支炎及び／または肺気腫（例えば、喫煙または煙への曝露によって生じる肺気腫）を含む慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療においても有用である。ＣＦＴＲ ｍＲＮＡ及びタンパク質は、疾患のＣＯＰＤの包括的なものの中で下方制御される。
本明細書に説明される化合物はまた、細胞内のハロゲン化物流出をレスキューする、細胞内のタンパク質のプロセシング欠陥を修正する、及びコール内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物チャネルを修正する際にも有用である。細胞内のハロゲン化物流出をレスキューする本方法は、細胞を本明細書に説明されるような化合物と接触させることを含む。これらの方法では、細胞は、ＣＦＴＲ変異を内因的に発現する。随意に、ＣＦＴＲ変異は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲである。随意に、ハロゲン化物流出は、塩化物流出である。
細胞内のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質のプロセシング欠陥を修正する本方法は、細胞を本明細書に説明されるような化合物と接触させることを含む。これらの方法では、細胞は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を発現する。随意に、細胞は、ＣＦヒト気道上皮細胞またはＣＦヒト肺である。
細胞内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物チャネルを修正する本方法は、細胞を本明細書に説明されるような化合物と接触させることを含む。随意に、塩化物チャネルは、分極上皮細胞の頂端膜内に存在する。随意に、本方法は、インビトロまたはインビボで実施される。
Ｖ．プロファイリング方法
加えて、本明細書に説明されるようなタンパク質ミスフォールディング障害を治療するための化合物（すなわち、ＣＦＴＲコレクター）をプロファイリングする方法を提供する。本方法は、嚢胞性線維症等のタンパク質フォールディング疾患を治療するための、対照と比較したときの本明細書に説明される化合物の相対効力及び相対効果を計測できるアッセイを用いる。本方法は、随意に、ＣＦＴＲ変異（例えば、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異）を内因的に発現するＣＦ気管支上皮細胞を含む。細胞は、例えば、一次または不死性ＣＦ肺及び／または気道上皮細胞（例えば、ＣＦＢＥ４１ｏ細胞）であってもよい。ＣＦＢＥ４１ｏ細胞は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲホモ接合性バックグラウンドのヒト気道上皮細胞である。随意に、細胞は、ＣＦＴＲ変異を過剰発現しない。
ＣＦＴＲコレクターを特定する他の方法において使用される細胞モデルは、低温、グリセロール、４−フェニルブチレート、ＤＭＳＯ等の化学シャペロン、及びモデルとして形質導入されたフィッシャーラット甲状腺細胞ラインのＣＦＴＲの過剰発現を用いているが、本発明の方法は、結果を歪める場合がある変数である、ＣＦＴＲの過剰発現、低温、及び化学シャペロンを必要とせず、随意に、排除する。
このプロファイリングの方法は、細胞からのハロゲン化物流出のレスキューを検出することを含むことができる。細胞からのハロゲン化物流出のレスキューを検出するステップは、ハロゲン化物反応停止色素６−メトキシ−Ｎ−（３−スルホプロピル）−キノリニウム（ＳＰＱ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて監視できる。本方法では、細胞は、ある期間（例えば、４８時間）本明細書に説明されるような化合物を使って治療される。次いで、ハロゲン化物流出のレスキューまたは修正は、ハロゲン化物色素を有するＳＰＱアッセイを用いて検出される。ハロゲン化物流出レスキューまたは修正の程度は、化合物が、修正されたｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ由来の膜塩化物イオン輸送を有し、よって嚢胞性線維症を治療する際に有用であることを示す。随意に、ハロゲン化物流出は、塩化物流出である。スクリーニングの方法は、多濃度の化合物を使って方法を実施することを更に含むことができる。
このプロファイリングの方法はまた、ＣＦＴＲグリコシル化またはＣＦＴＲタンパク質プロセシングの程度を決定することも含むことができる。随意に、本方法は、ウェスタンブロット分析法を用いて実施されてもよい。本方法では細胞は、ある期間（例えば、２４時間）、及び随意に、多濃度（例えば、４用量）で、本明細書に説明されるような化合物を使って治療され得る。
このプロファイリングの法は、細胞（例えば、分極ＣＦヒト気道上皮細胞）の頂端細胞膜内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物イオンチャネルの程度を決定することを更に含むことができる。本方法は、ウッシングチャンバ式の短絡電流の測定法、ボルトアンメータ式の開回路経上皮電圧及び経上皮抵抗の測定法、及びパッチクランプ電気生理学法等の電気生理学的方法を使用できる。
一般的に、タンパク質ミスフォールディング障害を治療するために有用な化合物は、天然物または合成（または半合成）抽出物の巨大ライブラリー、または当該分野で周知の方法に従う化合物ライブラリーから特定できる。試験用抽出物または化合物の正確な供給源は、スクリーニング手順（複数可）にとって重要ではない。したがって、実質的に、いくつもの化学抽出物または化合物が、本明細書に説明される方法を用いてスクリーニングできる。このような抽出物または化合物の例としては、植物ベース、真菌ベース、原核ベース、または動物ベース抽出物、発酵ブロス、及び合成化合物、ならびに既存の化合物の修正が挙げられるが、これらに限定されない。数多くの方法がまた、これらに限定されないが糖類系、リピドベース、ペプチドベース、ポリペプチドベース、及び核酸ベース化合物を含むいくつもの化学化合物のランダムまたは直接合成（例えば、半合成または全合成）を生成するために利用可能である。細菌性、真菌性、植物性、及び動物性抽出物の形態の天然化合物の合成化合物ライブラリー（単数及び複数）は、市販されている。加えて、天然及び合成的に生成されたライブラリーは、所望の場合、当該分野で周知の方法に従って、例えば、標準抽出及び分画方法によって生成される。更に、所望の場合、任意のライブラリーまたは化合物が、標準の化学的、物理的、または生化学的方法を用いて容易に修正される。
本明細書に使用されるとき、治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）、または治療する（ｔｒｅａｔ）という用語は、１つ以上の徴候または症状の発症を低減させるまたは遅らせる方法、もしくは、疾患もしくは障害（例えば、嚢胞性線維症等のタンパク質ミスフォールディング障害）に関して治療される対象の臨床的状態における改善を指す。したがって、開示される方法では、治療は、疾患または状態の１つ以上の症状の重症度における１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の低減を指し得る。例えば、対照と比較して、感染または入院の数の低減、呼吸症状または消化器症状の低減、栄養状態の改善、または対象の肺機能の改善は、有効な治療を示す。本明細書に使用されるとき、対照は、未治療の状態（例えば、本明細書に説明される化合物及び組成物を使って治療されていない対象）を指す。したがって、この低減は、天然レベルまたは対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％、または１０％〜１００％の間の任意の低減率であり得る。治療が、必ずしも疾患、状態、またはその疾患もしくは状態の症状の治癒もしくは完全消失を指す必要はないことを理解されたい。
本明細書に使用されるとき、疾患もしくは障害を予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）、予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）、及びその予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）という用語は、対象が疾患もしくは障害の１つ以上の症状を示し始める前、またはそれとほぼ同時に起こる、例えば、組成物または治療薬の投与等の動作を指し、疾患もしくは障害の１つ以上の症状の発症または重症度を阻害または遅らせる。
本明細書に使用されるとき、減少、低減、または阻害に関する参照は、対照レベルと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上の変化を含む。このような用語は、完全な排除を含み得るが、必ずしもそれを含むとは限らない。
本明細書に使用されるとき、対象は、哺乳類及び非哺乳類の両方を意味する。哺乳類は、例えば、ヒト、例えば、類人猿及びサル等の非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、ラット、マウス、ブタ、及びヤギを含む。非哺乳類は、例えば、魚類及び鳥類を含む。
本出願全体を通して、種々の出版物が参照される。これらの出版物のその全体における開示は、参照により本出願に組み込まれる。
以下の実施例は、本明細書に説明される方法及び化合物の特定の態様を更に示すこと意図するものであり、特許請求の範囲を限定することを意図しない。
実施例１：合成
ＤＢＭ−３０８の合成スキームを、スキーム１に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−１の合成スキームを、スキーム２に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−２の合成スキームを、スキーム３に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−３を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム４に示した。
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及び１−ブロモ−２−エトキシベンゼン（１０８ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を、Ｃｓ２ＣＯ３（５２８ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ．）、キサントホス（６０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（２ｍＬ）の存在下で１６０℃にて１５分間マイクロウェーブ内で反応させた。次いで、得られる生成物を、プレＨＰＬＣで精製して、黄色固体として８−クロロ−３−（２−（２−エトキシフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（２０ｍｇ、１０％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３９９．１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．４０（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、４．１４（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ）、６．９９〜７．０５（ｍ，３Ｈ）、７．３９（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７６〜７．７９（ｍ，２Ｈ）、７．９３（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、８．４８〜８．４９（ｍ，１Ｈ）、８．６５（ｓ，１Ｈ）、９．５４（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−４を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム５に示した。
