JP6310567B2 - アテローム動脈硬化映像化用組成物、及びそれを用いたアテローム動脈硬化の診断方法 - Google Patents

Description

本発明は、アテローム動脈硬化映像化用組成物、及びそれを用いたアテローム動脈硬化の診断方法に関する。

アテローム動脈硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）とは、血管の内側膜（内皮）にコレステロール沈着が起こり、血管内皮細胞の増殖が起こって、血管が狭くなるか、詰まって、その血管が末梢への血流障害を起こす疾患を言う。アテローム動脈硬化をより具体的に説明すれば、古い水道管がさびつき、異物が沈着して、直径が狭くなるように、主に血管の最も内側を覆っている内膜にコレステロールが沈着し、内皮細胞の増殖が起こった結果、粥腫が形成される血管疾患を言う。粥腫内部は、おかゆのように薄くなり、その周辺部位は、堅い線維性膜である硬化斑で取り囲まれるが、硬化斑が不安定になれば、破裂して血管内に血栓が生じる。また、粥腫内に出血が起こる場合、血管内部の直径が急激に狭くなるか、血管が詰まってしまい、その結果、末梢への血液循環に障害が生じる。

このようなアテローム動脈硬化の発生及び進行如何を確認するための方法としては、ＰＥＴ／ＣＴによる分子映像技法を利用して確認する方法がある。ＰＥＴ／ＣＴによる分子映像技法を利用して、アテローム動脈硬化の有無を診断するために、従来、Ｆｌｕｏｒｉｎｅ−１８ ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ（Ｆ−１８ ＦＤＧ）が活用されてきた。Ｆ−１８ ＦＤＧを用いたアテローム動脈硬化の診断原理は、泡沫細胞でのブドウ糖やＦＤＧの取り込み増加を利用して、アテローム動脈硬化の映像化を具現することである。

しかし、Ｆ−１８ ＦＤＧを用いてアテローム動脈硬化を映像化して診断する方法は、幾つかの問題点を有している。第１に、ＦＤＧがブドウ糖の誘導体であるために、血中ブドウ糖及び代謝関連ホルモンの影響を受け、診断のための一定の身体状態の調節に限界があり、結局は、アテローム動脈硬化の診断時に、その正確度が落ちるという問題点がある。また、この場合には、禁食や血糖調節などの条件を合わせなければならないために、糖尿などの高危険群では使用の制限がある。第２に、脳と心臓は、栄養素として血糖を用いるので、まさに脳と心臓は、アテローム動脈硬化が頻繁に発生する部位であるにも拘らず、Ｆ−１８ ＦＤＧを利用しにくいという問題点が存在する。第３に、Ｆ−１８ ＦＤＧを生産するためには、サイクロトロン（ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ）など高価の装備が必要であって、製造コストが急激に上昇するという問題点がある。

このような本発明と関連した先行技術文献としては、特許文献１と特許文献２とが開示されており、具体的に、特許文献１は、Ｆ−１８ ＦＤＧ陽電子放出断層撮映で悪性腫瘍と炎症病変とを区分して悪性腫瘍を選択的に診断する方法に関するものであり、特許文献２は、マンノシルアルブミンにＧａ−６８を標識した物質に関するものである。

大韓民国登録特許第１０−１３５１４１１号 大韓民国登録特許第１０−１０５５７００号

本発明は、前述した問題点を解決するために案出されたものであって、本発明の目的は、アテローム動脈硬化の診断の正確度を高め、糖尿のような疾病保有者にも、アテローム動脈硬化の診断が可能であり、脳と心臓とに発生したアテローム動脈硬化の診断が可能なアテローム動脈硬化映像化用組成物を提供するところにある。また、安い製造コストでアテローム動脈硬化映像化用組成物を提供し、それを用いてアテローム動脈硬化を診断する方法を提供するところにある。

前記課題を解決するための本発明の一特徴によるアテローム動脈硬化映像化用組成物は、二官能性キレート剤−マンノシルヒト血清アルブミン、二官能性キレート剤−マンノシルナノ粒子、二官能性キレート剤−マンノシルポリマーからなる群から選択される何れか１つに金属放射性同位元素を標識した放射性同位元素標識化合物を含む。

