JP6374569B2 - 酵素リロケーションにより代謝経路のフラックスを制御する方法 - Google Patents
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Description
この出願は、35 U. S. C. § 119(e) の下、2011年5月7日に出願された米国仮出願U.S.S.N. 61/332,624の優先権を主張するものであって、参照により本明細書に組み込まれる。
微生物宿主において、合成酵素の経路を介して化学物質を生産することは、イソプレノイド、ポリケチド、非リボソーム性のペプチド、バイオプラスチック、および化学的構成要素を含む多くの重要なクラスの分子に有用であることを証明している。合成生物学は、生物情報に固有のモジュール性により、微生物で生産した化合物のこのリストをさらにもっと広げる可能性を多いに有する。それにもかかわらず、宿主細胞の代謝ネットワークに新規生化学的経路を埋め込むことによって、または、野生型の生化学的経路において酵素発現を改変することによって、細胞が何千年にもわたって徐々に進化してきた繊細な調節機構が破壊される可能性もある。設計された細胞の代謝への悪影響は、細胞内で起こる複雑な相互作用についての理解が限られているため予測することが難しく、実際に化合物の最終的な収率はしばしば制限されてしまう。細胞内資源の制御されていない消費、異種タンパク質生産による代謝負担、および宿主に対して抑制性または毒性のある経路中間体/産物の蓄積はすべて、全体の収率を制限し得る大きな課題である。
本発明は、機能的な素子(例えば酵素)を生産するように遺伝学的に操作された細胞を設計することができるという着想に基づく。当該機能的な素子は、細胞の外部または細胞内の隔離された場所にその機能的な素子をリロケーションすることがなかったら、細胞の健康状態に悪影響をもたらすだろう。一態様において、このような隔離された場所は、細胞の周辺腔である。ある態様において、機能的な素子は、着目する経路におけるフラックスを制御する主要酵素である。
他の側面において、着目する経路の産物を生産するためのシステムが提供され、該システムには、本発明の細胞の溶解物;ならびに任意に、1種または2種以上の基質、酵素、栄養素、補因子、緩衝剤、還元剤、およびATP産生システムが含まれる。ある態様において、前記システムにはさらに、1種または2種以上の細胞溶解物を追加して含まれる。
周辺質の隔離
本発明における使用のための核酸、ポリペプチド、および細胞
本発明における使用のためのベクターおよび発現構築物
代謝フラックス
着目する経路
a) 抗生物質;例えば、アクチノマイシン、ブレオマイシン、リファマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、リンコマイシン、エリスロマイシン、ストレプトマイシン、シクロヘキサミド、ピューロマイシン、シクロセリン、バシトラシン、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、ポリミキシン、およびグラミシジン;
b) 生物系界面活性剤;例えば、ラムノリピッド、ソホロリピッド、糖脂質、およびリポペプチド;
c) バイオ燃料(biological fuel);例えば、バイオエタノール、バイオジエステル、およびバイオブタノール;
d) アミノ酸;例えば、L−グルタメート、L−リジン、L−フェニルアラニン、L−アスパラギン酸、L−イソロイシン、L−バリン、L−トリプトファン、L−プロリン(ヒドロキシプロリン)、L−トレオニン、L−メチオニン、およびD−p−ヒドロキシフェニルグリシン;
e) 有機酸;例えば、クエン酸、乳酸、グルコン酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、フマル酸、およびイタコン酸;
f) 脂肪酸;例えば、アラキドン酸、多価不飽和脂肪酸(PUBA)、およびγ−リノール酸;
g) アルコールおよびポリオール;例えば、グリセロール、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ポリ-3-ヒドロキシブチレート、イソブタノール、および1-ブタノール;
h) 香味料(flavor)および香料(fragrance);例えば、バニリン、ベンズアルデヒド、ジヒドロキシアセトン、4-(R)-デカノリド、および2-アセチル-1-ピロリン;
i) ヌクレオチド;例えば、5’-グアニル酸および5’-イノシン酸;
j) ビタミン;例えば、ビタミンC、ビタミンF、ビタミンB2、プロビタミンD2、ビタミンB12、葉酸、ニコチンアミド、ビオチン、2-ケト−L−グロン酸、およびプロビタミンQ10;
k) 色素;例えば、アスタキサンチン、β−カロテン、リコペン、モナスコルブリン、およびルブロプンクタチン(rubropunctatin);
l) 糖(sugar)および多糖(polysaccharide);例えば、リボース、ソルボース、キサンタン、ジェラン、およびできストラン;ならびに
m) 生体高分子(biopolymer)および合成樹脂(plastic);例えば、ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)、ポリ-γ-グルタミン酸、および、1,3-プロパンジオール。
(EC 1)オキシドレダクターゼ;例えば、デヒドロゲナーゼ、オキシダーゼ、レダクターゼ、オキシドレダクターゼ、シンターゼ、オキシゲナーゼ、モノオキシゲナーゼ、ジオキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼ、ヒドロゲナーゼ、トランスヒドロゲナーゼ、ペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ、エポキシダーゼ、ヒドロキシラーゼ、デメチラーゼ、デサチュラーゼ、ジスムターゼ、ヒドロキシルトランスフェラーゼ、デハロゲナーゼ、およびデヨージナーゼ;
(EC 2)トランスフェラーゼ;例えば、トランスアミナーゼ、キナーゼ、ジキナーゼ、メチルトランスフェラーゼ、ヒドロキシメチルトランスフェラーゼ、ホルミルトランスフェラーゼ、ホルムイミノトランスフェラーゼ、カルボキシトランスフェラーゼ、カルボミルトランスフェラーゼ、アミジノトランスフェラーゼ、トランスアルドラーゼ、トランスケトラーゼ、アセチルトランスフェラーゼ、アシルトランスフェラーゼ、パルミトイルトランスフェラーゼ、スクシニルトランスフェラーゼ、マロニルトランスフェラーゼ、ガロイルトランスフェラーゼ、シナポイルトランスフェラーゼ、チグロイルトランスフェラーゼ、テトラデカノイルトランスフェラーゼ、ヒドロキシシンナモイルトランスフェラーゼ、フェルロイルトランスフェラーゼ、ミコリルトランスフェラーゼ、ベンゾイルトランスフェラーゼ、ピペロイルトランスフェラーゼ、トリメチルトリデカノイルトランスフェラーゼ、ミリストイルトランスフェラーゼ、クマロイルトランスフェラーゼ、チオラーゼ、アミノアシルトランスフェラーゼ、ホスホリラーゼ、ヘキソシルトランスフェラーゼ、ペントシルトランスフェラーゼ、シアリルトランスフェラーゼ、ピリジニラーゼ、ジホスホリラーゼ、シクロトランスフェラーゼ、スルフリラーゼ、アデノシルトランスフェラーゼ、カルボキシビニルトランスフェラーゼ、イソペンテニルトランスフェラーゼ、アミノカルボキシプロピルトランスフェラーゼ、ジメチルアリルトランスフェラーゼ、ファルネシルトランストランスフェラーゼ、ヘキサプレニルトランストランスフェラーゼ、デカプレニルシストランスフェラーゼ、ペンタプレニルトランストランスフェラーゼ、ノナプレニルトランスフェラーゼ、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ、アミノカルボキシプレニルトランスフェラーゼ、オキシミノトランスフェラーゼ、プリントランスフェラーゼ、ホスホジスムターゼ、ホスホトランスフェラーゼ、ヌクレオチジルトランスフェラーゼ、ポリメラーゼ、コリンホスホトランスフェラーゼ、ホスホリルムターゼ、サルファトランスフェラーゼ、スルホトランスフェラーゼ、およびCoAトランスフェラーゼ;