ステップ１：Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（２−ニトロフェノキシ）エタンアミン： 乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の２−ニトロフェノール（１３．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）、２−（ジメチルアミノ）エタノール（１０．７ｇ、１２ｍｍｏｌ）、及びＰＰｈ３（２９ｇ、１１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＤＩＡＤ（２２ｇ、１１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。次いで、混合物を室温で１７時間攪拌した。溶媒を除去した。残渣を１ Ｎ ＨＣｌ水溶液中に溶解し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。水層を飽和ＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。有機層を回収し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して黄色油としてＮ，Ｎ−ジメチル−２−（２−ニトロフェノキシ）エタンアミン（２．１ｇ、１０％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２１１．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）アニリン：
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中のＮ，Ｎ−ジメチル−２−（２−ニトロフェノキシ）エタンアミン（１．０ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（８００ｍｇ、１０％）を添加した。混合物をＨ２下で５０℃で２時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却し、次いで濾過した。濾液を濃縮して、黄色油として２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）アニリン（７３０ｍｇ、８５％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１８１．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：Ｎ−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニルカルバモチオイル）ベンズアミド：
２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）アニリン（５５０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びベンゾイルイソチオシアナート（７２７ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）を反応させた。次いで、得られる混合物を濾過によって精製して白色固体としてＮ−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（３６０ｍｇ、３５％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３４４．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ４：１−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニル）チオ尿素：
Ｎ−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（３４３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ、３０％）中のＮａＯＭｅの溶液と反応させ、得られる混合物を濾過によって精製して白色固体として１−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）−フェニル）チオ尿素（１６０ｍｇ、６７％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２４０．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ５：８−クロロ−３−（２−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（約２７９ｍｇ、５０％、０．５３ｍｍｏｌ）及び１−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニル）チオ尿素（１０６ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、８０℃にてエタノール中で反応させた。次いで、生成物を濾過によって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（２−（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）フェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（６０ｍｇ、３１％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：４４２．０［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＦ３ＣＯＯＤ）：δ３．６４（ｓ，６Ｈ）、４．２７（ｓ，２Ｈ）、５．０２（ｓ，２Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７５（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．９４〜７．９９（ｍ，２Ｈ）、８．１２（ｓ，１Ｈ）、８．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．３３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、９．０３（ｓ，１Ｈ）
ＤＢＭ−Ｅ−５を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム６に示した。
ステップ１：Ｎ−（３，５−ジメチルフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド：
３，５−ジメチルアニリン（２．４２ｇ、２０ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル中のベンゾイルイソチオシアナート（４．２４ｇ、２６ｍｍｏｌ）を０℃〜室温の温度にて１７時間以上反応させた。次いで、得られる混合物を濾過によって精製して白色固体としてＮ−（３，５−ジメチルフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（３．５ｇ、６１％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２８５．１［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：１−（３，５−ジメチルフェニル）チオ尿素：
Ｎ−（３，５−ジメチルフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（３．５ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（４ｍＬ、３０％）中のＮａＯＭｅの溶液を室温にて２時間混合した。次いで、得られる混合物を濾過によって精製して白色固体として１−（３，５−ジメチルフェニル）チオ尿素（１．１ｇ、５１％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１８１．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（約１ｇ、５０％、１．６７ｍｍｏｌ）及び１−（３，５−ジメチルフェニル）チオ尿素（６００ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を、８０℃にてエタノール中で反応させた。次いで、生成物を濾過によって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（５００ｍｇ、７８％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３８３．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ４：８−クロロ−３−（２−（（３，５−ジメチルフェニル）（メチル）アミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）溶液に、０℃でＮａＨ（３１ｍｇ、６０％、０．７８ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を０℃で１５分間撹拌した。ＭｅＩ（５６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で２時間攪拌した。反応液を、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を使って反応を停止させ、ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（（３，５−ジメチルフェニル）（メチル）アミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（６０ｍｇ、３９％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３９７．０［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．３１（ｓ，６Ｈ）、３．５６（ｓ，３Ｈ）、６．９８（ｓ，１Ｈ）、７．１３（ｓ，２Ｈ）、７．３９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．６３（ｓ，１Ｈ）、７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．６９（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−６を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム７に示した。