本発明のさらに他の特徴によるアテローム動脈硬化の診断方法は、本発明による前記アテローム動脈硬化映像化用組成物を用いる。

本発明によるアテローム動脈硬化映像化用組成物は、アテローム動脈硬化の診断の正確度に優れ、糖尿のような血糖代謝障害が伴われた疾病保有者を対象にしても、アテローム動脈硬化の診断を可能にし、脳と心臓とで発生したアテローム動脈硬化に対しても、効果的な診断が可能な組成物である。また、従来、アテローム動脈硬化の診断のための映像化用組成物に比べて、製造コストが安い。したがって、それを用いてアテローム動脈硬化の効果的な診断が可能となる。

実施例の場合の、^６８ＧａＣｌの標識効率をＴＬＣで測定した結果である。 同上 放射化学的純度を測定して安定性を検証した結果である。 ラットのマクロファージのマンノースレセプターへのＭＳＡ−ＲＩＴＣの特異的な結合の態様などを示した図面である。 ウサギに^６８Ｇａ−ＭＳＡ １ｍＣｉを静脈注射した後、陽電子放出断層撮映を施行した結果を示した図面である。 高コレステロール食餌によりアテローム動脈硬化の病症が発生したウサギ大動脈でアテローム動脈硬化部位にＲＩＴＣ標識ＭＳＡが検出されることを検証した写真などを示した図面である。 ^１８Ｆ−ＦＤＧの比較例と^６８Ｇａ−ＭＳＡの実施例の場合のアテローム動脈硬化映像化を比較した図面である。 同上 同上 同上 同上 実施例と比較例とで、脳実質でのＳＵＶを比較した図面である。 実施例の場合の、臨床での頸動脈の動脈硬化部位に対する適用可能性を測定したものであって、正常者と病巣がある心筋梗塞患者での^６８Ｇａ−ＭＳＡ映像及びＳＵＶなどを比較して測定した結果を示した図面である。 同上 同上

本発明者らは、診断の正確度に優れながら、糖尿のような病歴を有したヒトにも適用が可能であり、脳と心臓のような部位にも利用することができるアテローム動脈硬化映像化用組成物を開発するために鋭意研究した結果、本発明によるアテローム動脈硬化映像化用組成物を見出し、本発明を完成した。

一般的に、従来のアテローム動脈硬化の発生及び進行如何を診断するための映像化用組成物としては、Ｆ−１８ ＦＤＧ（^１８Ｆ−ＦＤＧ）が用いられてきた。しかし、このような従来技術は、ＦＤＧがブドウ糖の誘導体であるために、正確度が落ち、糖尿病のような病歴を有したヒトには適用しにくく、アテローム動脈硬化の発病から最も問題となる脳と心臓部位には適用しにくいという問題点があった。また、Ｆ−１８ ＦＤＧの製造コストが高いという問題点があった。

具体的に、本発明によるアテローム動脈硬化映像化用薬剤学的組成物は、二官能性キレート剤−マンノシルヒト血清アルブミン、二官能性キレート剤−マンノシルナノ粒子、二官能性キレート剤−マンノシルポリマーからなる群から選択される何れか１つに金属放射性同位元素を標識した放射性同位元素標識化合物を含む。

前記組成物のうち、二官能性キレート剤は、放射性同位元素と結合する作用を行い、マンノース基は、マンノース受容体と結合する作用を行い、ヒト血清アルブミンやナノ粒子またはポリマーは、いずれも二官能性キレート剤とマンノースとを結合する運搬支持体として作用する。前記組成物は、血液中によく分散されて血流に乗って血管内を循環することができるサイズである１〜１００ｎｍのサイズが望ましいが、二官能性キレート剤とマンノースは０．５ｎｍ程度のサイズしかならないので、ほとんどのサイズは、運搬支持体であるヒト血清アルブミンやナノ粒子またはポリマーが占める。ヒト血清アルブミンは、サイズが長軸が６ｎｍ、短縮が４ｎｍであるラグビーボール形状なので、理想的なサイズであり、ナノ粒子やポリマーは、サイズや材質が非常に多様であるので、適当なサイズと材質とを選択して用いることができる。

