JP6324018B2

JP6324018B2 - 血液分析器を洗浄するためのホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物およびその使用法

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Publication number: JP6324018B2
Application number: JP2013218840A
Authority: JP
Inventors: アイ．リーズゴーミルタ; エス．ルビオカルロス; エム．マルドナドスサーナ
Original assignee: Beckman Coulter Inc
Current assignee: Beckman Coulter Inc
Priority date: 2006-04-07
Filing date: 2013-10-22
Publication date: 2018-05-16
Anticipated expiration: 2027-03-08
Also published as: US20070238632A1; JP2017057420A; EP2007532A2; WO2007117798A3; EP2007532A4; JP2014012860A; WO2007117798A2; JP2009533492A; US7838481B2; EP2007532B1

Description

（発明の分野）
本発明は、自動化血液分析器を洗浄するための洗浄剤組成物、およびその使用法に関し、特に、実質的にホルムアルデヒド分のない洗浄剤組成物に関する。

（発明の背景）
効果的な洗浄試薬および洗浄手順は、血液サンプル、または血液サンプルと血液の分析に使用される試薬の混合物に接触する機器の構成要素を洗浄し、分析器を適切な動作状態に維持するために、自動化および半自動化血液分析器に必要である。たとえば自動化血液分析装置における血液サンプルの分析の際、全体の血液サンプルは、測定の前に、機器上で様々な試薬を使って処理される。一般に、全体の血液サンプルの一定部分は、浸透圧希釈剤で希釈して、赤血球および血小板測定用のサンプル混合物を形成する。全体の血液サンプルの別の一定部分は、溶解試薬と混合されて、白血球およびヘモグロビン測定用の第２のサンプル混合物を形成し、赤血球は溶解される。血液サンプルおよび試薬のこれらのサンプル混合物は、タンパク質、および溶解した細胞膜の破片を含む。これらの材料は、血液サンプルの分析時に、サンプル混合物と接触する一定の機器構成要素の表面に沈殿する可能性がある。さらに、これらの物質は、試薬中の一定の化学物質とともに不溶性複合体も形成し、機器構成要素の表面に沈殿する可能性がある。効果的な洗浄を定期的に行わない場合、アパーチャ、および赤血球計算に使用されるフローセルの周囲、およびサンプル混合物に接触する管類の壁部に沿って沈殿物が蓄積する可能性がある。その結果、アパーチャまたはフローセルの部分的または完全な閉塞を生じ、機器が動作不能になる可能性がある。

酵素洗浄試薬は、先行技術で公知であり、タンパク質および血液の破片を酵素反応により分解する際に効果的である。界面活性剤は、一般に、破片および大きい有機分子を分解または分散させるために、洗浄試薬に使用される。

抗菌剤は、一般に、細菌、真菌、および酵母菌などの微生物の増殖を抑制し、試薬生成物の保存寿命、品質、および性能を保証するために、保存料として洗浄試薬に使用される。さらに、生物体の増殖は、機器構成要素の汚染を生じ、さらに、システムの性能を妨げる可能性があるため、機器の内部、たとえば、流体供給システムの試薬管類およびその他の部品の内部における微生物の増殖を防止することも重要である。たとえば、生物体は血球として数えられる可能性があるか、または誤ったフラッギングを生じる可能性があり、これは、血液サンプル中の異常な血液型の存在を示す。

一般に使用されている大多数の抗菌剤は、ホルムアルデヒドを含むか、または保存時にホルムアルデヒドを放出するホルムアルデヒド放出物質である。これらのホルムアルデヒド放出物質は、強力な抗菌剤であり、水溶液中における生物体の増殖を抑制する際に非常に効果的である。しかし、機器の排水を通して放出される洗浄試薬中に含まれるホルムアルデヒドは、近年、環境問題を生じている。

過去１０年間では、公共、産業、および医療廃棄物分に対する規制は、一定の化学物質がヒトの健康、および／または環境を脅かすことが分かるにつれて増加している。カリフォルニア州およびマサチューセッツ州など、いくつかの州における規制機関は、廃棄物分の許可量に対する新たな規則を実施した。ホルムアルデヒドは、これらの２つの州で廃棄物中で制限されている化学物質の１つである。新しい規制によると、廃棄物中のホルムアルデヒド濃度が１ｐｐｍ以下の場合、ホルムアルデヒドを含まないと考えられる。

したがって、ホルムアルデヒドを含まない洗浄試薬であって、血液分析器を効果的に洗浄し、保存時に安定性があり、環境を破壊しない洗浄試薬に対する強い必要性が存在する。

（発明の要旨）
一実施態様では、本発明は、ホルムアルデヒドを含まず、水溶液中に１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の非ホルムアルデヒド放出抗菌剤を含む洗浄剤組成物を目的とする。洗浄剤組成物は、タンパク質分解酵素、アルカリ金属塩、および洗浄剤組成物のｐＨを約７〜約１２、好ましくは約８〜約１０の範囲に保つための緩衝剤をさらに含む。洗浄剤組成物は、１ｐｐｍ以下のホルムアルデヒド濃度を有する。