ステップ１：３−（２−アミノオキサゾール−４−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン：
オーブン乾燥マイクロウェーブバイアルに、３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（６００ｍｇ、５０％、１ｍｍｏｌ）、尿素（９０ｍｇ、１．５当量）、及び乾燥ＮＭＰ（２ｍＬ）を添加した。バイアルをキャップし、窒素でパージした。反応混合物を、マイクロ波照射下で３０分間１５０℃に加熱した。次いで、混合物を冷却させ、プレＨＰＬＣで精製して、淡黄色固体として３−（２−アミノオキサゾール−４−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１５０ｍｇ、５７％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２６３．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）オキサゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
オーブン乾燥マイクロウェーブバイアルに、３−（２−アミノオキサゾール−４−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、１−ブロモ−３，５−ジメチルベンゼン（７０２ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（２４９ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）、キサントホス（４４ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）、及び乾燥ジオキサン（３ｍＬ）を添加した。バイアルをキャップし、窒素でパージした。反応混合物を、マイクロ波照射下で１時間１００℃に加熱した。混合物を冷却させ、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜１０％）によって精製して粗生成物を得た。粗生成物を、プレＨＰＬＣで精製して、黄色固体として８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）−オキサゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（１７ｍｇ、１２％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３６７．１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．３０（ｓ，６Ｈ）、６．６４（ｓ，１Ｈ）、７．３４（ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．７７〜７．７９（ｍ，１Ｈ）、７．９５（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、８．２０（ｓ，１Ｈ）、８．５０（ｓ，１Ｈ）、１０．１８（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−７を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム８に示した。
ステップ１：３−クロロ−２−（メチルアミノ）ベンゾニトリル：
乾燥ＤＭＦ（６０ｍＬ）中の２−アミノ−３−クロロベンゾニトリル（５．０ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＮａＨ（１．９７ｇ、６０％、４９．３ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を、０℃で１５分間撹拌した。ＭｅＩ（４．６７ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で２時間攪拌した。反応液を、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を使って反応を停止させ、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜５％）によって精製して白色固体として３−クロロ−２−（メチルアミノ）ベンゾニトリル（４．８ｇ、８８％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１６７．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：３−クロロ−２−（メチルアミノ）ベンズアルデヒド：
乾燥ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の３−クロロ−２−（メチルアミノ）ベンゾニトリル（４ｇ、２４ｍｍｏｌ）の溶液に、マイナス７８℃でＤＩＢＡＬ−Ｈ（１Ｍ、３６ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を室温で１７時間攪拌した。反応混合物を、飽和クエン酸溶液を使って反応を停止させ、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜３％）によって精製して黄色油として３−クロロ−２−（メチルアミノ）ベンズアルデヒド（１．４ｇ、３４％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１７０．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：３−アセチル−８−クロロ−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン：
キシレン（３０ｍＬ）中の３−クロロ−２−（メチルアミノ）ベンズアルデヒド（８００ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）の溶液を、１２０℃で２，２，６−トリメチル−４Ｈ−１，３−ダイオキシン−４−オン（６．７ｇ、４７ｍｍｏｌ）を使って処置した。反応混合物を、２時間１２０℃に加熱し、次いで室温に冷却した。溶媒を除去し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜３％）によって精製して黄色固体として３−アセチル−８−クロロ−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン（５００ｍｇ、４５％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２３６．０［Ｍ＋１］＋ ； １Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．６１（ｓ，３Ｈ）、３．８６（ｓ，３Ｈ）、７．３１（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７９〜７．８１（ｍ，１Ｈ）、７．９２〜７．９４（ｍ，１Ｈ）、８．４１（ｓ，１Ｈ）。
ステップ４：３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン：
ＣＨＣｌ３（２０ｍＬ）中の３−アセチル−８−クロロ−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン（４３２ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＣｕＢｒ２（４０４ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、７０℃で１７時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２ｘ）、ブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン（約５００ｍｇ、５０％）を提供し、それを直接次のステップで使用した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３１３．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
ステップ５：８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン：
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン（約２００ｍｇ、５０％、０．３２ｍｍｏｌ）及び１−（３，５−ジメチルフェニル）チオ尿素（１１５ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を、８０℃にてエタノール中で反応させた。次いで、生成物を濾過によって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−１−メチルキノリン−２（１Ｈ）−オン（５０ｍｇ、５０％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３９６．０［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．３１（ｓ，６Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、６．６４（ｓ，１Ｈ）、７．２９〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．６９〜７．７１（ｍ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．９９（ｓ，１Ｈ）、８．５８（ｓ，１Ｈ）、１０．１６（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−８を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム９に示した。
