JP6280507B2 - キレート剤 - Google Patents

Description

本発明は、インビボイメージング用放射性医薬品に関するものであり、生体ターゲティング分子に連結した放射性金属の金属錯体を含む。本発明は、かかる放射性金属錯体及び放射性医薬品の調製に有用な新規四座配位ジアミンジオキシムキレート剤を提供する。本発明は、キレーターの放射性金属錯体及びその調製方法、並びに放射性医薬組成物、キット及びイメージング方法も提供する。

核医学で最も多用されている放射性核種は、テクネチウム−９９ｍ（^99mＴｃ；ｔ_1/2＝６．０時間、１４０ＫｅＶγ線放射）である。臨床的に認可されている^99mＴｃ−放射性医薬品の大半は灌流型薬剤（血流の画像診断）であるが、特定のバイオマーカーを標的とする単光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）用のイメージング剤の開発及び商品化に関する関心が増している。

こうした機会を開拓するには、放射性金属を取り込むためのテクネチウムのキレーターとして作用する配位子であって、生体分子のような様々なベクターに位置選択的に結合させることができるものが必要とされる。ベクターとは、インビボでの標的又は標的部位に材料を運ぶために用いられる媒体（vehicle）をいう。理想的には、配位子は、ベクターの生物学的特性を損なわずに、^99mＴｃを取り込むことができるものであるべきである。

ジアミンジオキシムは一群の公知のキレート剤であり、放射性金属^99mＴｃと錯体を形成することが判明している。

米国特許第４６１５８７６号には、これらのジアミンジオキシムキレーター、生体ターゲティング分子とのコンジュゲート、インビボ放射性医薬品イメージング用の^99mＴｃとの錯形成が開示されている。

配位子ＰｅｎｔＡＯは、Ｓ．Ｊｕｒｉｓｓｏｎ他［Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２６，３５７６−８２（１９８７）］に開示されており、長寿命放射性金属⁹⁹Ｔｃとの金属錯体は中性であり、Ｔｃ（Ｖ）ジオキソコア（すなわち、ＴｃＯ₂ ⁺）を含むことが示された。Ｊ−Ｍ Ｌｏ他［Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｎｓｔ，４４，１１３９−４６（１９９３）］には、ＰｅｎｔＡＯの合成及び^99mＴｃとの錯形成が記載されている。

米国特許第５６８８４８７号には、低酸素症をイメージングするための、ニトロイミダゾール系生体ターゲティング分子とのＣ_2-5アルキレン架橋を有するジアミンジオキシムのキレートコンジュゲートが開示されている。Ｃ１（オキシムメチル）位でのニトロイミダゾールの結合が記載されている。

国際公開第９５／０４５５２号には、ＢｎＡＯ及びＰｅｎｔＡＯのニトロイミダゾールコンジュゲートが開示されている。実施例には、Ｃ１（オキシムメチル）位での結合が示されている。

欧州特許出願公開第０７３８１５８号及び米国特許第７５９７８７５号には、すべて炭素からなる架橋を含む配位子が開示されており、図１（構造Ａ）に示す。配位子（Ａ）は、第一窒素を介して広範なベクターに結合させることができる。しかし、ジアミンジオキシム全般と同様に、最適な標識に約９〜１０のｐＨを要する。このｐＨは、多くの変性し易い生体分子には不適である。さらに、構造Ａの合成では、モノ、ジ及びトリ官能化生成物が生じ、それらから分取ＨＰＬＣによって所望のジ官能化キレートを単離しなければならない。米国特許第７０４９２８９号には、配位子（図１、構造Ｂ）が開示されており、第一窒素を介して広範なベクターとの結合に適している。これは、すべて炭素からなる骨格（構造Ａ）よりも、合成上アクセスし易い。ただし、米国特許第７５９７８７５号に教示されているように、この配位子は温和な条件下では^99mＴｃと単一放射性標識種を形成しない。

同様に、米国特許第５６８８４８７号及び同第５９９７８４３号には、すべて炭素からなる架橋と、Ｃ１位に結合したニトロイミダゾールベクター（Ｘ）とを有する配位子（図１、構造Ｃ）が開示されている。この構造には、ベクターが多段階合成の初期に組み込まれるので、ベクターとの簡単で広範な結合が容易でないという制約がある。

欧州特許出願公開第０６２９６１７号には、以下の式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃの化合物が開示されている。

式中、Ｑは、−（Ｃ（ＲＲ））_m1−Ｙ¹−（Ｃ（ＲＲ））_m2−（Ｙ²−（Ｃ（ＲＲ））_m3）_n−基であり、
Ｙ¹及びＹ²は独立に−ＮＲ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ・−又は−Ｓｅ−であり、
ｎは０又は１から選択される整数であり、
ｍ１、ｍ２及びｍ３は、ｍ１とｍ２の合計が１以上であることを条件として、０〜４から独立に選択される整数であり
すべてのＲ及びＲ^*基は、Ｒ基を有する炭素原子が、２以上のヘテロ原子に直接結合していないことを条件として、独立に、
（ｉ）Ｒ²、
（ｉｉ）ハロゲン、
（ｉｉｉ）−ＯＲ²、
（ｉｖ）−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ²、
（ｖ）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ²）₂、
（ｖｉ）−Ｎ（Ｒ²）₂、
（ｖｉｉ）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ²、
（ｖｉｉｉ）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ²）₂、
（ｉｘ）−アルキル−Ｎ（Ｒ²）₂、
（ｘ）−アリール−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ²、
（ｘｉ）−アリール−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ²）₂、
（ｘｉｉ）−アリール−Ｎ（Ｒ²）₂、
（ｘｉｉｉ）アシル、
（ｘｉｖ）アシルオキシ、
（ｘｖ）ヘテロシクロ、
（ｘｖｉ）ヒドロキシアルキル、
（ｘｖｉｉ）−ＳＯ・−Ｒ²、
（ｘｖｉｉｉ）−アルキル−ＳＯ・−Ｒ²、
（ｘｉｘ）−（Ａ）_p−Ｒ³（式中、Ａは連結基であり、ｐは０又は正の整数であり、Ｒ³は生物活性基である。）、又は
（ｘｘ）２つのＲ基又はＲ基とＲ^*基とが、それらに結合した１以上の原子と一緒に、飽和又は不飽和、スピロ又は縮合、炭素環式又は複素環式環を形成するもので、非置換であっても、或いは上記（ｉ）〜（ｘｉｘ）の基から選択される１以上の基で置換されていてもよく、
Ｒ¹は、Ｈ、チオール保護基又は上述の−（Ａ）_p−Ｒ³基であり、
Ｒ²は独立にＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル又はアリールである。

新たな放射性医薬イメージング剤に対するニーズは未だに存在する。¹⁸Ｆ ＰＥＴイメージング剤のためのシクロトロンインフラがない又は限られている地域では、ＳＰＥＣＴ剤（例えば^99mＴｃ系のもの）が最良の選択肢である。^99mＴｃ剤には、⁹⁹Ｍｏ／^99mＴｃジェネレーターによって^99mＴｃ放射性同位体を簡便に入手できるという顕著な利点がある。^99mＴｃとキレート化できる配位子は周知であるが、有効な薬剤の開発に必要な基準を満たす配位子はわずかしかない。例えば、ある合成法では、^99mＴｃの取込みは塩基性条件下で達成されるが、これはペプチド／タンパク質に有害となるおそれがある。