好ましくは、組成物を保存し、血液分析器の維持を支援するために、イソチアゾロン化合物を抗菌剤として使用し、より好ましくは、２つ以上のイソチアゾロン化合物を洗浄剤組成物中に使用する。好ましくは、界面活性剤は非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、またはこれらの組合せであり、タンパク質分解酵素はスブチリシンである。

さらに他の実施態様では、本発明は、血液分析器を洗浄する方法であって、ホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップと、血液サンプルの分析時に、血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触する血液分析器の各部分に洗浄剤組成物を供給するステップと、各部分を一定期間にわたって洗浄剤組成物に接触させるステップと、洗浄剤組成物をすすぎ洗いし、血液分析器から除去するステップとを含む方法を目的とする。血液分析器は、血液分析装置、フローサイトメータ、または臨床化学分析器を備える。

本発明の利点は、以下のとおり本発明の詳細な説明、添付の請求の範囲から明らかになるであろう。
例えば、本願発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
ホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物であって、
（ａ）界面活性剤、
（ｂ）非ホルムアルデヒド放出抗菌剤、
（ｃ）タンパク質分解酵素、
（ｄ）アルカリ金属塩、および
（ｅ）前記洗浄剤組成物中のｐＨを約７〜約１２の範囲に維持するための緩衝剤
の水溶液を含み、
前記洗浄剤組成物が、１ｐｐｍ以下のホルムアルデヒド濃度を有する洗浄剤組成物。
（項目２）
前記少なくとも１つの非ホルムアルデヒド放出抗菌剤がイソチアゾロン化合物である、項目１に記載の洗浄剤組成物。
（項目３）
前記イソチアゾロン化合物が、約０．０３ｇ／ｌ〜約０．８ｇ／ｌの範囲の濃度である、項目２に記載の洗浄剤組成物。
（項目４）
前記界面活性剤が非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、またはこれらの混合物である、項目１に記載の洗浄剤組成物。
（項目５）
前記タンパク質分解酵素がスブチリシンである、項目１に記載の洗浄剤組成物。
（項目６）
前記スブチリシンが、約０．１５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの範囲の濃度である、項目５に記載の洗浄剤組成物。
（項目７）
前記アルカリ金属塩が、アルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ金属ギ酸塩、またはこれらの組合せである、項目１に記載の洗浄剤組成物。
（項目８）
前記アルカリ金属塩が、約１ｇ／ｌ〜約１６ｇ／ｌの範囲の濃度を有する、項目７に記載の洗浄剤組成物。
（項目９）
第２非ホルムアルデヒド放出抗菌剤をさらに含む、項目１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１０）
血液分析器を洗浄する方法であって、
（ａ）項目１に記載の前記ホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップと、
（ｂ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器の各部分に供給するステップであって、前記各部分が、前記血液サンプルの分析時に、血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触するステップと、
（ｃ）前記部分を前記洗浄剤組成物に一定期間にわたって接触させるステップと、
（ｄ）前記洗浄組成物を前記血液分析器から洗い流すステップと
を含む方法。
（項目１１）
ホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物であって、
（ａ）１つまたは複数の界面活性剤、
（ｂ）少なくとも２つの非ホルムアルデヒド放出抗菌剤、
（ｃ）タンパク質分解酵素、
（ｄ）アルカリ金属塩、および
（ｅ）前記洗浄剤組成物のｐＨを約７〜約１２の範囲に維持する緩衝剤
の水溶液を含み、実質的にホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物。
（項目１２）
前記２つの非ホルムアルデヒド放出抗菌剤がイソチアゾロン化合物である、項目１１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１３）
前記洗浄剤組成物が、１ｐｐｍ以下のホルムアルデヒド濃度を有する、項目１１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１４）
前記タンパク質分解酵素がスブチリシンである、項目１１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１５）
前記界面活性剤が、非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、またはこれらの混合物である、項目１１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１６）
前記アルカリ金属塩が、アルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ金属ギ酸塩、またはこれらの組合せである、項目１１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１７）
前記緩衝剤が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸、グリシルグリシン、グリシン、トリスヒドロキシメチルアミノエタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）、もしくは３−（（トリス（ヒドロキシメチル）メチル）アミノ）プロパンスルホン酸、またはこれらの組合せである、項目１１に記載の洗浄剤組成物。
（項目１８）
血液分析器を洗浄する方法であって、
（ａ）項目１１に記載のホルムアルデヒドを含まない前記洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップと、
（ｂ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器の各部分に供給するステップであって、前記各部分が、前記血液サンプルの分析時に、前記血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触するステップと、
（ｃ）前記部分を前記洗浄剤組成物に一定期間にわたって接触させるステップと、
（ｄ）前記洗浄組成物を前記血液分析器から洗い流すステップと
を含む方法。
（項目１９）
ホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物であって、
（ａ）１つまたは複数の界面活性剤、
（ｂ）第１イソチアゾロン化合物、
（ｃ）第２イソチアゾロン化合物、
（ｄ）第３イソチアゾロン化合物
の水溶液を含み、
実質的にホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物。
（項目２０）
前記洗浄剤組成物が、１ｐｐｍ以下のホルムアルデヒド濃度を有する、項目１９に記載の洗浄剤組成物。
（項目２１）
前記第１イソチアゾロン化合物が、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、またはこれらの誘導体である、項目１９に記載の洗浄剤組成物。
（項目２２）
前記第２イソチアゾロン化合物が１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オン、またはこれらの誘導体である、項目１９に記載の洗浄剤組成物。
（項目２３）
前記第２イソチアゾロン化合物が２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、またはこれらの誘導体である、項目１９に記載の洗浄剤組成物。
（項目２４）
前記界面活性剤が、２つの非イオン界面活性剤の組合せ、または非イオン界面活性剤と陰イオン界面活性剤との組合せである、項目１９に記載の洗浄剤組成物。
（項目２５）
血液分析器を洗浄する方法であって、
（ａ）項目１９のホルムアルデヒドを含まない前記洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップと、
（ｂ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器の各部分に供給するステップであって、前記各部分が、前記血液サンプルの分析時に、血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触するステップと、
（ｃ）前記部分を前記洗浄剤組成物に一定期間にわたって接触させるステップと、
（ｄ）前記洗浄組成物を前記血液分析器から洗い流すステップと
を含む方法。
（項目２６）
タンパク質分解酵素、アルカリ金属ギ酸塩、アルカリ金属ハロゲン化物、および前記洗浄剤組成物のｐＨを約７〜約１２の範囲に維持する緩衝剤をさらに含む、項目１９に記載の洗浄剤組成物。
（項目２７）
前記タンパク質分解酵素がスブチリシンである、項目２６に記載の洗浄剤組成物。
（項目２８）
前記緩衝剤が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸、グリシルグリシン、グリシン、トリスヒドロキシメチルアミノエタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）、または３−（（トリス（ヒドロキシメチル）メチル）アミノ）プロパンスルホン酸、またはこれらの組合せである、項目２６に記載の洗浄剤組成物。
（項目２９）
血液分析器を洗浄する方法であって、
（ａ）項目２６に記載のホルムアルデヒドを含まない前記洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップと、
（ｂ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器の各部分に供給するステップであって、前記各部分が、前記血液サンプルの分析時に、血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触するステップと、
（ｃ）前記部分を前記洗浄剤組成物に一定期間にわたって接触させるステップと、
（ｄ）前記洗浄組成物を前記血液分析器から洗い流すステップと
を含む方法。
（項目３０）
血液分析器を洗浄する方法であって、
（ａ）ホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップであって、前記洗浄剤組成物が、１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の非ホルムアルデヒド放出抗菌剤の水溶液を含み、１ｐｐｍ以下のホルムアルデヒド濃度を有するステップと、
（ｂ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器の各部分に供給し、前記各部分が、前記血液サンプルの分析時に、血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触するステップと、
（ｃ）前記各部分を前記洗浄剤組成物に一定期間にわたって接触させるステップと、
（ｄ）前記洗浄組成物を前記血液分析器から洗い流すステップと
を含む方法。
（項目３１）
前記血液分析器が、血液分析装置、フローサイトメータ、または臨床化学分析器である、項目３０に記載の方法。