(EC 3)ヒドロラーゼ;例えば、リパーゼ、エステラーゼ、アミラーゼ、ペプチダーゼ、ヒドロラーゼ、ラクトナーゼ、デアシラーゼ、デアセチラーゼ、ホスホビダーゼ、デポリメラーゼ、チオールエステラーゼ、ホスファターゼ、ジホスファターゼ、トリホスファターゼ、ヌクレオチダーゼ、フィターゼ、ホスホジエステラーゼ、ホスホリパーゼ、サルファターゼ、シクラーゼ、オリゴヌクレオチダーゼ、リボヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ、グリコシダーゼ、ヌクレオシダーゼ、グリコシラーゼ、アミノペプチダーゼ、ジペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、メタロカルボキシペプチダーゼ、オメガ−ペプチダーゼ、セリンエンドペプチダーゼ、システインエンドペプチダーゼ、アスパラギン酸エンドペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、トレオニンエンドペプチダーゼ、アミナーゼ、アミダーゼ、デスクシニラーゼ、デホルミラーゼ、アシラーゼ、デイミナーゼ、デアミナーゼ、ジヒドロラーゼ、シクロヒドロラーゼ、ニトリラーゼ、ATPアーゼ、GTPアーゼ、ハリダーゼ、デハロゲナーゼ、およびスルホヒドロラーゼ;
(EC 4)リアーゼ;例えば、デカルボキシラーゼ、カルボキシラーゼ、カルボキシキナーゼ、アルドラーゼ、エポキシリアーゼ、オキソ酸−リアーゼ、炭素−炭素リアーゼ、デヒドラターゼ、ヒドラターゼ、シンターゼ、エンドリアーゼ、エキソリアーゼ、アンモニア−リアーゼ、アミジン−リアーゼ、アミン−リアーゼ、炭素−硫黄リアーゼ、炭素−ハロゲンリアーゼ、リン−酸素リアーゼ、およびデヒドロクロリナーゼ;
(EC 5)イソメラーゼ;例えば、イソメラーゼ、ラセマーゼ、ムターゼ、トートメラーゼ、ホスホムターゼ、ホスホグルコムターゼ、アミノムターゼ、シクロイソメラーゼ、シクラーゼ、トポイソメラーゼ;ならびに
(EC 6)リガーゼ;例えば、シンセターゼ、tNRA−リガーゼ、酸−チオールリガーゼ、アミドシンターゼ、ペプチドシンターゼ、シクロリガーゼ、カルボキシラーゼ、DNA−リガーゼ、RNA−リガーゼ、およびシクラーゼ。
(EC 1.1)ドナーのCH-OH基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.2)ドナーのアルデヒド基またはオキソ基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.3)ドナーのCH-CH基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.4)ドナーのCH-NH2基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.5)ドナーのCH-NH基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.6)NADHまたはNADPHとアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.7)ドナーとしての他の窒素化合物とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.8)ドナーの硫黄基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.9)ドナーのヘム基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.10)ドナーとしてのジフェノールおよび関連する物質とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.11)アクセプターとしての過酸化物に作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.12)ドナーとしての水素とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.13)酸素分子を包含する単一のドナー(1個または2個の酸素原子も包含する)に作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.14)2-オキソグルタレート、NADH、NADPH、還元フラビン、フラビンタンパク質、プテリジン、鉄−硫黄タンパク質、アスコルベートであるドナーによる酸素分子の還元を包含する、対のドナーに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.15)アクセプターとしてのスーパーオキシドラジカルに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.16)金属イオンとアクセプターとを酸化するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.17)CH基またはCH2基とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.18)ドナーとしての鉄−硫黄タンパク質とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.19)ドナーとしての還元フラボドキシンとアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;
(EC 1.20)ドナーのリンまたはヒ素とアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;ならびに
(EC 1.21)X-Y結合を形成するためのX-HおよびY-Hとアクセプターとに作用するオキシドレダクターゼ;ここで、各ドナーのカテゴリに対するアクセプターとしては以下が挙げられ、限定されない:NAD、NADP、ヘムタンパク質、酸素、ジスルフィド、キノン、鉄−硫黄タンパク質、フラビン、含窒素基、シトクロム、二窒素、およびH+。
(EC 2.1)1炭素基を転移するトランスフェラーゼ;
(EC 2.2)アルデヒド基またはケトン基を転移するトランスフェラーゼ;
(EC 2.3)アシルトランスフェラーゼ;
(EC 2.4)グリコシルトランスフェラーゼ;
(EC 2.5)メチル基以外のアルキル基またはアルール基を転移するトランスフェラーゼ;
(EC 2.6)含窒素基を転移するトランスフェラーゼ;
(EC 2.7)リン含有基を転移するトランスフェラーゼ;
(EC 2.8)硫黄含有基を転移するトランスフェラーゼ;および
(EC 2.9)セレン含有基を転移するトランスフェラーゼ。
(EC 3.1)エステル結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.2)グリコシラーゼ;
(EC 3.3)エーテル結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.4)ペプチド結合に作用するヒドロラーゼ(ペプチダーゼ);
(EC 3.5)ペプチド結合以外の炭素−窒素結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.6)酸無水物に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.7)炭素−炭素結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.8)ハロゲンの結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.9)リン−窒素結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.10)硫黄−窒素結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.11)炭素−リン結合に作用するヒドロラーゼ;
(EC 3.12)硫黄−硫黄結合に作用するヒドロラーゼ;および
(EC 3.13)炭素−硫黄結合に作用するヒドロラーゼ。
(EC 4.1)炭素−炭素リアーゼ;
(EC 4.2)炭素−酸素リアーゼ;
(EC 4.3)炭素−窒素リアーゼ;
(EC 4.4)炭素−硫黄リアーゼ;