すなわち、本発明によるアテローム動脈硬化映像化用薬剤学的組成物は、マンノース受容体のリガンドであるマンノースにヒト血清アルブミン（ＭＳＡ：ｍａｎｎｏｓｙｌａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ａｌｂｕｍｉｎ）やナノ粒子またはポリマーを結合した後、これに、^６８Ｇａ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１８Ｆ、^１１Ｃ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、及び^１３１Ｉからなる群から選択される何れか１つ以上である放射性同位元素を付けて、それを検出することによって、アテローム動脈硬化の分子映像を具現し、それを通じて、アテローム動脈硬化の発病の有無及び進行過程を診断する。前記マンノース受容体は、アテローム動脈硬化内の泡沫細胞に存在する細胞膜受容体の１つである。

前記金属放射性同位元素は、望ましくは、^６８Ｇａ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１８Ｆ、^１１Ｃ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、及び^１３１Ｉからなる群から選択される何れか１つ以上であり、最も望ましくは、^６８Ｇａであり得る。

前記組成物は、代謝的制限がないために、禁食する必要がなく、代謝関連ホルモン状態と関連性がないために、糖尿などの病歴を有した対象者にも適用が可能である。また、脳や心臓部位に用いることができ、従来、Ｆ−１８ ＦＤＧが有した問題点を解消することができる。また、Ｆ−１８ ＦＤＧとは異なり、複雑で、高価な装備を必要とすることがなく、製造コストが安くなる。従来、Ｆ−１８ ＦＤＧの製造には、サイクロトロン（ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ）という高価な装備が使われた。しかし、本発明におけるように、金属放射性同位元素を^６８Ｇａとする場合には、ガリウムジェネレーター（Ｇａｌｉｕｍ ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）という小さな装備だけでも容易に製造が可能である。また、^６８Ｇａは、陽性子放出能に優れており、診断の際に、他の放射性同位元素を標識した場合や、Ｆ−１８ ＦＤＧを使って映像化した場合に比べて、より鮮明な映像の具現が可能であって、望ましい。

一方、前記金属放射性同位元素を^９９ｍＴｃまたは^１１１Ｉｎとする場合には、半減期が長くて、使用し易いという長所がある。また、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、及び^１３１Ｉの場合には、製造コストがより安くなるという長所がある。そして、^６８Ｇａ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１８Ｆ、^１１Ｃ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、及び^１３１Ｉのうち２以上の同位元素を同時に付けて使えば、それぞれの同位元素が有した効果が一体的に発現される。例えば、^６８Ｇａと^９９ｍＴｃとを同時に付けて使えば、診断の正確度を高めると共に、糖尿などの疾患を有した対象者にも適用が可能であり、脳や心臓部位にも適用が可能であり、半減期も長くなって、使用し易い。

前記二官能性キレート剤は、［１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）］、［１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）］、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）、Ｎ_２Ｓ_２、及びＮ_３Ｓから選択される何れか１つ以上であることが望ましく、特別な制限があるものではないが、最も望ましくは、ＮＯＴＡであり得る。このように、二官能性キレート剤としてＮＯＴＡを使えば、^６８Ｇａで特によく標識される効果があって、望ましい。もし、^９９ｍＴｃと標識しようとすれば、ＨＹＮＩＣ、Ｎ_２Ｓ_２、Ｎ_３Ｓを使い、^１１１Ｉｎと標識しようとすれば、ＤＯＴＡを使うことが望ましい。

本発明のさらに他の特徴によるアテローム動脈硬化の診断方法は、本発明による前記アテローム動脈硬化映像化用組成物を利用し、前記診断方法は、当業者に存在する公知の診断方法をいずれも含む。

実施例
以下、望ましい実施例を参照して、本発明を当業者が容易に実施できるように詳しく説明する。しかし、本発明は、さまざまな異なる形態として具現され、ここで説明する実施例に限定されるものではない。

実施例１：Ｇａ−６８（ ^６８ Ｇａ）標識のためのＮＯＴＡ−ＭＳＡの製造

＜段階１：フェニルマンノースが結合したヒト血清アルブミンの製造＞
０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）５ｍｌに２０ｍｇのヒト血清アルブミンを溶かした後、５．５ｍｇのα−Ｌ−マンノピラノシルフェニルイソチオシアネート（α−Ｌ−ｍａｎｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）を添加し、室温でよくかき混ぜながら、２０時間反応させた。その後、反応液を−７０℃に冷凍保管した。