（発明の詳細な説明）
一実施態様では、本発明は、ホルムアルデヒドを含まず、１つまたは複数の界面活性剤、および１つまたは複数の非ホルムアルデヒド放出抗菌剤を含む水性洗浄剤組成物を提供する。好ましくは、洗浄剤組成物は、タンパク質分解酵素、１つまたは複数のアルカリ金属塩、および洗浄剤組成物のｐＨを約７〜約１２の範囲に保つための緩衝剤をさらに含む。洗浄剤組成物は、実質的にホルムアルデヒドを含まない。好ましい実施態様では、洗浄剤組成物は、１百万分率（ｐｐｍ）以下のホルムアルデヒド濃度を有する。

本明細書で使用する「実質的にホルムアルデヒドを含まない」という用語は、画定されたＨＰＬＣ分析方法（ＥＰＡメソッド８３１５Ａ）によって検定した場合、水性組成物のホルムアルデヒド濃度が１ｐｐｍ以下であると規定する環境保護庁（ＥＰＡ）のホルムアルデヒドを含まないという定義に、水性組成物のホルムアルデヒド濃度が適合することを意味する。

本発明の洗浄剤組成物に適する界面活性剤は、非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、またはこれらの組合せを含む。非イオン界面活性剤の適切な実施例としては、エトキシル化アルキルフェノール、エトキシル化アルキルアルコール、またはこれらの組合せが挙げられるが、これらだけに限らない。好ましくは、エトキシル化アルキルアルコールは、８〜１８個の炭素原子、および１０〜４０モルのエチレンオキシドを有する線形アルキル基を有し、エトキシル化アルキルフェノールは、６〜１０個の炭素原子、および４〜３０モルのエチレンオキシドを有する線形アルキル基または分枝アルキル基でよい。例示的な実施態様では、２つのエトキシル化ノニルフェノールの組合せが使用される。陰イオン界面活性剤の適切な例としては、エトキシル化アルキルフェノールリン酸エステル、エトキシル化アルキルリン酸エステル、およびエトキシル化アルキル硫酸エステルが挙げられるが、これらだけに限らない。好ましくは、エトキシル化アルキルフェノールリン酸エステルは、８〜１０個の炭素原子、および４〜３０モルのエチレンオキシドを有する線形アルキル基を有する。もう１つの例示的な実施態様では、エトキシル化ノニルフェノール、およびエトキシル化アルキルフェノールリン酸エステルの組合せが使用される。洗浄剤組成物中の界面活性剤の濃度は、約１ｇ／ｌ〜約３０ｇ／ｌの範囲でよい。

