JP6497683B2 - プロテアーゼの基質ペプチド及びプロテアーゼの活性測定方法 - Google Patents
プロテアーゼの基質ペプチド及びプロテアーゼの活性測定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6497683B2 JP6497683B2 JP2016551530A JP2016551530A JP6497683B2 JP 6497683 B2 JP6497683 B2 JP 6497683B2 JP 2016551530 A JP2016551530 A JP 2016551530A JP 2016551530 A JP2016551530 A JP 2016551530A JP 6497683 B2 JP6497683 B2 JP 6497683B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycine
- amino acid
- tyrosine
- phenylalanine
- isoleucine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
[1] Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなるプロテアーゼの基質ペプチド。
[2] 前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる[1]の基質ペプチド。
[3] 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である[1]又は[2]の基質ペプチド。
[4] 前記プロテアーゼが、クロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来の中性プロテアーゼである[1]〜[3]のいずれかの基質ペプチド。
[6] 前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる[5]のペプチド。
[7] 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である[5]又は[6]のペプチド。
[8] クロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来の中性プロテアーゼによって特異的に切断される[5]〜[7]のいずれかのペプチド。
[9] クロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来のコラゲナーゼG、コラゲナーゼH及びクロストリパインによって切断されない[5]〜[8]のいずれかのペプチド。
グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン。
グリシン−フェニルアラニン−セリン。
グリシン−フェニルアラニン−グリシン。
グリシン−ロイシン−チロシン。
グリシン−ロイシン−ヒスチジン。
グリシン−ロイシン−セリン。
グリシン−ロイシン−グリシン。
グリシン−イソロイシン−チロシン。
グリシン−イソロイシン−ヒスチジン。
グリシン−イソロイシン−セリン。
グリシン−イソロイシン−グリシン。
グリシン−トリプトファン−チロシン。
グリシン−トリプトファン−ヒスチジン。
グリシン−トリプトファン−セリン。
グリシン−トリプトファン−グリシン。
Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる基質ペプチドと、
前記プロテアーゼと、
を混合する手順と、
前記基質ペプチドの切断量を定量する手順と、
を含む方法。
[12] 前記基質ペプチドが、前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる[11]の方法。
[13] 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である[11]又は[12]の方法。
[14] 前記プロテアーゼが、クロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来の中性プロテアーゼである[11]〜[13]のいずれかの方法。
[15] 前記基質ペプチドの前記アミノ酸配列が、以下のいずれか一である[11]〜[14]のいずれかの方法。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン、グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン、グリシン−フェニルアラニン−セリン、グリシン−フェニルアラニン−グリシン、グリシン−ロイシン−チロシン、グリシン−ロイシン−ヒスチジン、グリシン−ロイシン−セリン、グリシン−ロイシン−グリシン、グリシン−イソロイシン−チロシン、グリシン−イソロイシン−ヒスチジン、グリシン−イソロイシン−セリン、グリシン−イソロイシン−グリシン、グリシン−トリプトファン−チロシン、グリシン−トリプトファン−ヒスチジン、グリシン−トリプトファン−セリン、又は、グリシン−トリプトファン−グリシン。
Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる基質ペプチドと、
前記組成物と、
を混合する手順と、
前記基質ペプチドの切断量を定量する手順と、
を含む方法。
[17] 前記基質ペプチドが、前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる[16]の方法。
[18] 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である[16]又は[17]の方法。
[19] 前記組成物がクロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来のタンパク質分解酵素組成物であり、前記プロテアーゼが同菌由来の中性プロテアーゼである[16]〜[18]のいずれかの方法。
[20] 前記基質ペプチドの前記アミノ酸配列が、以下のいずれか一である[16]〜[19]のいずれかの方法。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン、グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン、グリシン−フェニルアラニン−セリン、グリシン−フェニルアラニン−グリシン、グリシン−ロイシン−チロシン、グリシン−ロイシン−ヒスチジン、グリシン−ロイシン−セリン、グリシン−ロイシン−グリシン、グリシン−イソロイシン−チロシン、グリシン−イソロイシン−ヒスチジン、グリシン−イソロイシン−セリン、グリシン−イソロイシン−グリシン、グリシン−トリプトファン−チロシン、グリシン−トリプトファン−ヒスチジン、グリシン−トリプトファン−セリン、又は、グリシン−トリプトファン−グリシン。
Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる基質ペプチドと、
前記組成物と、
を混合する手順と、
前記基質ペプチドの切断を検出する手順と、
を含む方法。
[22] 前記基質ペプチドが、前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる[21]の方法。
[23] 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である[21]又は[22]の方法。
[24] 前記組成物がクロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来のタンパク質分解酵素組成物であり、前記プロテアーゼが同菌由来の中性プロテアーゼである[21]〜「23」のいずれかの方法。
[25] 前記基質ペプチドの前記アミノ酸配列が、以下のいずれか一である[21]〜[24]のいずれかの方法。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン、グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン、グリシン−フェニルアラニン−セリン、グリシン−フェニルアラニン−グリシン、グリシン−ロイシン−チロシン、グリシン−ロイシン−ヒスチジン、グリシン−ロイシン−セリン、グリシン−ロイシン−グリシン、グリシン−イソロイシン−チロシン、グリシン−イソロイシン−ヒスチジン、グリシン−イソロイシン−セリン、グリシン−イソロイシン−グリシン、グリシン−トリプトファン−チロシン、グリシン−トリプトファン−ヒスチジン、グリシン−トリプトファン−セリン、又は、グリシン−トリプトファン−グリシン。
本発明に係るプロテアーゼの基質ペプチドは、Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなることを特徴とする。
また、例えば、N末端及びC末端の一方に蛍光物質を結合させ、他方の末端に消光物質を結合させた場合、基質ペプチドの切断によって消光物質(クエンチャー)から解離した蛍光物質からの蛍光を検出することによって、プロテアーゼによる基質ぺプチドの切断を検出できる。蛍光物質及び消光物質には、従来公知の物質を組み合わせて用いればよく、例えば蛍光物質として2−(N−メチル アミノ)ベンゾイル(2-(N-methyl amino)benzoyl)基又は7−メトキシコウマリン−4−イル)アセチル(7-methoxycoumarin-4-yl)acetyl)基を、消光物質として2,4−ジニトロロフェニル(2, 4-dinitorophenyl)を用いることができる。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン、グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン、グリシン−フェニルアラニン−セリン、グリシン−フェニルアラニン−グリシン、グリシン−ロイシン−チロシン、グリシン−ロイシン−ヒスチジン、グリシン−ロイシン−セリン、グリシン−ロイシン−グリシン、グリシン−イソロイシン−チロシン、グリシン−イソロイシン−ヒスチジン、グリシン−イソロイシン−セリン、グリシン−イソロイシン−グリシン、グリシン−トリプトファン−チロシン、グリシン−トリプトファン−ヒスチジン、グリシン−トリプトファン−セリン、又は、グリシン−トリプトファン−グリシン。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン。
グリシン−ロイシン−チロシン。
グリシン−イソロイシン−チロシン。
グリシン−トリプトファン−チロシン。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−セリン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−グリシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−ヒスチジン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−セリン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−グリシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−ヒスチジン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−セリン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−グリシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−ヒスチジン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−セリン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−グリシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−チロシン アミド。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−チロシン アミド。
本発明に係る基質ペプチドは、プロテアーゼ活性の測定のために利用できる。本発明に係る基質ペプチドは、NPに対して特異的な基質となるため、NPの活性の測定のために好適に用いられる。
本発明に係る基質ペプチドは、組成物中のプロテアーゼの有無を検出するために利用できる。本発明に係る基質ペプチドは、NPによって特異的に切断されるため、組成物中にNPが含まれているか否かを検出するために好適に用いられる。
本発明に係る基質ペプチドは、組成物中に含まれるプロテアーゼの量を決定するためにも利用できる。本発明に係る基質ペプチドは、NPに対して特異的な基質となるため、組成物中に含まれるNPの定量のために好適に用いられる。
NPに特異的な基質ペプチドの候補として、「Tyr-Gly-Phe-Tyr-Glu」(配列番号1)及び「Tyr-Gly-Phe-Tyr-Arg」(配列番号2)のペンタマーペプチドを合成した。これらの合成ペプチドを用いて、NP(参考例1参照)、クロストリジウム・ヒストリチクス菌由来のコラゲナーゼG(ColG、Meiji Seikaファルマ(株))、コラゲナーゼH(ColH、Meiji Seikaファルマ(株))による切断によって生成するペプチド断片を以下の方法で分析した。
カラム:TSKgel ODS−120T(φ4.6×250 mm, Tosho Co.)