したがって、わずかに塩基性乃至酸性ｐＨでのテクネチウムのキレート化に有効で、簡単に合成できるキレーターの代替アプローチを開発することができれば、ｐＨ制限なしに、ベクターをテクネチウム放射性標識できる技術を提供できる。さらに、高い有効比放射能を有する薬剤の臨床生産に適した単一工程で^99mＴｃの取込みができれば望ましい。そこで、短時間で高解像度・高感度画像を得ることができ、温和な水性条件下で生成させることのできるイメージング系及び方法に対するニーズが存在する。

米国特許第７５９７８７５号

本発明は、新規ジアミンジオキシムキレーターであって、以下の特徴を有するキレーターを提供する。
ｉ）金属錯形成したときに擬大環状分子を形成し、安定性を増大させる。
ｉｉ）Ｔｃ（Ｖ）の酸化状態で、対称又はジオキソコアを有するテクネチウム錯体を生じると予想される。かかる化学種は、⁹⁹Ｍｏ／^99mＴｃ放射性医薬用ジェネレーターからの^99mＴｃ−過テクネチウム酸塩から温和な放射性標識条件下で最も容易に利用できる。
ｉｉｉ）キレーターは、広範なｐＨ条件下でテクネチウムと強く結合し、アルカリ度の低い条件で従来技術のキレーターよりも高い放射性標識効率を呈する。これは、生体ターゲティング分子のキレーターコンジュゲートの放射性標識に重要であり、温和なアルカリ条件（ｐＨ８〜９）であっても生体分子には有害となりかねない。

^99mＴｃの従来技術のキレーターの構造である。 ^99mＴｃ−キレーター金属錯体の模式図である。 式Ｉａの「Ｎ−Ｘ−（Ｙ）_n−Ｚ」構造の具体例を示す図である。 ^99mＴｃ−化合物２のＨＰＬＣ分析を表すグラフである。 様々なｐＨ値での従来技術のキレーター化合物Ｃ（Ｘ＝Ｈ）（図１）と化合物２とを対比した競合実験のグラフである。

第１の態様では、本発明は、式Ｉのキレーターコンジュゲートを提供する。

式中、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は独立にＲ^a基であるか、或いは２つの隣接するＲ²及びＲ³基又は２つの隣接するＲ¹及びＲ²基が一緒に五員もしくは六員アリール、ヘテロアリール、脂環式環又は複素環を形成してもよく、
Ｒ^aは独立にＣ_1-6アルキル、Ｃ_2-4アルコキシアルキル、Ｃ_1-4ヒドロキシアルキル又はＣ_1-4フルオロアルキルであり、
Ｘは−ＣＯ−又は−ＳＯ₂−であり、
Ｙは、−（ＣＨ₂）_n−、−Ｃ₆Ｈ₄−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ）_n−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n又はこれらの組合せであり、
ｎは０〜１０の整数であり、
Ｚ¹はＢＴＭであって、ＢＴＭは生体ターゲティング部分である。

「キレーター」又は「キレート剤」という用語は、その通常の意味を有し、２個以上の金属ドナー原子が非配位骨格を介して結合しているとともに、かかる２個以上の金属ドナー原子による同一の金属中心への金属配位を生じるキレート環を与えるように配置されたものをいう。式（Ｉ）のキレーターは、すべて同一の金属に結合する、ジアミンジオキムドナーセットを有する四座配位子となるように設計される。

「コンジュゲート」という用語は、放射性薬化学分野における通常の意味を有し、ＢＴＭと共有結合しキレーターを意味する。

「生体ターゲティング部分」（ＢＴＭ）という用語は、投与後に、インビボで哺乳類の身体の特定の部位に選択的に取り込まれるか或いは局在化する化合物又はベクターを意味する。部位は、細胞、細胞群、臓器、腫瘍、又は近隣部位との相対的な病変であってもよい。かかる部位は、例えば、特定の病態に関係していることもあるし、臓器又は代謝過程がいかに機能しているかの指標となることもある。標的部位におけるベクターの集積は、近隣部位に比して、標的部位で異なる発現をするバイオマーカーとの結合及び／又は相互作用に起因するものであってもよい。バイオマーカーの代表的な具体例としては、限定されるわけではないが、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ−２）、脳チミジンキナーゼ１（ＴＫ−１）及び末梢型ベンゾジアゼピン受容体（ＰＢＲ）が挙げられる。

「含む」という用語は、本願全体を通してその通常の意味を有していて、薬剤又は組成物が、標記の本質的特徴又は成分を有していなければならないが、その他のものがさらに存在していてもよいことを意味する。「含む」という用語は、好ましい部分集合として、組成物が標記の成分を有していて他の特徴又は成分が存在しないことを意味する「から本質的になる」を包含する。

「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）を意味し、これらは天然のものでも純然たる合成品であってもよく、光学的に純粋つまり単一の鏡像異性体（従ってキラルなもの）であってもよいし、鏡像異性体の混合物であってもよい。本明細書では、アミノ酸の慣用三文字略語又は一文字略語を用いる。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。

「ペプチド」という用語は、以下で定義するように、２個以上のアミノ酸がペプチド結合（つまり、あるアミノ酸のアミンと別のアミノ酸のカルボキシルとを連結するアミド結合）で連結された化合物を意味する。

好ましい実施形態
式Ｉのキレート剤において、Ｘは好ましくは−ＳＯ₂−である。Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は好ましくは独立にＣ_1-6アルキル基、さらに好ましくはＣ_1-3アルキル基である。最も好ましくは、各Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³基はメチルである。

式Ｉにおいて、ｎは好ましくは０〜５であり、さらに好ましくは１〜４であり、最も好ましくは１である。

第１の態様のキレート剤コンジュゲートは好ましくは次の式Ｉａ又はＩｂのものである。

式中、Ｙ及びＺ¹は、式Ｉで定義した通りである。

式Ｉ、Ｉａ及びＩｂにおいて、Ｙは好ましくは−（ＣＨ₂）_n−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−又は−（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_nであり、さらに好ましくは−（ＣＨ₂）_n−又は−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−であり、最も好ましくは−（ＣＨ₂）_n−である。式Ｉａにおいて、Ｙは好ましくは−（ＣＨ₂）_n−であって、ｎは１である。

第１の態様のコンジュゲートは、好ましくは式（Ｉａ）のものである。

第１の態様のＢＴＭは、好ましくは、１個のアミノ酸、３〜１００残基のペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物である。

ＢＴＭは、合成品でも天然由来のものでもよいが、好ましくは合成品である。
「合成品」という用語は、その通常の意味を有しており、天然起源（例えば哺乳類の身体）から単離したものとは対照的に、人工のものを意味する。かかる化合物は、その製造及び不純物プロファイルを十分に制御できるという利点を有する。したがって、天然起源のモノクローナル抗体及びそのフラグメントは、本明細書で用いる「合成品」には属さない。

ＢＴＭの分子量は好ましくは１５０００ダルトン以下である。さらに好ましくは、分子量は２００〜１２０００ダルトン、最も好ましくは３００〜１００００ダルトンであり、４００〜９０００ダルトンが特に好ましい。ＢＴＭが非ペプチドである場合、ＢＴＭの分子量は好ましくは３０００ダルトン以下であり、さらに好ましくは２００〜２５００ダルトン、最も好ましくは３００〜２０００ダルトンであり、４００〜１５００ダルトンが特に好ましい。