タンパク質分解酵素、つまりプロテアーゼは、タンパク質分解として公知のプロセスによって、タンパク質がより小さいペプチド画分およびアミノ酸に分割する際に触媒作用を及ぼす任意の酵素である。タンパク質分解酵素は、様々な量および起源、７〜１２の様々なｐＨ範囲の活性度を有するものが入手可能であり、本発明に使用することができる。適切なタンパク質分解酵素の例は、バチルスサブティリス、バチルスリケニホルミスの特定の菌株から得られるスブチリシンであり、たとえば、オランダ、デルフトのＧｅｎｅｎｃｏｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＮ．Ｖ．が市販するＭａｘａｔａｓｅ（商標）、デンマーク、コペンハーゲンのＮｏｖｏｚｙｍｅｓｌｎｄｕｓｔｒｉＡ／Ｓが市販するＡｌｃａｌａｓｅ（商標）がある。

特に適するのは、８〜１２のｐＨ範囲全体で最大活性度を有するバシラス属の菌株から得られるプロテアーゼであり、ＮｏｖｏｚｙｍｅｓｌｎｄｕｓｔｒｉＡ／ＳからＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）およびＳａｖｉｎａｓｅ（登録商標）という商標名で市販されている。上記および類似酵素の調製は、英国特許第１２４３７８５号に記載されている。市販されているその他のプロテアーゼとしては、Ｋａｚｕｓａｓｅ（商標）（日本の昭和電工株式会社から市販）、Ｏｐｔｉｍａｓｅ（商標）（西ドイツ、ハノーバーのＭｉｌｅｓＫａｌｉ−Ｃｈｅｍｉｅが市販）、およびＳｕｐｅｒａｓｅ（商標）（米国のＰｆｉｚｅｒが市販）が挙げられる。

洗浄剤組成物中のタンパク質分解酵素の濃度は、約０．１５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの範囲でよい。本明細書に記載する濃度は、洗浄剤組成物中の純酵素の量で表される。

酵素が保存中に変性することは、十分に周知されている。これまでに、多くの酵素安定化システムが開発され、酵素調整技術で十分に周知されている。１つまたは複数のアルカリ金属塩は、本発明の洗浄剤組成物中において、タンパク質分解酵素を安定化させるのに有効であることが実証されている。好ましくは、アルカリ金属ギ酸塩、またはアルカリ金属ハロゲン化物を使用するとよい。より好ましくは、アルカリ金属ギ酸塩およびアルカリ金属ハロゲン化物の組合せを使用する。実施例１に示す例示的な一実施態様では、ギ酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムが使用される。洗浄剤組成物中のアルカリ金属塩（単数または複数）の濃度は、約１ｇ／ｌ〜約１６ｇ／ｌの範囲でよい。

様々な無機または有機緩衝剤は、洗浄剤組成物のｐＨを維持するために使用することができる。適切な緩衝剤としては、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸、グリシルグリシン、グリシン、トリスヒドロキシメチルアミノエタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ）、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、３−（（トリス（ヒドロキシメチル）メチル）アミノ）プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、またはこれらの組合せが挙げられるが、これらだけに限らない。例示的な一実施態様では、トリスヒドロキシメチルアミノエタンが使用される。本発明の洗浄剤組成物のｐＨは、約７〜約１２、好ましくは約８〜約１０の範囲である。

洗浄剤組成物に使用される抗菌剤を適切に選択すると、試薬の保存寿命を保証し、血液分析器内における潜在的な生物体の増殖を減少させることもできる。上記のとおり、一般に使用されている抗菌剤の多くは、ホルムアルデヒド放出物質である。ホルムアルデヒド放出物質は、機器の排水中に含まれるホルムアルデヒドによる潜在的な環境汚染のため、本発明の洗浄剤組成物における抗菌剤として選択されない。非ホルムアルデヒド放出抗菌剤のみが、水性試薬の保存料、および血液分析器内における微生物増殖を抑制するための活性成分として使用される。本明細書で使用する「ホルムアルデヒド放出物質」という用語は、化学反応後に、ホルムアルデヒド分子を含むかまたは放出する任意の化学物質を意味する。本明細書で使用する「非ホルムアルデヒド放出抗菌剤」という用語は、抗菌機能を有するが、ホルムアルデヒドを含まないか、または抗菌剤を含む試薬生成物の保存時にホルムアルデヒドを放出しない化学物質を意味する。