＜段階２：ベンジルＮＯＴＡとフェニルマンノースが結合したヒト血清アルブミンの製造＞
段階１で製造した１ｍｌマンノシルヒト血清アルブミン（１３．６ｍｇ／ｍｌ）に１０ｍｇのｐ−ＳＣＮ−Ｂｚ−ＮＯＴＡを添加した後、室温で１時間反応させた。反応後、セファデックスＧ−２５カラムを用いてベンジルＮＯＴＡとフェニルマンノースが結合したヒト血清アルブミンを分離精製した。

実施例２：マンノース受容体映像化用キットの製造
１ｍｌベンジルＮＯＴＡとフェニルマンノースが結合したヒト血清アルブミン（１３．６ｍｇ／ｍｌ）の１ｍｌを、０．３ｍｌ酢酸ナトリウム緩衝溶液（０．５Ｍ、ｐＨ５．５）に添加した後、タンパク質１ｍｇに相当する量ずつバイアルに分注し、それを凍結乾燥して−７０℃で保管した。

実施例３：マンノース受容体映像化用キットを用いた ^６８ Ｇａの標識化合物の製造
実施例２のキットに、^６８Ｇｅ／^６８Ｇａ−発生器（Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ Ｃｏ．，Ｒｕｓｓｉａ）から製造された^６８ＧａＣｌの０．１Ｍ塩酸溶液１ｍｌをそれぞれ添加して、３７℃で反応しながら、１０分、３０分、１時間、２時間後に標識効率をＴＬＣで測定した。この際、固定相は、ＩＴＬＣ−ＳＧ（Ｇｅｌｍａｎ Ｃｏ．，ＵＳＡ）を用い、展開溶媒は、０．１Ｍクエン酸溶液を用いた。ＩＴＬＣプレート上の放射能分布は、ＴＬＣ−スキャナー（Ｂｉｏｓｃａｎ Ｃｏ．）を用いて測定した。標識された^６８Ｇａは、原点に残っており、標識されていない^６８Ｇａは、頂点に移動した（図１）。また、ｐＨ４〜５にて、３７℃で３０分間反応すれば、標識がほとんど終了することが分かった（図２）。このように標識した^６８Ｇａ−ＮＯＴＡ−ＭＳＡをヒト血清と混合して、３７℃でインキュベートした時の放射化学的純度を測定して安定性を検証した。この結果は、下記の図３に示した。図３から見られるように、血清中で３７℃でインキュベートした場合、２時間９９％以上の純度を保持し、実際の核医学的映像を得る際には、標識後、１時間以内にほとんど注射するので、十分に実用的に安定であることを確認することができた。

実施例４：マンノース受容体蛍光映像化のためのＲＩＴＣ−ＭＳＡ化合物の製造
まず、実施例１の段階１のような方法でＭＳＡを製造した。ＭＳＡ１００ｍｇと、０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．５）１３ｍＬに溶かした１６ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）のローダミンＢイソチオシアネート（ＲＩＴＣ：ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）とを、室温暗所で２０時間反応させた。生成されたＲＩＴＣ−ＭＳＡは、ＰＤ−１０カラムで生理食塩水を使って分離精製した後、凍結乾燥した。ＭＳＡ当たり結合したＲＩＴＣは、窒素レーザ（３３７ｎｍ）を装着したＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトロメーターで分子量を測定して計算した。そのために、線形モードで５００回のレーザを発射して測定した。あらゆるサンプルは、４回ずつ分析し、ＭＳＡとＲＩＴＣ−ＭＳＡの分子量は、その平均値を取った。

このような実施例の過程を通じてアテローム動脈硬化映像化用組成物を製造した。

また、このように製造されたアテローム動脈硬化映像化用組成物を用いてアテローム動脈硬化の病症の患者を対象にしてＰＥＴ／ＣＴ映像を撮影した。この際、Ｐｈｉｌｉｐｓ社の専用ワークステーションＥｘｔｅｎｄｅｄ Ｂｒｉｌｌｉａｎｃｅ Ｗｏｒｋｓｐａｃｅ Ｖ３．５を用いて、ＰＥＴ／ＣＴ映像を得た。具体的には、映像化は、韓国の高麗大九老病院で実施し、その際、放射能摂取が最大である部分が中央に来るようにそれぞれ大動脈での関心領域（ＲＯＩ：Ｒｅｇｉｏｎ Ｏｆ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）を取った。上行大動脈と下行大動脈の軸方向に隣接したスライスについて、この関心領域の最大標準摂取係数（ＳＵＶ：Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｕｐｔａｋｅ Ｖａｌｕｅ）と平均標準摂取係数とを求めた。この平均標準摂取係数は、組織の放射能を全体体重に対して投与した総放射能で割った値とした。内部観察者と外部観察者との間での平均標準摂取係数測定値の相関係数は、０．９よりも大きかった。