(EC 4.5)炭素−ハロゲンリアーゼ;および
(EC 4.6)リン−酸素リアーゼ。
(EC 5.1)ラセマーゼおよびエピメラーゼ;
(EC 5.2)シス−トランス−イソメラーゼ;
(EC 5.3)分子内イソメラーゼ
(EC 5.4)分子内トランスフェラーゼ(ムターゼ);ならびに
(EC 5.5)分子内リアーゼ。
(EC 6.1)炭素−酸素結合を形成するリガーゼ;
(EC 6.2)炭素−硫黄結合を形成するリガーゼ;
(EC 6.3)炭素−窒素結合を形成するリガーゼ;
(EC 6.4)炭素−炭素結合を形成するリガーゼ;
(EC 6.5)リン酸エステル結合を形成するリガーゼ;および
(EC 6.6)窒素−金属結合を形成するリガーゼ。
生産方法
例
本発明を製造および使用する方法について完全な開示および説明を当業者に提供するために、下記の例を提示するものであって、下記の例は、本発明の範囲を限定する意図も、以下の実験が実施された全部のまたは唯一の実験であることを表す意図も、ない。用いられている数字(例えば、量、温度など)に関して正確性を確かめる努力をしたが、いくつかの実験誤差および偏差は存在する可能性がある。特記がない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は、大気圧またはそれに近いものである。
例1.シキミ酸の生産
例2.増殖効果および周辺質で発現したAroGの活性
a. BL21(DE3):pACYC-Duet1(対照の空ベクター)
b. BL21(DE3):pACYC-AroG(周辺質シグナル配列なし)
c. BL21(DE3):pACYC-OmpA-AroG(周辺質シグナル配列OmpAを有するAroGを含む)
d. BL21(DE3):pACYC-STII-AroG(周辺質シグナル配列STIIを有するAroGを含む)
を、34μg/mLのクロラムフェニコールを含む、250mlのEZ Rich限定培地(Neidhardt et al. J. Bacteriol. (1974) 119:736)(600nmでの光学密度は0.0025)に植菌した。OD600が0.6になるまで37℃で増殖した後、タンパク質発現を誘導するために0.1mMのIPTGを添加した。その後、25℃で16時間、増殖と誘導とを行った。
例3.イソブタノールおよび/または1-ブタノールの無細胞生産
例4.イソプレノイドおよびテルペンの無細胞生産
例5.ポリ-3-ヒドロキシブチレートの無細胞生産
他の態様
Claims (20)
- 着目する生合成経路の産物を生産する方法であって、該方法が:
(a)産物を生産する生合成経路の酵素を発現する細菌性細胞を培養すること、ここで少なくとも1つの酵素が:
(i)生合成経路において代謝フラックスを制御する酵素であり、および
(ii)周辺質を標的とするために備わる配列に付着するように遺伝学的に改変されている酵素であり、これにより少なくとも1つの周辺腔へと隔離される改変酵素を含む培養細菌性細胞を生産し、ここで遺伝学的改変および周辺腔への隔離が、代謝産物の経路フラックスにおいて有害性の増大をもたらすことがない、および少なくとも1つの周辺質を標的とする配列改変酵素が、生合成経路の入口酵素、律速酵素または生合成経路に供給される基質または補因子の率を増大させる酵素である;
および
(b)前記培養細菌性細胞を溶解すること、それにより前記生合成経路の酵素および前記少なくとも1つの周辺質を標的とする配列改変酵素を含む細胞溶解物を生産すること;
(c)前記細胞溶解物と、基質、酵素、栄養素、補因子、緩衝剤、還元剤、およびATP産生システムからなる群から選択される1種または2種以上の物質とを組み合わせること;および
(d)前記細胞溶解物と前記1種または2種以上の物質とを、酵素学的に産物を生産するのに十分な期間および条件下でインキュベートすること、ここで産物が、抗生物質、生物系界面活性剤、バイオ燃料、アミノ酸、有機酸、脂肪酸、アルコール、ポリオール、香味料、香料、ヌクレオチド、ビタミン、色素、糖、多糖、生体高分子、合成樹脂、イソプレノイド、テルペン、および細胞の代謝産物からなる群から選択される、
を含む、前記方法。 - 細菌性細胞を培養することが、該細菌性細胞の複数の培養を含む、請求項1に記載の方法。
- 溶解することが、2または3以上の溶解物を生産する、請求項1または2に記載の方法。
- 2または3以上の溶解物を組み合わせることをさらに含む、請求項3に記載の方法。
- 細菌性細胞において、少なくとも1つの周辺質を標的とする配列改変酵素の対応する野生型をコードする少なくとも1つの遺伝子が、細胞質において、標準的なレベルで発現される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌性細胞において、少なくとも1つの周辺質を標的とする配列改変酵素の対応する野生型が、ノックアウトされている、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌性細胞において、少なくとも1つの周辺質を標的とする配列改変酵素が、過剰発現されている、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌性細胞において、少なくとも1つの周辺質を標的とする配列改変酵素をコードする少なくとも1つの遺伝子が、エピソーム性のベクターまたは染色体に存在する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌性細胞において、生合成経路における少なくとも2つの酵素が、周辺質を標的とする配列に付着するように遺伝学的に改変されている、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌性細胞を培養することが、酵素の活性を高めるかもしくは維持する因子の添加により改変されている細胞増殖培地で培養することを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 周辺質を標的とするために備わる配列が、
MKIKTGARILALSALTTMMFSASALA(配列番号1)、
MKQSTIALALLPLLFTPVTKA(配列番号2)、
MMITLRKLPLAVAVAAGVMSAQAMA(配列番号3)、
MNKKVLTLSAVMASMLFGAAAHA(配列番号4)、
MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA(配列番号5)、
MKKIWLALAGLVLAFSASA(配列番号6)、
MMTKIKLLMLIIFYLIISASAHA(配列番号7)、
MKQALRVAFGFLILWASVLHA(配列番号8)、
MRVLLFLLLSLFMLPAFS(配列番号9)、および
MANNDLFQASRRRFLAQLGGLTVAGMLGPSLLTPRRATA(配列番号10)
からなる群から選択される配列である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。 - 生合成経路の産物が、バイオエタノール、バイオディーゼル、およびバイオブタノールからなる群から選択されるバイオ燃料である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 生合成経路の産物が、グリセロール、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、ポリ−3−ヒドロキシブチレートおよびイソブタノールからなる群から選択されるアルコールまたはポリオールである、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 生合成経路の産物が、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリ−γ−グルタミン酸および1,3−プロパンジオールからなる群から選択される生体高分子または合成樹脂である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 生合成経路の産物が、アモルファジエン、ファルネセン、リコペン、アスタキサンチン、ビタミンA、メントールおよびベータ−カロテンからなる群から選択されるイソプレノイドまたはテルペンである、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 