CN108452316B

CN108452316B - 眼部感染的治疗或预防方法

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Publication number: CN108452316B
Application number: CN201810557127.1A
Authority: CN
Inventors: 贾辛丝·金凯德·费尔利; 科林·保罗·巴雷特; 杰里米·罗伯特·亚瑟·保罗
Original assignee: Starpharma Pty Ltd
Current assignee: Starpharma Pty Ltd
Priority date: 2012-09-13
Filing date: 2013-09-13
Publication date: 2022-04-15
Anticipated expiration: 2033-09-13
Also published as: CN108452316A; IN2015DN02233A; ES2633778T3; US11219691B2; JP6419701B2; DK2895161T3; JP2015528509A; EP2895161B1; JP6766114B2; US10149885B2; CN105007910A; CA2884897C; CA2884897A1; HK1212619A1; JP2019001827A; EP2895161A1; EP2895161A4; US20150238557A1; US20190070249A1; CN105007910B

Abstract

通过局部对眼睛给药有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其具有一个或多个连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的含磺酸或磺酸盐部分的1‑8代树枝状分子，而治疗或预防了受试者眼部微生物感染。在这些方法中含有大分子或盐的组合物是有用的。

Description

眼部感染的治疗或预防方法

技术领域

本发明涉及治疗或预防眼部微生物感染或减轻或预防眼部微生物感染的一种或多种症状的方法。还描述了预防眼部微生物感染扩散的方法和用于治疗或预防眼部微生物感染的组合物。

背景技术

结膜炎，也称为红眼病，是一种对眼睛最外层（结膜）、眼睑内表面或结膜和眼睑内表面两者的感染。结膜炎可以由病毒、细菌、过敏原或化学物质所导致。结膜感染可能引起眼睛其它部分的参与和发炎，包括角膜、巩膜、泪腺、睑板腺和眼睫毛毛囊。

由例如病毒 (通常为腺病毒、疱疹病毒、柯萨奇病毒、痘病毒和爱泼斯坦巴尔病毒)和细菌等病原体导致的结膜炎通过感染颗粒、液滴、隐形眼镜、医学或眼科设备与眼睛的接触进行传播。腺病毒可通过来自腺病毒呼吸道感染患者的咳嗽或喷嚏的呼吸道飞沫传播。未充分消毒的隐形眼镜、医学或眼科设备也可能导致结膜感染。腺病毒感染可快速传遍学校和儿童护理中心，其中儿童彼此亲密接触。儿童可能转而感染其它家庭成员，包括兄弟姐妹和父母。虽然任何微生物都可能导致外眼发炎，但是据估计高达92%的诊断是由于腺病毒相关的流行性角膜结膜炎 (EKC)。

眼带状疱疹也是一种水痘的常见并发症。在每年诊断的约一百万例水痘中，约250,000例发展为眼带状疱疹，且这些患者的一半进一步发展为眼带状疱疹并发症。

疱疹性角膜结膜炎可能来自于成人和儿童中的初发和复发性单纯疱疹病毒-1(HSV-1)感染。HSV-1几乎全球分布（acquired），在发达国家是角膜失明的最常见形式。此外，HSV-2可导致疱疹性角膜结膜炎，主要是在新生儿中，其受到来自受感染个体的产道所传递的感染。

进一步的，不仅是病毒例如HSV-1，而且细菌例如淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae）和衣原体属（Chlamydia spp.）也可能感染从受感染母亲的产道出生的新生儿的眼部。这种感染会导致疼痛和显著的结膜排出（discharge），如果不治疗可能导致角膜溃疡。

虽然病毒性结膜炎的一些情况会在1-6周内不经治疗而解决（resolve），但是主要由腺病毒亚型8、19和/或37感染导致的EKC传染性非常强，并可能发展为涉及角膜以及结膜。对角膜的涉及影响短期视觉，有时会影响长期视觉。如果含病毒物质的上皮下角膜浸润物(湿疹(nummuli))发展的话，视觉缺陷可能持续数月。这些通常需要皮质类固醇治疗4个月的周期。EKC也可能导致对位于结膜中负责眼泪产生的细胞的损伤，导致长期泪腺困难例如干眼综合征。EKC在人群中快速传播，特别当大量人群紧密集中时，例如在学校、儿童抚养中心、医院、老年护理单位、医生办公室、军事基地、办公室和工厂。

在其它方面健康的患者中，结膜炎可随时间自己解决。然而，在免疫功能不全或免疫抑制的患者中，例如那些患有HIV或遗传免疫缺陷的患者、经历化疗的癌症患者、实体器官移植或干细胞移植受体的患者中，可能产生严重的感染和有生命危险的并发症。

虽然结膜炎，特别是病毒性结膜炎，主要影响一只眼睛，但是传递到另一只眼是常见的，特别是考虑到正常人每天约14次无意识地触碰其眼睑和眼睑软骨结膜，且这在那些使用眼部化妆品和/或戴隐形眼镜的人中更多。

结膜炎可导致视力模糊、失明和在一些情况下的疼痛，以及持续性干眼综合征，如果发生眼泪产生细胞损失的话。

结膜炎的常规治疗包括局部应用非甾体抗炎药物、抗生素滴眼剂或药膏以及在严重病毒性感染中使用局部皮质类固醇和/或口服抗病毒治疗。然而，很多这些治疗没有效果或仅有中等效果，且需要频繁给药或症状开始72小时内给药。常规眼药水还包含防腐剂，其可能导致患结膜炎的患者眼睛刺激，而不含防腐剂的溶液仅适于一次性使用，或必须冷冻。常规治疗具有毒性特征，限制了其应用。此外，没有有效的局部治疗腺病毒性结膜炎的抗病毒剂可以获得。常规治疗还不适于预防性使用，并因而不能减少或抑制感染传播至个体的另一只眼睛，或在有结膜感染风险的群体中传播。

常规治疗通常按照细菌性或病毒性的感染类型定制，不适于同时治疗病毒和细菌性感染两者。然而，在实践中有时候难以区分患者患有病毒或细菌性感染。由于不能判断病因，且缺少有效低毒的局部抗病毒药，从业者将用抗生素治疗，从而存在很多不需要的抗生素开药。病毒和细菌性病原体共感染也需要施用多种治疗。

在隐形眼镜佩戴者中，由于增加的眼部接触和外来物的存在导致感染频率增加。当用常规疗法进行治疗时通常需要暂停佩戴隐形眼镜，因为眼镜可能作为感染物的发源地，刺激病况并阻碍治疗到达或保留在眼部相关区域。

由于眼部感染例如结膜炎导致显著的社会和经济影响，包括损失学时和损失工作日，因此需要替代性治疗方法用于治疗、特别是预防眼部感染例如结膜炎。

发明内容

在本发明的第一个方面，提供了一种治疗或预防受试者眼部微生物感染的方法，包括对眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在一个具体实施方式中，微生物感染导致结膜炎。在一些实施方式中，结膜炎是病毒性结膜炎，特别是腺病毒导致的病毒性结膜炎，更特别的由腺病毒亚型8、11、19、37、53、54、56和64导致的病毒性结膜炎，最特别的亚型19和37。

在本发明的另一方面提供了一种缓解、减轻或停止受试者眼部微生物感染的一种或多种症状的发展的方法，包括对眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在一个具体实施方式中，缓解的症状是眼睛发红、瘙痒、刺激、畏光、疼痛、视力障碍、肿胀、流眼水和排出（discharge）中的一种或多种。

在一个进一步的方面，提供了一种治疗或预防受试者眼部同时或无差别发生的病毒和/或细菌性感染的方法，包括对眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在本发明又一个进一步的方面，提供了一种预防或减少在第一只眼睛患有微生物感染的受试者的第二只眼睛微生物感染严重程度的方法，包括对第二只眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在本发明的又一方面，提供了一种减少眼部微生物感染在有眼部微生物感染风险的群体中传播的方法，包括对群体中至少一个受试者的至少一只眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在本发明的另一方面提供了一种治疗或预防受试者中的传染性结膜炎的方法，包括对受试者的眼睛局部施用多于7天的有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

包含具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分的1-8代树枝状分子作为主要成分的组合物可用于关联前述方面和本发明实施方式的任一方法。树枝状分子可作为组合物的“主要成分”提供。在此背景下，当其是活性的以至少有助于获得本方法期望的效果时，树枝状分子起“主要成分”的作用。

在本发明的一个进一步的方面，提供了一种隐形眼镜溶液，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在本发明又一个进一步的方面，提供了一种组合物，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分的1-8代树枝状分子和至少一种提供与眼部相容的pH和渗透压的药学可接受载体。

在本发明的一个进一步的方面，提供了一种杀微生物剂递送系统，包括隐形眼镜和大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面氨基的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

具体实施方式

本文使用的冠词“一个”和“一种”指一个或多于一个(即，至少一个)的该冠词的受词。举例来说，“一种元素”表示一种元素或多于一种元素。

除非上下文另有要求，否则在整个本说明书和随后的权利要求书中使用的术语“包含”和变体例如“含有”和“包括”将被理解为包括了陈述的整数或步骤或整数或步骤的组，但不排除任何其它整数或步骤或整数或步骤的组。

如本文使用的术语"约"指在参考数量、水平、值、维度、尺寸或数量基础上改变多达30%、25%、20%、15%或10%的数量、水平、值、维度、尺寸或数量。

在本发明的第一个方面提供了一种治疗或预防受试者眼部微生物感染的方法，包括对眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

微生物感染可能感染外眼的任何部分，包括结膜、眼睑、巩膜、角膜、泪器、睑板腺、眼睫毛毛囊、半月皱襞和泪阜，并影响眼睛的其它部分，后者可能发炎，例如角膜，导致角膜炎；和眼睑，导致眼睑炎。在具体实施方式中，微生物感染导致传染性结膜炎。微生物感染可以是上皮细胞或基质细胞感染，例如角膜细胞或成纤维细胞。