一方、下記の図４は、ラットのマクロファージのマンノースレセプターにＭＳＡ−ＲＩＴＣが特異的に結合することを示し（図４（ａ））、その結合が、マンノースレセプター遮断抗体と共にあらかじめインキュベートすることによって、阻止されたことを示す（図４（ｂ））。加えて、フローサイトメトリー分析で、マンノースレセプターへのＭＳＡの結合が、アンチ−ＣＤ２０６マンノースレセプター遮断抗体と共にインキュベートすることによって、含有量依存的に減少したことを示す（図４（ｃ））。

追加製造例：ｒＭＳＡキットを用いたＴｃ−９９ｍ−ＭＳＡ（ ^９９ｍ Ｔｃ−ＭＳＡ）の製造
前記実施例のキットに、Ｍｏ−９９／Ｔｃ−９９ｍ−ジェネレーター（三栄ユニテック）から製造された過テクネチウム酸塩（^９９ｍＴｃＯ４−）の生理食塩水溶液２ｍｌまたは５ｍｌをそれぞれ添加して、室温で１〜３０分間反応した。テクネチウムの放射性同位元素標識効率は、ＩＴＬＣ（Ｉｎｓｔａｎｔ Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）に少量の反応物を撮った後、生理食塩水で展開し、ＴＬＣ−スキャナーで放射能分布を測定することで、決定した。標識されたテクネチウムは、原点に残っており、他のテクネチウムは、いずれも溶媒の先端に沿って移動した。標識の結果、常に９９％以上の効率を示した。標識した^９９ｍＴｃ−ＭＳＡを室温にそのまま置いた時とヒト血清と混合して３７℃でインキュベートした時との経時的な放射化学的純度（％）により安定性を測定した。その結果は、下記の表１に示した。

前記表１に見られるように、室温に放置した場合と血清中で３７℃でインキュベートした場合、いずれも２０時間９０％以上の純度を保持し、血清と３７℃でインキュベートした場合、２４時間目に８８．７％に落ちるが、実際の核医学的映像を得る際には、標識後、１時間以内にほとんど注射するので、十分に実用的に安定であることを確認することができた。

比較例

実施例とは異ならせて、アテローム動脈硬化映像化用組成物として既存に使われるＦ−１８ ＦＤＧを、比較例とした。

試験例

試験例１：実施例の場合、ウサギでのアテローム動脈硬化分子映像
１２週齢の一般ウサギ（Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｒａｂｂｉｔｓ）１０匹を対象とした。それぞれ５匹をランダムに選定して２群に分け、１つのグループには正常の餌を食べさせ、残りの１つのグループには１％のコレステロールを含有した食餌を与えた。飼育は、標準化された条件（２１℃、湿度４１％〜６２％）で行い、規則的な昼／夜（１０／１４時間）周期にて、水と飼料に自在に接近可能にした。３ヶ月の食餌療法後に、麻酔状態で^６８Ｇａ−ＭＳＡ １ｍＣｉを静脈注射し、１０分後から１０分間全身を対象にして陽電子放出断層撮映を施行した（図５、図６）。翌日、ウサギに麻酔をかけた後、ＲＩＴＣ標識−ＭＳＡ（４２μｇ／０．１ｍＬ）またはＲＩＴＣを０．９％食塩水に混ぜてウサギの耳静脈から注射した。その１０分後にウサギを安楽死させ、大動脈を剥離して、−２０℃に保管した。大動脈切片は、常温で３０分間４％（ｖ／ｖ）緩衝ホルマリン液で固定し、冷ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄後、ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｕｔｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ（ＯＣＴ ｃｏｍｐｏｕｎｄ，Ｓａｋｕｒａ，Ｔｏｋｙｏ）に包埋し、組織透過のために１日経過後、−８０℃に保管した。１０ｍｍの厚さに切片化した組織薄片は、ポリ-Ｄ-リジンと共にスライドに置き、光を遮断して４５℃で乾かし、使用時まで常温で保管した。スライド組織片は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で２回洗浄して、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇ^ＴＭ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を用いてマウントした。蛍光映像は、ＩＸ８１−ＺＤＣ ｆｏｃｕｓ ｄｒｉｆｔ ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）で励起波長と蛍光波長とをそれぞれ５４７ｎｍ及び５７２ｎｍで観察した（図６）。

図５（ａ）は、正常な餌を食べさせたウサギの^６８Ｇａ−ＭＳＡのＰＥＴ／ＣＴ映像であって、アテローム動脈硬化の病巣が観察されず、肝臓と骨髄などの組織に^６８Ｇａ−ＭＳＡの取り込みが増加することを確認することができた。また、図５（ｂ）は、コレステロールを食餌したウサギの^６８Ｇａ−ＭＳＡのＰＥＴ／ＣＴ映像であって、腹部の脊椎の前部でアテローム硬化の病巣が緑色で長く観察された。図５（ｃ）は、図５（ｂ）の動物でアテローム動脈硬化部位を拡大した写真であって、黄色の脊椎の前部に緑色のアテローム硬化の病巣部位が観察された。

図６（ｅ）は、コレステロールを摂取したウサギ大動脈のアテローム動脈硬化部位でＤＩＣ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｃｏｎｔｒａｓｔ）顕微鏡で観察したアテローム硬化組織である。また、図６（ｆ）は、同じ組織で共焦点蛍光顕微鏡により、ＤＡＰＩ−染色を用いたアテローム硬化の病巣の細胞核を観察したものであり、図６（ｇ）では、アテローム動脈硬化部位のＭＳＡで標識ＲＩＴＣの蛍光が観察されていることを確認し、図６（ｈ）では、同じアテローム動脈硬化組織に対してＭＳＡが標識されていない場合には、ＲＩＴＣを注射した場合であっても、蛍光顕微鏡によるＲＩＴＣの蛍光の観察が不可能であったことを確認し、図６（ｉ）は、これら写真をいずれも同時に融合して得た映像であって、マンノースレセプターへのＲＩＴＣ−ＭＳＡの特異的な結合を示す写真である。すなわち、ＲＩＴＣ標識ＭＳＡがアテローム硬化部位によく結合されることを確認することができた。

試験例２：実施例と比較例の場合、アテローム動脈硬化映像の比較
実施例と比較例との場合で、アテローム動脈硬化の診断映像の鮮明度を比較する実験を行った。実験の方法は、同じウサギに２日間隔で^６８Ｇａ−ＭＳＡと^１８Ｆ−ＦＤＧとをそれぞれ注射して比較する方法で行い、その結果は、図７、図８、及び図９に示した。

図７（ａ）は、正常な餌を食べさせたウサギの^１８Ｆ−ＦＤＧのＰＥＴ／ＣＴ映像であって、アテローム動脈硬化の病巣が観察されず、肝臓と骨髄などの組織に^１８Ｆ−ＦＤＧの取り込みが増加することを確認することができた。また、図７の（ｂ）は、コレステロールを食餌したウサギの^６８Ｇａ−ＭＳＡのＰＥＴ／ＣＴ映像であって、腹部の脊椎の前部でアテローム硬化の病巣が緑色で長く観察された。図７（ｃ）は、図７（ｂ）のような動物でアテローム動脈硬化部位を拡大した写真であって、灰色の脊椎の前部に緑色のアテローム硬化の病巣部位が観察された。

下記の図８から確認できるように、^１８Ｆ−ＦＤＧと^６８Ｇａ−ＭＳＡいずれもでアテローム動脈硬化の病巣を確認することができた。一方、取り込み増加に関し、^１８Ｆ−ＦＤＧを用いた比較例に比べ、^６８Ｇａ−ＭＳＡを用いた実施例のほうが、図９に示されるように、より優れた結果を示すことを確認することができた。より具体的に、下記の図９を見れば、下記の図９Ａでは、大動脈のアテローム動脈硬化の病巣のＳＵＶに対する、下大静脈のＳＵＶ値の比較値（ＴＢＲ：ｔａｒｇｅｔ−ｔｏ−ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｒａｔｉｏ）を示しており、図９Ｂでは、大動脈のアテローム動脈硬化の病巣のＳＵＶに対する、心臓のＳＵＶ値のＴＢＲを示しており、図９Ｃでは、大動脈のアテローム動脈硬化の病巣のＳＵＶに対する、脳実質のＳＵＶ値のＴＢＲを示している。このような図９の結果を総合した結果、比較例に比べて、実施例でより優れた結果を示すことが確認でき、実施例の場合が、比較例の場合よりもアテローム動脈硬化映像の鮮明度がさらに優れていることが確認できた。

