JP6419701B2 - 眼の感染症の治療または予防方法 - Google Patents
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Description
リジン構築物単位:
Jは、CHまたはNから選択され;
LとMは、独立して存在しないまたは-C1-6アルキレン-または-C1-3アルキレンOC1-3アルキレンから選択され; ただしLおよび/またはMが存在しないとき、JはCHであり;
**は、リジンまたはリジン類似体と、デンドリマーまたは構築物単位の前世代のコアとの間の連結を示している。
***は、リジンまたはリジン類似体と、リジンまたはリジン類似体の後代との結合を示すか、またはデンドリマーの表面アミノ基を形成する〕
から選択される。
以下の構造:
下の構造:
下の構造:
下の構造:
他の適切な構築物単位は以下を含む:
以下の構造:
以下の構造:
以下の構造:
前記構築物単位の任意のメチレン基は、メチレンオキシ(CH2-O)又はエチレンオキシ(CH2 -CH2-O)基で置き換えられていてもよく、ただし構築物単位内にカーボネート(-O-C(O)-O-)またはカルバメート(-O-C(O)-N-)部分の形成を生じないことを条件とする。
いくつかの実施形態では、スルホン酸又はスルホン酸塩含有部分は、以下から選択される:
式IIの特定のデンドリマーは、すべてのR基を、式IV(SPL7320)の基として有する。
式IIIの特定のデンドリマーは、すべてのR基を、式IV(SPL7304)の基として有する。
細胞へのアデノウイルスの侵入は、力価減少アッセイを用いて評価した(Hayashi, K: Characterization of antiviral activity of a sesquiterpene, triptofordin C-2, J. Antimicrob. Chemother., 1996, 37(4), 759-68)。細胞へのウイルスの侵入の防止は、細胞侵入を防止し、その結果、感染を排除する活性剤の能力を測定する。
殺ウイルスアッセイ(懸濁液におけるウイルスに対する殺菌剤の活性を評価するための標準試験方法、ASTM E 1052)のために、SPL7013は異なる濃度(0.5%、1.0%、3.0%、10.0%w/v)で異なる時間(30秒、1分、5分、30分、1時間)、アデノウイルスのサブタイプに曝露した。少数のサンプルのみ、30秒で試験した。露光後、SPL7013は、ウシ胎児血清で中和した。この中和されたサンプルは、その後、1/10〜1/100,000に希釈した。これらの希釈物はプレート中で標的細胞(細胞及びウイルスの詳細は実施例1に記載されている)を感染させるために用いられた。十分なインキュベーション(37℃±2℃で5-14日)後、プレートを細胞変性効果について陽性または陰性として分類し、別のプレートに適用されたウイルスの希釈に基づいて、組織培養感染用量(TCID50)を算出した(方法については実施例1を参照)。SFL7013なしのサンプルのTCID50値とSPL7013ありのサンプルのTCID50値を比較すると、SPL7013によって殺されたウイルス%の計算が可能になる。結果を表4に示す。
巨大分子の選択の抗アデノウイルス活性は、以下の方法により評価した。
ヘルペスウイルスHSV-2に対するSPL7013の殺ウイルス活性は、懸濁液中のウイルスに対する殺菌剤(ASTM E10S2)の活性を評価するために、米国材料試験協会の試験法を用いて評価した。
水性SPL7013溶液の抗微生物特性を評価するために、二つの水溶液を準備し、一つは5%w/vであり、二つ目は28%w/vである。標準保存有効性試験(USP <51>「抗菌効果試験」による)は、1ヶ月の期間にわたって、各溶液の微生物の増殖を制限する能力に挑戦するために実施した。
SPL7013は、5%または28%w/wの水中の溶液として、試料とともに溶解を促進するために攪拌して調製した。
溶液は、以下の微生物で挑戦した。
- 緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa,)、ATCC 9027
- 黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、ATCC 6S38
- カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)、ATCC 10231
- アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、ATCC 16404
- 大腸菌(Escherichia coli)、ATCC 8739
液体にさらされる上皮組織のSPL7013の保持を試験するために、SPL7013を、液体の層の下で、上皮細胞の複数の層状の層からなる組織の小さなフィルムに塗布した。
実験は、眼へのSPL7013の送達期間を延長し、またはレンズに隣接して、感染を低減または防止するために、コンタクトレンズに付着するSPL7013の能力を評価するために行った。
五つのすすぎビーカー50 mLのミリQ水を準備し、より小さなビーカーには15mLのミリQ水を準備した(抽出ビーカー)。コンタクトレンズをミリQ水ですすぎ、簡単に風乾させた。残留液滴を穏やかにビーカーの側面に取り出した。レンズは、その後、凹状にして(すなわちエッジを上向きにして)別のテストビーカーに入れた。水中10%のSP7013の1mLをレンズの上部に入れ、および試験溶液中で20分間または60分間インキュベートした。
レンズは、その後抽出ビーカーのミリQ水(15 mL)中に滴下し、任意に結合したSPL7013を解放するために10分間超音波処理した。
超音波処理した溶液を20mLのメスフラスコに移し、水をマークまで充填した。1.5mLの試料をHPLCバイアルにろ過した。これが、「リリース」された、試料である。
HPLC分析は、リリース、未結合およびリンスの試料を二重に実行し、SPL7013の0.05ミリg/mLのストック溶液の試料に対して較正を行った。試料の平均ピーク面積を計算し、サンプル中のSPL7013の濃度は、以下の式によって算出した。
C(試料)=面積(試料)/面積(標準)x標準の濃度
SPL7013および他のコンパレータ剤の亜阻害濃度の標的病原体の反復暴露後に出現する耐性の可能性は、連続継代することによって評価した。また、選択した変異体(親株よりも4倍以上高いMIC値を有する分離株)は、確認MIC試験、薬剤なしの培養後の変異体の安定性の評価、および共耐性パターンを決定することにより特徴づけられた。
試験品目
試験生物は、ATCC生物または代表的な臨床分離株からなる。
ガードネレラ バギナリス(Gardnerella vaginalis)ATCC 14018(MMX4153)
プレボテラ ビビア(Prevotella bivia) MMX 3447
Mobiluncus curtisii ATCC 3S241(MMX 4145)
アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)MMX 5716
バクテロイデスフラジリスATCC 25285(MMX 0123)とG.バギナリスATCC 14018(MMX4153)は、この研究で試験品質管理生物とされた。
全ての生物については、MICアッセイプレートと成長培地は3%ウマ血清(Cleveland Scientific; Bath, OH; )を補ったブレインハートインフュージョンブロス(Brain Heart Infusion broth (BUI; Becton Dickinson, Sparks, MD))であった。
3%ウマ血清を含むBHIを捕捉ブルセラブロスの代わりに、成長培地として使用したことを除いてCLSIブロス希釈法(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI document M11-A7)を使用して、すべての分離株と試験剤についてMIC値を得た。コンパレータ薬物について、標準的な96ウェル微量希釈プレートの列2〜12のウェルは、適切な希釈の薬液90μLで満たした。
成長があった、薬物の最高濃度を含有するウェルの内容物をブルセラ寒天上にプレーティングし、35℃で48時間嫌気的にインキュベートした。次の継代のための接種は、この寒天プレートからの成長を用いて調製した。最高の亜阻害濃度でウェルにごくわずかな成長が含まれていると判断された場合は、希釈下のウェルからの内容を、十分な密度の新鮮な接種材料が次の培養のために調製することができることを保証するために、ブルセラ寒天上にストリークした。プレートから、0.5マクファーランド懸濁液を作製し、試験プレートは、CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI document M11- A7)に応じて接種した。凍結ストックからのB.フラジリス0123とG. vaginalis の新鮮な接種物は、品質管理の目的のために毎日試験した。
B.フラジリスに対して、メトロニダゾールのMICの100%が範囲内であった、そしてクリンダマイシンのMICはMICが許容範囲を1ウエル下回った3日間を除いて、範囲内であった。SPL7013はMIC> 128 mg/mlのB.フラジリスに対して評価した濃度範囲にわたって活性を有さなかった。 SPL7013のための提案されたQC株であるG.バギナリスATCC 14018に対して、連続継代中のSPL7013のMICはMICが提案範囲より1ウエル上であった3試験日を除いて、0.25-1 mg/mlの提案範囲内であった。
G.バギナリスATCC 14018(MMX 4153)の連続継代中、SPL7013、メトロニダゾール、およびリファキシミンのMICは、ベースラインで観察されたMICの数倍に増加した。メトロニダゾールのMICは、継代7までに4から> 128μg/ml(> 64倍)に増加し、継代9までに、SPL7013 MICは、1から64 mg/ml(64倍)に増加した。
要約すると、ターゲット細菌性病原体およびL.アシドフィルスとの連続継代の間、SPL7013のMICの中でいくつかの増加があった。MICの増加は、メトロニダゾールとリファキシミンでのこれらの生物の中でも明らかであり、SPL7013で観察されたものよりも、大きさが大きく、早期に分化した。連続継代中にクリンダマイシンに対する抵抗性は明らかではなかった。
全身麻酔と角膜乱切に続いて、NZW雌ウサギは、Ad5 McEwenの3.0×107 PFU/mLを50μl(1.5×106 PFU/眼)でそれぞれの目に接種した。接種後約3時間後に、涙液膜と結膜の表面を綿棒で成長培地を1 mL含むチューブに取り、アデノウイルスを培養した。
3日目に、すべての目がドレイズ評点法(Draize, J. H., Woodward, G. and Calvery, H. O. Methods for the study of irritation and toxicity of articles applied topically to the skin and mucous membranes. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1944; 82:377-390.)を使用して製剤の眼の忍容性について評価し、最大平均総スコア(Kay JH, Calandra JC. Interpretation of eye irritation tests. J Soc Cos Chem. 1962;13:281-289)を用いて解釈した。すべての3つのグループは、低侵襲刺激としてスコアされた。
Ad5の力価は、標準的なプラークアッセイを用いて、A549肺癌細胞単層上で測定した。眼の培養物を希釈して、A549の単層上に接種し、ウイルスを3時間吸着させた。吸着後、1mlの培地と 0.5%メチルセルロースを各ウェルに添加し、そしてプレートを、7日間、5%CO2、水蒸気雰囲気中で37℃でインキュベートし、その後0.5%ゲンチアナバイオレットで染色し、そしてプラークを計数した。
Claims (16)
- 対象がヒトである、請求項1に記載の組成物。
- ヒトが、コンタクトレンズを装着しているまたは装着していた、および/または巨大分子が7日よりも多く投与される、請求項2に記載の組成物。
- 治療が、微生物性結膜炎の1つまたは複数の症状の進行を、緩和、低減または停止することを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組成物。
- 症状が、眼の赤み、かゆみ、刺激、羞明、痛み、視力障害、腫れ、涙目および排出の1つ又は複数である、請求項4に記載の組成物。
- 微生物性結膜炎がウイルス性または細菌性の結膜炎である、請求項1から7、9または10のいずれか一項に記載の組成物。
- 微生物性結膜炎が、同時の、または区別されないウイルスおよび/または細菌性結膜炎である、請求項1〜7、9または10のいずれか一項に記載の組成物。
- ウイルス性結膜炎が、アデノウイルスおよびヘルペスウイルスから選択されるウイルスによって引き起こされ、細菌性結膜炎が、ブドウ球菌属およびシュードモナス属から選択される細菌によって引き起こされる、請求項11または12に記載の組成物。
- ウイルス性結膜炎がアデノウイルスによって引き起こされる、請求項11〜13のいずれか一項に記載の組成物。
- アデノウイルスが、アデノウイルスサブタイプ11、8、19、37、53、54、56または64である、請求項14記載の組成物。
- 結膜炎が、流行性角結膜炎、急性流行性結膜炎、咽頭結膜熱、流行性結膜炎、角結膜炎、スイミングプール結膜炎、粒状結膜炎および急性出血性結膜炎からなる群より選択される、請求項11〜15のいずれか一項に記載の組成物。
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