市販の様々な非ホルムアルデヒド放出抗菌剤は、本発明の目的に使用することができる。こうした抗菌剤としては、イソチアゾロン化合物、フェノキシエタノール、２（２−フェノキシエトキシ）メチルジブロモグルタロニトリル、アミンアブダクト、２，２−ジブロモ−３−ニトリロプリオンアミド、またはこれらの組合せが挙げられるが、これらだけに限らない。イソチアゾロン化合物は、特に適する。イソチアゾロン化合物の適切な例としては、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オン、およびこれらの誘導体が挙げられる。本明細書では、「誘導体」という用語は、同じ化学基、たとえば−ＣＨ２−基の連続的な添加によって一定の間隔で異なるか、またはハロゲン化物官能基の中で互いに変化することによって異なる化合物である同族体を意味する。商品としては、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、および２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの混合物を含むＰｒｏｃｌｉｎ（登録商標）１５０が、ペンシルベニア州、フィラデルフィアのＲｏｈｍａｎｄＨａａｓＣｏｍｐａｎｙから入手することができる。１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オンは、ニュージャージー州、フローハムパークのＴｒｏｙＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからＭｅｒｇａｌ（登録商標）Ｋ１０Ｎ、およびドイツ、シュパイアーのＴｈｏｒｇｍｂｈからＡｃｔｉｃｉｄｅ（登録商標）Ｂ１０として市販されている。

好ましくは、２つ以上の非ホルムアルデヒド放出抗菌剤を一緒に使用すると、細菌、真菌、および酵母菌、特に自動化血液分析器システム内で頻繁に見られるものを含む広範な生物体の増殖を抑制する際に相乗効果が得られる。例示的な一実施態様では、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、および１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オンの組合せは、以下の実施例１に示すように、洗浄剤組成物に使用される。洗浄剤組成物中の抗菌剤の濃度は、約０．０３ｇ／ｌ〜約０．８ｇ／ｌの範囲でよい。

試薬生成物における抗菌剤の効果を確実にするために、一般に、先行技術で公知の標準的な手順を使用して、微生物負荷調査とも呼ばれる保存料効果試験を実施する。米国薬局方（ＵＳＰ）２６、第５１章によると、この調製は、以下が真である場合に効果的である：
細菌：７日間で、最初に計算した数から最低１．０Ｌｏｇ_１０減少し、１４日間で、最初の数から最低３．０Ｌｏｇ_１０減少し、２８日間で１４日間の数より増加しない。
酵母菌およびカビ：７日、１４日、および２８日で、最初に計算した数から増加しない。

実施例２は、２つの洗浄剤組成物、実施例１の処方Ａおよび処方Ｂの保存料効果試験を示す。表２に示すように、試験したすべての生物体の殖菌レベルは、早くも４８時間で処方Ａでは１０^５から１０^２（ＣＦＵ／ｍｌ）未満に減少し、殖菌レベルは、７、１４、および２８日の試験時には、１０^２（ＣＦＵ／ｍｌ）未満に維持された。表３にさらに示すように、処方Ｂの抗菌剤は、ＵＳＰ２６により要求される７日間より相当短い４８時間で試験したすべての生物体を排除するのに効果的だった。

ホルムアルデヒドの濃度は、ＥＰＡメソッド８３１５Ａに従って、高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を使用して分析する。洗浄剤組成物は、製造直後、または室温もしくは高温で保存した後、清潔な容器内にサンプリングする。サンプルは、公認分析試験所に送られ、ホルムアルデヒド分の分析が行われる。高温で保存されるか、または室温で相当期間にわたって保存される水性組成物によっては、ホルムアルデヒド濃度は、新たに製造された時のレベルより増加し得ることが分かっている。搬送時、または顧客の使用時、たとえば室温、最大４０℃の高温で保存する時に起り得る様々な保存状態を試験した。分析は、すべての条件下で、本発明の洗浄剤組成物が実質的にホルムアルデヒドを含まないことを示した。実施例３でさらに詳細に説明するとおり、洗浄剤組成物のホルムアルデヒド濃度は、新たに製造された時点で１ｐｐｍ未満であり、様々な保存条件下で１ｐｐｍ未満である。

さらに他の態様では、本発明は、本発明のホルムアルデヒドを含まない洗浄剤組成物を使用する血液分析器の洗浄または保守方法を提供する。本明細書で使用する「血液分析器」という用語は、血液サンプルの分析に使用される自動化または半自動化機器、たとえば血液分析装置、フローサイトメータ、および臨床化学分析器を意味する。一実施態様では、洗浄剤組成物は、自動化血液分析器によって、機器の各構成要素または部品に自動的に供給され、この機器は、血液分析時に、血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されたサンプル混合物に接触し、洗浄剤組成物は、ある期間にわたってこれらの機器構成要素と接触した状態を保ち、希釈剤または水ですすぎ洗いされて除去される。任意に、空気流または気泡で洗浄剤組成物を空気混合する方法を使用しても、構成要素の表面の物理的攪拌を増加させることができる。上記の洗浄プロセスでは、洗浄剤組成物は、溶解した血液サンプルからの破片、もしくはタンパク質沈殿物、または血液成分と血液分析に使用される試薬との間に形成される化学複合体から生成され、構成要素の表面に蓄積される沈殿物を除去する；したがって、洗浄剤組成物は、機器構成要素を清潔に保ち、これらの構成要素の表面における望ましくない蓄積を防止する。洗浄プロセスは、機器の使用または作業負荷に応じて、毎日１回以上行うことが可能である。

血液分析装置の場合、洗浄剤組成物は、通常、機器が通常どおり使用された後、一般に機器の一時停止時に、機器構成要素、たとえば、血液サンプルを調製するためのチャンバ、分析時にサンプル混合物と接触するフローセル、アパーチャ、および管類に供給される。機器構成要素と接触する洗浄剤組成物の接触時間、または培養時間は、自動化機器上で、一般に１０分〜１２時間までプログラムすることができ、さらに延長することができる。既存の様々な血液分析装置の場合、機器は、一般に一時停止時に、洗浄剤組成物で１回以上すすぎ洗いされ、洗浄剤組成物が再び供給され、チャンバおよび管類に一晩保持されてから、翌日の起動時にシステムからすすぎ洗いされて除去される。また、この洗浄プロセスは、機器が、１日３回すべてのシフトで使用された場合、臨床血液学研究所の各シフトの終わりに通常１回実施される。あるいは、自動化洗浄サイクルは、機器システム内にプログラムすることもでき、このシステムは、予め決められた数のサンプルを機器上で分析した後、自動的に洗浄プロセスを実施する。この洗浄剤組成物は、一般に、血液分析器における血液分析に使用される血液希釈剤を使用してすすぎ洗いされる。しかし、洗浄剤組成物は、水ですすぎ洗いしても良い。

この洗浄プロセスの頻度、洗浄剤組成物が機器構成要素と接触する時間は、機器メーカーが、機器の必要性に基づいて決定することができ、試験所が、機器の作業負荷に基づいて決定することもできる。

本発明の洗浄剤組成物および方法を使用すると、血液分析器、特に、一般に、数百の全血液サンプルを毎日分析するハイエンドな血液分析装置は、効果的に洗浄することができ、かなりの量の血液サンプルを機器上で分析した後に蓄積する沈殿物がない状態を保ことが可能であることが分かっている。実施例４は、本発明の洗浄剤組成物を使用して、ＣｏｕｌｔｅｒＬＨ７５０血液分析装置（カリフォルニア州、フラートンのＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．の製品）を保守する例を示す。示したとおり、ストレスを加えた機器作業環境で約１，１００の血液分析サイクルを２週間にわたって実施した後、アパーチャ周囲の表面に沈殿は見られなかった。アパーチャ周囲に加わる電圧により、これらの領域は、多数の血液サンプルを分析する時に蓄積する沈殿物を示すことが多いことが知られる。したがって、血液分析器を洗浄および保守する際の洗浄剤組成物の効果は、試験時にこの領域の表面を監視することによって効果的に試験することができる。

以下の例は、本発明を具体的に示すものであり、いかなる点でも、請求の範囲で定義する本発明の範囲を制限するものと解釈するべきではない。

（実施例１）
以下の酵素洗浄剤組成物を調製した。
処方Ａ
ＴＲＩＳ６．０５ｇ
１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オン＊０．０９８ｇ
５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン１７．０ｍｇ
２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン５．７０ｍｇ
ギ酸ナトリウム８．１６ｇ
塩化ナトリウム３．５ｇ
エトキシル化ノニルフェノール１．９８ｇ
エトキシル化分枝ノニルフェノール１．４０ｇ
タンパク質分解酵素４．９６×１０ ^−３ μｇ
ＰａｔｅｎｔＢｌｕｅＶＦ０．０１５ｇ
ｐＨ８．７０の脱イオン水により１．０リットルまでｑ．ａ．
ホルムアルデヒド濃度：０．４ｐｐｍ

処方Ｂ
ＴＲＩＳ６．０５ｇ
１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オン＊＊０．１０ｇ
５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン１７．０ｍｇ
２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン５．７０ｍｇ
ギ酸ナトリウム８．１６ｇ
塩化ナトリウム３．５ｇ
エトキシル化ノニルフェノール１．９８ｇ
エトキシル化分枝ノニルフェノール０．７０ｇ
エトキシル化アルキルリン酸エステル８．５ｇ
タンパク質分解酵素４．９６×１０ ^−３ μｇ
ＰａｔｅｎｔＢｌｕｅＶＦ０．０１５ｇ
ｐＨ８．７０の脱イオンにより１．０リットルまでｑ．ａ．
ホルムアルデヒド濃度：０．６ｐｐｍ。