ＢＴＭが、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物である場合、ＢＴＭは好ましくは非ペプチド、さらに好ましくは合成品である。「非ペプチド」という用語は、ペプチド結合（２つのアミノ酸残基間のアミド結合）を全く含まない化合物を意味する。好適な酵素基質、アンタゴニスト、アゴニスト又は阻害剤としては、グルコース及びグルコース類似体（例えばフルオロデオキシグルコースなど）、脂肪酸、又はエラスターゼ、アンジオテンシンＩＩ又はメタロプロテイナーゼ阻害剤が挙げられる。好ましい非ペプチド系アンジオテンシンＩＩアンタゴニストはロサルタンである。好適な合成受容体結合化合物としては、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲステロンその他のステロイドホルモン、ドーパミンＤ−１又はＤ−２受容体リガンド、及びトロパンのようなドーパミン輸送体リガンド、並びにセロトニン受容体用リガンドが挙げられる。

ＢＴＭは、最も好ましくは３〜１００残基のぺプチド又はペプチド類似体である。ＢＴＭがペプチドである場合、好ましくは４〜３０残基のペプチド、最も好ましくは５〜２８残基のペプチドである。ＢＴＭがペプチドである場合、好ましいペプチドとしては以下のものが挙げられる。
・ソマトスタチン、オクトレオチド及び類似体。
・ＳＴ受容体に結合するペプチド（ここで、ＳＴとは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）その他の微生物によって産生される耐熱性毒素をいう。）。
・ボンベシン。
・血管作用性小腸ペプチド。
・ニューロテンシン。
・ラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥ及びＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ。
・白血球集積部位をターゲティングするためのＮ−ホルミル走化性ペプチド。
・血小板第４因子（ＰＦ４）及びそのフラグメント。
・例えば血管形成をターゲティングし得るＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）含有ペプチド［Ｒ．Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ他，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ Ｊｕｎ；１５（６）：５４２−６］、［Ｅ．Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．１９９７ Ｍａｙ；５１（５）：１４１３−７］。
・α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのペプチドフラグメント。α₂−抗プラスミン、フィブロネクチン、β−カゼイン、フィブリノーゲン又はトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、以下の参考文献に見出すことができる。α₂−抗プラスミン前駆体［Ｍ．Ｔｏｎｅ他，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１０２，１０３３（１９８７）］、β−カゼイン［Ｌ．Ｈａｎｓｓｏｎ他，Ｇｅｎｅ，１３９，１９３（１９９４）］、フィブロネクチン［Ａ．Ｇｕｔｍａｎ他，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，２０７，１４５（１９９６）］、トロンボスポンジン１前駆体［Ｖ．Ｄｉｘｉｔ他，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８３，５４４９（１９８６）］、Ｒ．Ｆ．Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５３，１９５（１９８４）。
・アンジオテンシンＩＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（Ｅ．Ｃ．Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ他，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７９，Ｖｏｌ ２２，９，１０３８−１０４４）及び［Ｓａｒ，Ｉｌｅ］アンジオテンシンＩＩ：Ｓａｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ（Ｒ．Ｋ．Ｔｕｒｋｅｒ他，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７２，１７７，１２０３）のようなアンジオテンシンの基質又は阻害剤であるペプチド。
・アンジオテンシンＩ：Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ。
・ｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチド。

ＢＴＭがペプチドである場合、ペプチドの一端又は両端（好ましくは両端）に代謝阻害基（Ｍ^IG）が結合している。このようにペプチドの両端を保護することは、インビボイメージング用途で重要である。さもないと、急速な代謝が起こって、ＢＴＭペプチドに対する選択的結合親和性が失われてしまうと予想されるからである。「代謝阻害基（Ｍ^IG）」という用語は、アミノ末端又はカルボキシ末端でのＢＴＭペプチドの酵素（特にカルボキシペプチダーゼのようなペプチダーゼ）代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基はインビボ用途で特に重要であり、当業者に周知であり、好適には、ペプチドアミン末端に関してはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^G（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^GはＣ_1-6アルキル、Ｃ_3-10アリールから選択されるＲ^Gを有するか或いはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックを含む。）から選択される。好適なＰＥＧ基については、リンカー基（Ｌ¹）に関して後述する。好ましいＰＥＧ基は、式Ｂｉｏ１又はＢｉｏ２（後記）のバイオモディファイアーである。好ましいアミノ末端Ｍ^IG基はアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。

ペプチドカルボキシル末端に適した代謝阻害基としては、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成ブロックが挙げられる。ＢＴＭペプチドのカルボキシ末端アミノ酸残基に適したＭ^IG基は、アミノ酸残基の末端アミンをＣ_1-4アルキル基（好ましくはメチル基）でＮ−アルキル化したものである。好ましいＭ^IG基はカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましい基はカルボキサミドである。

好ましいＢＴＭペプチドは、ＲＧＤペプチド又はｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチドである。さらに好ましいＲＧＤペプチドは、以下のフラグメントを含む。

かかるＲＧＤペプチドとして最も好ましいのは、ＢＴＭが次の式（ＢＴＭ１）のペプチドであるものである。

式注、Ｘ⁷は−ＮＨ₂又はＰＥＧ１であり、ＰＥＧ１は次式のものである。

式中、ａは１〜１０の整数である。

式ＢＴＭ１において、Ｘ⁷は好ましくはＰＥＧ１であって、「ａ」は好ましくは１である。

好ましい官能化生体ターゲティング分子は、次の式ＢＴＭ２のものである。

ｃ−Ｍｅｔターゲティングペプチドは好ましくは次の式ＢＴＭ３の１８〜３０残基環状ペプチドである。

Ｚ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ² （ＢＴＭ３）
式中、ｃＭＢＰは、次の式（ＩＩＩ）のものであり、
−（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ’）_y （ＩＩＩ）
Ｑは、アミノ酸配列（配列番号１）：−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−であり、
（式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）
Ａ及びＡ’は、Ａ及びＡ’の少なくとも一方が存在してＬｙｓであることを条件として、独立にＣｙｓ以外のアミノ酸であり、
ｘ及びｙは独立に０〜１３の整数であって、［ｘ＋ｙ］＝１〜１３となるように選択され、
Ｚ¹はｃＭＢＰのＮ末端に結合していて、Ｈ又はＭ^IGであり、
Ｚ²はｃＭＢＰのＣ末端に結合していて、ＯＨ、ＯＢ^c（式中、Ｂ^cは生体適合性陽イオンである。）又はＭ^IG（式中、各Ｍ^IGは独立にｃＭＢＰペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基である。）であり、
ｃＭＢＰは、Ａ又はＡ’基のＬｙｓ残基で本発明のキレート剤と結合する。

さらに好ましくは、ｃＭＢＰペプチドは、次の式ＩＩＩＡのものである。

−（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ’）_z−Ｌｙｓ−
（ＩＩＩＡ）
式中、ｚは０〜１２の整数であって、［ｘ＋ｚ］＝０〜１２であり、ｃＭＢＰはＬｙｓ残基を１個しか含まない。

式ＩＩＩ及びＩＩＩＡにおいて、Ｑは好ましくは以下の配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列を含む。
Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶ （配列番号２）、
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ （配列番号３）。

式ＩＩ及びＩＩＡにおいて、Ｘ³は好ましくはＡｒｇである。

ｃＭＢＰぺプチドは、最も好ましくは、以下のアミノ酸配列（配列番号７）を有する。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。