ステップ１：８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−クロロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１ｇ、６．４ｍｍｏｌ）及びＡｃ２Ｏ（４５ｍＬ）中のＣＨ３ＣＯＯＨ（１．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）の混合物を、６時間１７５℃に加熱した。次いで、混合物を室温に冷却した。形成された沈殿物を回収して褐色固体として８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１．０２ｇ、８８％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１８１．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：３−ブロモ−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン：
８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１ｇ、５．５６ｍｍｏｌ）及びＣＨ３ＣＯＯＨ（３０ｍＬ）中のＣＨ３ＣＯＯＫ（１．０９ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）の混合物中に、Ｂｒ２（４．４ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、５０℃で４時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）中に注ぎ、濾過して褐色固体を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜５％）によって精製して黄色固体として３−ブロモ−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（６４０ｍｇ、４５％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２６０．９［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：８−クロロ−３−（チアゾール−２−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−ブロモ−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（６２０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）、２−（トリブチルスタンニル）チアゾール（１．８ｇ、４．８ｍｍｏｌ）、及び乾燥ジオキサン（２０ｍＬ）中のＰｄ（ＰＰｈ３）４（２７６ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の混合物を、６時間１００℃に加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜３０％）によって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（チアゾール−２−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（５００ｍｇ、７９％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２６４．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ４：３−（５−ブロモチアゾール−２−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン：
８−クロロ−３−（チアゾール−２−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（４００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及びＣＨ３ＣＯＯＨ（１５ｍｌ）中のＣＨ３ＣＯＯＫ（４４７ｍｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の混合物中に、Ｂｒ２（４７９ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）中に注ぎ、濾過して褐色固体を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜２０％）によって精製して黄色固体として３−（５−ブロモチアゾール−２−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（２５０ｍｇ、４８％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３４２．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ５：８−クロロ−３−（５−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−２−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（５−ブロモチアゾール−２−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及び３，５−ジメチルアニリン（１８２ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｃｓ２ＣＯ３（２９３ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ．）、キサントホス（５２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（２ｍＬ）の存在下で１５０℃にて２５分間マイクロウェーブ内で反応させた。混合物を、プレＨＰＬＣによって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（５−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−２−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（２５ｍｇ、２２％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３８３．１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．２５（ｓ，６Ｈ）、６．５６（ｓ，１Ｈ）、６．７４（ｓ，２Ｈ）、７．４３（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．６３（ｓ，１Ｈ）、７．７９〜７．８１（ｍ，１Ｈ）、７．９３〜７．９４（ｍ，１Ｈ）、８．８１（ｓ，１Ｈ）、９．１５（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−１０を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム１０に示した。
ステップ１：Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）チアゾール−２−アミン：
２−ブロモチアゾール（３．２６ｇ、２０ｍｍｏｌ）、３，５−ジメチルアニリン（３．６ｇ、３０ｍｍｏｌ）、及びｐ−トルエンスルホン酸（１．７ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、ｉ−プロパノール（５０ｍＬ）中に溶解した。混合物を、８０℃で１７時間攪拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜２０％）によって精製して白色固体としてＮ−（３，５−ジメチルフェニル）チアゾール−２−アミン（１．１ｇ、２７％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２０５．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル３，５−ジメチルフェニル（チアゾール−２−イル）カルバメート：
Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）チアゾール−２−アミン（１．０２ｇ、５ｍｍｏｌ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（５．４５ｇ、２５ｍｍｏｌ）、及びｔ−ＢｕＯＨ（２０ｍＬ）中のＤＭＡＰ（１．５２ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）の混合物を、３６時間８０℃に加熱した。溶媒を除去し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜５％）によって精製して白色固体としてｔｅｒｔ−ブチル３，５−ジメチルフェニル（チアゾール−２−イル）カルバメート（３６０ｍｇ、２４％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３０５．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル５−ブロモチアゾール−２−イル（３，５−ジメチルフェニル）カルバメート：
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３，５−ジメチルフェニル（チアゾール−２−イル）カルバメート（３９０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の混合物に、室温でＮＢＳ（２５２ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を室温で１時間攪拌した。溶媒を除去し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜５％）によって精製して黄色固体としてｔｅｒｔ−ブチル５−ブロモチアゾール−２−イル（３，５−ジメチルフェニル）カルバメート（４４５ｍｇ、９０％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３８５．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル３，５−ジメチルフェニル（５−（トリメチルスタンニル）チアゾール−２−イル）カルバメート：
ｔｅｒｔ−ブチル５−ブロモチアゾール−２−イル（３，５−ジメチルフェニル）カルバメート（４４５ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）、１，１，１，２，２，２−ヘキサメチルジスタンナン（５７９ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（１５ｍＬ）中のＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１時間撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、飽和ＫＦ溶液を使って反応を停止させた。混合物を室温で１時間攪拌し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物ｔｅｒｔ−ブチル３，５−ジメチルフェニル（５−（トリメチルスタンニル）チアゾール−２−イル）カルバメート（約５００ｍｇ）を、次のステップで直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：４６９．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ５：ｔｅｒｔ−ブチル−５−（８−クロロ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）チアゾール−２−イル（３，５−ジメチルフェニル）