５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンは、ペンシルバニア州、フィラデルフィアのＲｏｈｍａｎｄＨａｓｓからＰｒｏｃｌｉｎ（登録商標）１５０の商標の製品を調達した。１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オンは、ニュージャージー州、フローハムパークのＴｒｏｙＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからＭｅｒｇａｌ（登録商標）Ｋ１０Ｎ（＊）という商標の製品、およびドイツ、シュパイアーのＴｈｏｒｇｍｂｈからＡｃｔｉｃｉｄｅ（登録商標）Ｂ１０（＊＊）の商標の製品をそれぞれ調達した。エトキシル化アルキルリン酸エステルは、ミネソタ州、ブルーミントンのＭｕｒｎｃｏから調達した。エトキシル化ノニルフェノールは、ミズーリ州、セントルイスのＳｉｇｍａ／ＡｌｄｒｉｃｈからＮｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ−４０代替品の商標の製品を調達した。エトキシル化分枝ノニルフェノールは、ニュージャージー州、クランベリーのＲｈｏｎｅ−ＰｏｕｌｅｎｃからＩｇｅｐａｌＳＳ−８３７の商標の製品を調達した。プロテアーゼは、ノースキャロライナ州、フランクリントンのＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋＢｉｏｃｈｅｍＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．からＥｓｐｅｒａｓｅ（登録商標）８．０Ｌの商標の製品を調達した。

（実施例２）
実施例１の処方Ａについて保存料効果試験を実施し、洗浄剤組成物の抗菌効果を判定した。

保存料効果試験は、抗菌剤が、ＵＳＰ２６（米国薬局方２６、第５１章）「保存料効果試験」に記載されているレベルおよび条件以下で、細菌、酵母菌、および糸状菌細胞、および／または胞子の増殖を制限する能力の測定基準である。

洗浄剤組成物は、０．５ｍｌの洗浄剤組成物を栄養素培養液管内に植菌し、２０〜２５℃および３０〜３５℃で７日間にわたって培養することにより、初期の無菌状態をまず試験した。培養サンプル中に、生物体は観察されなかった。

洗浄剤組成物は、６つの細菌、２つの酵母菌、および３つの真菌を含む１１の生物体に対して試験した。生物体のうち５つは、ＵＳＰ２６に記載されており、６つの生物体は、生物体の増殖による汚染物質を有する血液分析装置から以前に単離された。生物体は、微生物学的な標準手順により調製し、約１×１０^７〜１×１０^８ＣＦＵ（コロニー形成単位）／ｍｌを含む初期懸濁液を得た。サンプル管中の１０ｍｌの洗浄剤組成物は、各々の生物体ごとに５０μｌの初期懸濁液を植菌し、洗浄剤組成物中の各々の生物体の濃度を１×１０^５〜１×１０^６ＣＦＵ／ｍｌにした。保存料効果試験に使用した殖菌レベルを表１に示す。

植菌したサンプル管は、ＵＳＰ２６に従って混合および培養した。植菌した洗浄剤組成物は、生理食塩水ブランク中で希釈し、標準のプレート計算方法を使用してプレートアウトした。プレートは、ＵＳＰ２６の微生物回復培養時間に従って培養した。培養後、コロニー形成単位を数えて報告した。

＊生物体は、生物体の増殖による汚染物質を有する血液分析装置から単離した。

植菌した洗浄剤組成物は、４８時間、７日、１４日、２１日、および２８日に評価した。４８時間、７日、１４日、および２８日の結果を表２に示す。示したとおり、試験したすべての生物体が増殖しないことは、処方Ａで観察された。殖菌レベルは、早くも４８時間で１０^２（ＣＦＵ／ｍｌ）未満まで減少し、２８日のテスト期間で１０^２（ＣＦＵ／ｍｌ）未満に維持されたことに注意する。この結果は、処方Ａの抗菌剤は、洗浄剤組成物を保存する際に有効だったことを示した。

実施例１の処方Ｂは、上記と同じ手順を使用して等価な殖菌レベルで、表１に示す生物体と同じパネルを使用して試験した。植菌した洗浄剤組成物を４８時間で評価し、結果を表３に示す。

示したとおり、試験したすべての生物体が増殖しないことは、処方Ｂで観察された。処方Ｂ中の抗菌剤は、試験したすべての生物体を４８時間以内に排除する上で効果的であり、これは、ＵＳＰ２６が要求している７日間より相当短い。

（実施例３）
実施例１の処方Ａは、フレッシュと呼ばれる洗浄剤組成物を製造した直後、および４５℃で１７日および３５日にわたって洗浄剤組成物を培養した後など、様々な時にサンプリングした。高温での培養は、加速試薬安定性試験条件を提供した。サンプルは、ニューヨーク州、アルバニーのＡｄｉｒｏｎｄａｃｋＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．に送り、分析を行った。ＡｄｉｒｏｎｄａｃｋＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．は、ＮａｔｉｏｎａｌＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｐｐｒｏｖａｌＰｒｏｇｒａｍ（米国環境試験所認定プログラム）によって認定されている。洗浄剤組成物のホルムアルデヒド濃度は、ＥＰＡメソッド８３１５Ａに記載されている手順に従って、ＨＬＰＣを使用して分析した。分析結果を表４に示す。