式Ｉのキレーターは、適当なジアミンを以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれかでアルキル化し、
（ｉ）適当なクロロニトロソ誘導体Ｃｌ−ＣＲ¹Ｒ²−ＣＨ（ＮＯ）Ｒ³、
（ｉｉ）式Ｃｌ−ＣＲ¹Ｒ²Ｃ−Ｃ（＝ＮＯＨ）Ｒ³のα−クロロオキシム、
（ｉｉｉ）式Ｂｒ−ＣＲ¹Ｒ²−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ³のα−ブロモケトン、
次いで、ジアミンジケトン生成物を、以下のヒドロキシルアミンでジアミンオキシムに変換し、
（ｉｖ）式Ｒ¹Ｒ²Ｃ＝Ｃ（Ｒ³）ＮＯ₂のニトロ−オレフィン
次いで、ニトロ付加物を還元することによって調製することができる。

経路（ｉ）については、対応ジアミンジオキシムキレーターに関して、Ｓ．Ｊｕｒｉｓｓｏｎ他［Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２６，３５７６−８２（１９８７）］に記載されている。クロロニトロソ化合物は、例１に示すように、適当なアルケンをニトロシルクロライド（ＮＯＣｌ）で処理することによって得ることができる。クロロニトロソ化合物の合成に関する詳細は、Ｒａｍａｌｉｎｇａｍ他［Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２５（５）７４３−５２（１９９５）］；Ｇｌａｓｅｒ他［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６１（３），１０４７−１０４８（１９９６）］；Ｃｌａｐｐ他［Ｊ．Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ．，３６（８）１１６９−７０（１９７１）］；Ｓａｉｔｏ他［Ｓｈｉｚｅｎ Ｋａｇａｋｕ，４７，４１−９（１９９５）］及び、Ｓｃｈｕｌｚ［Ｚ．Ｃｈｅｍ．，２１（１１），４０４−４０５（１９８１）］に記載されている。ヒドロキシアルキル又はアルコキシアルキル置換基を有するクロロニトロソ化合物は、Ｓｕｎ他［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３７，１１７−１２３（２０１０）］に記載されている。

ニトロ−アルケン化学（調製及び還元）は、Ｂａｒｒｅｔｔ他［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，８６，７５１−７６２（１９８５）］に記載されている。α−クロロ−オキシムは、市販の対応α−クロロ−ケトン又はアルデヒドのオキシム化によって得ることができる。α−ブロモケトンは市販されている。

第２の態様では、本発明は、第１の態様のキレーターコンジュゲートの放射性金属錯体を提供する。第２の態様におけるキレーターコンジュゲートの好ましい態様は、第１の態様（上述）で説明した通りである。

第２の態様の放射性金属錯体は、好ましくは、インビボイメージング剤として有用である。「イメージング剤」という用語は、哺乳類の身体のイメージングに適した化合物を意味する。好ましくは、哺乳類はインタクトな哺乳類の生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。イメージング剤は、典型的には、非薬理学的量（つまり哺乳類被験体での生物学的作用が最小限となるように設計された用量）で投与される。好ましくは、イメージング剤は最小限の侵襲的方法で（つまり、医療専門技術の下で実施したときに哺乳類被験体に対して実質的な健康リスクを伴わずに）哺乳類の身体に投与される。かかる最小限の侵襲的投与は、好ましくは被験体の末梢静脈への静脈内投与であり、局所又は全身麻酔を必要としない。

本明細書で用いる「インビボイメージング」という用語は、哺乳類被験体の体内の様相の全体又は一部の画像を非侵襲的に生成する技術をいう。かかるイメージング技術として好ましいのは、ＳＰＥＣＴ（単光子放射断層撮影）及びＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）である。

第２の態様の放射性金属錯体において、放射性金属は好ましくは^99mＴｃ又は^94mＴｃから選択され、最も好ましくは^99mＴｃである。^99mＴｃはＳＰＥＣＴイメージングに使用され、^94mＴｃはＰＥＴイメージングに使用される。テクネチウム放射性金属錯体は、次式の構造のジオキソコアと中性Ｔｃ（Ｖ）錯体を形成すると予想される。

第２の態様の放射性金属錯体は、第３の態様（後述）に記載の通り調製することができる。

第３の態様では、本発明は、第２の態様の放射性金属錯体の調製方法を提供する。本方法は、適当な溶媒中での第１の態様のキレーターコンジュゲートと放射性金属の供給源との反応を含む。

第３の態様におけるキレーター及び金属錯体の好ましい態様は、各々、第１の態様（上述）及び第２の態様で説明した通りである。

適当な溶媒は、典型的には、本質的に水性であり、好ましくは、第４の態様（後述）で定義する生体適合性キャリア溶媒である。

第３の態様の放射性金属錯体は、適当なｐＨで、適当な酸化状態の放射性金属の溶液をキレーターと反応させることによって調製することができる。溶液は、適宜、配位子交換又はキレート交換を用いて、放射性金属と弱く錯化する配位子（例えば、^99mＴｃに対するグルコン酸塩又はクエン酸塩）を含んでいてもよい。かかる条件は、放射性金属イオンの加水分解のような不都合な副反応を抑制するのに有用なことが多い。放射性同位体が^99mＴｃである場合、通常の出発材料は、⁹⁹Ｍｏ／^99mＴｃジェネレーターから得られる過テクネチウム酸ナトリウムである。テクネチウムは、Ｔｃ（ＶＩＩ）酸化状態の^99mＴｃ−過テクネチウム酸塩として存在し、比較的反応性が低い。そのため、低い酸化状態Ｔｃ（Ｉ）乃至Ｔｃ（Ｖ）のテクネチウム錯体の調製には、錯形成を促進するため、亜ジチオン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ）のような薬学的に許容される還元剤の添加を必要とする。薬学的に許容される還元剤は、好ましくは第一スズ塩、最も好ましくは塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズである。

第４の態様では、本発明は、第２の態様の放射性金属錯体を、生体適合性キャリアと共に哺乳類への投与に適した形態で含んでなる放射性医薬組成物を提供する。

第４の態様におけるキレーター及び金属錯体の好ましい態様は、それぞれ、第１及び第２の態様（上述）で説明した通りである。

「哺乳類への投与に適した形態で」という記載は、無菌でパイロジェンフリーであり、毒性又は有害作用を生じる化合物を含まず、生体適合性ｐＨ（約ｐＨ４．０〜１０．５）で製剤化される組成物を意味する。かかる組成物は、インビボで塞栓を生じるおそれのある粒状物質を含んでおらず、生物学的流体（例えば、血液）と接触した際に沈殿が起こらないように製剤化される。かかる組成物は、生物学的に適合性の賦形剤しか含んでおらず、好ましくは等張性である。

「生体適合性キャリア」とは、イメージング剤を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるようなものである。生体適合性キャリアは好適には注射可能なキャリア液であり、例えば、パイロジェンフリーの注射用滅菌水、生理的食塩水のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性となるように調整するのに都合がよい）、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。好ましくは、生体適合性キャリアはパイロジェンフリーの注射用水、等張塩類溶液又はリン酸緩衝液である。

放射性医薬組成物は、無菌健全性及び／又は放射能の安全性並びに適宜、不活性ヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）を維持することができ、しかも、シリンジ又はカニューレで溶液の添加及び吸引もできる密封容器を備える適当なバイアル又は容器で供給される。かかる容器として好ましいのはセプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（典型的にはアルミニウム製）でクリンプしたものである。蓋は、無菌健全性を維持しながら皮下注射針で１回又は複数回穿刺するのに適している（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）。かかる容器は、蓋が所望により（例えばヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気のための）真空に耐え、酸素又は水蒸気のような外部の大気ガスを侵入させることなく、減圧のような圧力変化に耐えることができるという追加の利点も有する。