カルバメート：
ｔｅｒｔ−ブチル３，５−ジメチルフェニル（５−（トリメチルスタンニル）チアゾール−２−イル）
カルバメート（約５００ｍｇ）、３−ブロモ−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（３００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（１５ｍＬ）中のＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１時間撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を、プレＨＰＬＣによって精製して黄色固体としてｔｅｒｔ−ブチル５−（８−クロロ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）チアゾール−２−イル（３，５−ジメチルフェニル）カルバメート（２つのステップのための３０ｍｇ、１０％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：４８３．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ５：８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−５−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
ジオキサン（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル−５−（８−クロロ−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル）チアゾール−２−イル（３，５−ジメチルフェニル）カルバメート（２５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン（４Ｍ、６０ｍＬ）中のＨＣｌの溶液を添加した。混合物を、２５℃で１７時間攪拌した。次いで、溶媒を除去した。固体を、Ｅｔ２Ｏで洗浄して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（３，５−ジメチルフェニルアミノ）チアゾール−５−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（１７ｍｇ、７１％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３８３．１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＦ３ＣＯＯＤ）：δ２．９１（ｓ，６Ｈ）、７．５８（ｓ，２Ｈ）、７．７１（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．１６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．６１（ｓ，１Ｈ）、８．８２（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−１１の合成スキームを、スキーム１１に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−１２の合成スキームを、スキーム１２に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−１３を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム１３に示した。
ステップ１：１−ニトロ−２−プロポキシベンゼン：
２−ニトロフェノール（３ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）、１−ブロモプロパン（３．９ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（５０ｍＬ）中のＫ２ＣＯ３（８．９ｇ、６４．８ｍｍｏｌ）の混合物を、７０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２ｘ）及びブライン（２ｘ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝０〜３％）によって精製して黄色油として１−ニトロ−２−プロポキシベンゼン（３．３６ｇ、８６％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１８２．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：２−プロポキシアニリン：
１−ニトロ−２−プロポキシベンゼン（１．５ｇ、８．３ｍｏｌ）、Ｆｅ（２．３２ｇ、４１．５ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中のＮＨ４Ｃｌ（２．１９ｇ、４１．５ｍｍｏｌ）、及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）の混合物を、９０℃で２時間撹拌した。反応混合物を、濾過した。濾液を濃縮し、残渣を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮させて黄色油として２−プロポキシアニリン（１．１６ｇ、９３％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１５２．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：Ｎ−（２−プロポキシフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド：
２−プロポキシアニリン（１．１６ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）及びベンゾイルイソチオシアナート（１．６３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル中で０℃〜室温の温度にて３時間以上反応させた。混合物を、濾過によって精製して白色固体としてＮ−（２−プロポキシフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（１．３６ｇ、５６％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３１５．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ４：１−（２−プロポキシフェニル）チオ尿素：
Ｎ−（２−プロポキシフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（１．３６ｇ、４．３ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（４ｍＬ、３０％）中のＮａＯＭｅの溶液と反応させた。次いで、得られる混合物を濾過によって精製して白色固体として１−（２−プロポキシフェニル）チオ尿素（６５０ｍｇ、７１％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２１１．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ５：８−クロロ−３−（２−（２−プロポキシフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（約３００ｍｇ、５０％、０．５ｍｍｏｌ）及び１−（２−プロポキシフェニル）チオ尿素（１５８ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を、８０℃にてエタノール中で反応させた。次いで、生成物を濾過によって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（２−プロポキシフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（１１５ｍｇ、５６％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：４１３．０［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．９９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．７８〜１．８４（ｍ，２Ｈ）、４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．０１〜７．０５（ｍ，３Ｈ）、７．３９（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７６〜７．７９（ｍ，２Ｈ）、７．９３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．４１〜８．４４（ｍ，１Ｈ）、８．６４（ｓ，１Ｈ）、９．４９（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−１４の合成スキームを、スキーム１４に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−１５の合成スキームを、スキーム１５に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−１６を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム１６に示した。
ステップ１：Ｎ−（２−メトキシ−５−メチルフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド：
２−メトキシ−５−メチルアニリン（５００ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）及びベンゾイルイソチオシアナート（７７３ｍｇ、４．７４ｍｍｏｌを、アセトニトリル中で０℃〜室温の温度にて２時間以上反応させた。次いで、混合物を、濾過によって精製して白色固体としてＮ−（２−メトキシ−５−メチルフェニルカルバモチオイル）ベンズアミド（６００ｍｇ、５５％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３０１．１［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：１−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）チオ尿素：