溶媒:0.1%ギ酸添加アセトニトリル(0-10 min: 4 %, 10-40 min: 4-80 %, 40-50 min: 80 %)、流速0.5ml/分
プロテアーゼによる切断を光学的に検出可能とし、エキソペプチダーゼによる消化を防止するため、試験例1の合成ペプチドに基づいて、N末端にFA基、C末端にアミド基を付加した「FA-Gly-Phe-Tyr-amide」(N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−チロシン アミド:FAGFYA)を設計した。NP特異的基質ペプチド(FAGFYA)を用いて、試験例1と同様にして、NPによる切断によって生成するペプチド断片を分析した。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン アミド(FA-Gly-Phe-His-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−セリン アミド(FA-Gly-Phe-Ser-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−フェニルアラニン−グリシン アミド(FA-Gly-Phe-Gly-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−チロシン アミド(FA-Gly-Leu-Tyr-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−ヒスチジン アミド(FA-Gly-Leu-His-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−セリン アミド(FA-Gly-Leu-Ser-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−ロイシン−グリシン アミド(FA-Gly-Leu-Gly-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−チロシン アミド(FA-Gly-Ile-Tyr-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−ヒスチジン アミド(FA-Gly-Ile-His-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−セリン アミド(FA-Gly-Ile-Ser-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−イソロイシン−グリシン アミド(FA-Gly-Ile-Gly-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−チロシン アミド(FA-Gly-Trp-Tyr-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−ヒスチジン アミド(FA-Gly-Trp-His-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−セリン アミド(FA-Gly-Trp-Ser-NH2)。
N−[3−(2−フリル)アクロイル]−グリシン−トリプトファン−グリシン アミド(FA-Gly-Trp-Gly-NH2)。
クロストリジウム・ヒストリチクス菌の中性プロテアーゼ(NP)を以下の手順で調製した。
フォワードプライマーNP:5'-CGCCTAATGAGCGGGCTTTTTTCAC-3'(配列番号3)
リバースプライマーNP:5'-TACGGCTGATGTTTTTGTAATCGGCAAAC-3'(配列番号4)
培地A組成
2% Polypepton N
1% yeast extract
1% NaCl,
20 μg/ml chloramphenicol
pH 7.5
培地B組成
4% Polypepton N
2% yeast extract
2% NaCl
10 mg/ml chloramphenicol
pH 7.5
配列番号2:基質ペプチド
配列番号3:フォワードプライマーNP
配列番号4:リバースプライマーNP
Claims (18)
- Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる、3−5アミノ酸長の基質ペプチドを含んでなる、クロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来中性プロテアーゼの活性測定用合成ペプチド溶液。
- 前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる請求項1記載の活性測定用合成ペプチド溶液。
- 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である請求項1又は2記載の活性測定用合成ペプチド溶液。
- 前記アミノ酸配列が以下のいずれか一である請求項1〜3のいずれか一項に記載の活性測定用合成ペプチド溶液。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン。
グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン。
グリシン−フェニルアラニン−セリン。
グリシン−フェニルアラニン−グリシン。
グリシン−ロイシン−チロシン。
グリシン−ロイシン−ヒスチジン。
グリシン−ロイシン−セリン。
グリシン−ロイシン−グリシン。
グリシン−イソロイシン−チロシン。
グリシン−イソロイシン−ヒスチジン。
グリシン−イソロイシン−セリン。
グリシン−イソロイシン−グリシン。
グリシン−トリプトファン−チロシン。
グリシン−トリプトファン−ヒスチジン。
グリシン−トリプトファン−セリン。
グリシン−トリプトファン−グリシン。 - クロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来中性プロテアーゼの活性を測定する方法であって、
Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる、3−5アミノ酸長の基質ペプチドと、
前記中性プロテアーゼと、
を混合する手順と、
前記基質ペプチドの切断量を定量する手順と、
を含む方法。 - 前記基質ペプチドが、前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる請求項5記載の方法。
- 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である請求項5又は6記載の方法。
- 前記アミノ酸配列が以下のいずれか一である請求項5−7のいずれか一項に記載の方法。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン。
グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン。
グリシン−フェニルアラニン−セリン。
グリシン−フェニルアラニン−グリシン。
グリシン−ロイシン−チロシン。
グリシン−ロイシン−ヒスチジン。
グリシン−ロイシン−セリン。
グリシン−ロイシン−グリシン。
グリシン−イソロイシン−チロシン。
グリシン−イソロイシン−ヒスチジン。
グリシン−イソロイシン−セリン。
グリシン−イソロイシン−グリシン。
グリシン−トリプトファン−チロシン。
グリシン−トリプトファン−ヒスチジン。
グリシン−トリプトファン−セリン。
グリシン−トリプトファン−グリシン。 - 組成物中に含まれるクロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来の中性プロテアーゼの量を決定する方法であって、
Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる、3−5アミノ酸長の基質ペプチドと、
前記組成物と、
を混合する手順と、
前記基質ペプチドの切断量を定量する手順と、
を含む方法。 - 前記基質ペプチドが、前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる請求項9記載の方法。
- 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である請求項9又は10記載の方法。
- 前記組成物がクロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来のタンパク質分解酵素組成物である請求項9−11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アミノ酸配列が以下のいずれか一である請求項9−12のいずれか一項に記載の方法。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン。
グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン。
グリシン−フェニルアラニン−セリン。
グリシン−フェニルアラニン−グリシン。
グリシン−ロイシン−チロシン。
グリシン−ロイシン−ヒスチジン。
グリシン−ロイシン−セリン。
グリシン−ロイシン−グリシン。
グリシン−イソロイシン−チロシン。
グリシン−イソロイシン−ヒスチジン。
グリシン−イソロイシン−セリン。
グリシン−イソロイシン−グリシン。
グリシン−トリプトファン−チロシン。
グリシン−トリプトファン−ヒスチジン。
グリシン−トリプトファン−セリン。
グリシン−トリプトファン−グリシン。 - 組成物中のクロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来の中性プロテアーゼの有無を検出する方法であって、
Gly−Xaa−Yaa(XaaはPhe、Leu、Ile及びTrpから選択されるいずれか一のアミノ酸、YaaはTyr、His、Ser及びGlyから選択されるいずれか一のアミノ酸を示す)のアミノ酸配列を含んでなる、3−5アミノ酸長の基質ペプチドと、
前記組成物と、
を混合する手順と、
前記基質ペプチドの切断を検出する手順と、
を含む方法。 - 前記基質ペプチドが、前記アミノ酸配列のN末端及び/又はC末端に結合する保護基を含んでなる請求項14記載の方法。
- 前記保護基が、3−(2−フリル)アクロイル基である請求項14又は15記載の方法。
- 前記組成物がクロストリジウム・ヒストリチクス菌(Clostridium histolyticum)由来のタンパク質分解酵素組成物である請求項14−16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アミノ酸配列が以下のいずれか一である請求項14−17のいずれか一項に記載の方法。
グリシン−フェニルアラニン−チロシン。
グリシン−フェニルアラニン−ヒスチジン。
グリシン−フェニルアラニン−セリン。
グリシン−フェニルアラニン−グリシン。
グリシン−ロイシン−チロシン。
グリシン−ロイシン−ヒスチジン。
グリシン−ロイシン−セリン。
グリシン−ロイシン−グリシン。
グリシン−イソロイシン−チロシン。
グリシン−イソロイシン−ヒスチジン。
グリシン−イソロイシン−セリン。
グリシン−イソロイシン−グリシン。
グリシン−トリプトファン−チロシン。
グリシン−トリプトファン−ヒスチジン。
グリシン−トリプトファン−セリン。
グリシン−トリプトファン−グリシン。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014199203 | 2014-09-29 | ||
JP2014199203 | 2014-09-29 | ||
PCT/JP2015/004901 WO2016051752A1 (ja) | 2014-09-29 | 2015-09-28 | プロテアーゼの基質ペプチド及びプロテアーゼの活性測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016051752A1 JPWO2016051752A1 (ja) | 2017-06-29 |
JP6497683B2 true JP6497683B2 (ja) | 2019-04-10 |
Family
ID=55629820
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016551530A Active JP6497683B2 (ja) | 2014-09-29 | 2015-09-28 | プロテアーゼの基質ペプチド及びプロテアーゼの活性測定方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6497683B2 (ja) |
WO (1) | WO2016051752A1 (ja) |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0683670B2 (ja) * | 1983-08-12 | 1994-10-26 | 第一製薬株式会社 | デオキシリボ核酸 |
GB8407044D0 (en) * | 1984-03-19 | 1984-04-26 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Producing human insulin |
US5843753A (en) * | 1994-05-04 | 1998-12-01 | Novo Nordisk A/S | Metalloprotease having increased activity |
AU743092B2 (en) * | 1997-04-10 | 2002-01-17 | Charles Gilvarg | Method of detecting procarboxypeptidase A and carboxypeptidase A levels in biological fluids |
WO2007046818A2 (en) * | 2004-11-16 | 2007-04-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions and methods related to synchronous selection of homing peptides for multiple tissues by in vivo phage display |
US7919584B1 (en) * | 2005-04-15 | 2011-04-05 | Arbor Vita Corporation | Methods and compositions for diagnosis and treatment of asthma |
JP4845102B2 (ja) * | 2006-03-24 | 2011-12-28 | 雪印メグミルク株式会社 | ペプチド |
JP2012505228A (ja) * | 2008-10-07 | 2012-03-01 | レクサン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Hpma−ドセタキセルまたはゲムシタビンコンジュゲートおよびその使用 |
JP5664992B2 (ja) * | 2009-08-26 | 2015-02-04 | 国立大学法人名古屋大学 | 細胞特異的ペプチド及びその用途 |
KR102017026B1 (ko) * | 2013-01-10 | 2019-09-02 | (주) 수파드엘릭사 | 염증 또는 알러지의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 염증 또는 알러지 개선용 화장료 조성물 |
-
2015
- 2015-09-28 JP JP2016551530A patent/JP6497683B2/ja active Active
- 2015-09-28 WO PCT/JP2015/004901 patent/WO2016051752A1/ja active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2016051752A1 (ja) | 2016-04-07 |
JPWO2016051752A1 (ja) | 2017-06-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Toma et al. | Grafting of a calcium-binding loop of thermolysin to Bacillus subtilis neutral protease | |
Svendsen et al. | Isolation and amino acid sequence of a glutamic acid specific endopeptidase from Bacillus licheniformis | |
JP5266265B2 (ja) | ヘモグロビンA1c測定法およびそれに用いる酵素とその製造法 | |
Sommergruber et al. | Cleavage specificity on synthetic peptide substrates of human rhinovirus 2 proteinase 2A. | |
EP1776380A2 (en) | Gfp-snap25 fluorescence release assay for botulinum toxin protease activity | |
Tirat et al. | Synthesis and characterization of fluorescent ubiquitin derivatives as highly sensitive substrates for the deubiquitinating enzymes UCH-L3 and USP-2 | |
Moradian‐Oldak et al. | Controlled proteolysis of amelogenins reveals exposure of both carboxy‐and amino‐terminal regions | |
Kino et al. | Dipeptide synthesis by L-amino acid ligase from Ralstonia solanacearum | |
Schimmel | Hazards and their exploitation in the applications of molecular biology to structure-function relationships | |
Lütticke et al. | E. coli LoiP (YggG), a metalloprotease hydrolyzing Phe–Phe bonds | |
Martin et al. | A fluorescence-resonance-energy-transfer-based protease activity assay and its use to monitor paralog-specific small ubiquitin-like modifier processing | |
KR20160068966A (ko) | 당화 펩티드에 작용하는 아마도리아제를 이용한 HbA1c 측정법 | |
JP6497683B2 (ja) | プロテアーゼの基質ペプチド及びプロテアーゼの活性測定方法 | |
Chura-Chambi et al. | Leptospira interrogans thermolysin refolded at high pressure and alkaline pH displays proteolytic activity against complement C3 | |
Ikehara et al. | [16] Dipeptidyl-peptidase IV from rat liver | |
EP3529371B1 (en) | A functional detection assay devoid of antibodies for serotyping of botulinum neurotoxins | |
Bánóczi et al. | Synthesis of cell-penetrating conjugates of calpain activator peptides | |
Marokházi et al. | Enzymic characterization with progress curve analysis of a collagen peptidase from an enthomopathogenic bacterium, Photorhabdus luminescens | |
Beebe et al. | A continuous fluorimetric assay for tail-specific protease | |
JP2019122300A (ja) | 角質汚れ分解能の評価方法 | |
Coatnoan et al. | Proline racemases: insights into Trypanosoma cruzi peptides containing D-proline | |
Tokmina-Roszyk et al. | Development of a Förster resonance energy transfer assay for monitoring bacterial collagenase triple-helical peptidase activity | |
US11198859B2 (en) | Recombinant polynucleotide coding for polypeptide comprising reporter moiety, substrate moiety and destabilizing moiety, host cell comprising same and use of same | |
JP5431339B2 (ja) | 酵素学的方法および酵素 | |
CA2041875A1 (en) | Peptide amidase and the use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170321 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170405 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180330 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180807 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181005 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190205 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190305 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6497683 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |