JP6310440B2 - 医薬製剤 - Google Patents
医薬製剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6310440B2 JP6310440B2 JP2015219480A JP2015219480A JP6310440B2 JP 6310440 B2 JP6310440 B2 JP 6310440B2 JP 2015219480 A JP2015219480 A JP 2015219480A JP 2015219480 A JP2015219480 A JP 2015219480A JP 6310440 B2 JP6310440 B2 JP 6310440B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hcg
- rhcg
- mol
- sialylation
- sialic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 108090000141 Sialyltransferases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000003838 Sialyltransferases Human genes 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 101100468640 Danio rerio rhcgl2 gene Proteins 0.000 description 88
- 101150053759 rhcg gene Proteins 0.000 description 88
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 55
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 53
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 52
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 36
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 27
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 27
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 25
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 20
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 20
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 15
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 12
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 11
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 11
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 7
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 6
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 6
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 5
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 5
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 4
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 4
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 3
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000023108 LH Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010011942 LH Receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HORYNJCIACQHGZ-BHVWUGLYSA-N 1-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-2,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]ethanone Chemical compound C(C)(=O)C1(O)[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO HORYNJCIACQHGZ-BHVWUGLYSA-N 0.000 description 2
- 102100029945 Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710083574 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 2
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 2
- 101000863864 Homo sapiens Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 2
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- MTDHILKWIRSIHB-UHFFFAOYSA-N (5-azaniumyl-3,4,6-trihydroxyoxan-2-yl)methyl sulfate Chemical compound NC1C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C(O)C1O MTDHILKWIRSIHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101001089087 Cladrastis kentukea Agglutinin-2 Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Polymers OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 108010082302 Human Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000003864 Human Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 102100038551 Peptide-N(4)-(N-acetyl-beta-glucosaminyl)asparagine amidase Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 241000208829 Sambucus Species 0.000 description 1
- 108010013180 Sambucus nigra lectins Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000001593 cAMP accumulation Effects 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960004407 chorionic gonadotrophin Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- -1 etc.) Substances 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 102000013361 fetuin Human genes 0.000 description 1
- 108060002885 fetuin Proteins 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000008217 follicular development Effects 0.000 description 1
- 108010081934 follitropin beta Proteins 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 229960002849 glucosamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 108040002068 peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl)asparagine amidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000008063 pharmaceutical solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 239000002745 poly(ortho ester) Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 125000005630 sialyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/24—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1081—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/99—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
よび絨毛性ゴナドトロピン(CG)が含まれる。
および排卵を支援する機能を果たす。hCGは、他の糖タンパク質ホルモン、LHおよびFSHにも共通する92個のアミノ酸から成るアルファ・サブユニットと、ホルモンの特異性を決定する145個のアミノ酸から成るベータ・サブユニットを含有する。各サブユニットは翻訳
後修飾により、複合糖質残基が付加される。アルファ・サブユニットは2つのN-結合型グリコシル化部位(52位および78位アミノ酸)を有し、ベータ・サブユニットは2つのN-結
合型グリコシル化部位(13位および30位のアミノ酸)および4つのO-結合型グリコシル化
部位(121位、127位、132位、および138位のアミノ酸)を有する。
する。組換え型hCG、Ovitrelle(Serono社)が利用可能である。これはチャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞で発現される。既知の組換えhCG製剤は、ヒト尿から生成されたhCGとは異なる薬物動態プロファイルを示す。ヒト尿から生成されたhCGの薬物動態プロファイルをより高い類似性で再現または模倣するhCG製剤が必要とされている。
の量の相違に関係する。個々のhCGアイソフォームは同一のアミノ酸配列を示すが、翻訳
後修飾される度合いが異なっている;特定のアイソフォームは糖鎖分枝構造が不均一であること、およびシアル酸(末端糖)の導入量が異なっていることを特徴とし、そのいずれも、特定のアイソフォームの生体活性に影響を与えると考えられる。
み合わせて含有しうる、多様な構造を有する。グリカンは以下のような更なる修飾も有しうる:コアのフコシル化、バイセクティング(bisecting)グルコサミン、アセチルラク
トサミン伸長鎖、部分的または完全なシアリル化、α2,3およびα2,6結合型シアリル化、およびガラクトースを置換するグルコサミンサルフェート。更に、グリカン構造の個々のグリコシル化部位の分布は異なっている。
ランスフェラーゼの種類を反映する。既存のrhCG製剤であるOvitrelleは、組換えチャイ
ニーズ・ハムスターの卵巣細胞(CHO細胞)由来のものである。CHO由来rhCGにおけるグリカン修飾の種類は、尿由来の天然型製剤で見られるものに比較して限られたものである。CHO由来rhCG中に見られる還元型グリカンが異なっている例として、バイセクティンググ
ルコサミンの欠如、並びにコアのフコシル化およびアセチルラクトサミン伸長鎖の含量低下が挙げられる。更に、CHO細胞はα2,3結合によらなければシアル酸を付加することができない(Kagawaら, 1988, Takeuchiら, 1988, Svenssonら, 1990)。これは、天然由来の
hCGがα2,3およびα2,6結合型シアル酸を混合して保有するグリカンを含有するのとは異
なっている。
量は、組換え製剤であるGonal-f(Serono社)およびPuregon(Oreganon社)に比較してかなり高い(Andersenら 2004)。FSHでは硫酸で修飾されて負に帯電したグリカンの含量が低いので、これはrFSH中に含有されるシアル酸のモル量が低いことを反映していると考えられる。天然型FSHに比較してシアル酸含量が低いことは市販FSH製剤の両方に共通する特徴であり、これは製造工程の限界を反映していると考えられる(BassettおよびDriebergen, 2005)。FSHの循環寿命は、種々の供与源からの物質について報告されている。これらの物質のいくつかは、分子全体の電荷(pIで表され、酸性度が高いほど負の電荷が高い)に基づいて分画が行われている。分子全体の電荷に寄与する主な要因は各FSH分子の総シ
アル酸含量である。例えば、rFSH(Oreganon社)のシアル酸含量は約8mol/molであり、尿由来FSHのシアル酸含量はこれより高い(de Leeuwら 1996)。ラットにおけるそれぞれの血漿クリアランス速度は0.34ml/分および0.14ml/分である(Ulloa-Aguirreら 2003)。組換えFSHサンプルを高pI画分および低pI画分に分離した別の例では、高pI(シアル酸含量
が低い)画分はインビボにおける有効性が低下しており、血漿中半減期はより短かった(D'Antonioら 1999)。出願人が得た知見では、FSHと同様、既知のCHO由来組換えhCG製剤
(例えばOvitrelle)でも、等電点(pI)が4未満である(酸性アイソフォームと見なされる)hCGの量は尿hCGより少なく、これも既知のrhCG製剤のシアル酸含量が尿hCGに比較し
て低いことを表している。
接比較することはできない。下垂体/血清/尿hCGはα2,3およびα2,6結合型シアル酸の
両方を含有し、前者が優位である。しかしながら、CHO細胞由来の組換え体はα2,3しか含有しない(Kagawara, 1988, Takeuchiら, 1988, Svenssonら, 1990)。すなわち、CHO系
を用いて発現させた組換えタンパク質は末端シアル酸結合のタイプがその天然型とは異なる。天然型製剤および現在使用されている組換え製剤では、後者の方が総シアル酸含量が低いことに加えて、この点が相違している。糖質部分は分子の薬理学的特性に寄与しうるため、これは医薬品用の生物学的製剤を製造する上で考慮すべき重要な点である。
にかかるrhCG(またはrhCG製剤)のシアル酸含量は、(タンパク質のモル数に対するシアル酸のモル数の比で)15 mol/molまたはそれ以上、例えば15 mol/molから25 mol/mol、例えば17 mol/molから24 mol/mol、例えば17.7 mol/molから23 mol/mol、例えば18 mol/molから22 mol/mol、例えば19 mol/molから21 mol/mol、例えば19 mol/molから20 mol/molであってもよい。本発明にかかるrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の10%以上がα2,3-シアリル化であってもよい。例えば、総シアリル化の45%から80%がα2,3-シアリル化であってもよく、総シアリル化の50%から70%がα2,3-シアリル化であってもよく、総シアリル化の55%から65%がα2,3-シアリル化であってもよい。例えば総シアリル化の65-85%がα2,3-シアリル化であってもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の
50%またはそれ未満がα2,6-シアリル化であってもよい。例えば総シアリル化の20-55%が
α2,6-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の30-50%がα2,6-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の35-45%がα2,6-シアリル化であってもよい。例えば総シアリル化の15-35%がα2,6-シアリル化であってもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の5%またはそれ未満がα2,8-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の0-4%、例えば0.1-4%がα2,8-シアリル化であってもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、α2,8-シアリル化を含有しなくてもよい。