示したとおり、洗浄剤組成物が製造された時点、または加速安定性試験条件下で保存した後、ホルムアルデヒド濃度は１ｐｐｍ未満に維持した。

（実施例４）
ＣｏｕｌｔｅｒＬＨ７５０血液分析装置（カリフォルニア州、フラートンのＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．の製品）は、本発明の洗浄剤組成物の性能試験に使用した。ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．の既存の洗浄剤製品であり、機器と関連したＣｏｕｌｔｅｒＣｌｅｎｚ（登録商標）は、実施例１の処方Ａと置き換えた。１１日間の就業日における圧力試験を血液分析装置上で実施したが、これは、圧力が加わる試験作業環境をシミュレートするものであった。１１日の試験期間中、週末は２日だった。各日とも、機器の通常の起動サイクル後、機器のユーザに対して推奨されるように品質管理手順を実施し、この手順は、様々な血液対照製剤の試験を伴った。次に、７つのフレッシュな全血液サンプル、および７つの製造から２４時間後の全血液サンプルは、取扱説明書に記載されている標準の手順に従って機器上に流し、各々のサンプルを６回分析した。さらに、期限切れの血液対照は、機器上で１８回分析した。期限切れの血液対照は、一般に比較的粘性であり、洗浄に関する問題を生じる傾向があることが知られている。１１日間の各日について、一時停止サイクルを当日の終わりに実行した。５日間で、３０分の一時停止サイクルを実行し、さらに５日間で、１２時間の一時停止サイクルを実行し、１日で２４時間の一時停止サイクルを実行した。一時停止サイクル時、洗浄剤組成物は、機器の様々な領域に供給され、アパーチャ、サンプル混合チャンバ、および様々な管類に接触した。一時停止サイクルが終わるごとに、起動サイクルを実行し、ＬＨ７００シリーズの希釈剤（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．の製品）で、洗浄剤組成物を機器から洗い流した。

上記のように１１日間の圧力試験後、ＷＢＣ槽およびＲＢＣ槽のアパーチャをともに機器から取り外し、目視および立体鏡で検査した。タンパク質および破片による沈殿物の蓄積は、アパーチャの表面および周囲領域に観察されなかった。さらに、血液サンプルの分析時に、血液サンプル／試薬混合物と接触する管類およびその他の構成要素に、沈殿物は観察されなかった。

本発明について詳細に説明してきたが、これは、本発明の範囲を制限するものと解釈するべきではなく、本発明の好ましい実施態様を例示するものであると解釈するべきである。しかし、上記の明細書に記載され、添付の請求の範囲、およびその法的に等価なものに定義される本発明の精神および範囲内で、様々な修正および変更を加えることが可能であることは明らかであろう。

Claims

血液分析器において細菌、酵母菌および真菌の増殖を抑制するための洗浄剤組成物であって、
（ａ）界面活性剤であって、前記界面活性剤が１ｇ／ｌ〜３０ｇ／ｌの範囲の濃度である、界面活性剤、
（ｂ）イソチアゾロン化合物５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２ベンゾイソチアゾリン−３−オンおよび２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オンの組み合わせであって、前記イソチアゾロン化合物が、０．０３ｇ／ｌ〜０．８ｇ／ｌの範囲の濃度である、組み合わせ、
（ｃ）タンパク質分解酵素、
（ｄ）アルカリ金属塩、および
（ｅ）前記洗浄剤組成物のｐＨを８〜１０の範囲に維持するための緩衝剤
の水溶液を含み、
前記洗浄剤組成物が、１ｐｐｍ以下のホルムアルデヒド濃度を有し、
前記アルカリ金属塩がアルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ金属ギ酸塩、またはこれらの組合せであり、前記アルカリ金属塩が、１ｇ／ｌ〜１６ｇ／ｌの範囲の濃度を有する、
洗浄剤組成物。
前記界面活性剤が非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、またはこれらの組合せである、請求項１に記載の洗浄剤組成物。
前記タンパク質分解酵素がスブチリシンである、請求項１に記載の洗浄剤組成物。
前記スブチリシンが、０．１５μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌの範囲の濃度である、請求項３に記載の洗浄剤組成物。
血液分析器を洗浄する方法であって、
（ａ）請求項１に記載の前記洗浄剤組成物を血液分析器に供給するステップと、
（ｂ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器の各部分に供給するステップであって、前記各部分が、血液サンプルの分析時に、前記血液サンプルおよび１つまたは複数の試薬によって形成されるサンプル混合物と接触するステップと、
（ｃ）前記各部分を前記洗浄剤組成物に一定期間にわたって接触させるステップと、
（ｄ）前記洗浄剤組成物を前記血液分析器から洗い流すステップと
を含む方法。
前記緩衝剤が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸、グリシルグリシン、グリシン、トリスヒドロキシメチルアミノエタン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）、もしくは３−（（トリス（ヒドロキシメチル）メチル）アミノ）プロパンスルホン酸、またはこれらの組合せである、請求項１に記載の洗浄剤組成物。
前記界面活性剤が、２つの非イオン界面活性剤の組合せ、または非イオン界面活性剤と陰イオン界面活性剤との組合せである、請求項２に記載の洗浄剤組成物。
前記血液分析器が、血液分析装置、フローサイトメータ、または臨床化学分析器である、請求項５に記載の方法。