结膜炎可以是结膜和/或眼睑内表面的任何炎症。结膜炎可由微生物例如病毒、细菌或真菌所导致。在具体实施方式中，结膜炎的病理选自病毒性结膜炎或细菌性结膜炎，更特别的病毒性结膜炎。结膜炎可以是慢性或急性的。在一些实施方式中，结膜炎选自流行性角膜结膜炎、角膜结膜炎、急性出血性结膜炎、咽结膜热、红眼病、急性流行性结膜炎、游泳池结膜炎、沙眼、粒状结膜炎角膜炎、埃及眼炎、非淋球菌细菌性结膜炎、淋球菌结膜炎、包涵体结膜炎、衣原体结膜炎、立克次体结膜炎、小水疱病(小疱形成性角膜结膜炎)和睑结膜炎，特别是流行性角膜结膜炎、急性流行性结膜炎、咽结膜热、红眼、角膜结膜炎、游泳池结膜炎、粒状结膜炎和急性出血性结膜炎。在一些实施方式中，结膜感染已经扩散到外眼的其他地区，如角膜、巩膜和/或泪腺。

在一些实施方式中，病毒性结膜炎由下述病毒性病原体导致：腺病毒，包括腺病毒亚型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、17、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、53、54、56和64，特别是腺病毒亚型1、2、3、4、6、7、8、11、14、19、21、37、53、54、56和64，更特别的腺病毒亚型3、4、7、8、11、19、37、53、54、56和64，特别是8、19、37和64，最特别的19和37，D类腺病毒；肠病毒例如肠病毒8、肠病毒19和肠病毒70；疱疹病毒例如单纯性疱疹病毒1型、单纯性疱疹病毒2型、单纯性疱疹病毒3型 (水痘带状疱疹病毒)和单纯性疱疹病毒5型(巨细胞病毒)；柯萨奇病毒例如柯萨奇 A24和柯萨奇病毒A28；鼻病毒和流感病毒，包括甲型流感，例如H1N1、H7N7、H2N2、H3N2和H5N1，乙型流感和丙型流感，禽流感和猪流感；特别是腺病毒、疱疹病毒和柯萨奇病毒，更特别的腺病毒或疱疹病毒，最特别的腺病毒。

在具体实施方式中，本发明的方法提供了一种治疗或预防腺病毒导致的结膜炎或感染及其导致的结膜以及其它眼组织例如巩膜、眼睑、角膜的炎症的方法。在另一具体实施方式中，本发明的方法提供了对由疱疹病毒导致的结膜炎的治疗。

在一些实施方式中，细菌性结膜炎由下述一种或多种细菌性病原体导致：奈瑟氏菌属（Neisseria spp.），例如淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae）和脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）；链球菌属（Streptococcus spp.），例如肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）和脓链球菌（Streptococcus pyrogenes）；葡萄球菌属（Staphylococcus spp.），例如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）；嗜血杆菌属（Haemophilus spp.），例如埃古普托斯嗜血杆菌（Haemophilus aegyptus）和流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）；假单胞菌属（Pseudomonas spp.），例如铜绿假单胞菌（Psecudomonas aeruginosa）；立克次氏体属（Rickettsia spp.），例如普氏立克次氏体（Rickettsia prowazekii）；腔隙莫拉克斯氏菌（Moraxella lacunata）；单核细胞增多性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）；鲁氏不动杆菌（Acinetobacter iwoffi）；大肠杆菌（Escherichia coli）；蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）；棒状杆菌（Corynebacterium），例如白喉杆菌（Corynebacterium diphtheriae）；分枝杆菌属（Mycobacterium spp.），例如结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和偶发分枝杆菌（Mycobacterium foruitum）；和衣原体属（Chlamydia spp.），例如眼阴部衣原体（Chlamydia oculogenitalis）、沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis）、淋巴肉芽肿衣原体（Chlamydia lymphogranulomatis）和鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci），特别是奈瑟氏菌属、衣原体属、葡萄球菌属、链球菌属、假单胞菌属和嗜血杆菌属。

在一些实施方式中，真菌结膜炎由下述一种或多种真菌性病原体导致：曲霉属（Aspergillus spp.），例如黑曲霉（Aspergillus niger）；念珠菌属（Candida spp.），例如白色念珠菌（Candida albicans）；西伯鼻孢子菌（Rhinosporidium seeberi）；球孢子菌属（Coccidioides spp.），例如粗球孢子菌（Coccidioides immitis）；和孢子丝菌属（Sporothrix spp.），例如申克氏孢子丝菌（Sporothrix schenckii），特别是黑曲霉和白色念珠菌。

如本文使用的术语"受试者"指任何易受结膜炎影响的受试者，包括人，家养动物例如猫和狗，农场动物，包括牛、绵羊、山羊、猪、鸡、鹅、骆驼、鹿等，实验室试验动物，如大鼠、小鼠、猴子、兔子和豚鼠，野生圈养动物，如动物园中发现的那些。在一个具体实施方式中，受试者是人，包括新生儿、儿童和成人。

在一些实施方式中，受试者是非免疫功能不全的。在其它实施方式中，受试者是免疫功能不全的或免疫抑制的。免疫功能不全的受试者包括那些免疫缺陷的患者，例如那些患有HIV或遗传免疫缺陷的患者和那些进行抑制（compromise）免疫的治疗的患者，例如经历化疗或放疗的癌症患者。免疫抑制的受试者包括那些服用免疫抑制药物的患者，例如实体器官移植受体或干细胞移植受体。

在一些实施方式中，受试者是隐形眼镜佩戴者。佩戴的隐形眼镜可以是1类-4类可透气(GP)镜或软水凝胶镜(1类=低水，非离子性；2类=高水，非离子性；3类=低水，离子性；4类=高水，离子性)。有很多隐形眼镜品牌，一些主要品牌是Acuvue® Oasys® (Vistakon)、Air Optix® Aqua (CIBA Vision)、Biofinity® (Cooper Vision)和PureVision®(Bausch & Lomb)。

本文使用的术语"治疗"指至少部分获得期望的治疗效果，但不必然表示受试者被治疗至痊愈。治疗还包括减少或减轻眼部感染症状，例如传染性结膜炎和相关眼组织（特别是角膜）发炎，或减轻眼部感染例如传染性结膜炎的严重程度。治疗还包括减少病毒负荷或病毒抗原和减少感染时间或严重度。

术语"预防"指减少眼部感染例如传染性结膜炎的感染或发展的风险或延迟眼部感染例如传染性结膜炎的发作。预防不必是完全的，也不表示受试者最终不会感染或发展眼部感染例如传染性结膜炎。

"有效量"表示至少部分获得期望的响应所需要的量，或使眼部感染例如传染性结膜炎延迟发作、抑制发展或完全停止所需要的量。所述量随着待治疗受试者的健康和身体条件、待治疗受试者的分类组、需要的保护程度、组合物剂型、传染剂量、疾病严重程度和其它相关因素而变化。预期有效量将落入相对较广的范围，其可通过常规实验进行判断。对人类患者的有效量可以，例如，落入约25 µg至25 mg每剂量的范围，特别是150 µg-6 mg，更特别的0.5 mg-2.5 mg每剂量。当在溶液中或作为组合物的一部分时，大分子的量可以是0.1% w/w组合物至10% w/w组合物，特别是0.5%至8% w/w，更特别的1% w/w至5% w/w组合物。

在本发明的另一方面，提供了一种缓解、减轻或停止受试者中一种或多种眼部微生物感染症状的发展及相关的发炎的方法，包括对眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在具体实施方式中，所述症状是结膜炎症状。如本文使用的结膜炎症状包括眼睛发红、眼睛瘙痒、眼睛和眼睑发炎、眼睑肿胀、眼睛刺激或瘙痒、流眼水、或流泪(溢泪)性耳廓前淋巴结病、排出（discharge）、畏光、视力模糊、皱襞和阜肿胀、湿疹(nummuli)、眼睛干燥和散光。在具体实施方式中，本发明的方法减缓或减少眼睛发红、瘙痒、刺激、畏光、视力障碍、肿胀、疼痛、流眼水和排出（discharge）。

在一些实施方式中，本发明的方法减轻了一种或多种症状的严重程度或持续时间。在其它实施方式中，本发明的方法中止了症状的发展，从而进一步预防症状发生或预防症状变差。

在具体实施方式中，该同时或无差别发生的病毒和/或细菌性感染导致结膜炎。术语"同时"指受到多于一种微生物同时感染。术语"无差别"描述了其中医师难以对感染的病因或病原做出具体诊断。

在一些实施方式中，同时感染包括原发病毒性感染和继发性细菌性感染。在一些实施方式中，同时感染包括由病毒病原体导致的病毒性结膜炎，其选自包括腺病毒亚型1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、17、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、36、37、38、39、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、53、54、56和64，特别是腺病毒亚型1、2、3、4、6、7、8、11、14、19、21、37、53、54、56和64，更特别的腺病毒亚型3、4、7、8、11、19、37、53、54、56和64，特别是8、19、37和64，最特别的19和37；肠病毒例如肠病毒8、肠病毒19和肠病毒70；疱疹病毒例如单纯性疱疹病毒1型、单纯性疱疹病毒2型、单纯性疱疹病毒3型 (水痘带状疱疹病毒)和单纯性疱疹病毒5型(巨细胞病毒)；柯萨奇病毒例如柯萨奇 A24和柯萨奇病毒A28；鼻病毒和流感病毒，包括甲型流感，例如H1N1、H7N7、H2N2、H3N2和H5N1，乙型流感和丙型流感，禽流感和猪流感，以及由细菌性病原体导致的细菌性结膜炎，其选自奈瑟氏菌属（Neisseria spp.），例如淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae）和脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis）；链球菌属（Streptococcus spp.），例如肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）和脓链球菌（Streptococcus pyrogenes）；葡萄球菌属（Staphylococcus spp.），例如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）；嗜血杆菌属（Haemophilus spp.），例如埃古普托斯嗜血杆菌（Haemophilus aegyptus）和流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）；假单胞菌属（Pseudomonas spp.），例如铜绿假单胞菌（Psecudomonas aeruginosa）；立克次氏体属（Rickettsia spp.），例如普氏立克次氏体（Rickettsia prowazekii）；腔隙莫拉克斯氏菌（Moraxella lacunata）；单核细胞增多性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）；鲁氏不动杆菌（Acinetobacter iwoffi）；大肠杆菌（Escherichia coli）；蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）；棒状杆菌（Corynebacterium），例如白喉杆菌（Corynebacterium diphtheriae）；分枝杆菌属（Mycobacterium spp.），例如结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和偶发分枝杆菌（Mycobacterium foruitum）；和衣原体属（Chlamydia spp.），例如眼阴部衣原体（Chlamydia oculogenitalis）、沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis）、淋巴肉芽肿衣原体（Chlamydia lymphogranulomatis）和鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci）。在具体实施方式中，病毒病原体选自腺病毒，特别是腺病毒亚型8、19或37或疱疹病毒，和选自奈瑟氏菌属、衣原体属、葡萄球菌属、链球菌属、假单胞菌属和嗜血杆菌属的细菌性病原体。