好ましい多用量容器は、患者の複数回分の用量を収容した単一バルクバイアルからなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の用量を臨床グレードのシリンジに吸引することができる。プレフィルドシリンジは患者１回分の用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨てその他の臨床用に適したシリンジである。本発明の医薬組成物は、好ましくは１人の患者に適した用量を有し、上述の適当なシリンジ又は容器で提供される。

医薬品組成物は、抗菌保存剤、ｐＨ調節剤、フィラー、可溶化剤又は重量オスモル濃度調整剤のような追加の賦形剤を適宜含んでいてもよい。「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生成する含酸素フリーラジカルのような反応性の高いフリーラジカルを捕捉することによって、酸化還元プロセスのような分解反応を防ぐ化合物をいう。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、パラアミノ安息香酸（すなわち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（すなわち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）並びにこれらと生体適合性陽イオンとの塩から選択される。「生体適合性陽イオン」（Ｂ^c）という用語は、イオン化した負荷電基と塩を形成する正荷電の対イオンを意味するが、正荷電対イオンも無毒性であって哺乳類の身体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの具体例としては、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンが挙げられる。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。

「可溶化剤」という用語は、組成物中に存在し、溶媒に対する溶解性を高める添加剤である。好ましい溶媒は水性媒質であり、可溶化剤は好ましくは水に対する溶解性を高める。かかる可溶化剤として好適なものとして、Ｃ_1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンが挙げられる。

「抗菌保存剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌保存剤は、使用量に応じて若干の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌保存剤の主な役割は、医薬組成物での微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌保存剤は、投与前に組成物の調製に使用されるキットの１種以上の成分における有害微生物の増殖の防止にも適宜使用できる。適当な抗菌保存剤としては、パラベン類（すなわちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌保存剤はパラベン類である。

「ｐＨ調節剤」という用語は、組成物のｐＨが、ヒト又は哺乳類への投与に関して許容範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）内に収まるようにするのに有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかる適当なｐＨ調節剤としては、トリシン、リン酸塩、クエン酸塩又はＴＲＩＳ（すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）のような薬学的に許容される緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容される塩基が挙げられる。組成物をキットの形態で用いる場合、キットのユーザーが多段階法の一部としてｐＨを調節できるようにｐＨ調節剤を適宜別のバイアル又は容器に入れて提供してもよい。

「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当なフィラーとしては、塩化ナトリウムのような無機塩並びに水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。

放射性医薬組成物は、所望の滅菌非発熱性生成物が得られるような無菌製造（クリーンルーム）条件下で調製し得る。重要な構成要素、特に関連する試薬並びにイメージング剤と接触する装置の部材（例えばバイアル）は無菌であるのが好ましい。構成要素及び試薬は、無菌濾過、例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（エチレンオキサイド）を用いた最終滅菌を始めとする当技術分野で公知の方法で滅菌することができる。一部の構成要素を予め滅菌しておけば、最小限の操作を実施すればよいので好ましい。ただし、予防策として、医薬品組成物の調製の最終段階として少なくとも無菌濾過段階を含めておくのが好ましい。

第５の態様では、本発明は、第４の態様の放射性医薬組成物を調製するためのキットであって、第１の態様のキレーターコンジュゲートを無菌固体形態で含んでいて、生体適合性キャリア中の放射性金属の無菌供給源で再構成すれば溶解が起こって所望の放射性医薬品組成物が得られるキットを提供する。

第５の態様におけるキレーター及び金属錯体の好ましい態様は、それぞれ、第１及び第２の態様（上述）で説明した通りである。

無菌固体形態は好ましくは凍結乾燥固体である。

第６の態様では、本発明は、次の式ＩＩの前駆体を提供する。

式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｘ及びＹは、第１の態様の式Ｉで定義した通りであり、Ｚは、Ｚ¹に結合させることのできる反応性基であって、カルボン酸、活性エステル、ホスホルアミダイト、イソシアネート、イソチオシアネート、アルデヒド、酸クロライド、スルホニルクロライド、アルキルハライド、アミン、ホスフィン、ホスフェート、アルコール又はチオールの１種以上を含むものであり、Ｚ¹は、第１の態様で定義したＢＴＭである。

第６の態様におけるＲ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｘ、Ｙ及びＺ¹の好ましい態様は、第１の態様（上述）で説明した通りである。

「活性エステル」という用語は、良好な脱離基となるように設計されたカルボン酸のエステル誘導体であって、アミンのような求核性化合物と容易に反応するものを意味する。好適な活性エステルの例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホ−スクシンイミジルエステル、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、パラ−ニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（すなわち、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。好ましい活性エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステルであり、特にＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。

好ましい前駆体は、以下の式ＩＩａ又はＩＩｂのものである。

式ＩＩ、ＩＩａ及びＩＩｂにおいて、Ｚは好ましくは、活性エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、アルデヒド、アミン又はチオールであり、さらに好ましくは、活性エステル、アルデヒド又はアミンである。

式ＩＩａ及びＩＩｂの好ましい前駆体は以下のものである。

本発明の二官能性キレート前駆体の合成は、本明細書の記載、さらにはＭ．Ｚｈｅｎｇ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅｓ，ＢｉｂｌｉｏＢａｚａａｒ ＬＬＣ（２０１１）；Ｒｕｚｚａ他［Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１２（５），４１６−４２７（２０１２）；及び、Ｌａｔｔｕａｄａ他，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．，４０（５），３０１９−３０４９（２０１１）の記載に従って実施できる。

第７の態様では、本発明は、第１の態様の式Ｉのキレーターコンジュゲートの調製方法であって、第６の態様の式ＩＩの前駆体と生体ターゲティング部分（Ｚ¹又はＢＴＭ）との反応を含む方法を提供する。

第７の態様におけるキレーターコンジュゲート及び前駆体の好ましい態様は、それぞれ、第１及び第６の態様で説明した通りである。第７の態様の方法は、本明細書の記載、さらには第６の態様（上述）で引用した参考文献並びにＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（２００８）の記載に従って実施できる。

第８の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体のイメージング方法であって、第２の態様の放射性金属錯体又は第４の態様の組成物が分布した身体の少なくとも一部分の画像をＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて生成させることを含んでおり、イメージング剤又は組成物が身体に予め投与されている、方法を提供する。

第８の態様におけるキレーターコンジュゲート、金属錯体及び放射性医薬組成物の好ましい態様は、それぞれ、第１、第２及び第４の態様（上述）で説明した通りである。

第８の態様の方法は、好ましくは、薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングするために繰り返し実施され、イメージングは、薬剤による治療の前後、及び任意には薬剤による治療中に実施される。

第９の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体の診断方法であって、第８の態様のイメージング方法を含む方法を提供する。

第９の態様におけるキレーター、金属錯体、放射性医薬組成物及びキットの好ましい態様は、それぞれ、第１、第２、第４及び第５の態様（上述）で説明した通りである。

その他の態様では、本発明は、ヒト又は動物の身体の診断方法における、第２の態様の放射性金属錯体、第４の態様の組成物又は第５の態様のキットの使用を提供する。

この態様におけるキレーター、金属錯体、放射性医薬組成物及びキットの好ましい態様は、それぞれ、第１、第２、第４及び第５の態様（上述）で説明した通りである。

本発明を、以下の実施例で例示する。反応量は表に記載した。大抵は、試薬を体積及び重量で記載したが、これは、試薬を体積によって分注したが、その量は重量によって決定したことを意味する。計算はすべて重量を基準にした。

例１は、本発明のキレーターの合成に有用なクロロニトロソアルカンの合成合成を例示し、例２は、クロロ−オキシムの合成を例示する。例３は、従来技術のキレーター化合物Ｃ（ＰｅｎｔＡＯとしても公知）の合成を例示する。例４は、本発明のキレーター（化合物２）の合成を例示する。例５は、化合物２の^99mＴｃ放射性標識を例示する。^99mＴｃの放射性標識に用いた共通の共配位子を使用した場合も使用しなかった場合も、良好な放射化学純度（ＲＣＰ）が達成され、コロイド形成は最小限であった（表７）。注目すべきは、ｐＨ７〜７．５で高いＲＣＰが認められたことであり、温和なｐＨ条件に対するニーズを解決する。使用した共配位子はメチレンジホスホン酸（ＭＤＰ）であった。実験結果は図４に示す。

例６は、様々なｐＨ値における化合物２と化合物Ｃ（従来技術）の競合放射性標識を示す。化合物Ｃの^99mＴｃ錯形成は、溶液のｐＨを約６〜約１０、さらに好ましくは約７〜約９に維持しながら達成できる。化合物２の放射性標識は、保持時間（分）対応答（ｍＶ）のＨＰＬＣ分析で例証されている通り、ｐＨ９及び７〜７．５において１／１（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ／Ｈ₂Ｏ中１５分で達成された。この結果は、ｐＨを下げたときに、化合物２が化合物Ｃ（従来技術）よりも優れた性能を有していることを示す。

例１：３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの調製
２−メチルブタ−２−エン（１４７ｍｌ、１．４ｍｏｌ）と亜硝酸イソアミル（１５６ｍｌ、１．１６ｍｏｌ）の混合物を、ドライアイス及びメタノール浴中で−３０℃に冷却し、オーバーヘッドエアスターラーで激しく攪拌し、温度が−２０℃未満に保たれるような速度で、濃塩酸（１４０ｍｌ、１．６８ｍｏｌ）を滴下した。かなりの発熱があり、過熱を防ぐための注意を要したのでこれには１時間を要した。添加終了時に生じたスラリーの粘度を下げるためにエタノール（１００ｍｌ）を添加し、反応混合物を−２０〜−１０℃でさらに２時間攪拌して反応を完了させた。沈殿を減圧濾過して回収し、４×３０ｍｌの冷（−２０℃）エタノール及び１００ｍｌの氷冷水で洗浄し、真空乾燥し、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンを白色固体として得た。エタノール濾液と洗液を一緒にして、水（２００ｍｌ）で希釈し、冷却して−１０℃でさらに１時間静置したところ、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンがさらに析出した。沈殿を、濾過によって回収し、最少量の水で洗浄し、真空乾燥して、総収量の３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（１１５ｇ、０．８５ｍｏｌ、７３％）、ＮＭＲによる純度９８％超を得た。

ＮＭＲ ¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃）、異性体混合物（異性体１；９０％）１．５ｄ，（２Ｈ，ＣＨ₃），１．６５ｄ，（４Ｈ，２×ＣＨ₃），５．８５，ｑ及び５．９５，ｑ，ｔｏｇｅｔｈｅｒ １Ｈ．（異性体２；１０％），１．７６ｓ，（６Ｈ，２×ＣＨ₃），２．０７（３Ｈ，ＣＨ₃）。

１−クロロ−１−（１−ニトロソエチル）シクロペンタンを、エチリデンシクロペンタンから同様の方法で調製した（収率５５％）［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３６（８）ｐ．１１６９−１１７０（１９７１）］。

１−クロロ−１−（１−ニトロソエチル）シクロヘキサンを、エチリデンシクロヘキサンから同様の方法で調製した（収率６３％）［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３６（８）ｐ．１１６９−１１７０（１９７１）］。

¹Ｈ（ＣＤＣｌ₃；２７０ ＭＨｚ），１．５２（３Ｈ，ｄ ＪＨＨ ７Ｈｚ，ＣＨ₃），１．４８−２．２０（１０Ｈ，ｍ，ＣＨ₂×５），５．９６（１Ｈ，ｑ，ＪＨＨ ７Ｈｚ，ＣＨ）。

１−クロロ−１−メチル−２−ニトロソ−シクロヘキサンを、１−メチル−１−シクロヘキセンから、同様の方法で調製した（収率５７％）［Ｉｎｄ Ｊ．Ｃｈｅｍ Ｓｅｃｔ Ｂ（１９７８）１６Ｂ（１０）９１７−２０、Ｚ．Ｃｈｅｍ．（１９８１），２１（１１）４０４−５、Ｊ．Ｐｒａｃｔ．Ｃｈｅｍ．（１９７８）３２０（３）４３３−５１］。

δＨ（ＣＤＣｌ₃；２７０ ＭＨｚ），１．４１−２．２８（１１Ｈ，ｍ，ＣＨ₃，ＣＨ₂×４），５．７２−５．７９（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）。

例２：３−クロロ−３−メチル−２−ブタノンオキシム２０の調製

２−メチル−２−ブテン２１を、亜硝酸イソアミルと混合し、ＭｅＯＨ／ドライアイス浴中で−７０℃に冷却した。温度を−３０〜−２０℃に保ちながら、濃ＨＣｌを５０分かけて添加した。添加の後半にＥｔＯＨ（３４ｍＬ）も添加したが、添加完了後も混合物はゲルに凝固したままであった。バッチを−２０〜−１０℃でさらに２時間攪拌した後、濾過した（濾過及び洗浄に約４０分を要した。）。濾過ケークを冷ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）、次いで氷冷水（５０ｍＬ）で洗浄し、９０分間放置して乾燥させた。湿重量は６６．４ｇであった。真空乾燥後、重量は３３．４ｇに減った（０．２４６モル、理論値の６２％）。プロトンＮＭＲから、生成物（この時点では粘稠な液体と固体との混合物）が、ｔｒａｎｓ−オキシム２０（４９％）、ニトロソ−互変異性体２２（４０％）及び３−ニトロソ−２−クロロブタン２３（１１％）であったことが認められた。冷蔵庫で保存すると、材料が凝固して、ｔｒａｎｓ−オキシム２０が得られた。

例３：３，３’−（１，５−ペンタンジイルジイミノ）ビス［３−メチル−２−ブタノン］ジオキシムＣ（Ｘ＝Ｈ）［従来技術］の調製

クロロオキシム２０（例２）をＭｅＯＨ（４０ｍＬ）に溶解して淡い緑色溶液を得た。溶液を氷／アセトン浴中で０℃未満に冷却した。白色固体が沈殿した。１，５−ジアミノペンタン２４を、温度を０℃未満に保ちながら（最初の発熱で１０℃）、約３０分にわたって添加した。添加を開始すると、混合物は橙褐色になり、添加の最後には、薄い暗紫色スラリーへと変化した。混合物を室温で一晩攪拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ／ＮＨ₃中でのＴＬＣ及びニンヒドリン染色による可視化によって、混合物が、非常に極性が高いもの（おそらくモノアルキル化物）と極性のないもの（おそらくジアルキル化物）との２種類の主成分からなることが分かった。２時間加熱還流したが、混合物の組成に変化はみられなかった。水（１００ｍＬ）を冷却した混合物に添加し、濾過によって０．９ｇの黄色固体を回収した。濾液のｐＨをｐＨ１２に調節したところ、粘稠な油が水層から分離した。油をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、有機層を濃縮して８ｇの紫色樹脂を得た。樹脂を、さらに室温で一晩真空乾燥して、６ｇの粘着性固体を得た。固体を水（７５ｍＬ）で粉砕し、濾過し、４ｇの濁った白色固体を得たが、これは依然として若干粘着性であった。固体を、還流ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、氷／水浴中で９０分間冷却した。白色固体を、濾過によって回収し、真空乾燥し、６３８ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ、理論値の７％）の所望の配位子を白色固体として得た。ＭＳ、¹Ｈ及び¹³Ｃ ＮＭＲによって構造を確認した。この手順では、ヒューニッヒ塩基を用いなかったが、添加してもよい。

例４：化合物２の合成

工程（ａ）：Ｎ，Ｎ−ビス［２−［（フェニルスルホニル）オキシ］エチル］−ベンゼンスルホンアミド１８。

２０ｍＬのＥｔ₂Ｏ中のＥｔ₃Ｎを、５００ｍＬフラスコ内の１００ｍＬ Ｅｔ₂Ｏ中の塩化トシルに添加した。これを攪拌し、氷浴で冷却した。ジエタノールアミンを、オーブン内で融解させ、１００ｍｌフラスコに移した。８０ｍＬのＣＨ₃ＣＮをアミンに添加して、溶解させ、この混合物をカニューレで、塩化トシルとＥｔ₃Ｎの混合物に添加して、白色懸濁液を形成した。反応の進行はＨＰＬＣでモニターした。反応は、窒素ガスの活発な気流下で溶媒を蒸発させることによって、５日後に完了した。ジエチルエーテルを残渣に添加して懸濁液を生じさせ、沈殿を濾過によって回収した。沈殿を、６０／４０ヘキサン／ＣＨ₂Ｃｌ₂で開始して１００％ＣＨ₂Ｃｌ₂へと移る重力シリカゲルカラムで精製した。

工程（ｂ）：Ｎ，Ｎ−ビス（２−アミノエチル）−４−メチル−ベンゼンスルホンアミド１９。

１０２ｍＬのＤＭＦ中の化合物１８（６．２５ｇ）及びＮａＮ₃（２．１１５ｇ）を、１００℃で２時間加熱した。この時点で、反応が完了していたことがＨＰＬＣで判明した。反応混合物を冷却し、１０％Ｋ₂ＣＯ₃水溶液（１００ｍＬ）を添加した。混合物をヘキサン（６０ｍＬ）で３回抽出したが、大半のアジドは中間相の固体として分離しており、これをＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解した。ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を添加し、溶液を１００ｍＬに濃縮した。Ｐｄ／Ｃ触媒（０．３６ｇ）を添加した。フラスコをＮ₂でフラッシュし、次いで排気し、（バルーンからの）Ｈ₂でフラッシュした。反応をＨ₂下で３時間攪拌した後、ＨＰＬＣで出発材料が残存していないことが認められた。反応混合物を濾過及び濃縮して１．７ｇの淡い黄色油を得た（理論値の６０％）。油を水に溶解し、次いでＣ−１８（１０ｇ、６０ｍＬ）でのクロマトグラフィーで精製した。カラムは最初にＣＨ₃ＣＮでフラッシュし、次いで水／０．０５％ＴＦＡでフラッシュした。粗溶液をカラムにロードし、水（３５ｍＬ）、次いで水／ＣＨ₃ＣＮ ９８：２（２０ｍＬ）、次いでＣＨ₃ＣＮの割合を毎回２％ずつ１６％まで増加させた２０ｍＬ画分で溶出した。画分２〜１１はＨＰＬＣ分析で純粋ジアミンを含んでおり、濃縮して１．３ｇの粘着性の白色固体を得た。真空乾燥後の重量は０．８７ｇに減った（理論値の３１％）。

工程（ｃ）：Ｎ，Ｎ−ビス（２−（（Ｅ）−３−（ヒドロキシイミノ）−２−メチルブタン−２−イルアミノ）エチル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド２。

トシルジアミン１９（８５０ｍｇ）をＥｔＯＨでスラリーとし、氷水浴中で０〜５℃に冷却した。合計３．４ｇのＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）及び３．６ｇの２０を約３時間かけて３回に分けて添加した。しかる後、ＨＰＬＣで、遊離ジアミンが残存していないことが認められた。反応混合物を濃縮し、水（４０ｍＬ）を添加し、溶液を１．５ｍＬの濃ＨＣｌで酸性化させた。水性層を２×５０ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。次いで、水性層のｐＨをＫ₂ＣＯ₃で１０に調節した（沈殿が生じた。）。水性層をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、濃縮してＭｅＯＨでスラリーとした。ジアルキル化生成物を、濾過によって白色固体として回収した。乾燥重量は５３５ｍｇ（理論値の３６％）であった。

例５：化合物２の放射性標識
（ｉ）配位子安定性試験：保存溶液（約３００μｇの配位子を４ｍＬの水（化合物２の場合には、４ｍＬのＤＭＳＯ／Ｈ₂Ｏ［１：１ ｖ／ｖ］）に溶解することによって調製）を、特別な注意を払わずに、室温でベンチトップ上に保存した。ＬＣ−ＭＳを２４時間毎に行ったところ、３日後も分解は認められなかった。
（ｉｉ）一般的標識手順（ｐＨ９）：０．２１ｍＬのｃｐｎ配位子（３）保存溶液（１６μｇ、７５μｇ／ｍＬ、水溶液）、２００μＬのＮａＯＡｃ（４ｍｇ、２０ｍｇ／ｍＬ、水溶液）、０．５ｍＬの重炭酸緩衝液ｐＨ９及び１３．２μＬのＭＤＰ（１３．２μｇ、１．０ｍｇ／ｍＬ、水溶液）を含む１０ｍＬバイアルに、１ｍＬのＮａ^99mＴｃＯ₄ ^-溶液及び１４．３μＬのＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（３６μｇ、２．５１ｍｇ／ｍＬ、水溶液）を逐次添加した。反応溶液のｐＨ値をｐＨ試験紙で測定したところ、ｐＨ９であった。反応混合物を室温で１５分間放置した。実験の最後に、ｐＨ値をｐＨ試験紙で再度測定した。反応溶液を、５ｍＬシリンジのチップ上のフィルター（０．２μｍナイロンメンブレンを含むＡｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）１３ｍｍシリンジフィルター、ＨＰＬＣ認定フィルター、Ｐａｌｌ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＮＹ）を通して濾過した。２ｍＬの水を、フィルターを通して押し出し、濾液を１つにまとめたもの、フィルター、元のバイアル、シリンジ及びニードルの放射能を測定した。濾液の一部はＨＰＬＣ分析に付した。
（ｉｉｉ）一般的標識手順（ｐＨ７〜７．５、ＮａＨＣＯ ₃ 緩衝液）：０．２１ｍＬのｃｐｎ配位子（３）保存溶液（１６μｇ、７５μｇ／ｍＬ、水溶液）、０．１５ｍＬの１００ｍＭ ＮａＨＣＯ₃溶液（ｐＨ８．０−８．５）及び１３．２μＬのＭＤＰ（１３．２μｇ、１．０ｍｇ／ｍＬ、水溶液）を含む１０ｍＬのバイアルに、１ｍＬのＮａ^99mＴｃＯ₄ ^-溶液及び１４．３μＬのＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（３６μｇ、２．５１ｍｇ／ｍＬ、水溶液）を逐次添加した。反応溶液のｐＨ値は（ｐＨ試験紙で）７〜７．５であった。反応混合物を室温で１５分間放置した。実験の最後に、ｐＨ値をｐＨ試験紙で再度測定した。反応溶液を、５ｍＬシリンジのチップ上のフィルター（０．２μｍナイロンメンブレンを含むＡｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）１３ｍｍシリンジフィルター、ＨＰＬＣ認定フィルター）を通して濾過した。２ｍＬの水を、フィルターを通して押し出し、次いで、濾液を１つにまとめたもの、フィルター、元のバイアル、シリンジ及びニードルの放射能を測定した。濾液の一部はＨＰＬＣ分析に付した。
（ｉｖ）一般的標識手順（ｐＨ７〜７．５）：ＳｎＣｌ₂添加後の溶液のｐＨ値を、０．１ＮのＮａＯＨ溶液の添加によって７〜７．５に調節した点を除いて、上記の一般的手順を用いた。
（ｖ）一般的標識手順（ｐＨ６）：０．４２ｍＬのｃｐｎ配位子（３）保存溶液（３２μｇ、７５μｇ／ｍＬ、水溶液）、０．０２５ｍＬの１００ｍＭ ＮａＨＣＯ₃溶液（ｐＨ８．０−８．５）及び１３．２μＬのＭＤＰ（１３．２μｇ、１．０ｍｇ／ｍＬ、水溶液）を含む１０ｍＬのバイアルに、１．２１ｍＬのＮａ^99mＴｃＯ₄ ^-溶液及び１４．３μＬのＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（３６μｇ、２．５１ｍｇ／ｍＬ、水溶液）を逐次添加した。反応溶液のｐＨ値は（ｐＨ試験紙で）約６であった。反応混合物を室温で１５分間放置した。実験の最後に、ｐＨ値をｐＨ試験紙で再度測定した。反応溶液を、５ｍＬシリンジのチップ上のフィルター（０．２μｍナイロンメンブレンを含むＡｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）１３ｍｍシリンジフィルター、ＨＰＬＣ認定フィルター）を通して濾過した。２ｍＬの水を、フィルターを通して押し出し、次いで、濾液を１つにまとめたもの、フィルター、元のバイアル、シリンジ及びニードルの放射能を測定した。濾液の一部はＨＰＬＣ分析に付した。
（ｖｉ）分析法ＨＰＬＣ条件：すべての分析実験はＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムで行った。カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ＵＰＬＣカラム（１００×２．１ｍｍ、Ｃ１８、１．７μｍ ＢＥＨ）。移動相：溶媒ＡはＨ₂Ｏ中の０．４％ギ酸アンモニウムであり、溶媒Ｂはアセトニトリルである。