酸の結合のタイプ(α2,3またはα2,6)は、hCGの生物学的クリアランスに劇的な影響を
与えうる。ヒト細胞系は、CHO細胞系とは異なり、α2,3およびα2,6結合型シアル酸の両
方を含有する組換えhCGを発現できる。
ェラーゼ活性によって生成される。これには、慣例的なCHO細胞で発現されるrhCGより優
れた点が2つある:1つは、2つのシアリルトランスフェラーゼの複合活性によって物質がより高度にシアリル化されることである;また2つめは、物質が天然型hCGとより高い
類似性を有することである。これは、CHO細胞由来の組換え産物(α2,3結合型シアル酸しか生成せず、シアル酸含量が低い)に比較して、生物学的により好適であると考えられる。
れは投与等に関して、重要な利点となり得る。更に、より「天然」であるか、またはより「ヒト」に近い製剤であること、ある意味では人工的であるが可能な限り「天然」であることは、治療を必要とする患者によってより好ましい。また、他の組換え製剤より天然型(例えばヒト尿)hCGに近い糖鎖(例えばグリカン)構造を有する組換えhCG製剤には、他の利点(例えば薬物動態学的利点)もあり得る。
較してより天然に近い卵巣刺激を行うことができる。
」または「rechCG」)(および/または組換えhCG製剤)を提供する。rhCGまたはrhCG製
剤は、任意にα2,8-シアリル化を更に含んでもよい。
18 mol/molから22 mol/mol、例えば19 mol/molから21 mol/mol、例えば19 mol/molから20
mol/molであってもよい。本発明のrhCGはヒト細胞系で生成または発現させてもよい。
総シアリル化の55%から65%の量のα2,3-シアリル化を含有してもよい。rhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の65%から85%、例えば総シアリル化の70%から80%、例えば総シアリル化の71%から79%の量のα2,3-シアリル化を含有してもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の50%またはそれ未満のα2,6-シアリル化を含有してもよい。例えば総シアリル化の45、40、30、20、10、5%、またはそれ未満がα2,6-シアリル化であってもよい。rhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の20%から55%、例えば総シアリル化の30-50%、例えば総シアリル化の35-45%の量のα2,6-シアリル化を含有してもよい。rhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の15%から35%、例えば総シアリル化の20%から30%、例えば総シアリル化の21%から29%の量のα2,6-シアリル化を含有してもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の5%またはそれ未満のα2,8-シアリル化を含有してもよい。例えば、総シアリル化の2.5%またはそれ未満がα2,8-シアリル化であってもよい。rhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の0%から4%、例えば総シアリル化の0.1から4%、例えば総シアリル化の0.5から3%、例えば総シアリル化の0.5から3%の量のα2,8-シアリル化を含有してもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)はα2,8-シアリル化を含有しなくてもよい。シアリル化は、hCGの糖鎖構造上に存在す
るシアル酸残基の量を表す。α2,3-シアリル化は(当該分野で知られるように)2,3位が
シアリル化されていることを意味し、α2,6-シアリル化は(当該分野で知られるように)2,6位がシアリル化されていることを意味する。従って、「総シアリル化のX%がα2,3-シアリル化であってもよい」とは、hCG中に存在するシアル酸残基総数のX%が2,3位でシア
リル化されていることを意味する。「総シアリル化のX%がα2,6-シアリル化である」と
は、hCG中に存在するシアル酸残基総数のX%が2,6位でシアリル化されていることを意味する。
の量)は、(タンパク質+糖鎖の質量ではなく、タンパク質の質量ベースで)6重量%ま
たはそれ以上(例えば6%から15%、例えば7%から13%、例えば8%から12%、例えば11
%から15%、例えば12%から14%)であってもよい。チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞で発現させた組換えhCGはα2,3-シアリル化のみを含有する。本発明のrhCGはヒト細胞系で生成または発現させることができる。これによって製造法が簡易(かつより効率的)になり得る。これは、例えば細胞増殖培地を操作または制御してシアリル化を維持することが、既知の方法に比較して重要ではないためである。また、この方法はより効率的でもあり得る。これは、既知のrhCG製剤生成の場合に比較して、生成される塩基性rhCGが少なく;より多くの酸性rhCGが生成され、塩基性hCGの分離/除去がさほど問題とならないためである。rhCGはPer.C6細胞系、Per.C6由来細胞系、または改変型Per.C6細胞系で生成または発現させてもよい。細胞系をα2,3-シアリルトランスフェラーゼを用いて改変してもよい。rhCGは、(細胞系の)内因性シアリルトランスフェラーゼ活性によって生成されたα2,6結合型シアル酸(α2,6-シアリル化)を含有してもよい。あるいは、または、更
に、細胞系をα2,6-シアリルトランスフェラーゼを用いて改変してもよい。
化)を含有してもよい。rhCGはα2,3-および/またはα2,6-シアリルトランスフェラーゼを用いて生成してもよい。
トラ-シリアル化グリカン構造を、例えば以下の相対量で含有してもよい:0.1-4%のモノ-シアリル化;35-45%のジ-シアリル化;0.5-8%のトリ-シアリル化;および0-1%のテトラ-
シアリル化(例えば実施例8Dに記載する帯電性グリカンのWAX分析に示すように)。好ましくは、本発明の組換えhCGはモノ(1S)、ジ(2S)、トリ(3S)、およびテトラ(4S)
シアリル化構造を含有する。好ましくは、シアリル化構造の相対量は以下である(1S:2S:3S:4S):0.2-1%:35-40%:2.5-7%:0.5-1%(例えば実施例8Dに記載する帯電性グリカン
のWAX分析に示すように)。
)を含有してもよい。あるいは、または、更に、細胞系をα2,6-シアリルトランスフェラーゼを用いて改変してもよい。本発明にかかるrhCG(またはrhCG製剤)のシアル酸含量は、(タンパク質のモル数に対するシアル酸のモル数の比で)15 mol/molまたはそれ以上、例えば15 mol/molから25 mol/mol、例えば17 mol/molから24 mol/mol、例えば17.7 mol/molから23 mol/mol、例えば18 mol/molから22 mol/mol、例えば19 mol/molから21 mol/mol、例えば19 mol/molから20 mol/molであってもよい。rhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の10%またはそれ以上がα2,3-シアリル化であってもよく、例えば、総シアリル化の45%から80%がα2,3-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の50%から70%がα2,3-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の55%から65%がα2,3-シアリル化であってもよい。例えば総シアリル化の65%から85%がα2,3-シアリル化であってもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の50%またはそれ未満がα2,6-シアリル化であってもよい。例えば総シアリル化の20-55%がα2,6-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の30-50%がα2,6-シアリル化であってもよく、例えば総シアリル化の35-45%がα2,6-シアリル化であってもよい。例えば総シアリル化の15-35%がα2,6-シアリル化であってもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、総シアリル化の5%ま
たはそれ未満のα2,8-シアリル化を含有してもよく、例えば総シアリル化の0-4%、例え
ば0.5-4%がα2,8-シアリル化であってもよい。本発明のrhCG(またはrhCG製剤)は、α2,8-シアリル化を含有しなくてもよい。
はLHを更に含有してもよい。
せた)組換えFSHであってもよい。組換えFSHの発現および精製の方法は当該分野で知られている。
、または子宮腔内授精(IUI)に使用するためのものであってもよい。医薬組成物を、例