一方、下記の表２は、脳組織のＳＵＶに対する、大動脈のアテローム動脈硬化部位のＳＵＶのＴＢＲ値を示す。これによると、実施例のＴＢＲが比較例のそれよりも高く表われていた。また、これに加えて、下記の図１０は、ＰＥＴにおける脳ＳＵＶの影響は、実施例の場合、比較例と比べて非常に低いものであったことを示す。一方、比較例の場合、脳血管障壁を通過して脳実質に^１８Ｆ−ＦＤＧが入り、それを通じて、脳実質内で^１８Ｆ−ＦＤＧ流入による代謝がなされ、結局は、アテローム動脈硬化の病巣によるものであるか、それとも^１８Ｆ−ＦＤＧ増加によるものであるかが正確に区別されず、脳組織では、アテローム動脈硬化の病巣の追跡に正しく利用しにくいことが示された。

試験例３：実施例の場合、臨床での適用如何の評価
実施例の場合、臨床において適用可能か否かを評価する実験を行った。その実験は、急性心筋梗塞患者群と正常対照群とを対象にして頸動脈部位のアテローム硬化部位の^６８Ｇａ−ＭＳＡ映像を比較するｐｈａｓｅ Ｉ臨床研究方法で行い、その結果は、下記の図１１、図１２、及び図１３に示した。下記の図１１は、急性心筋梗塞患者で超音波で確診された頸動脈部位のアテローム動脈硬化の病巣部位の^６８Ｇａ−ＭＳＡ映像を示した例であって、首部位の緑色のアテローム硬化部位がよく観察され、図１２は、頸動脈にアテローム硬化の病巣のない対照群での^６８Ｇａ−ＭＳＡ映像を示した例であって、何の異常部位が観察されないことを確認することができた。また、図１３から確認されるように、頸動脈にアテローム硬化のある心血管疾患者で正常対照群に比べて、^６８Ｇａ−ＭＳＡのＰＥＴ／ＣＴ映像で視覚的判断（ＰＥＴ＿ｖｉｓｕａｌ＿ｇｒａｄｅ）、ＳＶＵ（ＰＥＴ＿ＲＣＡ＿ｇｒａｄｅ）及びｔａｒｇｅｔ ＳＵＶ／ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ＳＵＶ ｒａｔｉｏ（ＰＥＴ＿ＲＣＡ＿ＴＢＲ）を用いた重症度診断方法いずれもでアテローム動脈硬化の病巣の映像を用いてアテローム動脈硬化の病巣の有無の判別が容易に確認することができ、実施例の場合、臨床でも適用可能なアテローム動脈硬化映像化用組成物であることを確認した。

以上、本発明の望ましい実施例について説明したが、本発明は、これに限定されるものではなく、本発明の技術思想範囲内でさまざまに変形して実施することが可能であり、これも、添付の特許請求の範囲に属するということは当然である。

Claims (6)

1. 二官能性キレート剤−マンノシルヒト血清アルブミンに放射性同位元素を標識した放射性同位元素標識化合物を含み、前記放射性同位元素は ^６８ Ｇａである、アテローム動脈硬化映像化用組成物。
2. アテローム動脈硬化の診断のためのものである、請求項１に記載のアテローム動脈硬化映像化用組成物。
3. 注射投与されるためのものである、請求項１又は２に記載のアテローム動脈硬化映像化用組成物。
4. ＰＥＴによる映像化のためのものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のアテローム動脈硬化映像化用組成物。
5. 前記二官能性キレート剤は、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）、Ｎ_２Ｓ_２、及びＮ_３Ｓから選択される何れか１つ以上であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のアテローム動脈硬化映像化用組成物。
6. 前記二官能性キレート剤は、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のアテローム動脈硬化映像化用組成物。