生合成経路の産物が、2,3−ジヒドロキシ安息香酸、2−ケトグルタレート、3−ホスホグリセレート、4−ヒドロキシベンゾエート、6−ホスホグルコネート、アセトアセチルコエンザイムA、アセチルコエンザイムA、アセチルホスフェート、アデニン、アデノシン、アデノシンホスホサルフェート、アデノシン二リン酸、アデノシン二リン酸−グルコース、アラニン、アデノシン一リン酸、アントラニレート、アルギニン、アスパラギン、アスパルテート、アデノシン三リン酸、カルバミルアスパルテート、シス−アコニテート、シトレート、シトルリン、シトシン一リン酸、コエンザイムA、シトシン三リン酸、サイクリックアデノシン一リン酸、シチジン、シトシン、デオキシアデノシン一リン酸、デオキシアデノシン三リン酸、デオキシシトシン三リン酸、デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシリボース−5−リン酸、デオキシグアノシン一リン酸、ジヒドロオロテート、ジヒドロキシアセトンリン酸、デオキシチミジン二リン酸、デオキシチミジン三リン酸、エリトロース−4−リン酸、フラビンアデニンジヌクレオチド、フラビンモノヌクレオチド、フルクトース−1,6−ビスリン酸、フルクトース−6−リン酸、フマレート、グアノシン二リン酸、グルコネート、グルコノラクトン、グルコサミン−6−リン酸、グルコース−6−リン酸、グルコース−1−リン酸、グルタメート、グルタミン、グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、グリセラアルデヒド−3−リン酸、グリセラート、グリセロール−3−リン酸、グアノシン一リン酸、グアノシン三リン酸、グアニン、グアノシン、ヒスチジン、ヒスチジノール、ホモシステイン、イノシン二リン酸、イノシン一リン酸、イノシン三リン酸、イソロイシン、リジン、マレート、マロニルコエンザイムA、メチオニン、ミオイノシトール、N−アセチル−グルコサミン−1−リン酸、N−アセチル−オルニチン、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドヒドラート、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸ヒドラート、オルニチン、オキサロアセテート、フェニルアラニン、フェニルピルビン酸、ホスホエノールピルビン酸、プロリン、プロピオニルコエンザイムA、ホスホリボシルピロリン酸、ピルベート、キノリン、リボフラビン、リボース−5−リン酸、リブロース−5−リン酸、S−アデノシル−L−メチオニン、セリン、シキミ酸、シキメート、スクシネート、スクシニルコエンザイムA、トレオニン、トリプトファン、チロシン、ウリジン二リン酸、ウリジン二リン酸−グルコース、ウリジン二リン酸−グルクロネート、ウリジン二リン酸−N−アセチルグルコサミン、ウリジン、ウリジン三リン酸、バリン、およびキシルロース−5−リン酸からなる群から選択される細胞の代謝産物である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞の代謝産物が、シキミ酸またはシキメートである、請求項16に記載の方法。
- 生合成経路の酵素が、3−デオキシ−D−アラビノースヘプツロース−7−リン酸シンターゼ、3−デヒドロキネートシンターゼ、3−デヒドロキネートデヒドラターゼ、シキメートデヒドロゲナーゼからなる群から選択される、請求項17に記載の方法。
- 遺伝的に改変された少なくとも1つの酵素が、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼおよびリガーゼからなる群から選択される、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 細菌性細胞が、Escherichia coli細胞である、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US3223592A (en) | 1957-09-27 | 1965-12-14 | Yamasa Shoyu Kk | Production of 5'-nucleotides |
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US4006060A (en) | 1974-11-25 | 1977-02-01 | Merck & Co., Inc. | Thienamycin production |
US3950357A (en) | 1974-11-25 | 1976-04-13 | Merck & Co., Inc. | Antibiotics |
US4194047A (en) | 1975-11-21 | 1980-03-18 | Merck & Co., Inc. | Substituted N-methylene derivatives of thienamycin |
US4266034A (en) | 1978-04-14 | 1981-05-05 | Exxon Research And Engineering Company | Method for producing microbial cells and use thereof to produce oxidation products |
US4248966A (en) | 1979-05-17 | 1981-02-03 | Massachusetts Institute Of Technology | Synthesis of isopenicillin derivatives in the absence of living cells |
US4270537A (en) | 1979-11-19 | 1981-06-02 | Romaine Richard A | Automatic hypodermic syringe |
US4458066A (en) | 1980-02-29 | 1984-07-03 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4292436A (en) | 1980-06-25 | 1981-09-29 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of N-protected N-formimidoyl 2-aminoethanethiol |
US4329481A (en) | 1980-06-25 | 1982-05-11 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of N-protected N-formimidoyl 2-aminoethanethiol |
US4374772A (en) | 1981-03-19 | 1983-02-22 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of N-formimidoyl thienamycin and reagents therefor |
JPS585189A (ja) | 1981-07-01 | 1983-01-12 | Sanraku Inc | 新規なアミドヒドロラ−ゼ |
US4460689A (en) | 1982-04-15 | 1984-07-17 | Merck & Co., Inc. | DNA Cloning vector TG1, derivatives, and processes of making |
US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
JPS61260895A (ja) | 1985-05-13 | 1986-11-19 | Unitika Ltd | 生理活性物質の製造方法 |
DE3660768D1 (en) | 1985-05-13 | 1988-10-27 | Unitika Ltd | Process for producing physiologically active substance |