放射性標識の結果を、図４及び表７に示す。

例６：化合物２と化合物Ｃ（従来技術）の放射性標識の対比
化合物Ｃ（Ｘ＝Ｈ）（図１）と化合物２との競合実験をｐＨ９、７〜７．５及び６で行った。結果を図５に表す。図５は、放射化学純度（ＲＣＰ）を様々なｐＨ値での百分率対時間（分）として示す。ｐＨ９では、ＭＤＰの存在に関わらず、Ｃの錯形成が依然として優性であった（Ｃ／２生成物比：約３：１）。しかし、低いｐＨ（７〜７．５）では、化合物２の錯体が主要生成物となった（生成物比：約１：１．５）。さらに低いｐＨ（６）では、化合物２はＣよりも高い錯形成量を示した（生成物比：約１：３）。

Claims (14)

1. 次の式Ｉのキレーターコンジュゲート。
   式中、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は独立にＲ^a基であるか、或いは２つの隣接するＲ²及びＲ³基又は２つの隣接するＲ¹及びＲ²基が一緒に五員もしくは六員アリール、ヘテロアリール、脂環式環又は複素環を形成してもよく、
   Ｒ^aは独立にＣ_1-6アルキル、Ｃ_2-4アルコキシアルキル、Ｃ_1-4ヒドロキシアルキル又はＣ_1-4フルオロアルキルであり、
   Ｘは−ＳＯ₂−であり、
   Ｙは、−（ＣＨ₂）_n−、−Ｃ₆Ｈ₄−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ）_n−、−（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n又はこれらの組合せであり、
   ｎは０〜１０の整数であり、
   Ｚ¹はＢＴＭであって、ＢＴＭは、１個のアミノ酸、３〜１００残基のペプチド、酵素基質、酵素アンタゴニスト、酵素アゴニスト、酵素阻害剤又は受容体結合化合物から選択される生体ターゲティング部分である。
2. Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³が独立にＣ_1-6アルキル基である、請求項１記載のコンジュゲート。
3. Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³がＣＨ₃であり、Ｙが−（ＣＨ₂）_nであり、ｎが１である、請求項１又は請求項２記載のコンジュゲート。
4. 請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のキレーターコンジュゲートの放射性金属錯体。
5. 放射性金属が^99mＴｃ又は^94mＴｃから選択される、請求項４記載の放射性金属錯体。
6. 放射性金属が^99mＴｃである、請求項５記載の放射性金属錯体。
7. 請求項４乃至請求項６のいずれか１項記載の放射性金属錯体を調製する方法であって、適当な溶媒中での請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のコンジュゲートと放射性金属の供給源との反応を含む、方法。
8. 請求項４乃至請求項６のいずれか１項記載の放射性金属錯体を生体適合性キャリアと共に哺乳類への投与に適した形態で含む、放射性医薬組成物。
9. 請求項８記載の放射性医薬品組成物の調製用キットであって、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のコンジュゲートを無菌固体形態で含んでいて、生体適合性キャリア中の放射性金属の無菌供給源で再構成すれば溶解が起こって所望の放射性医薬品組成物が得られる、キット。
10. 無菌固体形態が凍結乾燥固体である、請求項９記載のキット。
11. 次の式ＩＩの前駆体。
    式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｘ及びＹは、請求項１乃至請求項３のいずれか１項で定義した通りであり、
    Ｚは、Ｚ¹に結合させることのできる反応性基であって、カルボン酸、活性エステル、ホスホルアミダイト、イソシアネート、イソチオシアネート、アルデヒド、酸クロライド、スルホニルクロライド、アルキルハライド、アミン、ホスフィン、ホスフェート、アルコール又はチオールの１種以上を含むものであって、活性エステルが、スクシンイミジルオキシカルボニル基、スルホ−スクシンイミジルオキシカルボニル基、ペンタフルオロフェニルオキシカルボニル基、ペンタフルオロフェニルチオカルボニル基、パラ−ニトロフェニルオキシカルボニル基及びベンゾトリアゾリルオキシカルボニル基からなる群から選択されるものであり、Ｚ¹は請求項１で定義した通りである。
12. 請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の式Ｉのキレーターコンジュゲートを調製する方法であって、請求項１１の式ＩＩの前駆体とＺ¹（ただし、Ｚ¹は請求項１で定義した通りである。）との反応を含む、方法。
13. ヒト又は動物の身体のイメージング方法に使用するための請求項８記載の放射性医薬組成物であって、前記方法が、前記放射性医薬組成物が分布した身体の少なくとも一部分の画像をＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて生成させることを含んでいる、放射性医薬組成物。
14. 請求項１３記載の放射性医薬組成物であって、前記方法が、薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニタリングするために繰り返し実施され、前記イメージングが、薬剤による治療の前後、及び任意には薬剤による治療中に実施される、放射性医薬組成物。