Ｎ−（２−メトキシ−５−メチルフェニルカルバモチオイル）−ベンズアミド（６００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（０．７ｍＬ、３０％）中のＮａＯＭｅの溶液と反応させた。次いで、得られる混合物を濾過によって精製して白色固体として１−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）チオ尿素（３００ｍｇ、７６％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：１９７．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ３：８−クロロ−３−（２−（２−メトキシ−５−メチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（約３００ｍｇ、５０％、０．５ｍｍｏｌ）及び１−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）チオ尿素（１９７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を、８０℃にてエタノール中で反応させた。次いで、生成物を濾過によって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（２−メトキシ−５−メチルフェニルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（６０ｍｇ、３０％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３９９．０［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．３６（ｓ，３Ｈ）、３．８４（ｓ，３Ｈ）、６．８２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．９３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７５〜７．７７（ｍ，２Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、８．２９（ｓ，１Ｈ）、８．５８（ｓ，１Ｈ）、９．６２（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−１７の合成スキームを、スキーム１７に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−１８の合成スキームを、スキーム１８に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−２０を、以下に列挙する手順に従って調製し、合成スキームをスキーム１９に示した。
ステップ１：３−（２−アミノチアゾール−４−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（２−ブロモアセチル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（約１．４ｇ、５０％、２．３３ｍｍｏｌ）及びＥｔＯＨ（２５ｍＬ）中のチオ尿素（３５５ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）の混合物を、８０℃で２時間撹拌した。形成された沈殿物を回収して黄色固体として３−（２−アミノチアゾール−４−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（６３０ｍｇ、９６％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：２７９．０［Ｍ＋１］＋。
ステップ２：８−クロロ−３−（２−（３−メトキシピリジン（ｍｅｔｈｏｘｙｐｙｒｉｄｉｎ）−４−イルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン：
３−（２−アミノチアゾール−４−イル）−８−クロロ−２Ｈ−クロメン−２−オン（１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及び４−ブロモ−３−メトキシピリジン（ｍｅｔｈｏｘｙｐｙｒｉｄｉｎｅ）塩酸塩（８０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、Ｃｓ２ＣＯ３（３５１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２５ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）、キサントホス（４１ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）、及び乾燥ジオキサン（２ｍＬ）の存在下で１５０℃にて１．５時間マイクロウェーブ内で反応させた。次いで、混合物を、プレＨＰＬＣによって精製して黄色固体として８−クロロ−３−（２−（３−メトキシピリジン−４−イルアミノ）チアゾール−４−イル）−２Ｈ−クロメン−２−オン（４５ｍｇ、３３％）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ（ＥＩ＋，ｍ／ｚ）：３８６．１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．９８（ｓ，３Ｈ）、７．４２（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７７〜７．７９（ｍ，１Ｈ）、７．９２（ｓ，１Ｈ）、８．００（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、８．２１〜８．２６（ｍ，２Ｈ）、８．６８〜８．７４（ｍ，２Ｈ）、１０．２７（ｓ，１Ｈ）。
ＤＢＭ−Ｅ−２２の合成スキームを、スキーム２０に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−２３の合成スキームを、スキーム２１に示す。
ＤＢＭ−Ｅ−９の合成スキームを、スキーム２２に示す。
実施例２：化合物プロファイリング
本明細書に説明されるＣＦＴＲコレクター薬物をプロファイリングするための一般的手法を示す概略図を図１に示す。最初に、化合物を経上皮抵抗及び電圧を測定する上皮ボルトオームメータ（ＥＶＯＭ）電気バイオアッセイに供した。この伝導率測定における経上皮抵抗中の降下は、より信頼できるエンドポイントであり、８ポイントまたは１２ポイントの濃度反応曲線を持つこれらの化合物をプロファイルするために使用した。本明細書に説明される化合物のための及び業界標準Ｖｅｒｔｅｘ ８０９（ＶＸ−８０９；Ｖｅｒｔｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）のためのＥＣ５０値を決定した（表１）。
実施例３：ＳＰＱ高処理スクリーニングアッセイ
ＳＰＱ高処理スクリーニングアッセイを実施するために、ＣＦＢＥ４１ｏ細胞を、９６ウェルのマイクロタイタープレート内に播種し、血清添加培地中で蛍光ハロゲン化物感受性色素、ＳＰＱを負荷した。特定のウェルに、ＶＸ−８０９を含む周知の正の対照コレクター分子を装填した。試験化合物をウェル内に装填し、１０μＭ用量で３連のウェルで試験し、室温で４８時間以上インキュベートした。４８時間中に、ＳＰＱを吸着させた。プレートを、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）ベースのリンゲル中で洗浄し、２分以上にわたって１回解読してベースラインＳＰＱ蛍光活性を設定した。次いで、ＮａＣｌを、硝酸ナトリウム（ＮａＮＯ３）ベースのリンゲルで置換した。プレートを、４分以上にわたって２回解読した。一次高処理スクリーン（ＨＴＳ）データを分析して、基本条件下でレスキューされたｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲの任意の機能を検出した。プレートを最大２回解読して、ＳＰＱ ＨＴＳアッセイを完了した。本方法の概略図を、図２に示す。化合物ＤＢＭ １０１及び他の化合物を、アッセイに供した（図３）。化合物ＤＢＭ １０１は、細胞膜のＣｌ透過率をレスキューし、用量反応作用を表示し、ナノモル作用を表示し、細胞傷害性を有しなかった（図３）。したがって、化合物を検証コレクターとして確認した。
実施例４：上皮ボルトオームメータ電気アッセイ
電気及び生化学プロファイリングアッセイを実施して、本明細書に説明される化合物を評価した。図４の概略図に示されるように、上皮ボルトオームメータ（ＥＶＯＭ）電気アッセイを実施した。本アッセイでは、経上皮抵抗（ＲＴＥ）の降下は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌチャネルが、ＣＦヒト呼吸上皮の頂端膜において開口であり活性であることを示す。以下の化合物をＥＶＯＭ電気アッセイで試験した：業界標準ＶＸ−８０９（図５）、化合物ＤＢＭ ２２８（図６）、化合物ＤＢＭ ３０８（図７）、化合物ＤＢＭ ７０１（図８）、化合物ＤＢＭ ７０７（図９）、化合物ＤＢＭ ７１５（図１０）、化合物ＤＢＭ ３２８（図１１）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０１（図１２）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０２（図１３）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０３（図１４）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０４（図１５）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０５（図１６）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０５．１（図１７）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−０８（図１８）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−９．１（図１９）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−１０（図２０）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−１１（図２１）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−１２（図２２）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−１３（図２３）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−１４（図２４）、化合物ＤＢＭ−Ｅ−１６（図２５）、及び化合物ＤＢＭ−Ｅ−１７（図２６）。
実施例５：ＣＦＴＲウェスタンブロット