えば既知のhCG製剤を使用する医学的適応に使用してもよい。また、本発明は、不妊症治
療のための、または不妊症治療のための薬剤を製造するための、本明細書に記載する(本発明の観点の)rhCGおよび/またはrhCG製剤の使用法を提供する。本発明の医薬組成物を調剤して、任意の薬剤投与経路(例えば経口、直腸、非経口、経皮(例えばパッチ法)、静脈内、筋肉内、皮下、胸骨内、膣内、腹腔内、局所(パウダー、軟膏、または滴下剤)のための既知の組成物、またはバッカルもしくは鼻腔内スプレーとしてもよい。一般的な組成物には医薬的に許容されるキャリアー、例えば水溶液、非毒性賦形剤(塩を含む)、保存剤、バッファーなど、特にRemington's Pharmaceutical Sciences(第15版、Matt Publishing Company, 1975, 1405-1412ページおよび1461-87ページ)およびnational formulary XIV(第14版、American Pharmaceutical Association, 1975)に掲載されているも
のがある。
含有される場合は)他の活性成分)の吸収を遅延させることが望まれる。これは、難水溶性の結晶または非結晶性物質の懸濁液を使用することによって行うことができる。この場合、hCGの吸収速度は溶解速度に依存し、溶解速度は結晶のサイズおよび形態に依存する
。あるいはまた、非経口投与されたhCG配合剤の吸収遅延を、hCG配合剤を油性賦形剤に溶解または懸濁することによって行う。
でhCG(および(含有される場合は)他の物質)のマイクロカプセル・マトリクスを形成
することによって行うことができる。hCGとポリマーの比率、および使用する特定ポリマ
ーの性質に基づいて、hCGの放出速度を制御できる。他の生分解性ポリマーの例として、
ポリビニルピロリドン、ポリ・オルトエステル、ポリ酸無水物などがある。また、デポー注射剤は、体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルションにhCGを封入さ
せることによって調製する。
固形の組成物であり、使用の直前にこれを滅菌水または他の滅菌注射用溶媒に溶解または分散させる)の導入によって行ってもよい。注射用製剤は任意の好適な容器、例えばバイアル、薬剤充填済み注射器、注射カートリッジなどに封入して提供してもよい。
版)参照。好ましい態様では、本発明の組成物を非経口投与のための組成物として提供する。非経口製剤の一般的な調製法は当該分野で知られており、また、REMINGTON; THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(上記。780-820ページ)に記載されている。非経口組成物は液体製剤として提供するか、または固形であって、投与の直前に滅菌注射用溶媒と混合してもよい。特に好ましい態様では、非経口組成物を投与ユニット形態で提供し、投与を容易にし、また投薬量を均一にしてもよい。
以下に、本発明について以下の実施例および添付の図面を用いてより詳細に記載する。
ヒトhCG
FiddesおよびGoodman (1979)に従い、hCGαポリペプチド遺伝子のコード領域を使用し
た。配列はAH007338として登録されており、構築の時点で、このタンパク質配列には他の変異体は存在しなかった。本明細書ではこの配列をSEQ ID 1と称する。
た。配列はNP_000728として登録されており、CGベータ3、CGベータ5、およびCGベータ7
のタンパク質配列と一致する。本明細書ではこの配列をSEQ ID 2と称する。
α2,3-シアリルトランスフェラーゼ: KitagawaおよびPaulson (1994)に従い、βガ
ラクトシドα2,3-シアリルトランスフェラーゼ4(α2,3-シアリルトランスフェラーゼ
、ST3GAL4)遺伝子のコード領域を使用した。この配列はL23767として登録されており、
本明細書ではSEQ ID 3と称する。
hCGαポリペプチドのコード配列(AH007338, SEQ ID 1)およびhCGβポリペプチドのコード配列(NP_000728, SEQ ID 2)をPCRで増幅した(プライマーはそれぞれ、CGa-fwお
よびCGa-rev、CGb-fwおよびCGb-revの組み合わせで使用)。
CGa-fw 5'-CCAGGATCCGCCACCATGGATTACTACAGAAAAATATGC-3'
CGa-rev 5'-GGATGGCTAGCTTAAGATTTGTGATAATAAC-3'
CGb-fw 5'-CCAGGCGCGCCACCATGGAGATGTTCCAGGGGCTGC -3'
CGb-rev 5'- CCGGGTTAACTTATTGTGGGAGGATCGGGG-3'
様に、hCGαDNAをBamHIおよびNheIで消化し、既にhCGβポリペプチドDNAを含有させた発
現ベクターのBamHI/NheI部位に挿入した。
αおよびβの両方を含有するベクターを含むもののうち20個を選択してシーケンシングを行った。シーケンシング用に選択したコロニーの全てがSEQ ID 1およびSEQ ID 2と一致する正しい配列を含有した。プラスミドphCG A+Bをトランスフェクションに使用した(図1)。
βガラクトシドα-2,3-シアリルトランスフェラーゼ4のコード配列(ST3、L23767、SEQ
ID 3)のPCR増幅を、プライマー、2,3STfwおよび2,3STrevを使用して行った。
2,3STfw 5'-CCAGGATCCGCCACCATGTGTCCTGCAGGCTGGAAGC-3'
2,3STrev 5'-TTTTTTTCTTAAGTCAGAAGGACGTGAGGTTCTTG-3'
耐性マーカーを保有するCMV駆動性哺乳動物細胞発現ベクターのBamHI/AflII部位に挿入
した。ベクターを上記のように増幅し、シーケンシングを行った。クローンpST3#1(図2)はSEQ ID 3と一致する正しい配列を含有し、これをトランスフェクションに使用した。
βガラクトサミドα-2,6-シアリルトランスフェラーゼ1のコード配列(ST6、NM_003032、SEQ ID 4)のPCR増幅を、プライマー、2,6STfwおよび2,6STrevを使用して行った。
2,6STfw 5'-CCAGGATCCGCCACCATGATTCACACCAACCTGAAG-3'
2,6STrev 5'-TTTTTTTCTTAAGTTAGCAGTGAATGGTCCGG-3'
カーを保有するCMV駆動性哺乳動物細胞発現ベクターのBamHI/AflII部位に挿入した。ベ
クターを上記のように増幅し、シーケンシングを行った。クローンpST6#11(図3)はSEQ
ID 4と一致する正しい配列を含有し、これをトランスフェクションに使用した。
クローンのトランスフェクション、単離、およびスクリーニング
hCGを生成するPer.C6クローンを作製するために、1つのプラスミドからhCGの両ポリペプチド鎖を発現させた(実施例1参照)。
した。合計389個のクローンを単離した。単離したクローンを選択培地中、70-80%の集密
度まで培養した。hCG選択的ELISAを用いて上清のhCGタンパク質含量を測定し、クローン
化した細胞系におけるhCG受容体の薬理活性をcAMP蓄積アッセイによって測定した。機能
性タンパク質を発現するクローン(118個)を24ウェル、6ウェル、およびT80フラスコに
順次、拡大培養した。
速度分析に供するクローンの選択を行った。十分な生産性およびクオリティーを有するクローンを選択し、シアリルトランスフェラーゼ操作に使用した。
クション、単離、およびスクリーニング
高度にシアリル化されたhCGを生成するPer.C6クローンを作製するために、既にhCGの両ポリペプチド鎖を発現することが確認されているPer.C6細胞(実施例4参照)において、別のプラスミド(実施例2参照)からα2,3-シアリルトランスフェラーゼを発現させた
。実施例4に記載するPER.C6(登録商標)細胞から作製したクローンについて、その特性(生産性、良好な増殖プロファイル、機能性タンパク質の生成、および生成されるシアリル化含有hCG)に基づく選択を行った。
する試験のためのクローン数は最終的に5個であった。α2,3-シアリルトランスフェラー
ゼ・クローンを懸濁条件で無血清培地に馴化させた。
換えhCG(Ovitrelle、Serono社)および親hCG Per.C6細胞系と比較した。代表的なサンプルを実施例および図に示す。
現により、hCGのみを発現する細胞に比較して、高レベルのシアリル化hCGが得られる。
上記のように作製したα、βヘテロダイマー(実施例4)はシアリル化のレベルが低く、非常に塩基性の高いIEFプロファイルを示した。上記(実施例5a)のように、Per.C6
細胞におけるhCGおよびα2,3-シアリルトランスフェラーゼの共発現により、hCGのみを発
現する細胞に比較して、高レベルのシアリル化hCGが得られる。
ルトランスフェラーゼ酵素遺伝子の2重トランスフェクションを行った。hCGベクター(
2元(α/β)発現ベクター、実施例1)およびα2,3-シアリルトランスフェラーゼをコードするベクター(実施例2)の共トランスフェクションにより、無血清条件下において細胞系を作製した。PER.C6(登録商標)細胞から作製したクローンについて、その特性(生産性、良好な増殖プロファイル、機能性タンパク質の生成、および生成されるシアリル化含有hCG)に基づく選択を行った。クローンを単離、拡大培養、およびアッセイした。
組換えhCG(Ovitrelle、Serono社)および親hCG Per.C6細胞系と比較した。代表的なサンプルを実施例および図に示す(実施例6、9、10、図4、および5参照)。クローンによって生成された組換えhCG(すなわち、本発明にかかる組換えhCG)は、α2,3-シアリルトランスフェラーゼ無しで発現させたhCGおよびOvitrelleと比較して、著しく向上したシアリル化を示す(すなわち平均して、多数のシアル酸を有するhCGアイソフォームがより
多い)(実施例6および8、図4参照)。
電気泳動は、電場による溶媒中での荷電分子の移動と定義される。電場による生体分子の移動度は電場の強度、分子の正味荷電、分子のサイズおよび形状、分子が移動する溶媒のイオン強度および特性に依存する。
法である。pIは、タンパク質が正味の荷電を有さず、電場を移動しないpHである。hCGア
イソフォームのシアル酸含量により各アイソフォームのpIがわずかに変化するため、これを用いて各クローンからのPer.C6 hCGアイソフォームを可視化することができる。
て分析した。Per.C6 hCGクローンからの細胞培養液を実施例4、5a、および5bに記載するように調製した。
)上、ネイティブ条件下、pH 3.0-7.0のグラジエント、両性電解質溶液(pH 3.0-7.0)中で行った。当該分野で知られる方法により、クマシーブルー染色を用いてタンパク質を可視化した。
、より多くのシアル酸分子を保有するhCGアイソフォームを生成するクローンを同定した
。図4に示すように、α2,3-シアリルトランスフェラーゼ操作したヒト細胞系由来組換えhCG(本発明の組成物)は、Ovitrelleに比較して、より酸性度の高いプロファイルを示す。
レクチンに基づくグリカン識別法を用いて、複合糖質の分析を行った。この方法によれ
ば、ニトロセルロースに結合した糖タンパク質および複合糖質を特性決定することができる。レクチンは特定の部分(例えばα2,3結合型シアル酸)を選択的に認識する。適用し
たレクチンはステロイド・ハプテンであるジゴキシゲニンとコンジュゲートし、これによって結合したレクチンの免疫学的検出が可能となる。
の説明書に従って使用し、シアル酸の分析を行った。セイヨウニワトコ凝集素(Sambucus
nigra agglutinin、SNA)との陽性反応は末端結合(2,6)シアル酸の存在を示す。イヌ
エンジュ凝集素(Maackia amurensis agglutinin II、MAA)との陽性反応は末端結合(α2,3)シアル酸の存在を示す。
有レベルが高く、α2,6シアル酸結合の含有レベルが低かった。標準物質であるOvitrelleはα2,3シアル酸結合しか含有しない。これは、チャイニーズ・ハムスター卵巣(CHO)細胞で生成された組換えタンパク質についての知見と一致している(Kagawaら, 1988, Takeuchiら, 1988, Svenssonら, 1990)。
。
シアル酸はタンパク質に結合した炭水化物であってモノサッカライドと見なされ、他のモノサッカライド(例えばガラクトース、マンノース、グルコサミン、ガラクトサミン、およびフコース)と化合して存在する。本発明の精製rhCG上の総シアル酸を、Stantonら
の方法に基づく方法を用いて測定した(J. Biochem. Biophys. Methods. 30 (1995), 37 - 48)。
α2,3-シアリルトランスフェラーゼで改変したPer.C6組換えhCG(例えば実施例5a、
実施例5b)の総シアル酸含量を測定したところ、(タンパク質のモル数に対するシアル酸のモル数の比で)15 mol/mol以上、例えば18 mol/mol以上、例えば19.1 mol/molであった。これはOvitrelle(総シアル酸含量 17.6 mol/mol)に匹敵する。
α2,3-シアリルトランスフェラーゼで改変したPer.C6組換えhCG(080019-19)(上記実施例5bの方法で調製したもの)の総シアル酸含量を測定したところ、(タンパク質のモル数に対するシアル酸のモル数の比で)20 mol/molであった。この場合も、これはOvitrelle(総シアル酸含量 17.6 mol/mol)を凌ぐものである。この事例(080019-19)について試験を行い、α2,3およびα2,6シアル酸の相対量を定量した(実施例8C)。
精製rhCG((080019-19)の例および実施例5で調製した他の2つの例)上のα2,3およびα2,6シアル酸の相対量(%)を、既知の方法、すなわち順相(NP-)HPLCを用いて測定した。
アリダーゼおよびα2-3シアリダーゼを用いて行った。その後、酵素消化したグリカンをNPカラムで再分離し、調製した標準物質を用いてNP-HPLCでO-グリカンを同定した。算出した相対%を以下の表に示す(SA=シアル酸)。
は35-45%の範囲(例えば41%)であった。
量
精製rhCG(実施例8Cで使用した3つのサンプル)から抽出したグリカン上のモノ-、ジ-、トリ-、およびテトラ-シアリル化構造の相対量(%)を既知の方法で測定した。
Fで一晩消化した。その後、N-グリカンを抽出および処理した。NP-HPLCおよびWAX−HPLC分析に用いるN-グリカンを、Royleらに詳述されているように、フルオロフォア2ABで標識した。
らの報告に従い、Fetuin N-グリカン標準物質を参照として行った。含有されるシアル酸
数に従ってグリカンを溶出した。全てのサンプルはモノ(1S)、ジ(2S)、トリ(3S)、およびテトラ(4S)シアリル化構造を含有した。シアリル化構造の相対量は以下の比率であった;1S:2S:3S:4S=0.1-4%:35-45%:0.5-8%:0-1%。
α2,3-シアリルトランスフェラーゼを用いて操作したPer.C6組換えhCGサンプル(例え
ば実施例5a、5b)の代謝クリアランス速度(MCR)を測定するために、意識のあるメ
ス・ラット(クローン毎に3検体)の尾静脈にrhCGをボーラス注射し(サンプルのELISA
定量(DRG社、EIA 1288)に基づき、1-10 μg/ラット)、時間=0とした。試験サンプル注射の1、2、4、8、12、24、および32時間後に、尾の先端部から血液サンプル(400μL)
を採取した。遠心分離によって血清を回収し、ELISA(DRG社、EIA 1288)によってhCG含
量のアッセイを行った。α2,3-シアリルトランスフェラーゼで操作したPer.C6 hCGサンプルのMCRは、半減期が標準物質と同程度であることを示した(図5)。図6は、α2,3-シ
アリルトランスフェラーゼで操作した他のhCGサンプルの半減期が標準物質と比較して向
上されることを示している(図6)。
hCGバイオアッセイを実施し、hCG特異的活性を測定した。活性の測定はUSP(USP Monographs:Chorionic Gonadotropin, USPC Official 8/1/09-11/30/09)に従い、Ovitrelleを標準物質として用いて行った。Ovitrelleの生体活性は26,000 IU/mgである(Curr Med Res Opin. 2005 Dec; 21(12): 1969 - 76)。許容限界(acceptance limit)は>21,000 IU hCG/mgである。α2,3-シアリルトランスフェラーゼで操作したヒト細胞系由来組換えhCG
サンプル(シアル酸含量 19.1 mol/mol、実施例8参照)の生体活性は27,477 IU hCG/mgであった。
無血清培地中で懸濁培養したPER.C6細胞において組換えhCGを生成させる方法を開発し
た。方法は以下に記載するが、いくつかのhCG生成PER.C6細胞系に適用される。
で培養した。継代の際は、細胞を無血清培地(Excell 525+4mM L-グルタミン)中に再懸濁し、0.3x106細胞/mlの密度とした。25mlの細胞懸濁液を250mlの振とうフラスコに採取
し、100rpm、37℃、5% CO2で振とう培養した。細胞密度が>1x106細胞/mlに達した後、細胞を継代して0.2または0.3x106 細胞/mlの密度とし、更に37℃、5% CO2、100rpmで振と
う培養した。
に、細胞は>107細胞/mlの密度まで増殖した。細胞生存率が低下し始めた後、培地を回収
した。細胞を1000rpmで5分間遠心分離し、上清を用いてhCGの定量および精製を行った。hCGの濃度をELISA(DRG社、EIA 1288)で測定した。
着クロマトグラフィー、および調製用ポリアクリルアミド電気泳動によって行った。
Andersen CY, Westergaard LG, and van Wely M. (2004). FSH isoform composition of commercial gonadotrophin preparations: a neglected aspect? Reprod Biomed Online.
9(2), 231-236.
Bassett RM, and Driebergen R. (2005). Continued improvements in the quality and
consistency of follitropin alfa, recombinant human FSH. Reprod Biomed Online. 10(2), 169-177.
D'Antonio M., Borrelli F. , Datola A., Bucci R. , Mascia M. , Polletta P., Piscitelli D., and Papoian R. (1999) Biological characterization of recombinant human
follicle stimulating hormone isoforms. Human Reproduction 14, 1160-1167
Fiddes, J. C. and Goodman, H. M. (1979) Isolation, cloning and sequence analysis
of the cDNA for the alpha-subunit of human chorionic gonadotropin. Nature, 281,
351-356.
Fiddes, J. C. and Goodman, H. M. (1980) The cDNA for the beta-subunit of human chorionic gonadotropin suggests evolution of a gene by readthrough into the 3'-untranslated region. Nature, 286, 684-387.
Kagawa Y, Takasaki S, Utsumi J, Hosoi K, Shimizu H, Kochibe N, and Kobata A. (1988). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of natural human interferon-beta 1 and recombinant human interferon-beta 1 produced by three different mammalian cells. J Biol Chem. 263(33), 17508-17515.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. (1951) Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 193(1), 265-75.
Lowry, PJ, McLean, C, Jones RL and Satgunasingam N. (1976) Purification of anterior pituitary and hypothalamic hormones Clin Pathol Suppl (Assoc Clin Pathol). 7, 16−21.
Royle L, Radcliffe CM, Dwek RA and Rudd PM (2006) Methods in Molecular Biology, ed I Brockhausen-Schutzbach (Humana Press), 347: Glycobiology protocols, 125-144.
Steelman SL, and Pohley FM. (1953) Assay of the follicle stimulating hormone based on the augmentation with human chorionic gonadotropin. Endocrinology. 53(6), 604-616.
Svensson EC, Soreghan B, and Paulson JC. (1990) Organization of the beta-galactoside alpha 2,6-sialyltransferase gene. Evidence for the transcriptional regulation of terminal glycosylation. J Biol Chem. 265(34):20863-20868.
Takeuchi M, Takasaki S, Miyazaki H, Kato T, Hoshi S, Kochibe N, and Kobata A (1988). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of human erythropoietins purified from urine and the culture medium of recombinant Chinese hamster ovary cells. J Biol Chem. 263(8), 3657-3663.
Ulloa-Aguirre A, Midgley AR Jr, Beitins IZ, and Padmanabhan V. (1995). Follicle-stimulating isohormones: characterization and physiological relevance. Endocr Rev.16(6), 765-787.
Ulloa-Aguirre A, Timossi C, Barrios-de-Tomasi J, Maldonado A, and Nayudu P. (2003). Impact of carbohydrate heterogeneity in function of follicle-stimulating hormone: studies derived from in vitro and in vivo models. Biol Reprod. 69(2), 379-389.
Claims (4)
- α2,3−およびα2,6−シアリル化を含有する組換えhCG(rhCG)を含む医薬組成物を製造する方法であって、ヒト細胞株で前記組換えhCGを生産する、または発現させる工程を含み、細胞株は、α2,3−シアリルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を導入することにより改変されている、方法。
- α2,3−およびα2,6−シアリル化を含有する組換えhCG(rhCG)を製造する方法であって、ヒト細胞株で前記組換えhCGを生産し、または発現させる工程を含み、細胞株は、α2,3−シアリルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を導入することにより改変されている、方法。
- 細胞株が、Per.C6(商標)細胞株である、請求項1または2に記載の方法。
- rhCGが内在性のシアリルトランスフェラーゼ活性によるα2,6−シアリル化を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP09252360 | 2009-10-05 | ||
EP09252360.4 | 2009-10-05 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012532657A Division JP6176924B2 (ja) | 2009-10-05 | 2010-10-04 | 医薬製剤 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017205012A Division JP6580104B2 (ja) | 2009-10-05 | 2017-10-24 | 医薬製剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016074680A JP2016074680A (ja) | 2016-05-12 |
JP6310440B2 true JP6310440B2 (ja) | 2018-04-11 |
Family
ID=41471027
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012532657A Active JP6176924B2 (ja) | 2009-10-05 | 2010-10-04 | 医薬製剤 |
JP2015219480A Active JP6310440B2 (ja) | 2009-10-05 | 2015-11-09 | 医薬製剤 |
JP2017205012A Active JP6580104B2 (ja) | 2009-10-05 | 2017-10-24 | 医薬製剤 |
JP2019154226A Active JP7292153B2 (ja) | 2009-10-05 | 2019-08-27 | 医薬製剤 |
JP2021114833A Active JP7196244B2 (ja) | 2009-10-05 | 2021-07-12 | 医薬製剤 |
JP2023025781A Pending JP2023075144A (ja) | 2009-10-05 | 2023-02-22 | 医薬製剤 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012532657A Active JP6176924B2 (ja) | 2009-10-05 | 2010-10-04 | 医薬製剤 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017205012A Active JP6580104B2 (ja) | 2009-10-05 | 2017-10-24 | 医薬製剤 |
JP2019154226A Active JP7292153B2 (ja) | 2009-10-05 | 2019-08-27 | 医薬製剤 |
JP2021114833A Active JP7196244B2 (ja) | 2009-10-05 | 2021-07-12 | 医薬製剤 |
JP2023025781A Pending JP2023075144A (ja) | 2009-10-05 | 2023-02-22 | 医薬製剤 |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8975226B2 (ja) |
EP (2) | EP2486051B1 (ja) |
JP (6) | JP6176924B2 (ja) |
KR (7) | KR102213154B1 (ja) |
CN (1) | CN107050434B (ja) |
AR (2) | AR079876A1 (ja) |
AU (1) | AU2010304922B2 (ja) |
BR (1) | BR112012007990A2 (ja) |
CA (1) | CA2776790A1 (ja) |
DK (1) | DK2486051T3 (ja) |
ES (1) | ES2798258T3 (ja) |
HR (1) | HRP20200941T1 (ja) |
HU (1) | HUE050793T2 (ja) |
IL (3) | IL218548A (ja) |
IN (1) | IN2012DN02073A (ja) |
JO (1) | JOP20200039A1 (ja) |
LT (1) | LT2486051T (ja) |
MX (1) | MX2012003951A (ja) |
PL (1) | PL2486051T3 (ja) |
PT (1) | PT2486051T (ja) |
RS (1) | RS60413B1 (ja) |
RU (2) | RU2588650C2 (ja) |
SI (1) | SI2486051T1 (ja) |
TW (2) | TWI532495B (ja) |
WO (1) | WO2011042688A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI488640B (zh) | 2008-04-16 | 2015-06-21 | Ferring Int Ct Sa | 藥學製劑 |
TWI532495B (zh) * | 2009-10-05 | 2016-05-11 | 菲瑞茵國際中心股份有限公司 | 藥學製劑 |
WO2012131306A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Ferring B.V. | Pharmaceutical preparation |
WO2012168680A1 (en) * | 2011-06-06 | 2012-12-13 | Ferring B.V. | Pharmaceutical preparation comprising recombinant fsh |
JO3092B1 (ar) * | 2011-08-08 | 2017-03-15 | Ferring Bv | مركب لتحفيز مسيطر عليه للمبيض |
AU2012340501A1 (en) * | 2011-12-19 | 2013-07-11 | Grifols, S.A. | Compositions, methods, and kits for preparing sialylated recombinant proteins |
JP6511685B2 (ja) | 2012-12-10 | 2019-05-15 | 生化学工業株式会社 | 新規組換えファクターc、その製造法、およびエンドトキシンの測定法 |
CN107429237B (zh) * | 2014-12-22 | 2021-09-28 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Cmp依赖性的唾液酸酶活性 |
KR102658666B1 (ko) * | 2015-04-24 | 2024-04-17 | 훼링 비.브이. | 고나도트로핀 생산 방법 |
ES2770860T3 (es) | 2015-06-26 | 2020-07-03 | Ferring Bv | Métodos de purificación y/o inactivación viral |
WO2019211153A1 (en) | 2018-04-30 | 2019-11-07 | Ferring B.V. | Composition for controlled ovarian stimulation |
MX2022009611A (es) * | 2020-02-05 | 2022-11-07 | Novartis Ag | Celula cho que expresa heterodimeros il-15. |
CN116199742A (zh) * | 2022-07-06 | 2023-06-02 | 华兰基因工程有限公司 | 一种重组人绒毛膜促性腺激素Fc融合蛋白制备方法 |
Family Cites Families (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4840896A (en) * | 1983-11-02 | 1989-06-20 | Integrated Genetics, Inc. | Heteropolymeric protein |
DK49987A (da) * | 1987-01-30 | 1988-07-31 | Nordisk Gentofte | Fremgangsmaade til behandling af infertilitet og middel til anvendelse ved fremgangsmaaden |
IT1206302B (it) | 1987-06-26 | 1989-04-14 | Serono Cesare Ist Ricerca | Ormone follicolo-stimolante urinario |
BR9510567A (pt) * | 1995-03-21 | 1998-06-23 | Applied Research Systems | Formulaçoes líquidas de hcg |
TW518235B (en) * | 1997-01-15 | 2003-01-21 | Akzo Nobel Nv | A gonadotropin-containing pharmaceutical composition with improved stability on prolong storage |
ZA985545B (en) | 1997-06-25 | 1999-04-01 | Applied Research Systems | Disulfide crosslinking glycoprotein hormone analogs and their preparation and use |
US6500627B1 (en) | 1998-02-03 | 2002-12-31 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods for predicting pregnancy outcome in a subject by HCG assay |
EP1176976B2 (en) * | 1999-05-07 | 2015-10-21 | Laboratoires Serono SA | Use of lh administered in mid- or late-follicular phase for the treatment of anovulatory women |
ES2307585T3 (es) | 2000-02-22 | 2008-12-01 | Laboratoires Serono Sa | Procedimiento para purificar hcg recombinante que tiene una bioactividad especifica. |
KR20040032954A (ko) | 2001-09-12 | 2004-04-17 | 어플라이드 리서치 시스템스 에이알에스 홀딩 엔.브이. | 과배란 유도에서 hCG의 용도 |
PL369606A1 (en) | 2001-10-22 | 2005-05-02 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Gonadotrophins for folliculogenesis |
CA2465007C (en) * | 2001-10-29 | 2012-01-17 | Crucell Holland B.V. | Methods and means for producing proteins with predetermined post-translational modifications |
AU2002224199A1 (en) * | 2001-10-29 | 2003-06-23 | Crucell Holland B.V. | Methods and means for producing proteins with predetermined post-translational modifications |
CN1374525A (zh) * | 2001-12-31 | 2002-10-16 | 陕西超英生物医学研究开发有限公司 | 一种抗体芯片、其制备技术及其检测方法 |
JP2006522151A (ja) * | 2003-04-01 | 2006-09-28 | アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ | 不妊症におけるホスホジエステラーゼ阻害剤 |
MXPA05010773A (es) * | 2003-04-09 | 2005-12-12 | Neose Technologies Inc | Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos. |
US20040248784A1 (en) * | 2003-06-03 | 2004-12-09 | Marco Filicori | Unitary combinations of FSH and hCG |
DK1654353T3 (da) * | 2003-08-18 | 2013-08-26 | Glycotope Gmbh | Tumorcellelinjerne nm-f9 (dsm acc2606) og nm-d4 (dsm acc2605) samt anvendelser deraf |
ATE476666T1 (de) * | 2004-02-04 | 2010-08-15 | Centre Nat Rech Scient | Verfahren zur identifizierung von glykoformspezifischen antikörpern |
CN103627670B (zh) * | 2004-02-13 | 2016-12-21 | 格莱克托普有限公司 | 高活性糖蛋白加工条件及其有效生产方法 |
KR20070110902A (ko) * | 2005-03-11 | 2007-11-20 | 프레제니우스 카비 도이치란트 게엠베하 | 비활성 출발 물질로부터 생물활성 당단백질의 생산 |
JP2009504985A (ja) | 2005-08-15 | 2009-02-05 | シーメンス ヴィディーオー オートモーティヴ コーポレイション | ディーゼル車排気への炭化水素計量弁 |
RU2309411C2 (ru) * | 2005-11-24 | 2007-10-27 | Ростовский НИИ акушерства и педиатрии МЗ РФ | Способ отбора пациенток с синдромом "пустых" фолликулов для проведения программы эко и пэ донорскими ооцитами |
KR100809945B1 (ko) * | 2006-02-01 | 2008-03-05 | 대한민국 | 인체장내정상세균총 특이반응 dna칩 및 이를 이용한인체장내정상세균총의 변화에 의한 인체 위해성의 평가방법 |
US9187532B2 (en) * | 2006-07-21 | 2015-11-17 | Novo Nordisk A/S | Glycosylation of peptides via O-linked glycosylation sequences |
JP2010505874A (ja) * | 2006-10-03 | 2010-02-25 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | ポリペプチドコンジュゲートの精製方法 |
TWI488640B (zh) * | 2008-04-16 | 2015-06-21 | Ferring Int Ct Sa | 藥學製劑 |
TWI532495B (zh) * | 2009-10-05 | 2016-05-11 | 菲瑞茵國際中心股份有限公司 | 藥學製劑 |
WO2012131306A1 (en) * | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Ferring B.V. | Pharmaceutical preparation |
JO3092B1 (ar) * | 2011-08-08 | 2017-03-15 | Ferring Bv | مركب لتحفيز مسيطر عليه للمبيض |
-
2010
- 2010-09-27 TW TW099132570A patent/TWI532495B/zh active
- 2010-09-27 TW TW104140348A patent/TWI604850B/zh active
- 2010-10-04 SI SI201032015T patent/SI2486051T1/sl unknown
- 2010-10-04 KR KR1020197016021A patent/KR102213154B1/ko active IP Right Grant
- 2010-10-04 HU HUE10763000A patent/HUE050793T2/hu unknown
- 2010-10-04 ES ES10763000T patent/ES2798258T3/es active Active
- 2010-10-04 LT LTEP10763000.6T patent/LT2486051T/lt unknown
- 2010-10-04 RU RU2012112907/10A patent/RU2588650C2/ru active
- 2010-10-04 PT PT107630006T patent/PT2486051T/pt unknown
- 2010-10-04 CN CN201610832288.8A patent/CN107050434B/zh active Active
- 2010-10-04 MX MX2012003951A patent/MX2012003951A/es active IP Right Grant
- 2010-10-04 RS RS20200698A patent/RS60413B1/sr unknown
- 2010-10-04 KR KR1020127008827A patent/KR101804479B1/ko active IP Right Grant
- 2010-10-04 BR BR112012007990A patent/BR112012007990A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2010-10-04 RU RU2016118236A patent/RU2724528C2/ru active
- 2010-10-04 KR KR1020177034392A patent/KR20170133531A/ko not_active IP Right Cessation
- 2010-10-04 US US13/500,274 patent/US8975226B2/en active Active
- 2010-10-04 JP JP2012532657A patent/JP6176924B2/ja active Active
- 2010-10-04 DK DK10763000.6T patent/DK2486051T3/da active
- 2010-10-04 EP EP10763000.6A patent/EP2486051B1/en active Active
- 2010-10-04 WO PCT/GB2010/001854 patent/WO2011042688A1/en active Application Filing
- 2010-10-04 AU AU2010304922A patent/AU2010304922B2/en active Active
- 2010-10-04 CA CA2776790A patent/CA2776790A1/en active Pending
- 2010-10-04 KR KR1020217037028A patent/KR102489143B1/ko active IP Right Grant
- 2010-10-04 PL PL10763000T patent/PL2486051T3/pl unknown
- 2010-10-04 KR KR1020237001308A patent/KR20230012104A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-10-04 IN IN2073DEN2012 patent/IN2012DN02073A/en unknown
- 2010-10-04 KR KR1020197007226A patent/KR101987982B1/ko active IP Right Grant
- 2010-10-04 KR KR1020217003233A patent/KR20210014767A/ko not_active IP Right Cessation
- 2010-10-04 EP EP19190372.3A patent/EP3611185A1/en active Pending
- 2010-10-05 AR ARP100103608A patent/AR079876A1/es not_active Application Discontinuation
-
2012
- 2012-03-08 IL IL218548A patent/IL218548A/en active IP Right Grant
-
2014
- 2014-05-21 US US14/283,904 patent/US9676835B2/en active Active
-
2015
- 2015-11-09 JP JP2015219480A patent/JP6310440B2/ja active Active
-
2017
- 2017-02-23 IL IL250733A patent/IL250733B/en active IP Right Grant
- 2017-05-03 US US15/586,010 patent/US10526390B2/en active Active
- 2017-10-24 JP JP2017205012A patent/JP6580104B2/ja active Active
-
2019
- 2019-06-20 IL IL267556A patent/IL267556A/en unknown
- 2019-08-27 JP JP2019154226A patent/JP7292153B2/ja active Active
- 2019-12-10 US US16/709,810 patent/US11292824B2/en active Active
-
2020
- 2020-02-17 JO JOP/2020/0039A patent/JOP20200039A1/ar unknown
- 2020-06-12 HR HRP20200941TT patent/HRP20200941T1/hr unknown
-
2021
- 2021-07-12 JP JP2021114833A patent/JP7196244B2/ja active Active
-
2022
- 2022-03-30 US US17/709,296 patent/US20220340634A1/en active Pending
- 2022-05-27 AR ARP220101408A patent/AR125991A2/es unknown
-
2023
- 2023-02-22 JP JP2023025781A patent/JP2023075144A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6580104B2 (ja) | 医薬製剤 | |
JP7316905B2 (ja) | アルファ2,3-およびアルファ2,6-シアリル化を含む組換えfsh | |
JP6336557B2 (ja) | 医薬製剤 | |
Class et al. | Patent application title: Pharmaceutical Preparation Comprising Recombinant HcG Inventors: Ian Cottingham (St. Prex, CH) Daniel Plaksin (St. Prex, CH) Richard Boyd White (San Diego, CA, US) Assignees: Ferring BV |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161122 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170221 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170222 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20170529 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170725 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171024 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180220 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180316 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6310440 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |