JP6494223B2 - 多光子励起型観察システム - Google Patents
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Description
本発明は、光源から発せられたレーザ光を走査させる走査部と、該走査部により走査されたレーザ光を標本に集光させる一方、該標本において多光子励起により発生した蛍光を集光する対物レンズとを備える複数の顕微鏡本体と、前記蛍光を検出可能な、前記顕微鏡本体の数よりも少ない数の光検出部と、該光検出部と各前記顕微鏡本体とに接続されて、該顕微鏡本体において前記対物レンズにより集光された前記標本からの蛍光を前記走査部を介さずに前記光検出部に導光可能なリキッドライトガイドとを備え、該リキッドライトガイドと各前記顕微鏡本体および前記リキッドライトガイドと前記光検出部の少なくとも一方が着脱可能に形成されている多光子励起型観察システムを提供する。
このように構成することで、光検出光学系として他のレンズ等を用いないので、光検出部をより小型で安価に共用することができる。
上記発明においては、前記顕微鏡本体ごとに個別に接続され、接続されている前記顕微鏡本体の前記走査部を個別に制御する複数の制御装置を備え、前記リキッドライトガイドにより前記光検出部に接続された前記顕微鏡本体に接続されている前記制御装置が、前記走査部の制御を実行するとともに、該走査部の走査位置情報と前記光検出部から出力される蛍光の光強度情報とに基づいて前記標本の画像を生成することとしてもよい。
本発明の第1実施形態に係る多光子励起型観察システムについて図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る多光子励起型観察システム100は、例えば、図1に示すように、2つの顕微鏡装置10A,10Bと、これら顕微鏡装置10A,10Bにより共用する単一のPMT(Photomultiplier Tube、光検出部)19と、顕微鏡装置10A,10BとPMT19とを接続可能なリキッドライトガイド20とを備えている。
スキャンユニット13は、レーザ光を偏向するガルバノミラーのようなスキャナ(走査部)21と、スキャナ21により偏向されたレーザ光を集光させて中間像を結像させる瞳投影レンズ23と、中間像を結像したレーザ光を略平行光にして対物レンズ15に入射させる結像レンズ25とを備えている。
光検出光学系17は、結像レンズ25により略平行光に変換されたレーザ光を対物レンズ15に向けて透過させる一方、対物レンズ15により集光されてレーザ光の光路を戻る蛍光を反射して光路から分岐させる励起ダイクロイックミラー27と、励起ダイクロイックミラー27により分岐された蛍光を集光する集光レンズ29とを備えている。
制御装置7A,7Bには、PMT19が着脱可能に接続されるようになっている。この制御装置7A,7Bは、レーザ光源1A,1Bおよびそれぞれのスキャナ21を制御する他、スキャナ21によるレーザ光の走査位置に関する走査位置情報とPMT19から出力される蛍光の光強度情報とに基づいて、標本Sの2次元的な画像を生成するようになっている。
本実施形態に係る多光子励起型観察システム100により顕微鏡装置10Aの標本Sを観察する場合は、顕微鏡本体5Aにリキッドライトガイド20を装着し、顕微鏡本体5AとPMT19とを接続する。また、PMT19と制御装置7Aとをケーブルで接続する。次いで、レーザ光源1Aからレーザ光を発生させる。
一変形例としては、図2に示すように、2つのリキッドライトガイド20A,20Bを採用し、各顕微鏡本体5A,5BとPMT19とをそれぞれリキッドライトガイド20A,20Bにより接続することとしてもよい。
次に、本発明の第2実施形態に係る多光子励起型観察システムについて説明する。
本実施形態に係る多光子励起型観察システム200は、図3に示すように、レーザ光源1A,1Bに代えて、単一のレーザ光源(光源)1と光ファイバ3とを備え、レーザ光源1A,1Bから発せられたレーザ光を光ファイバ3により顕微鏡本体5A,5Bに導光する点で第1実施形態と異なる。
以下、第1実施形態に係る多光子励起型観察システム100と構成を共通する箇所には、同一符号を付して説明を省略する。
光ファイバ3は、一端がレーザ光源1に固定され、他端が顕微鏡本体5A,5Bに接続されるようになっている。
調整ネジ49は、外筒部材41を半径方向に貫通して円筒部材45の傾斜部45aに接触するように配置されている。
ティルト部材67は、支持部33の固定部材55により支持されている。このティルト部材67は、突っ張りネジ73Aと引っ張りネジ73Bの押し込み量に応じて、光軸に交差する方向の傾きを変更することができるようになっている。また、ティルト部材67は、Y方向に延びる雌アリ67aを有している。
本実施形態に係る多光子励起型観察システム200により顕微鏡本体5Aの標本Sを観察する場合は、まず、光ファイバ3により顕微鏡本体5Aにレーザ光源1を接続する。
このように設定した状態で、レーザ光源1からレーザ光を発生させると、レーザ光が光ファイバ3により導光されて顕微鏡本体5Aに入射する。顕微鏡本体5Aにレーザ光を入射させた後の作用は、第1実施形態と同様であるので説明を省略する。
顕微鏡装置10Bにおいては、顕微鏡装置10Aと同様にして、レーザ光源1から発せられたレーザ光が光ファイバ3により顕微鏡本体5Bに導光されるとともに、標本Sにおいて発生した蛍光がリキッドライトガイド20によりPMT19に導光されて標本Sの画像が生成される。これにより、ユーザはモニタ9B上で標本Sを観察することができる。
すなわち、本実施形態においては、レンズ調整機構として、レンズ保持部39が、レーザ光の光軸に交差する方向にコリメートレンズ38の傾きを調整可能なティルトネジ53を備えることとした。第1変形例としては、例えば、図8に示すように、レンズ調整機構として、さらに、コリメートレンズ38から射出させるレーザ光の光軸に交差する方向にコリメートレンズ38の位置を調整可能なシフト調整ネジ81を備えることとしてもよい。
このようにすることで、コリメートレンズ38を光軸に交差する方向にずらし、コリメートレンズ38から射出させるレーザ光を光軸に交差する方向にシフトさせることができる。
このようにした場合も、2つの顕微鏡本体5A,5B間でレーザ光源1を共用し、経済性を向上することができる。
このようにした場合も、2つの顕微鏡本体5A,5B間でレーザ光源1を共用し、経済性を向上することができる。
このようにすることで、1つの顕微鏡本体5A(5B)に対してレーザ光源1A,1Bを付け替えることにより、波長が異なる蛍光を効率的かつ経済的に観察することができる。
本変形例では、光検出光学系をレンズなどを利用せず、ダイクロイックミラー27のみとしたので、より小型、安価にPMT19を共用することができると共に、蛍光の取り込み効率も維持することができる。
15 対物レンズ
16 検出側切換部(切換部)
17 光検出光学系
19 PMT(光検出部)
20 リキッドライトガイド
21 スキャナ(走査部)
27 励起ダイクロイックミラー(光検出光学系)
100,200 多光子励起型観察システム
Claims (4)
- 光源から発せられたレーザ光を走査させる走査部と、該走査部により走査されたレーザ光を標本に集光させる一方、該標本において多光子励起により発生した蛍光を集光する対物レンズとを備える複数の顕微鏡本体と、
前記蛍光を検出可能な、前記顕微鏡本体の数よりも少ない数の光検出部と、
該光検出部と各前記顕微鏡本体とに接続されて、該顕微鏡本体において前記対物レンズにより集光された前記標本からの蛍光を前記走査部を介さずに前記光検出部に導光可能なリキッドライトガイドとを備え、
該リキッドライトガイドと各前記顕微鏡本体および前記リキッドライトガイドと前記光検出部の少なくとも一方が着脱可能に形成されている多光子励起型観察システム。 - 光源から発せられたレーザ光を走査させる走査部と、該走査部により走査されたレーザ光を標本に集光させる一方、該標本において多光子励起により発生した蛍光を集光する対物レンズとを備える複数の顕微鏡本体と、
前記蛍光を検出可能な、前記顕微鏡本体の数よりも少ない数の光検出部と、
該光検出部と各前記顕微鏡本体とを接続して、該顕微鏡本体において前記対物レンズにより集光された前記標本からの蛍光を前記走査部を介さずに前記光検出部に導光する複数のリキッドライトガイドと、
前記光検出部と前記複数の顕微鏡本体との間で前記複数のリキッドライトガイドにより形成される前記蛍光の光路を切り替えて、いずれかの前記顕微鏡本体からの前記蛍光を前記光検出部に択一的に入射させる切換部とを備える多光子励起型観察システム。 - 前記顕微鏡本体が、前記対物レンズにより集光された前記蛍光を前記走査部に戻さずに前記リキッドライトガイドに入射させるダイクロイックミラーのみからなる光検出光学系を備える請求項1または請求項2に記載の多光子励起型観察システム。
- 前記顕微鏡本体ごとに個別に接続され、接続されている前記顕微鏡本体の前記走査部を個別に制御する複数の制御装置を備え、
前記リキッドライトガイドにより前記光検出部に接続された前記顕微鏡本体に接続されている前記制御装置が、前記走査部の制御を実行するとともに、該走査部の走査位置情報と前記光検出部から出力される蛍光の光強度情報とに基づいて前記標本の画像を生成する請求項1から請求項3のいずれかに記載の多光子励起型観察システム。
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