次いで、化合物を生化学アッセイに供して、どのヒット化合物が、細胞内部内のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲのバンドＢコアグリコシル化小胞体（ＥＲ）をタンパク質の分泌経路内及び形質膜内の深いグリコシル化バンドＣ形態内にレスキューしたかを定義した。有効化合物は、ＣＦＴＲのバンドＢ形態を安定化し、いっそう多くのこの形態をＥＲのレベルまで蓄積させた。最有効化合物は、バンドＣ形態を出現させた。
実施例として、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を、４８時間の低温インキュベーションを使ってＥＲからレスキューできる（正の対照としてのブロット内の実施例を参照のこと）。ＤＭＳＯ対照は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ−発現細胞が生理的温度で成長したシミュレートされたＣＦ条件である。化合物ＤＢＭ １０１を、１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、及び１ｎＭでの生化学レスキューアッセイで試験した。ＤＭＳＯ（３７℃）、Ｃｏｒｒ−４ａ及びＣｏｒｒ−１７（２つのｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲコレクター研究用ツール薬物）治療細胞、ＷＴ−ＣＦＴＲ発現細胞、及び低温（２７℃）修正細胞は、対照として機能した。図２７を参照されたい。化合物ＤＢＭ １０１は、１〜１０μＭの濃度で２７℃の低下温度成長対照のＣＦヘテロ接合性表現型を達成した。図２７及び２８を参照されたい。しかしながら、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲを過剰発現する異種細胞システムを用いて発見された周知のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲコレクター薬物Ｃｏｒｒ−４ａ及びＣｏｒｒ−１７は、ＣＦＢＥ細胞内に効果を有しなかった（図２７）。化合物ＤＢＭ ２２８もまた、同様の濃度で他の試験化合物と一緒に２μＭでの生化学レスキューアッセイで試験した。ＤＭＳＯ、Ｃｏｒｒ−４ａ治療細胞、及び低温（２７℃）修正細胞は、対照として機能した。図２９を参照されたい。
本明細書に説明される特定の化合物もまた、生化学レスキューアッセイで試験した。各化合物を、１０μＭ、１μＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭで試験した。ＤＭＳＯ、ＷＴ−ＣＦＴＲ発現細胞、及び低温（２７℃）修正細胞は、対照として機能した。図３０〜３２を参照されたい。実験は、上述の本方法を用いて１０％の血清添加培地で実施した。データは、本明細書に説明されるコレクター化合物が血清タンパク質に依存せずに有効であることを示す。特定の化合物のブロットの濃度測定グラフを図３３に示す。データは、本明細書に説明される化合物がｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲの強力生化学コレクターであり、ＶＸ−８０９より優れていることを示す。
実施例６：ウッシングチャンバ測定法
ウッシングチャンバ電気生理学アッセイをまた実施して、修正及び活性ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌチャネルが嚢胞性線維症呼吸上皮の頂端膜内で機能的であることを確認した。アッセイでは、分極ＣＦＢＥ細胞単分子膜を、それらが１，０００オーム経上皮抵抗を超えるまで４〜６日間にわたって培養する。次いで、単分子膜を、ＤＭＳＯビヒクル対照群に対して２４時間本明細書に説明される化合物を使って治療する。短絡電流を電圧固定条件下で、ウッシングチャンバ内で測定して、複数の測定を介して頂端膜内のＣＦＴＲ機能のレベルを計測する。３つの化合物をＣｌ電流トレースから決定でき、全ての成分が有用である（図３４を参照のこと）。基本電流セクションは、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化できるかならびに基本条件下でそのフォールディング欠陥を修正できるかどうかを示す。ｃＡＭＰ刺激の電流セクションは、環式ＡＭＰ動態化薬物がｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲチャネルを更に刺激するかどうかを示す。更には、ＧｌｙＨ１０１は、阻害剤に対して感受性である刺激電流の量を示す選択的ＣＦＴＲ阻害剤である。
ウッシングチャンバ由来短絡電流データを、化合物ＤＢＭ ２２８（図３５を参照）及びＤＢＭ ３０８（図３６を参照）のために得た。化合物ＤＢＭ ２２８は、基本条件下で機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物イオンチャネルの頑強修正を示し、ｎＭ濃度でｃＡＭＰ刺激Ｃｌ−電流をトリガする。ＶＸ−８０９は、ｎＭ濃度で効果を有しなかった。０．３μＭで化合物ＤＢＭ ３０８は、（ＶＸ−８０９のウッシング効果のための最適濃度である）３μＭでのＶＸ−８０９と当量またはそれよりも大きいレベルまで基本Ｃｌ電流を増加させた。ＶＸ ８０９と比較して、この化合物にはｃＡＭＰ刺激Ｃｌ電流がほとんどなく、ＧｌｙＨ１０１感受性Ｃｌ電流がより少ない。共に、これらの結果は、本明細書に説明される化合物がｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲを修正するが、更なるＣｌチャネル集団に正の影響を与え、それを上方制御することを示す。０．３μＭ及び３μＭのＤＢＭ ３０８及びＶＸ−８０９の組み合わせは、それぞれ、Ｃｌ電流全体を、２７℃低下温度成長対照（すなわち、ＣＦヘテロ接合体）に見られるレベルまで刺激した。ＤＢＭ ３０８の濃度応答曲線図を図３７に示す。
実施例７：上皮ナトリウムチャネル阻害
上皮ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）活性の濃度依存阻害を、ウッシングチャンバ電気実験及び関連確証的電気生理学アッセイを用いて研究した。慢性の一晩のプレ治療（アッセイ前の１２〜１８時間）は、図３８に示されるＣＲＣベースのデータをもたらした。ビヒクル治療細胞の電気測定値もまた、図３８の図に示す。不活性薬物類似体である化合物ＤＢＭ ３２８は、１０マイクロモルで効果がなかった（Ｘ軸上の１０マイクロモル指標より上の単一のひし形及び三角形記号で示されるデータ）。電気生理学アッセイは、規定の濃度で、本明細書に説明されるような化合物のパネルをプロファイルした。基本条件下でのｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲの修正及び活性化の更なる証拠を、３マイクロモルのＩＣ５０とのＣＲＣ関係性を表示する基本条件下でのアミロライド感受性ＥＮａＣナトリウム電流の頑強阻害によって観察した。この効果を、プレ実験電位差測定値によってもまた表示する。
結果を、ＣＦＢＥ−ｄｅｌＦ５０８細胞単分子膜プラットフォームを用いる電気実験で確認した（図３９を参照）。慢性（すなわち、薬物を使っての一晩の治療）及び化合物ＤＢＭ ３０８及び化合物ＤＢＭ ３２８の急性添加を試験した。アミロライド感受性経上皮電圧（ＶＴＥ）を、化合物ＤＢＭ ３０８による用量依存方法では阻害したが、化合物ＤＢＭ ３２８によっては阻害しなかった。両方のデータのセットは、１〜３マイクロモルのＥＮａＣの慢性阻害のためのＩＣ５０を示す。複数のバイオアッセイ（蛍光、生化学、電気）中及び基本（非刺激の）条件下でのｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲの修正及び活性化の化合物ＤＢＭ ３０８ ＥＣ５０の濃度は、０．１〜１マイクロモルである。ＣＦＴＲ及びＥＮａＣの両方の効果は、薬物を用いる一晩の治療を必要とする。急性添加は、ＣＦＴＲまたはＥＮａＣに効果がない。いずれの化合物の急性添加も、アミロライド感受性経上皮電圧（ＶＴＥ）に効果がなかった。小胞体のレベルでのｄｅｌＦ５０８修正及び頂端形質膜のレベルでの修正ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲの活性化は、順に、同じ膜内のＥＮａＣを阻害する。全ての効果が、作用の三重治療学様式を形成するためにＣＦ治療学手法にとって望ましいものである。
実施例８：包括的高感受性プロテオミクス
包括的高感受性プロテオミクス分析を、ビヒクル治療及び不活性類似体（化合物ＤＢＭ ３２８）対照と比較して、化合物ＤＢＭ ３０８治療ＣＦＢＥ細胞に実施した。９９％を超えるタンパク質が、このパターンの治療（一晩の１８時間のプレ治療）によって影響されなかった。
統計学的に有意な様式で変化したさほど多くはないタンパク質の分析において、ＣＦにおける化合物ＤＢＭ ３０８の有用な効果を説明する関係性または影響されたタンパク質標的はない。理論によって束縛されるものではないが、化合物ＤＢＭ ３０８は、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲのミスフォールド領域またはｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質プロセシング、輸送、及び機能の非常に近接して関連付けられる制御因子に直接結合し得る。
添付の特許請求の範囲の化合物及び方法は、本明細書に説明される特定の化合物及び方法による範囲に限定されるものではなく、特許請求の範囲のうちの少数の態様の例示として意図され、機能的に均等である任意の化合物及び方法は、本開示の範囲内である。本明細書に示されかつ説明されるものに加えて、化合物及び方法の種々の修正は、添付の特許請求の範囲内に属することを意図する。更には、特定の代表的な化合物、方法、及びこれらの化合物及び方法の態様のみが具体的に説明されるが、他の化合物及び方法が、添付の特許請求の範囲内に属することを意図する。したがって、ステップ、要素、成分、または構成物の組み合わせが、明示的に記述され得るが、ステップ、要素、成分、及び構成物の全ての他の組み合わせが、明示的に記されなくとも含まれる。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグであって、式中、
Ｒ １ が、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキル、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルであり、
Ｒ ２ が、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アジド、チオシアネート、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のアルコキシル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のカルボニル、または置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキルであり、
Ｒ ３ が、水素または置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキルであり、
Ｒ ４ が、置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキル、置換もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、
Ｘが、ＳまたはＯであり、
Ｙが、Ｏ、ＮＨ、またはＮＣＨ ３ である、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
（項目２）
前記化合物が、

からなる群から選択され、式中、Ｒ ５ 、Ｒ ６ 、Ｒ ７ 、Ｒ ８ 、及びＲ ９ が、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のカルボニル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキル、置換もしくは非置換のＣ ２−６ アルケニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のスルホンアミド、置換もしくは非置換のスルホニル、または置換もしくは非置換のチオから選択され、
随意に、Ｒ １ 及びＲ ２ 、Ｒ ５ 及びＲ ６ 、Ｒ ６ 及びＲ ７ 、Ｒ ７ 及びＲ ８ 、またはＲ ８ 及びＲ ９ が、組み合わさって、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のシクロアルケニル、置換もしくは非置換のヘテロアリール、または置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルを形成する、項目１に記載の化合物。
（項目３）
以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグであって、式中、
Ｌが、ヘテロアリールであり、
Ｒ ５ 、Ｒ ６ 、Ｒ ７ 、Ｒ ８ 、及びＲ ９ が、各々独立して、水素及びメトキシから選択される、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
（項目４）
以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグであって、式中、
Ｘ １ 、Ｘ ２ 、Ｘ ３ 、及びＸ ４ が、各々独立して、ＣＨ及びＮから選択され、
Ｙが、ＯまたはＮＲであり、式中、Ｒが、水素またはメチルであり、
Ｒ ２ が、水素、Ｃ １−６ アルキル、ハロゲン、またはトリフルオロアルキルであり、
Ｒ ５ 、Ｒ ６ 、Ｒ ７ 、Ｒ ８ 、及びＲ ９ が、各々独立して、水素及びメトキシから選択される、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
（項目５）
以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグであって、式中、
Ｘ １ が、ＯまたはＮＣＨ ３ であり、
Ｘ ２ が、ＣＨまたはＮであり、
Ｙが、Ｏ、ＮＨ、またはＮＣＨ ３ であり、
Ｒ ５ 、Ｒ ６ 、Ｒ ７ 、Ｒ ８ 、及びＲ ９ が、各々独立して、水素及びメトキシから選択される、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
（項目６）
以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグであって、式中、
Ｒ １ 及びＲ ２ が、各々独立して、水素、置換もしくは非置換のアミノ、及び置換もしくは非置換のカルボニルから選択される、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
（項目７）
以下の式の化合物、

またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグであって、式中、
Ｘが、ＣＨ ２ 、ＮＨ、またはＯである、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
（項目８）
項目１〜７に記載の化合物のうちの１つ以上及び薬学的に許容される担体を含む、組成物。
（項目９）
項目１〜７のいずれかに記載の有効量の化合物を前記対象に投与することを含む、対象のタンパク質フォールディング障害の治療のための方法。
（項目１０）
前記タンパク質フォールディング障害が、嚢胞性線維症である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記タンパク質フォールディング障害が、慢性閉塞性肺疾患である、項目９に記載の方法。
（項目１２）
ＣＦＴＲ変異を内因的に発現する細胞を、項目１〜７のいずれかに記載の化合物と接触させることを含む、細胞内のハロゲン化物流出をレスキューする方法。
（項目１３）
前記ＣＦＴＲ変異が、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ハロゲン化物流出が、塩化物流出である、項目１２または１３に記載の方法。
（項目１５）
ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を発現する細胞を、項目１〜７のいずれかに記載の化合物と接触させることを含む、前細胞内のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質のプロセシング欠陥を修正する方法。
（項目１６）
前記細胞が、ＣＦヒト気道上皮細胞である、項目１２〜１５のいずれかに記載の方法。
（項目１７）
前記細胞が、ＣＦヒト肺である、項目１２〜１５のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
細胞内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物チャネルを修正する方法であって、
分極上皮細胞である細胞を、項目１〜７のいずれかに記載の化合物と接触させることを含む方法。
（項目１９）
前記方法が、インビトロで実施される、項目１２〜１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記方法が、インビボで実施される、項目１２〜１８のいずれかに記載の方法。

Claims (16)

  1. 以下の式の化合物、
    またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
    Ｒ１が、水素であり、そしてＲ２が、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アジド、チオシアネート、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のカルボニル、または置換もしくは非置換のＣ１−６アルキルであり、または
    Ｒ １ がハロゲンであり、そしてＲ ２ がハロゲンであり、または
    Ｒ １ が置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキルであり、そしてＲ ２ が置換もしくは非置換のＣ １−６ アルキルであり、または
    Ｒ １ がヒドロキシであり、そしてＲ ２ がヒドロキシであり、または
    Ｒ １ が置換もしくは非置換のアミノであり、そしてＲ ２ がアミノまたはニトロであり、
    Ｒ３が、水素または置換もしくは非置換のＣ１−６アルキルであり、
    Ｒ４が、非置換のＣ１−６アルキル、置換もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、
    Ｘが、ＳまたはＯであり、
    Ｙが、Ｏである、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  2. 前記化合物が、

    からなる群から選択され、式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９が、各々独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシル、置換もしくは非置換のアルコキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、置換もしくは非置換のカルボニル、置換もしくは非置換のアミノ、置換もしくは非置換のＣ１−６アルキル、置換もしくは非置換のＣ２−６アルケニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のスルホンアミド、置換もしくは非置換のスルホニル、または置換もしくは非置換のチオから選択される、請求項１に記載の化合物。
  3. 請求項１〜２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩のうちの１つ以上及び薬学的に許容される担体を含む、組成物。
  4. 請求項１〜２のいずれかに記載の有効量の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、対象のタンパク質フォールディング障害の治療のための組成物。
  5. 前記タンパク質フォールディング障害が、嚢胞性線維症である、請求項４に記載の組成物。
  6. 前記タンパク質フォールディング障害が、慢性閉塞性肺疾患である、請求項４に記載の組成物。
  7. 請求項１〜２のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、細胞内のハロゲン化物流出をレスキューするための組成物であって、前記組成物は前記細胞と接触させられることを特徴とし、前記細胞はＣＦＴＲ変異を内因的に発現する、組成物。
  8. 前記ＣＦＴＲ変異が、ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲである、請求項７に記載の組成物。
  9. 前記ハロゲン化物流出が、塩化物流出である、請求項７または８に記載の組成物。
  10. 請求項１〜２のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、細胞内のｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質のプロセシング欠陥を修正するための組成物であって、前記組成物は前記細胞と接触させられることを特徴とし、前記細胞はｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ変異を発現する、組成物。
  11. 前記細胞が、ＣＦヒト気道上皮細胞である、請求項７〜１０のいずれかに記載の組成物。
  12. 前記細胞が、ＣＦヒト肺である、請求項７〜１０のいずれかに記載の組成物。
  13. 細胞内の機能的ｄｅｌＦ５０８−ＣＦＴＲ塩化物チャネルを修正するための組成物であって、請求項１〜２のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、前記組成物は、前記細胞と接触させられることを特徴とし、前記細胞は、分極上皮細胞である、組成物。
  14. 前記組成物が、インビトロで接触させられる、請求項７〜１３のいずれかに記載の組成物。
  15. 前記組成物が、インビボで接触させられる、請求項７〜１３のいずれかに記載の組成物。
  16. 以下からなる群から選択される、化合物。

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