US5672497A (en) | 1986-03-21 | 1997-09-30 | Eli Lilly And Company | Method for increasing the antibiotic-producing ability of antibiotic-producing microorganisms |
JPS637788A (ja) | 1986-06-25 | 1988-01-13 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 補酵素の回収方法 |
CA1283827C (en) | 1986-12-18 | 1991-05-07 | Giorgio Cirelli | Appliance for injection of liquid formulations |
US4946783A (en) | 1987-01-30 | 1990-08-07 | President And Fellows Of Harvard College | Periplasmic protease mutants of Escherichia coli |
GB8704027D0 (en) | 1987-02-20 | 1987-03-25 | Owen Mumford Ltd | Syringe needle combination |
US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4950603A (en) | 1987-11-02 | 1990-08-21 | Eli Lilly And Company | Recombinant DNA expression vectors and DNA compounds that encode isopenicillin N synthetase from Streptomyces lipmanii |
JPH01228473A (ja) | 1988-03-08 | 1989-09-12 | Hikari Kimura | 新規な組み換え体dnaおよびグルタチオンの製造法 |
US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
US5070020A (en) | 1988-05-09 | 1991-12-03 | Eli Lilly And Company | Recombinant dna expression vectors and dna compounds that encode deacetoxycephalosporin c synthetase |
FR2638359A1 (fr) | 1988-11-03 | 1990-05-04 | Tino Dalto | Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau |
ES2067556T3 (es) | 1988-12-22 | 1995-04-01 | Lilly Co Eli | Vectores de expresion de adn recombinante y compuestos de adn que codifican la actividad isopenicilina n epimerasa (racemasa). |
US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
CA2034735A1 (en) | 1990-01-26 | 1991-07-27 | Barbara J. Weigel | Recombinant dna expression and dna compounds that encode isopenicillin n epimerase activity |
US5190521A (en) | 1990-08-22 | 1993-03-02 | Tecnol Medical Products, Inc. | Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin |
US5527288A (en) | 1990-12-13 | 1996-06-18 | Elan Medical Technologies Limited | Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs |
GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
SE9102652D0 (sv) | 1991-09-13 | 1991-09-13 | Kabi Pharmacia Ab | Injection needle arrangement |
KR0177841B1 (ko) | 1992-01-30 | 1999-04-01 | 나까무라 간노스께 | 시티딘 디인산 콜린의 제조방법 |
US5328483A (en) | 1992-02-27 | 1994-07-12 | Jacoby Richard M | Intradermal injection device with medication and needle guard |
US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
US5319122A (en) | 1992-11-12 | 1994-06-07 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of benzylformimidate |
US6746859B1 (en) | 1993-01-15 | 2004-06-08 | Genetics Institute, Llc | Cloning of enterokinase and method of use |
CA2153254C (en) | 1993-01-15 | 2002-05-21 | Edward R. Lavallie | Cloning of enterokinase and method of use |
US5436131A (en) | 1993-04-02 | 1995-07-25 | Merck & Co., Inc. | Color screening assay for identifying inhibitor resistant HIV protease mutants |
WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
KR0131166B1 (ko) | 1994-05-04 | 1998-04-11 | 최차용 | 무세포시스템에서 단백질을 제조하는 방법 |
GB9410142D0 (en) | 1994-05-20 | 1994-07-06 | Univ Warwick | Carbapenems |
US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
JPH08196284A (ja) | 1995-01-19 | 1996-08-06 | Canon Inc | 酵素反応素子およびその製造方法、酵素反応器ならびに酵素反応方法 |
US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
WO1997002358A1 (en) | 1995-07-06 | 1997-01-23 | The Leland Stanford Junior University | Cell-free synthesis of polyketides |
US6537776B1 (en) | 1999-06-14 | 2003-03-25 | Diversa Corporation | Synthetic ligation reassembly in directed evolution |
US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
KR100205768B1 (en) | 1996-08-24 | 1999-07-01 | Choongwae Pharm Co | Stereo-selective composition of 4-acetoxyazetidinone |
GB9622516D0 (en) | 1996-10-29 | 1997-01-08 | Univ Cambridge Tech | Enzymic cofactor cycling |
US20020160459A1 (en) | 1997-01-14 | 2002-10-31 | Alan Berry | Process for production of n-glucosamine |
US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
US6159693A (en) | 1998-03-13 | 2000-12-12 | Promega Corporation | Nucleic acid detection |
GB9815666D0 (en) | 1998-07-17 | 1998-09-16 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
CN1203174C (zh) | 1998-12-24 | 2005-05-25 | 宝生物工程株式会社 | 多肽 |
US6613552B1 (en) | 1999-01-29 | 2003-09-02 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Biocatalytic synthesis of shikimic acid |
US6994986B2 (en) | 1999-03-17 | 2006-02-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford University | In vitro synthesis of polypeptides by optimizing amino acid metabolism |
CA2365668C (en) | 1999-03-17 | 2014-05-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | In vitro macromolecule biosynthesis methods using exogenous amino acids and a novel atp regeneration system |
US6168931B1 (en) | 1999-03-17 | 2001-01-02 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro synthesis of biological macromolecules using a novel ATP regeneration system |
AU784043B2 (en) | 1999-04-15 | 2006-01-19 | Regents Of The University Of California, The | Identification of sortase gene |
US6284483B1 (en) | 1999-10-06 | 2001-09-04 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Modified synthetases to produce penicillins and cephalosporins under the control of bicarbonate |
CA2293852A1 (fr) | 1999-12-30 | 2001-06-30 | Purecell Technologies Inc. | Procede de preparation d'extraits de plantes actifs et utiles a la capture de radicaux libres; les extraits, et compositions et dispositifs les comprenant |
US7041479B2 (en) | 2000-09-06 | 2006-05-09 | The Board Of Trustess Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro synthesis of active proteins containing disulfide bonds |
US6548276B2 (en) | 2000-09-06 | 2003-04-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro synthesis of active proteins containing disulfide bonds |
KR20080113283A (ko) | 2001-04-04 | 2008-12-29 | 제넨코 인터내셔날 인코포레이티드 | 숙주 세포에서의 생산물의 생산 방법 |
US7112434B2 (en) | 2001-05-02 | 2006-09-26 | University Of South Florida | Vector system for selection of genes encoding secreted proteins and membrane-bound proteins |
WO2003027301A1 (fr) | 2001-09-06 | 2003-04-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede permettant de produire un alcool au moyen d'un micro-organisme |
KR100954641B1 (ko) | 2001-09-13 | 2010-04-27 | 제넨테크, 인크. | 아미노펩티다아제 |
WO2003038117A2 (en) | 2001-10-30 | 2003-05-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced in vitro nucleic acid synthesis using nucleoside monophosphates |
US20040038250A1 (en) | 2002-04-04 | 2004-02-26 | Astur-Pharma, S.A. | Gene cluster for thienamycin biosynthesis, genetic manipulation and utility |
DE10219714A1 (de) | 2002-05-02 | 2003-11-27 | Holland Sweetener Co | Verfahren zur mikrobielien Herstellung von aromatischen Aminosäuren und anderen Metaboliten des aromatischen Aminosäurebiosyntheseweges |
CN100513576C (zh) | 2002-05-08 | 2009-07-15 | 协和发酵生化株式会社 | 胞苷5’-二磷酸胆碱的制备方法 |
AU2003280305B2 (en) | 2002-07-01 | 2008-05-01 | Arkion Life Sciences Llc | Process and materials for production of glucosamine and N-acetylglucosamine |
AU2003259912B2 (en) | 2002-08-19 | 2008-10-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Improved methods of in vitro protein synthesis |
WO2004101598A2 (en) | 2003-05-09 | 2004-11-25 | Research Development Foundation | Insertion of furin protease cleavage sites in membrane proteins and uses thereof |
US7341852B2 (en) | 2003-07-18 | 2008-03-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods of decoupling reaction scale and protein synthesis yield in batch mode |
US20050054044A1 (en) | 2003-07-18 | 2005-03-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of alleviating nucleotide limitations for in vitro protein synthesis |
US7790431B2 (en) * | 2003-09-24 | 2010-09-07 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Methods and materials for the production of shikimic acid |
US9410170B2 (en) | 2003-11-20 | 2016-08-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods of in vitro protein synthesis |
WO2005059157A2 (en) | 2003-12-11 | 2005-06-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | METHODS AND COMPOSITIONS FOR USE IN PREPARING HAIRPIN RNAs |
DK1730313T3 (da) | 2004-03-25 | 2013-01-07 | Univ Leland Stanford Junior | Forøget proteinekspressionsudbytte i cellefri proteinsyntesesystemer ved tilsætning af skumdæmpende midler |
AU2005238524A1 (en) | 2004-04-27 | 2005-11-10 | Archer-Daniels-Midland Company | Enzymatic decarboxylation of 2-keto-l-gulonic acid to produce xylose |
US8257943B2 (en) | 2004-06-25 | 2012-09-04 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Process for producing dipeptides or dipeptide derivatives |
SG158108A1 (en) | 2004-12-10 | 2010-01-29 | Dsm Ip Assets Bv | Production of beta-lactam antibiotics by genetically modified non- naturally producing microorganisms |
US7351563B2 (en) | 2005-06-10 | 2008-04-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free extracts and synthesis of active hydrogenase |
US7312049B2 (en) | 2005-06-14 | 2007-12-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Total amino acid stabilization during cell-free protein synthesis |
TW200741005A (en) | 2005-08-10 | 2007-11-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | A purification method of cytidine diphosphate |
CN1329506C (zh) | 2005-09-06 | 2007-08-01 | 清华大学 | 一种具有颗粒状甲烷单加氧酶活性的重组菌及其应用 |
US7517680B2 (en) | 2005-09-09 | 2009-04-14 | Johns Hopkins University | Production of clavulanic acid by genetic engineering of Streptomyces clavuligerus |
JP5383197B2 (ja) | 2005-10-31 | 2014-01-08 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 膜結合ポリペプチドの無細胞合成法 |
GB0606112D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
WO2007137144A2 (en) | 2006-05-17 | 2007-11-29 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Single protein production in living cells facilitated by a messenger rna interferase |
WO2007140816A1 (en) | 2006-06-09 | 2007-12-13 | Metabolic Explorer | Glycolic acid production by fermentation from renewable resources |
WO2007144018A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Metabolic Explorer | Ethanolamine production by fermentation |
WO2008002661A2 (en) | 2006-06-28 | 2008-01-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fusion protein constructs |
US20110129438A1 (en) | 2006-06-28 | 2011-06-02 | James Robert Swartz | Immunogenic protein constructs |
US8715958B2 (en) | 2006-06-29 | 2014-05-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free synthesis of proteins containing unnatural amino acids |
WO2008002673A2 (en) | 2006-06-29 | 2008-01-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cell-free synthesis of virus like particles |
US8293894B2 (en) | 2006-11-20 | 2012-10-23 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited | Process for the preparation of carbapenem antibiotic |
KR100832740B1 (ko) | 2007-01-17 | 2008-05-27 | 한국과학기술원 | 분지쇄 아미노산 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를이용한 분지쇄 아미노산의 제조방법 |
US7871794B2 (en) | 2007-01-18 | 2011-01-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enhanced cell-free synthesis of active proteins containing disulfide bonds |
WO2008094546A2 (en) * | 2007-01-31 | 2008-08-07 | The Regents Of The University Of California | Genetically modified host cells for increased p450 activity levels and methods of use thereof |
US20090124012A1 (en) | 2007-08-08 | 2009-05-14 | Mazef Biosciences, Llc | Toxin/antitoxin systems and methods for regulating cellular growth, metabolic engineering and production of recombinant proteins |
US20110099670A1 (en) | 2008-02-14 | 2011-04-28 | Andries Jurriaan Koops | Nucleotide sequences coding for cis-aconitic decarboxylase and use thereof |
EP2262901B1 (en) | 2008-03-05 | 2018-11-21 | Genomatica, Inc. | Primary alcohol producing organisms |
JP2011519561A (ja) | 2008-05-01 | 2011-07-14 | ジェノマティカ, インコーポレイテッド | メタクリル酸の産生のための微生物 |
WO2010012604A1 (en) | 2008-07-28 | 2010-02-04 | Clariant International Ltd | Production method |
GB0819563D0 (en) | 2008-10-24 | 2008-12-03 | Isis Innovation | Methods for preparing heterocyclic rings |
BRPI0914521A2 (pt) | 2008-10-27 | 2016-07-26 | Butamax Advanced Biofuels Llc | célula hospedeira microbiana recombinante, método de aumento da produção de isobutanol e método de produção de isobutanol |
BRPI0921734A2 (pt) | 2008-10-31 | 2019-01-08 | California Inst Of Techn | micro-organismos criados geneticamente capazes de produzir compostos-alvo sob condições anaeróbicas |
EP2376619A4 (en) | 2008-12-15 | 2012-07-04 | Greenlight Biosciences Inc | METHODS FOR CONTROLLING FLOWS IN METABOLIC PATHWAYS |
WO2010074760A1 (en) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Greenlight Biosciences | Compositions and methods for the production of a compound |
DK2204453T3 (da) | 2008-12-30 | 2013-06-10 | Sued Chemie Ip Gmbh & Co Kg | Fremgangsmåde til celle-fri fremstilling af kemikalier |
US8597923B2 (en) | 2009-05-06 | 2013-12-03 | SyntheZyme, LLC | Oxidation of compounds using genetically modified Candida |
US10385367B2 (en) | 2009-06-01 | 2019-08-20 | Ginkgo Bioworks, Inc. | Methods and molecules for yield improvement involving metabolic engineering |
DK2462221T3 (en) | 2009-08-05 | 2017-05-22 | Genomatica Inc | SEMISYNTHETIC TEREPHTHALIC ACID BY MICRO-ORGANISMS PRODUCING MUCONIC ACID |
CA2783962C (en) | 2009-12-11 | 2016-07-26 | The Johns Hopkins University | Method for late introduction of the (8r)-hydroxyl group in carbapenem .beta.-lactam antibiotic synthesis |
WO2011130544A2 (en) | 2010-04-14 | 2011-10-20 | Sutro Biopharma, Inc. | Monitoring a dynamic system by liquid chromatography-mass spectrometry |
EP2566953B1 (en) | 2010-05-07 | 2019-01-02 | Greenlight Biosciences, Inc. | Methods for control of flux in metabolic pathways through enzyme relocation |
JP6280367B2 (ja) | 2010-08-31 | 2018-02-14 | グリーンライト バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドGreenlight Biosciences,Inc. | プロテアーゼ操作を介した代謝経路におけるフラックスの制御のための方法 |
SG2014014377A (en) | 2011-09-09 | 2014-05-29 | Greenlight Biosciences Inc | Cell-free preparation of carbapenems |
EP2935598A1 (en) | 2012-12-21 | 2015-10-28 | Greenlight Biosciences Inc. | Cell-free system for converting methane into fuel, pyruvate or isobutanol |
CA2913999A1 (en) | 2013-06-05 | 2014-12-11 | Greenlight Biosciences, Inc. | Control of metabolic flux in cell-free biosynthetic systems |
JP6483687B2 (ja) | 2013-08-05 | 2019-03-13 | グリーンライト バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドGreenlight Biosciences,Inc. | プロテアーゼ切断部位を有する操作されたタンパク質 |
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