在一些实施方式中，对原发性病毒性感染的治疗防止继发性细菌性感染发生。

有利的是，本发明的大分子同时具有抗病毒和抗细菌活性，因此一种治疗可被用于治疗或预防两种感染，而不需要多种治疗，或不需要医师判断感染原因。

长期或不正确地使用传统抗生素可能导致细菌耐受性的发展并降低清除感染的效果。本发明的大分子有利地具有减少的诱导细菌耐受性的可能性。

因而，在本发明的另一方面提供了一种治疗或预防受试者结膜炎的方法，包括对受试者的眼睛局部施用多于7天有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在一些实施方式中，结膜炎的预防为至少 14天，例如，14-30天。在一些实施方式中，大分子的给药减少了细菌耐受性的发展。在其它实施方式中，结膜炎的预防为长期的，以避免有高结膜炎发病率倾向的个体的感染再发生。

在本发明的一个进一步的方面，患有结膜炎或携带已知导致结膜炎的腺病毒性感染的受试者被治疗，以预防感染传播至其他个体。

当受试者显示结膜炎时，其通常在一只眼睛中。然而，一只眼睛中的感染显著增加感染传播到另一只眼睛的风险。大多数情况，在不存在严格的卫生条件下，另一只眼也被感染，虽然经常程度较轻。目前没有减少第二只眼感染风险的治疗。

因而，在本发明又一个进一步的方面，提供了一种预防或减少在第一只眼睛患有微生物感染的受试者的第二只眼睛微生物感染严重程度的方法，包括对第二只眼睛局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

不希望受理论限制，本发明的大分子表现出预防病毒感染或进入细胞，从而减少了第二只眼感染病毒的可能性。

在又一个方面，提供了一种减少眼部微生物感染在有眼部微生物感染风险的群体中传播的方法，包括对群体中至少一个受试者的至少一只眼局部施用有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在具体实施方式中，眼部微生物感染导致结膜炎。传染性结膜炎，特别是病毒性结膜炎，易于通过接触传播，包括手眼接触、接触来自咳嗽或喷嚏的空气播散飞沫、医学或眼科设备或隐形眼镜。传染性结膜炎在紧密靠近的群体或群组中是严重的问题，例如学校、儿童抚养中心、军事基地、医院、医生外科手术、眼科诊所、工厂、办公室等等。传染性结膜炎在学校和儿童抚养中心的迅速传播是公知的，其中儿童紧密接触且对呼吸卫生和咳嗽礼仪存在较低控制。

在一些实施方式中，受试者群体是儿童群体，特别是学校儿童或儿童抚养中心所扶养的儿童。在一些实施方式中，群体是家族或家庭群体，包括成人和儿童。在一些实施方式中，群体是成人群体，例如，在办公室或工厂中。在一些实施方式中，群体是军事基地的成人群体。在一些实施方式中，群体是医院群体，特别是免疫功能不全的群体。

在一些实施方式中，对群体中的一个人给药本发明的大分子。在其它实施方式中，对群体的所有成员给药本发明的大分子，不论是否存在结膜炎症状。在其它实施方式中，群体的一部分被给药本发明的大分子，例如，群体的1-99% 被给药，特别是群体的至少 90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10% 被给药本发明的大分子。

大分子或大分子制剂可按照提供期望效果的给药方案进行给药。例如，在症状存在或例如会导致结膜炎的眼部感染的感染风险存在的时间内，制剂可每天1-6次，特别是每天1-4次，或每天1-3次，更特别的每天一次被施用至眼睛。例如，给药可在1-30天、1-20天、1-10天，特别是约4-7天的周期内发生。

预防性给药可在1-30天、1-20天、1-10天，特别是约4-7天内或例如会导致结膜炎的眼部感染的感染风险存在时每天发生一次。预防性给药可每天发生1-8次。在1-30天、1-20天、1-10天，特别是约4-7天的周期内或微生物感染例如结膜炎的症状持续时，治疗性给药可每天发生1-6次，特别是每天1-4次或每天1-3次，更特别的每天一次。

在本发明的方法中，制剂可与另一种微生物感染疗法共同给药，例如抗病毒剂、抗生素、抗炎剂或皮质类固醇。当其它治疗剂与大分子相容且适于对眼睛局部施用时，可以出现单一组合物中的共同给药。可选的其它治疗剂可同时或顺序地分别递送。当分别递送时，另一种用于微生物感染例如传染性结膜炎的治疗剂可通过任何合适的方式给药，包括口服、局部或注射。

用于口服给药的合适的抗病毒剂包括但不限于西多福韦、阿昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦、扎西他滨、阿洛夫定、stampidine、利巴韦林、环孢霉素、2’,3’-双脱氧胞苷（DDC）、6-氮杂胞苷、(S)-HPMPC、(S)-HPMPA和2-降-环GMP。

合适的抗生素包括阿米卡星、阿奇霉素、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟、头孢曲松、氯霉素、环丙沙星、克林霉素、粘菌素、domeclocycline、红霉素、庆大霉素、磺胺米隆、甲烯土霉素、新霉素、氟哌酸、氧氟沙星、土霉素、多粘菌素B、乙胺嘧啶、利福昔明、磺胺嘧啶银盐、磺胺醋酰、磺胺二甲基异恶唑、四环素和妥布霉素。

合适的非甾体抗炎药包括水杨酸盐，如阿司匹林、二氟苯水杨酸和双水杨酯；丙酸衍生物如布洛芬、右旋布洛芬、非诺洛芬、酮洛芬、右酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦和洛索洛芬；乙酸衍生物，如吲哚美辛、托美丁、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸和萘丁美酮；烯醇酸衍生物如炎痛喜康、美洛昔康、替诺昔康、屈恶昔康、氯诺昔康和伊索昔康；芬娜酸衍生物如甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸和托芬那酸；COX-2抑制剂如塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、帕瑞考昔、芦米考昔、艾托考昔和非罗考昔；和其他如利克飞龙和氯尼辛赖氨酸。

合适的皮质类固醇包括氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、氢化波尼松、甲基氢化波尼松、泼尼松、曲安奈德、去炎松醇、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、氟轻松、氟轻松醋酸酯、哈西奈德、倍他米松、地塞米松、氟可龙、泼尼卡酯、氯倍他松-17丁酸和氯倍他索-17-丙酸酯。

当母亲具有病毒或细菌性阴道、宫颈或阴唇感染时，结膜炎可随着新生儿经过母亲的产道而被新生儿感染。新生儿可在出生后1-5天内发展出由单纯性疱疹病毒导致的病毒性结膜炎症状或由淋病或衣原体导致的细菌性感染。出生过程中从母亲到新生儿的传播的预防需要在出生前足以治愈所述感染或发作的时间用抗生素或抗病毒剂治疗母亲。这并非总是可能的，如果不知道母亲被感染或在紧邻分娩前或分娩过程中才发现感染的话。

在本发明的另一方面，提供了一种预防或减少在新生儿经过母亲产道的过程中将细菌性或病毒性感染传递至新生儿眼睛的可能性的方法，包括对母亲的产道给药一种包含有效量的一种大分子或其药学上可接受的盐的局部用制剂，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在一些实施方式中，大分子以阴道凝胶、药膏、泡沫、霜剂或洗液的形式给药，特别是凝胶。在一些实施方式中，大分子的凝胶制剂含有流变学修饰剂，特别是Carbopol®聚合物例如Carbopol® 971P。流变学修饰剂可以2-10%的量存在，特别是约5%。大分子的凝胶制剂还可包含螯合剂，例如聚氨基羧酸。特别有用的螯合剂是乙二胺四乙酸 (EDTA)及其盐。在凝胶制剂中可包含的其它成分包括防腐剂例如苯甲酸酯，例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯或其混合物；溶剂例如水；pH调节剂例如氢氧化物；和软化剂和湿润剂例如甘油和丙二醇。用于阴道应用的合适的制剂是VivaGel®。

在一些实施方式中，剂量可以按100-500 mg的体积给药，特别是200-400 mg和更特别的约250 mg。

用于本发明的树枝状分子可以是能够将一种或多种含磺酸或磺酸盐部分呈递在其表面的任何合适的树枝状分子。在一些实施方式中，树枝状分子选自具有1-8代的聚赖氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、聚酰胺胺（PAMAM）、聚（醚羟氨）、聚醚、聚酯或聚（丙烯亚胺）（PPI）树枝状分子。大分子还包含连接至最外一代树枝状分子的一种或多种表面功能基团的一种或多种含磺酸或磺酸盐部分。例如，当树枝状分子是聚赖氨酸、聚酰胺胺、聚（醚羟氨）或聚（丙烯亚胺）树枝状分子时，表面功能基团是氨基基团，而当树枝状分子是聚谷氨酸或聚天冬氨酸树枝状分子时，表面功能基团是羧酸。

树枝状分子是由从一个中央核心部分发出的多个分支单体组成的分支状聚合物大分子。分支点的数量随着从树枝状分子核心至其表面移动而增加，且由单体（或构建）单元的连续层或“代”所定义。每一代构建单元被编号以显示离开核心的距离。例如，第1代(G1)是附着于核心的构建单元层，第2代(G2)是附着于第1代的构建单元层，第3代(G3)是附着于第2代的构建单元层，第4代(G4)是附着于第3代的构建单元层，第5代(G5)是附着于第4代的构建单元层，等等。

最外面一代构建单元提供了树枝状分子的表面并呈递了功能基团，其上共价结合至少一个含磺酸或磺酸盐部分。含磺酸或磺酸盐基团可直接结合至表面功能基团或可通过接头连接至表面功能基团。

树枝状分子包含一种或多种类型的单体单元（本文也称为构建单元）。在具体实施方式中，树枝状分子包含一种类型的单体单元。从树枝状分子核心延伸的每个“分支”具有至少一层或代的构建单元。如本文使用的术语"分支"指用于连接核心上的一个功能基团的至少一代构建单元。在某些实施方式中，每个分支或任何分支可具有至少两层或代的构建单元。在进一步的实施方式中，每个分支或任何分支可具有至少三或四层或代的构建单元。在进一步的实施方式中，每个分支或任何分支可独立的具有至少五层或六代或高达八代的构建单元。

本文关注的树枝状分子可通过本领域已知的方法制备，且可以收敛的模式(其中，有效地，分支预先形成并然后连接至核心)或发散的模式(其中从核心外部依次构建层或代)进行制备。这些方法对于技术人员而言都是容易理解的。

树枝状分子可包含任何合适的核心。如本文使用的“核心”指在其上构建单体或构建单元的代的部分（通过发散过程或者收敛过程），且可以是具有至少一个反应性或功能性位点的任何部分，从所述位点依次产生单体或构建单元的层（或预先形成的“分支”连接到所述位点）。本文关注的一些示例性的适用的核心包括具有1、2、3或4个反应基团的那些，所述基团独立地选自氨基、羧基、巯基、烷基、炔基、腈、卤素、叠氮基、羟胺、羰基、马来酰亚胺、丙烯酸酯或羟基基团，构建单元或单体的层或代可连接至这些基团。核心部分可以与构建单元相同或可以不同。

示例性的核心包括聚氨基烃、含聚胺的二硫化物、聚（缩水甘油醚）、氨基乙醇、氨、芳基卤代甲烷、哌嗪、氨乙基哌嗪、聚（乙烯亚胺）、烯烃基/亚芳基二硫醇、4,4- 二硫丁酸、巯基芳胺、硫醚烷基胺、异氰脲酸酯、杂环化合物、大环化合物、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯、膦、卟吩、环氧乙烷、硫烷、氧杂环丁烷、氮丙啶、氮杂环丁烷、多叠氮功能体、硅氧烷、恶唑啉、氨基甲酸盐或己内酯。

本文关注的核心部分的一些非限制性实例包括胺和二氨基C₂-C₁₂烷基，例如乙二胺、1,4-二胺丁烷和1,6-二胺己烷。然而，可理解核心不一定是在每个末端具有单一反应基团的线性部分。非线性的、环状的或分支状的核心部分也是本发明关注的。例如，芳基甲烷胺，例如二苯甲胺(BHA)，是合适的核心。

在一些实施方式中，树枝状分子的构建单元选自赖氨酸构建单元：

胺胺构建单元：

醚羟胺构建单元：

丙烯亚胺构建单元：

谷氨酸构建单元：

天冬氨酸构建单元：

聚酯构建单元：

聚醚构建单元：

在一些实施方式中，构建单元可以是下式的赖氨酸或赖氨酸类似物：

在一些实施方式中，赖氨酸或赖氨酸类似物选自下式的化合物：

其中K不存在或选自–C_1-6烯烃基-、-C_1-6烯烃基NHC(O)-、-C_1-6烯烃基C(O)-、-C_1-3烯烃基-O-C_1-3烯烃基-、-C_1-3烯烃基-O-C_1-3烯烃基NHC(O)-和-C_1-3烯烃基-O-C_1-3烯烃基C(O)-；

J 选自CH或N；

L和M独立的不存在或选自–C_1-6烯烃基-或-C_1-3烯烃基OC_1-3烯烃基；条件是当L和/或M不存在，J是CH；

** 表示赖氨酸或赖氨酸类似物和树枝状分子核心或前一代构建单元之间的连接；和

*** 表示赖氨酸或赖氨酸类似物和后一代赖氨酸或赖氨酸类似物之间的连接或形成树枝状分子的表面氨基。

示例性赖氨酸类似物构建单元包括如下：

甘氨酰-赖氨酸1，具有结构：

；

类似物2，其具有如下结构，其中a是整数1或2；且b和c独立的是整数1、2、3或4：

；

类似物3，其具有如下结构，其中a是整数0、1或2；且b和c独立的是整数2、3、4、5或6：

；

类似物4，其具有如下结构，其中a是整数0、1、2、3、4或5；且b和c独立的是整数1、2、3、4或5：

；

其它合适的构建单元包括：

类似物5，其具有如下结构，其中a是0-2的整数；b和c相同或不同且为1-4的整数；A₁和A₂相同或不同并选自NH₂、CO₂H、OH、SH、X、烯丙基-X、环氧化物、氮杂环丙烷、N₃或炔烃，其中X是F、Cl、Br或I，

，

类似物6，其具有如下结构，其中a是0-2的整数；b和c相同或不同且为2-6的整数；A₁和A₂相同或不同并选自NH₂、CO₂H、OH、SH、X、烯丙基-X、环氧化物、氮杂环丙烷、N₃或炔烃，其中X是F、Cl、Br或I，

类似物7，其具有如下结构，其中a是0-5的整数；b和c相同或不同且为1-5的整数；A₁和A₂相同或不同并选自NH₂、CO₂H、OH、SH、X、烯丙基-X、环氧化物、氮杂环丙烷、N₃或炔烃，其中X是F、Cl、Br或I，

，

其中每个#表示羧基的羰基残基，其与核心的氮原子或前一代构建单元的氮原子形成酰胺键；

且，其中构建单元的任何亚甲基基团可被取代为亚甲基氧 (CH₂-O)或乙烯氧(CH₂-CH₂-O)基团，条件是其不会导致在构建单元中形成碳酸盐 (-O-C(O)-O-)或氨基甲酸盐 (-O-C(O)-N-)部分。

在一个具体实施方式中，树枝状分子是具有赖氨酸构建单元的聚赖氨酸树枝状分子，特别是具有二苯甲胺核心的聚赖氨酸树枝状分子。

含磺酸或含磺酸盐部分是任何能够在树枝状分子表面呈递磺酸或磺酸盐基团的部分。在一些实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分具有一个磺酸或磺酸盐基团。在其它实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分具有多于一个磺酸或磺酸盐基团，例如 2或3个磺酸或磺酸盐基团，特别是2个磺酸或磺酸盐基团。在一些实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分含有芳基，例如苯基或萘基，特别是萘基。

当存在含磺酸盐部分时，该部分可以离子形式 (-SO₃ ^-)或盐形式存在，例如，钠盐(–SO₃Na)。合适的药学可接受的碱加成盐包括但不限于金属盐如铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌盐，以及由有机胺制成的有机盐如N,N′-二苄基-乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、乙二胺、二环己基胺、葡甲胺(N-甲葡糖胺)和普鲁卡因，季胺如胆碱和锍和磷盐。在具体实施方式中，盐选自钠和钾，特别是钠。

合适的磺酸或含磺酸盐部分的例子包括但不限于：

-NH-(CH₂)_nSO₃ ^-、-(CH₂)_nSO₃ ^-、

、

、

、

和

，

其中n是0或1-20的整数，m是1或2的整数且p是1-3的整数。

在一些实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分含有芳基基团。在一些实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分选自：

、

、

、

和

，

特别是

。

在一些实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分直接结合至树枝状分子的表面氨基。在其它实施方式中，含磺酸或磺酸盐部分通过接头基团连接至树枝状分子的表面氨基。

合适的接头基团包括烯烃基或亚烯基基团，其中一种或多种非相邻的碳原子被可选的取代为氧或硫原子以提供醚、硫醚、聚醚或聚硫醚；或基团-X₁-(CH₂)_q-X₂或–X-(CR₁R₂)_q-X-，其中X₁和X₂独立地选自-NH-、-C(O)-、-O-、-S-和-C(S)，R₁和R₂独立地选自氢或–CH₃，且q为0或1-10的整数，且其中一种或多种非相邻(CH₂)基团可被取代为-O-或-S-以形成醚、硫醚、聚醚或聚硫醚。

在一个具体实施方式中，接头为

#-O-CH₂-C(O)-*，其中#指示连接至含磺酸部分，*指示连接至树枝状分子的表面氨基。

可用于本发明的示例性树枝状分子包括式I、II和III：

其中每个R基团表示式IV的基团或氢：

IV

条件是至少一个 R基团是式IV的基团

或其药学上可接受的盐。

在具体实施方式中，多于一个R基团是式IV的基团，特别是其中至少 10个R基团是式IV的基团，至少 15个R基团是式IV的基团，至少 20个R基团是式IV的基团，至少 25个R基团是式IV的基团或至少 30个R基团是式IV的基团。在一些实施方式中，全部R基团是式IV的基团。

式I的一个特别的树枝状分子具有所有的R基团都为式IV的基团 (SPL7013)。式II的一个特别的树枝状分子具有所有的R基团都为式IV的基团(SPL7320)。式III的一个特别的树枝状分子具有所有的R基团都为式IV的基团 (SPL7304)。

式I、II和III的树枝状分子的合成描述于WO 02/079299。

已知上述大分子具有低毒性且在局部施用时不会被全身吸收。在本发明一些实施方式中，大分子具有低毒性且可被给药至眼部，对于受试者眼部具有低刺激或没有刺激。

本发明的大分子可以任何适于对眼部施用的剂型进行递送，例如，溶液、药膏、凝胶、洗液、在缓释聚合物中或被包埋、结合或浸渍于隐形眼镜。“适于对眼部施用”表示制剂的任何组分都不会导致对眼部或待治疗受试者产生长时间的有害效应。在给药时可以发生没有长时间有害效应的瞬时效应，例如小的刺激或“刺痛”。大分子可被配制为单一水溶液。可选的，大分子可被配制以具有一种或多种生理相容性渗透压和pH，例如，通过在溶液、凝胶、洗液或药膏中包括盐和缓冲剂以及其它组分，例如防腐剂、胶凝剂、粘度控制剂、眼睛润滑剂、粘膜粘着聚合物、表面活性剂、抗氧化剂等等。

本发明的大分子被保持在上皮上或其中一段时间，允许大分子扩散出上皮。这种扩散提供了药物的缓慢释放入眼睛环境，使得大分子的抗病毒活性在一段时间内递送，不被眼液和物理清洗所洗脱。大分子可以在一段多于10分钟的时间内从上皮释放，更特别的多于1小时的时间，更特别的多于6小时的时间。

在本发明又一个进一步的方面提供了组合物，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分的1-8代树枝状分子和至少一种提供与眼部相容的pH和渗透压的药学可接受载体。

可用作等渗剂的合适的眼用可接受的盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯、柠檬酸、抗坏血酸、硼酸、磷酸、重碳酸、硫酸、硫代硫酸或亚硫酸氢离子的盐。合适的盐的例子包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、硫酸氢钠和硫酸铵。

合适的眼用可接受的pH调节剂和/或缓冲剂包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，例如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和tris羟甲基甲氨；和缓冲剂，如柠檬酸盐-葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。

合适的防腐剂包括稳定化铵化合物，如苯扎氯铵、十六烷基三甲基氯化铵和十六烷基吡啶鎓氯化物；汞化合物如乙酸苯汞；咪唑烷基脲；对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸丁酯；苯氧乙醇；氯苯氧乙醇；苯氧基丙醇；氯丁醇；氯甲酚；苯乙醇；乙二胺四乙酸；山梨酸及其盐。

合适的胶凝剂或粘度控制剂包括当其接触到例如由闪烁或流泪导致的泪液时增加粘度的胶凝剂。此类胶凝剂可用于通过泪管引流（drainage）减少大分子的损失，允许所述大分子具有增加的停留时间，并从而吸收在眼睛或眼睑的上皮层。合适的胶凝剂包括吉兰糖胶，特别是低乙酰吉兰糖胶、藻胶或壳聚糖。粘度调节剂还可以包括成膜聚合物如烷基纤维素，例如甲基纤维素或乙基纤维素；羟烷基纤维素，如羟乙基纤维素或羟丙基甲基纤维素；透明质酸或其盐；硫酸软骨素或其盐；聚右旋糖；环糊精；聚糊精；麦芽糊精；糊精；明胶；胶原蛋白；聚半乳糖醛酸衍生物例如果胶；天然树胶如黄原胶、刺槐豆、金合欢胶、黄蓍胶和角叉菜胶；琼脂；聚乙烯醇；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙二醇；丙烯酰胺、丙烯酸和聚氰基丙烯酸酯的聚合物；和甲基丙烯酸甲酯和2-羟基-甲基丙烯酸乙酯的聚合物。粘度控制剂或胶凝剂可以0.1％至约6.5％w/w的组合物的量存在，特别是约0.5％至4.5％w/w的组合物。

合适的润滑剂包括聚乙烯醇、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。

合适的粘膜粘附聚合物包括羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚丙烯酰胺、聚卡波非、聚环氧乙烷、藻酸钠和糊精。

合适的眼用可接受的表面活性剂包括非离子表面活性剂，如聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，包括聚氧乙烯（60）氢化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如辛苯聚醇10和辛苯聚醇40。

合适的抗氧化剂包括抗坏血酸和焦硫酸氢钠。

眼用药膏也可包括一种或多种增稠剂，例如液体石蜡、黄软石蜡、硬石蜡和/或羊毛脂。

本发明的大分子在制剂中可以重量比约0.1%至重量比约10%的量存在，特别是0.5%-8% w/w或1%-5% w/w。

虽然本发明的组合物可与本领域常用的如上所述的载体、稀释剂和赋形剂一起配制在局部眼制剂中是可能的，但是公知一些常用的防腐剂在局部眼用制剂中使用时有缺点。例如，一些防腐剂会导致眼睛刺激，且如果用于长期治疗，其有可能造成对眼睛的损害。此外，一些防腐剂对一些细菌菌株无效，导致该组合物变质。实例包括苯扎氯铵，其对某些微生物如铜绿假单胞菌（P. aerugenosa）和结核分枝杆菌（M. tuberculosis）、红色毛癣菌（T. rubrum）和指间毛癣菌（Trichophyton interdigitale）的菌株是无效的，并且可能与缓冲剂，例如柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液不相容。此外苯扎氯铵可对眼睛有害，不适合隐形眼镜清洗溶液，因为它如果长期使用会导致眼毒性。苯基乙酸汞不能用作长期使用的滴眼剂制剂防腐剂，因为汞中毒性晶状体变色可能会发生。对羟基苯甲酸酯因其刺激性质通常被认为不适合用于眼用制剂。在某些情况下，滴眼剂组合物被配制为不含防腐剂以减少刺激性。然而，这样的制剂必须被包装为单次使用或一旦打开即需冷藏。

本发明的制剂具备大分子不仅具有抗病毒和抗微生物活性、而且还具有防腐活性的优点。因此本发明的组合物可配制为不含常规防腐剂，并在室温下稳定贮存。

在其最简单的状态，本发明的制剂包含大分子的水溶液与至少一种药学可接受的赋形剂，其中所述至少一种赋形剂提供了7.0至7.6的pH和240至310 mOsm/kg的渗透压，尤其是与眼泪等渗的渗透压。在其他实施方式中，所述制剂包含大分子的水溶液与至少一种药学可接受的赋形剂，其中所述至少一种赋形剂提供了7.0至7.5的pH和240至310 mOsm/kg的渗透压，但除了大分子以外的防腐剂被排除在外。

隐形眼镜配戴者特别容易受到结膜炎影响，因为异物在他们眼中插入。结膜炎的风险可以通过在隐形眼镜溶液中包括本发明的大分子而降低。隐形眼镜溶液包括洗涤、漂洗、贮存、消毒、再润湿、润滑、通用目的的溶液和浓缩药用的溶液。本发明的大分子被保留在隐形眼镜上并扩散出眼镜至眼睛上，以提供至眼部环境的缓慢释放。从眼镜的扩散使得大分子的抗病毒活性比没有眼镜的情况下在一段较长的时间被传递。

因而在本发明的另一方面提供了一种隐形眼镜溶液，包括大分子或其药学上可接受的盐，其包括1-8代树枝状分子，该1-8代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分。

在一些实施方式中，大分子可以溶液0.5%-10%的量存在，特别的，大分子可以溶液1%-5%的量存在，特别是1%-5%，更特别的溶液的1%-3%。当溶液被制备为浓缩添加剂时，大分子可以溶液5%-25%的量存在，特别是10%-20%。

本发明的大分子被保持在隐形眼镜上或其中一段时间，允许大分子扩散出眼镜。这种扩散提供了药物的缓慢释放入眼睛环境，使得大分子的抗病毒活性在一段时间内递送，不被眼液和物理清洗所洗脱。大分子可以在一段多于10分钟的时间内从隐形眼镜释放，更特别的多于1小时的时间，更特别的多于6小时的时间。

本发明的隐形眼镜溶液还可以包括其它组分，如缓冲剂、等渗剂、缓和剂、润湿剂、表面活性剂、螯合剂、酶、抗菌剂、麻醉剂和任选的防腐剂。

在一些实施方式中，所述抗菌剂选自聚六亚甲基双胍（PHMB）、N-烷基-2-吡咯烷酮、氯己定、聚季铵盐-1、海克替啶、溴硝丙二醇、阿来西定、低浓度过氧化氢，且眼科可接受的它们的盐的量为组合物的0.00001-0.01或0.00001-0.1 wt %。

在本发明中有用的眼科可接受的螯合剂包括氨基羧酸化合物或其水溶性盐，包括乙二胺四乙酸（EDTA）、次氮基三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、羟乙基乙二胺三乙酸、1,2-二胺环己烷四乙酸、乙二醇四乙酸（EGTA）、氨基二乙酸和羟乙基二乙酸。这些酸可以以它们的水溶性盐、特别是它们的碱金属盐的形式使用。尤其优选的螯合剂是乙二胺四乙酸（EDTA）的二、三和四钠盐，最优选EDTA二钠（乙二胺四乙酸二钠）。

其它螯合剂如柠檬酸盐和聚磷酸盐也可在本发明中使用。可在本发明中使用的柠檬酸盐包括柠檬酸及其单- 、二-和三- 碱金属盐。可以使用的聚磷酸盐包括焦磷酸盐、三磷酸盐、四磷酸盐、三偏磷酸盐、四偏磷酸盐，以及以中性或酸性碱金属盐的形式更高度缩合的磷酸盐，如钠和钾盐，以及铵盐。

溶液的pH值应调整为与眼睛和隐形眼镜相容，如6.0-8.0，优选6.8-7.9或7.0-7.6。显著偏离中性会导致隐形眼镜的一些物理参数变化（即直径）。

合适的张力调节剂包括氯化钠、氯化钾、丙二醇、甘油或它们的混合物。该溶液的张力通常调整为大约240-310毫渗透压摩尔每千克溶液（mOsm/kg）溶液，以使得该溶液与眼组织、并与亲水性隐形眼镜相容。在一个实施方式中，所述溶液含有0.01-0.5重量百分比氯化钠。

合适的粘度诱导剂可以包括数量与上述表面活性剂相似的卵磷脂或如羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基乙基纤维素和甲基纤维素的纤维素衍生物。

本发明现将参考随后的实施例进行更全面的描述。但是，应当理解，以下描述仅为说明性的，不应被以任何方式视为对本发明上述概括的限制。

实施例

实施例1：抗腺病毒活性–预防病毒透进细胞

使用滴度减少分析评价了腺病毒向细胞内的透进 (Hayashi, K:Characterization of antiviral activity of a sesquiterpene, triptofordin C-2,J. Antimicrob. Chemother., 1996, 37(4), 759-68)。对病毒透进细胞的预防检测了活性剂防止细胞穿透和进而排除感染的能力。

腺病毒亚型5 (ATCC #VR-5)与HeLa细胞(ATCC #CCL-2) 一起使用，腺病毒亚型8(ATCC #VR-1640)与A549细胞(ATCC #CCL-185) 一起使用，腺病毒亚型19 (ATCC #VR-254)与Chang C细胞(ATCC #CCL-20.2) 一起使用，腺病毒37 (ATCC #VR-929)与WI-38细胞(ATCC #CCL-75) 一起使用。使用了上皮细胞和成纤维细胞两种细胞类型。

将细胞与不同浓度 (10、3、0.5、0.1、0.02、0.004% w/v)的SPL7013或无SPL7013在37°C下的无血清培养基中孵育60分钟。孵育后，4°C ± 2°C下0.1 MOI的病毒等份被接种并允许吸附至细胞共1小时。孵育后，用具有针对每种细胞系的合适添加剂的Eagle’s最低基础培养基洗涤去除游离病毒，并在37°C下孵育约30分钟以允许细胞穿透。然后对细胞胰蛋白酶化，并如下测定穿透的病毒。

通过进行1/10-1/100,000的稀释并加至平板中的细胞将回收的病毒在易感细胞系中滴定。当在病毒对照中细胞病变效应(CPE)很明显时，将滴定板归类为对细胞病变效应阳性或阴性，并基于应用至不同板的病毒的稀释，使用Spearman-Kärber方法(Hubert, JJ(1984) Spearman-Karber Method in Bioassay. Hunt, Dubuque, IA, pp65, 66)计算了50%组织培养传染剂量(TCID₅₀)。TCID₅₀确立了其中50%的板显示细胞病变效应(感染)的稀释度。将不含SPL7013的样品的TCID₅₀与具有不同浓度SPL7013的样品的TCID₅₀值进行比较，提供了由每种浓度的SPL7013获得的感染百分比减少的检测。该百分比减少代表了SPL7013抗腺病毒细胞穿透的活性。

在20 µg/mL、2 µg/mL、0.2 µg/mL和0.02 µg/mL下与SPL7013一起检测了对照物质(西多福韦) (Gordon YJ, Antiviral Research, 1991, 16(1), 11-16)。因为西多福韦在病毒复制循环后期作用，靶细胞首先用0.1 MOI病毒进行感染并在37°C ± 2°C下孵育60分钟。去除病毒，以各自浓度添加西多福韦，并孵育细胞直至CPE达到其最大值。然后裂解细胞并按照上述滴定病毒。

下述表1列出了两个实验中由SPL7013针对不同腺病毒在不同的SPL7013浓度下获得的平均百分比减少。表2列出了由阳性对照(西多福韦)获得的百分比减少。

表1：SPL7013存在下腺病毒穿透的百分比减少

表2：西多福韦存在下腺病毒复制的百分比减少

对SPL7013和西多福韦均估算了IC₅₀值并在摩尔基础上进行了计算。对SPL7013使用的分子量为16582 g/mol，西多福韦为279 g/mol。表3 显示了对两种化合物估算的IC₅₀值。

表3：对四种腺病毒亚型测定的SPL7013和西多福韦的IC₅₀值

检测显示SPL7013抑制腺病毒穿透并从而抑制在浓度0.02%或更高时检测的选定的腺病毒亚型的感染。针对腺病毒亚型37观察到最大抗传染性活性，其中在浓度0.5%和更高观察到多于99.5%的穿透抑制。

实施例2：抗腺病毒活性–杀病毒活性

对于杀病毒分析 (评价杀微生物剂在悬液中针对病毒的活性的标准测试方法(Standard Test Method to Assess the Activity of Microbicides against Viruses in Suspension), ASTM E 1052)，将SPL7013暴露于不同浓度(0.5%、1.0%、3.0%和10.0% w/v)的腺病毒亚型不同时间(30 sec、1 min、5 min、30 min、1 hr)。仅有很少的样品在30sec检测。暴露后，将SPL7013用胎牛血清中和。然后将该中和的样品稀释1/10-1/100,000。这些溶液被用于感染板中的靶细胞 (细胞和病毒的细节如实施例1所述)。充分孵育(37°C ±2°C下5-14天)后，将板归类为对细胞病变效应阳性或阴性，并基于应用至不同板的病毒的稀释，计算了组织培养传染剂量(TCID₅₀) (方法参见实施例1)。将不含SPL7013的样品的TCID₅₀与具有SPL7013的样品的TCID₅₀值进行比较，能够计算由SPL7013杀死的病毒%。结果见表4。

表4：SPL7013针对选定的腺病毒亚型的杀病毒活性(杀死的病毒%)

SPL7013显示了杀死多达96.84%的病毒的能力。SPL7013杀死腺病毒的能力与其抑制穿透的能力一起提供了SPL7013用于治疗和预防腺病毒性感染的有效性的证据。

实施例3：大分子的抗腺病毒活性

通过下述方法评价了选择的大分子的抗腺病毒活性。

对于细胞病变分析 (CPE)，将细胞板与各腺病毒亚型和不同药物浓度的药物一起孵育。孵育细胞直至在不含药物的细胞和病毒被铺板的板中明显观察到细胞病变效应。在加入药物的板中，使用光学显微镜定量细胞病变效应并表达为0 % (无效果) 至100 % (与无药物对照板中一样强的效果)。将CPE读数对药物浓度进行标绘，EC50值被测定为观察到50% CPE的药物浓度。

使用噬斑减少中和试验(NR)定量树枝状分子中和/失活病毒的能力。待测的树枝状分子溶液被稀释并混合病毒悬液。对其进行孵育以允许树枝状分子与病毒反应。将其倾注至汇合的（confluent）单层宿主细胞上。细胞层的表面覆盖一层琼脂或羧甲基纤维素以防止病毒扩散。噬斑形成单位的浓度可通过几天后形成的噬斑(受感染细胞的区域)数量进行估算。基于病毒，噬斑形成单位通过显微镜观察、荧光标记抗体或与受感染细胞反应的特异性染料进行检测。噬斑数量较之无树枝状分子的病毒减少50%的树枝状分子的浓度给出了EC50值。

利巴韦林被引入作为阳性对照。结果见表5。

表5：抗腺病毒活性

实施例4：针对疱疹病毒的杀病毒活性

使用美国材料和试验学会用于评价杀微生物剂在悬液中针对病毒的活性的检测方法(ASTM E1052)评价了SPL7013针对疱疹病毒HSV-2的杀病毒活性。

0.5% SPL7013 (5 mg/mL)针对HSV-2_MS和5% SPL7013 (50 mg/mL) 针对HSV-2_G的杀病毒活性。

0.5% SPL7013的结果见表6A，(以及表6B中对应的对照)，5% SPL7013的结果见表7。

表6A

表6B

+ 存在的CPE；

0 –未检测到CPE；

表7

(+)= 对测试病毒的存在呈阳性

(0)= 未回收到测试病毒和/或不存在细胞毒性

(*) = 细胞呈现被固定

(**)= 基于中和对照结果的TCID₅₀/0.1 mL结果

实施例5：抗细菌性活性–防腐效率实验

为了评价SPL7013水溶液的抗微生物性质，制备了2种水溶液，一种5% w/v，第二种28% w/v。进行了标准防腐剂效果试验（按照USP <51>“防腐效能试验(AntimicrobialEffectiveness Test)”）以挑战每种溶液在一个月的周期内限制微生物生长的能力。

5%和28% w/w SPL7013溶液

SPL7013被制备为5%或28% w/w的水溶液，其中搅拌样品以利于溶解。

试验方法

用以下微生物挑战溶液：

-铜绿假单孢菌，ATCC 9027

-金黄色葡萄球菌， ATCC 6538

-白色念珠菌， ATCC 10231

-黑曲霉， ATCC 16404

-大肠杆菌， ATCC 8739

将测试接种物添加至每种溶液，从而接种后的终浓度为 1 x 10⁵至1 x 10⁶ cfu每mL 产物(如平板计数法测得的)。接种的容器在22.5 ± 2.5 °C下孵育，并在14和28天后取样。取样时，每种微生物的浓度通过平板计数法测定。

表8：暴露至SPL7013后微生物的Log₁₀减少

如表8所示，SPL7013的5% w/v溶液在14天的周期中表现为针对铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀菌剂，在28天后没有后来的微生物浓度增加。相同的测试溶液在14天后对白色念珠菌和黑曲霉接种显示了静态效应（static effect）。如表6进一步显示的，SPL7013的28% w/v溶液在14天的周期中表现为针对铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀菌剂，在28天中也针对白色念珠菌。相同的测试溶液在测试持续过程中防止了黑曲霉接种物的生长。

两种测试溶液(5%和28% w/v SPL7013水溶液)的抗细菌性质均作为局部用制剂中的防腐剂满足测试的通过标准。

实施例6：SPL7013与上皮组织的结合

为了测试SPL7013对暴露于液体的上皮组织的保留，将SPL7013用于位于一层液体之下的包括上皮细胞多个分层的小组织膜。

本实验测试了两种不同的制剂：30 mg/mL和5 mg/mL的SPL7013的PBS溶液，和用芦芭液 (United Guardian，Inc.)配制的SPL7013凝胶(0.5%或5 mg/mL)。使用了一种上皮组织试剂盒(MatTek Corporation，Cat# VEC-100-FT)，并按照表9所述给药/配制组织。

表9：多剂量治疗的给药方案

*浓度指各给药/强化（dosing/spiking）溶液中的SPL7013

组织首先通过置于含0.9 mL特异性培养基的6孔板并在37 °C下孵育过夜进行处理。给药前用0.9 mL新鲜培养基更换培养基。

将待给药的组织从培养箱中取出，并应用100 µL的给药溶液。将组织返回培养箱并孵育规定时间。然后从培养箱取出组织并回收任何剩余的给药溶液，转移至预标记的1.5mL离心管。然后对组织进行严谨洗涤流程，其中首先在PBS 流下冲洗组织15次，然后浸入PBS并在纸巾上干燥。

然后使用Thermo-Scientific裂解试剂盒(组织裂解试剂盒；Thermo Scientific，Cat# 78833)裂解组织。简而言之，对每种组织加入 100 µL CER I试剂。然后，使用组织被通过反复上下吹吸进行均质化。然后将组织漩涡振荡15秒，孵育10分钟，加入5.5 µL CERII试剂，漩涡振荡，再孵育1分钟，漩涡振荡，16,000 x g离心5分钟和最终将裂解物转移至新鲜的1.5 mL管。

通过胶束电动色谱在碱性pH条件下分析全部裂解物。该方法之前被用于分析来自临床试验研究的药代动力学样品 (Chen等人，J AIDS，2009，50(4)，375-380)。

为了计入空白塑料结合，进行了对照试验，其中15个裸组织培养插入物被与表9所示5种给药方案相同地给药。每个给药一式三份进行。

表10显示了组织和空白结合试验的结果：

表10：来自组织和对照插入物多剂量治疗的SPL7013回收

结果为所用的三种组织与每种给药溶液的均值±标准差。 #孵育在37 °C下具有5% CO₂的潮湿培养箱中进行空白结合测试平行进行以测定由单独的塑料管保留的SPL7013的量。小部分给药的SPL7013 的量 (< 0.5%)由单独的组织培养插入物保留。

在给药3% SPL-7013的PBS溶液的组织上保留了显著更多的SPL7013。这些结果表明SPL7013或者能够强力结合至上皮细胞的表面（不被洗脱），或者能够穿透入上皮细胞的上层。这些实验不能分辨是否所有的结合仅发生在表面或SPL7013如何成功和如何深入地穿透组织。之前的结果显示SPL7013可跨过单层的顶部-基底外侧极化细胞。约1-6%应用的SPL7013能够跨过该层，且底外侧回收的SPL7013出人意料地作为传染剂仍有活性。

总而言之，在此描述的结果显示SPL7013具有透过组织的能力，其透过程度为其中5%的给药化合物可能通过附着至上皮细胞表面和/或扩散入邻近组织表面的细胞间隙移入最上层上皮细胞。宿主-病原体相互反应通常在此位置发生，因而一些SPL7013渗入上层上皮的能力可能增强化合物的应用。

这些数据还支持了至今在所有非临床和临床研究中观察到的SPL7013全身性吸收的缺乏。为了发生全身性吸收，药物必须基本上穿透比在此研究的更厚的组织层。推测SPL7013存在的量随着增加的组织厚度而显著降低，且没有或非常少会穿透至足以与循环血管接触，后者是全身性吸收所需要的。

组织模型包括由多个上皮细胞层组成的小组织膜以模拟上皮组织。该组织位于小塑料孔的底部，其上方放置一层液体（即，培养基）。这些结合研究显示SPL7013通过附着至上皮细胞表面和/或扩散入邻近组织表面的细胞间隙被组织保留。

实施例7：SPL7013结合至隐形眼镜

进行了实验以评价SPL7013附着至隐形眼镜的能力以延长SPL7013向眼部递送的周期并减少或防止眼镜上或其附近感染。

每个眼镜的试验流程

用50 mL Milli Q水准备了5个清洗烧杯，同时用15 mL Milli Q水准备了一个小一些的烧杯(提取烧杯)。用50 mL Milli Q水清洗隐形眼镜并允许短暂风干。使任何残余液滴从烧杯壁上轻轻流出。然后将眼镜以凹陷的方式置于单独的测试烧杯中 (即，粘性边缘朝上)。将1 mL的10% SP7013水溶液置于眼镜上部，在测试溶液中将该溶液孵育20 min或60min。

通过用镊子取出眼镜并将眼镜投入第一清洗容器中对眼镜进行清洗。用镊子搅拌容器5秒，确保镊子也被清洗。在第二清洗容器中重复上述步骤。共进行5次清洗。

结合材料的释放：

然后将眼镜投入提取烧杯（具有15 mL Milli Q水）并超声10 min以释放任何结合的SPL7013。

样品制备：

将超声过的溶液转移入20 mL容量瓶并用水填充至刻度。将1.5 mL样品过滤入HPLC瓶。这是“释放的”样品。

将剩余的测试溶液转移入500 mL容量瓶并用水填充至刻度并混合。如果没有结合发生那么该500 mL容量瓶中的浓度将为0.2 mg/mL。用水将溶液稀释¼至20 mL。这是“未结合的”样品。

所有清洗溶液被倾注入一个250 mL的容量瓶，其随后用水填充至刻度并混合。这是“清洗”样品。

分析：

对释放的和未结合的和清洗样品一式两份进行了HPLC分析，并标定为SPL7013的0.05 mg/mL 存储溶液样品。计算了样品的平均峰面积，样品中SPL7013的浓度通过以下公式计算：

C(样品) = 面积 (样品)/面积(标准) x标准浓度

释放的SPL7013的量如下计算：m (释放的) = c (释放的样品) x 20 mL，未结合的SPL7013的量如下计算：m (未结合的) = c (未结合的样品) x 2000 mL。清洗部分中SPL7013的量如下计算：m (清洗) = c (清洗) x 250 mL。

结果见表11

表11

如上所示，测试的隐形眼镜保留了SPL7013，后者随后被短的超声处理所释放。超声处理步骤模拟了眼镜的磨蚀以及在眼睛内花费的时间，并显示了一旦结合至眼镜后，SPL-7013可被释放。预期结合的SPL7013将逐渐从眼镜上扩散到眼睛上。

实施例8：细菌对SPL7013耐受性的发展

通过连续传代评价了在目标病原体重复暴露于SPL7013的次-抑制浓度下后出现的耐受潜力。此外，通过确认性MIC检测、无药物传代后突变稳定性评价和共耐受模式测定表征了选择突变体（具有MIC值≥4倍高于亲代菌株的分离物）。

材料和方法

检品

所有药物在一个广泛的浓度范围(128 – 0.002 mg/mL)下基于试剂针对测试微生物的期望活性进行检测，且在分析过程中允许观察增加的MIC。

对于选定的突变体，针对下述抗生素测定了共耐受性：

微生物

测试微生物包括ATCC微生物或代表性的临床分离物：

阴道加德那菌（Gardnerella vaginalis）ATCC 14018 (MMX 4153)

二路普雷沃尔菌（Prevotella bivia）MMX 3447

短小活动弯曲杆菌（Mobiluncus curtisii）ATCC 35241 (MMX 4145)

嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）MMX 5716

脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis）ATCC 25285 (MMX 0123)和阴道加德纳菌ATCC 14018 (MMX 4153)在本研究中作为质量控制微生物进行检测。

将分离物在补料的Brucella琼脂板上亚培养(Remel；Lenexa，KS；编号R01255；批号146893、174114、164387)并在35ºC下厌氧孵育48 hr。通过在无药物补料的Brucella琼脂板上亚培养3次的无药物传代后，对选定的突变体评价了稳定性。

测试培养基

对所有微生物，MIC分析板和生长培养基为补充3%马血清(ClevelandScientific；Bath，OH；)的脑、心脏浸剂肉汤 (BHI；Becton Dickinson，Sparks，MD)。

MIC分析方法

使用CLSI肉汤稀释法(临床和实验室标准研究所(Clinical and LaboratoryStandards Institute)，CLSI文件M11-A7)从所有分离物和检测试剂获得MIC值，除了含3%马血清的BHI被用作生长培养基代替补料的Brucella肉汤以外。

对于比较药物，用适当稀释的90µL药物溶液填充标准96孔微量稀释板第2-12列的孔。

对每种CLSI方法（临床和实验室标准研究所，CLSI文件M11-A7）制备了每种微生物的标准化接种物。在厌氧条件下用10 μL标准化接种物接种平板以产生约5 x 10⁵ cfu/mL的终细胞浓度。

在35ºC下孵育平板46-48 hr。MIC被记录为抑制可见的微生物生长的药物最低浓度。

连续传代耐受性发展

存在生长的含有最高药物浓度的孔里的内容物被涂覆至Brucella琼脂并在35ºC下厌氧孵育48 hr。通过使用来自本琼脂板的生长来制备用于下一代的接种物。如果在最高的次抑制浓度下的孔被判断为仅含有边缘生长，则来自低一个稀释度的孔的内容物也被划线至Brucella琼脂以确保足够密度的新鲜接种物可被制备以用于下一代。从板上制备了0.5 McFarland悬液，测试板按照CLSI（临床和实验室标准研究所，CLSI文件M11-A7）进行接种。对来自冷冻保存的脆弱拟杆菌0123和阴道加德那菌4153的新鲜接种物每天进行测试，用以进行质量控制。

整个过程重复10个连续传代。第1代定义了每种微生物的基线值。MIC值的显著改变被定义为从基线值的4倍增长。

结果和讨论

针对脆弱拟杆菌，100%的甲硝唑MIC在范围内，克林霉素MIC在范围内，除了3天以外，当时MIC低于可接受的范围一个孔。SPL7013在针对脆弱拟杆菌评价的浓度范围内不具有活性，MIC >128 mg/mL。针对阴道加德那菌ATCC 14018，一种推荐的对于SPL7013的QC菌株，在连续传代过程中SPL7013的MIC在推荐的0.25-1 mg/mL的范围内，除了3个测试的天数以外，当时MIC高于可接受的范围一个孔。

连续传代

在阴道加德那菌ATCC 14018 (MMX 4153)的连续传代过程中，SPL7013、甲硝唑和利福昔明的MIC比在基线处观察到的MIC增加了几倍。到第9代时，SPL7013的MIC已经从1mg/mL增加到了64 mg/mL (64倍)，而对于甲硝唑，到第7代时MIC从4 µg/mL增加到了>128 µg/mL (>64倍)。到第9代时，利福昔明的MIC从0.06 µg/mL增加到了128 µg/mL (>2000倍)。相反，在传代过程中对克林霉素没有显著的MIC增加。对短小活动弯曲杆菌ATCC 35241(MMX 4145) 在传代时观察到相似结果，除了对利福昔明的耐药性发展并不明显以外。到第9代时，SPL7013的MIC从8 mg/mL增加到了128 mg/mL (16倍)，而甲硝唑的MIC到第5代时从8mg/mL增加到了>128 mg/mL (>16倍)。在传代过程中利福昔明和克林霉素没有观察到明显的MIC增加。

对于嗜酸乳杆菌MMX 5716，SPL7013的MIC到第4代时增加了8倍，从2 mg/mL到16mg/mL，而对于利福昔明，MIC到第9代时增加了64倍，从1 µg/mL到64 µg/mL。克林霉素的MIC在传代过程中保持不变。

在二路普雷沃尔菌MMX 3447传代过程中，该微生物没有在超过5代后保持存活。到第5代，对SPL7013或甲硝唑没有观察到超过基线MIC两倍的增加。对于利福昔明，到第5代时MIC增加了4倍，从0.03 µg/mL到0.12 µg/mL。

小结

总之，在用目标细菌性病原体和嗜酸乳杆菌连续传代时，SPL7013的MIC存在一些增加。MIC的增加在那些使用甲硝唑和利福昔明的微生物中也是显著的，且通常为跨数量级的更大并比用SPL7013观察到的更早地发展。在连续传代中对于克林霉素没有明显的耐受性。

除短小活动弯曲杆菌以外， SPL7013的MIC的增加通过对MIC的再次试验被进行了确认并表现为稳定，其在无药物传代后保持上升。在评价推定的短小活动弯曲杆菌突变体中，对利福昔明和SPL7013在连续传代过程中观察到的MIC在MIC再次试验过程中没有确认。该结果表明短小活动弯曲杆菌突变体不是在用SPL7013或利福昔明连续传代过程中产生的，且对于SPL7013这看上去部分由于在基线和早期传代过程中观察到的人为的低MIC。相反，对甲硝唑的短小活动弯曲杆菌突变体在连续传代过程中没有出现且是稳定的。

在所评价的比较试剂中，没有明显的SPL7013来源突变体的共耐受，表明对SPL7013降低的敏感性不影响靶向细菌中已知的、被良好表征的途径的试剂的活性。

实施例9：腺病毒性感染的体内治疗

在全身麻醉和角膜划痕后，NZW雌性家兔每只眼睛接种50 μl 3.0 x 10⁷ PFU/mL(1.5 x 10⁶ PFU/眼)的Ad5 McEwen。接种后约3小时，从泪膜和角膜和结膜表面取拭样（swab）至含有1 mL结果（outgrowth）培养基的管中，并培养用于腺病毒。

然后将家兔分为3组：3% SPL7013 (n=5)、载体(n=5)和0.5%西多福韦的盐水溶液作为阳性对照 (n=4)。在第1天开始，对动物的每只眼睛用37 μL药物每天处理8次，或37 μL对照每天两次。处理后1小时从泪膜和角膜和结膜表面取拭样。

抗病毒耐受性：

在第3天，使用Draize评分法(Draize, J. H., Woodward, G. and Calvery, H.O.Methods for the study of irritation and toxicity of articles appliedtopically to the skin and mucous membranes. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1944;82:377-390.)评价了所有眼睛的制剂视觉耐受性，并使用最大平均总分数(Kay JH,Calandra JC. Interpretation of eye irritation tests. J Soc Cos Chem. 1962;13:281-289)进行了解读。所有3组都打分为最小刺激。

总而言之，SPL7013未表现出显著的眼部毒性。该大分子具有低毒性且可以低刺激或无刺激被给药至眼部。

抗病毒效力：

使用标准噬斑分析在A549肺癌细胞单层上测定了Ad5滴度。眼睛培养物被稀释并接种至A549单层，病毒吸附3小时。吸附后，对每个孔加入1 mL培养基加0.5% 甲基纤维素，37^oC下在5% CO₂-水蒸汽环境中将平板孵育7天，然后用0.5%结晶紫染色，并对噬斑进行计数。

表12 Ad5的PFU

SPL7013在接受第一剂量8小时内作用，早于西多福韦，且在减少病毒滴度方面比西多福韦更有效。

Claims

1.适于对眼部施用的组合物，包括大分子或其药学上可接受的盐，该大分子或其药学上可接受的盐包括3-5代树枝状分子和至少一种提供与眼部相容的pH和渗透压的药学可接受载体，该3-5代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分，

其中所述pH在pH6.0和pH8.0之间，并且所述渗透压在240-310mOsm/kg之间，

其中含磺酸的部分和或含磺酸盐的部分选自：

2.根据权利要求1所述的组合物，其中组合物不包含额外的防腐剂。

3.一种隐形眼镜溶液，包括大分子或其药学上可接受的盐，该大分子或其药学上可接受的盐包括3-5代树枝状分子和至少一种提供与眼部相容的pH和渗透压的药学可接受载体，该3-5代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面氨基的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分，

其中含磺酸的部分和或含磺酸盐的部分选自：

4.一种杀微生物剂递送系统，包括隐形眼镜和大分子或其药学上可接受的盐，该大分子或其药学上可接受的盐包括3-5代树枝状分子和至少一种提供与眼部相容的pH和渗透压的药学可接受载体，该3-5代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面氨基的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分，

其中含磺酸的部分和或含磺酸盐的部分选自：

5.权利要求1-4任一项所述的组合物、隐形眼镜溶液或递送系统，用于治疗或预防受试者眼部微生物感染。

6.一种用于治疗或预防受试者眼部微生物感染的药物组合物，包含大分子或其药学上可接受的盐，该大分子或其药学上可接受的盐包括3-5代树枝状分子作为主要成分和至少一种提供与眼部相容的pH和渗透压的药学可接受载体，该3-5代树枝状分子具有连接至最外面一代树枝状分子的一个或多个表面基团的一个或多个含磺酸或磺酸盐部分，

其中含磺酸的部分和或含磺酸盐的部分选自：

7.根据权利要求6所述的组合物，其中微生物感染是结膜炎。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中结膜炎是病毒或细菌性结膜炎。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中结膜炎是病毒性结膜炎。

10.根据权利要求9所述的组合物，其中病毒性结膜炎由腺病毒导致。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中腺病毒是腺病毒亚型11、8、19、37、53、54、56或64。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中腺病毒是腺病毒亚型19或37。

13.根据权利要求7至12任一项所述的组合物，其中所述结膜炎是流行性角膜结膜炎。

14.根据权利要求7至12任一项所述的组合物，其中结膜炎选自急性流行性结膜炎、咽结膜热、红眼、角膜结膜炎、游泳池结膜炎、粒状结膜炎和急性出血性结膜炎。

15.根据权利要求1所述的组合物，其中受试者是人类。

16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述人类佩戴隐形眼镜。

17.根据权利要求15所述的组合物，其中所述人类一直佩戴隐形眼镜。

18.根据权利要求1所述的组合物，其中组合物给药多于7天。

19.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于缓解、减轻或停止受试者眼部微生物感染一种或多种症状发展。

20.根据权利要求19所述的组合物，其中症状是眼睛发红、瘙痒、刺激、畏光、疼痛、视力障碍、肿胀、流眼水和排出中的一种或多种。

21.根据权利要求19或权利要求20所述的组合物，其中组合物用于减轻一种或多种症状的严重程度或持续时间。

22.根据权利要求19或权利要求20所述的组合物，其中组合物用于终止一种或多种症状的发展。

23.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于治疗或预防受试者眼部同时或无差别的病毒和/或细菌性感染。

24.根据权利要求23所述的组合物，其中病毒性感染由选自腺病毒和疱疹病毒的病毒导致，且细菌性感染由选自奈瑟氏菌属、衣原体属、葡萄球菌属、链球菌属、假单胞菌属和嗜血杆菌属的细菌导致。

25.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于对第二只眼睛局部施用以预防或减少在第一只眼睛患有微生物感染的受试者的第二只眼睛中微生物感染严重程度。

26.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于减少眼部微生物感染在有眼部微生物感染风险的群体中传播。

27.根据权利要求26所述的组合物，其中树枝状分子用于对群体中至少一个受试者每天施用多于7天。

28.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于多于7天给药以治疗或预防受试者结膜炎。

29.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于预防或减少在新生儿经过母亲产道的过程中将细菌性或病毒性感染传递至新生儿眼睛的可能性。

30.根据权利要求1或权利要求6所述的组合物，其中含磺酸或磺酸盐部分通过烯烃基接头连接至树枝状分子。

31.根据权利要求1或权利要求6所述的组合物，其中含磺酸或磺酸盐部分通过-O-CH2-C(O)-接头连接至树枝状分子。

32.根据权利要求1所述的组合物，其中树枝状分子为：

其中至少20个R基团为

33.根据权利要求32所述的组合物，其中所有的R基团为

34.根据权利要求1所述的组合物，其中该大分子或其药学上可接受的盐被配制为用于与抗病毒剂、抗生素、抗炎药或皮质类固醇一起给药。

35.根据权利要求34所述的组合物，其中抗生素是阿米卡星、阿奇霉素、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑肟、头孢曲松、氯霉素、环丙沙星、克林霉素、粘菌素、地美环素、红霉素、庆大霉素、磺胺米隆、美他环素、新霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、土霉素、多粘菌素B、乙胺嘧啶、利福昔明、磺胺嘧啶银、磺胺醋酰、磺胺异恶唑、四环素或妥布霉素。