JP6246378B2

JP6246378B2 - Ｄｏ３ａ−トラネキサム酸コンジュゲートを含むガドリニウム錯体

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Publication number: JP6246378B2
Application number: JP2016545967A
Authority: JP
Inventors: テ−ジョンキム; ヨンミンチャン
Original assignee: キョンプクナショナルユニバーシティインダストリー−アカデミックコーポレーションファウンデーション
Priority date: 2014-01-10
Filing date: 2015-01-08
Publication date: 2017-12-13
Anticipated expiration: 2035-01-08
Also published as: EP3093285A1; EP3093285A4; EP3093285B1; JP2017502072A; US10245328B2; KR101603699B1; KR20150083721A; CN105899494B; WO2015105352A1; US20160331849A1; CN105899494A

Description

本発明は、ガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤に関し、より具体的に、化学式１の構造を有する新規のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物とそれらのガドリニウム錯体に関する。

本発明は、韓国未来創造科学部の支援下に課題番号２０１３０２９６１８によって行われたものあって、前記課題の研究管理専門機関は、韓国研究財団、研究事業名は、「核心研究支援事業」、研究課題名は、「多重エネルギー帯域幅を有する高敏感度ＣＴ分子映像ナノ複合体研究」、主管機関は、慶北大学校産学協力団、研究期間は、２０１３年５月１日から２０１４年４月３０日である。

また、本発明は、韓国未来創造科学部の支援下に課題番号２０１３０６９５０７によって行われたものであって、前記課題の研究管理専門機関は、韓国研究財団、研究事業名は、「基礎研究事業」、研究課題名は、「中性子捕獲治療用ガドリニウムナノ構造体基礎研究室」、主管機関は、慶北大学校産学協力団、研究期間は、２０１３年１２月１日から２０１４年１０月３１日である。

磁気共鳴映像（ＭＲＩ）は、優れた空間的解像度（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）及び対照度（ｃｏｎｔｒａｓｔ）に基づき、人体解剖学、生理学及び病態生理学の非侵襲的診断のための最も強力な技術中の１つである。現在、多数のＭＲＩ技術は、人体内で水プロトン弛緩率（ｒｅｌａｘａｔｉｏｎｒａｔｅ）を増加させて、映像対照度を向上させるために、Ｇｄ（III）錯体を利用して実施された。Ｇｄ（III）イオンを利用した代表的な利点は、高い磁性モーメント及び長い電子スピン弛緩時間のような独特の特性からもたらされる。しかし、それらの広範且つ成功的な臨床的応用にもかかわらず、従来のＧｄ（III）に基づく造影剤（ＧＢＣＡｓ）は、大部分速い腎臓（ｒｅｎａｌ）排出を示す細胞外液（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｆｌｕｉｄ；ＥＣＦ）造影剤であった。そのため、向上した性能及び特異的機能性を同時に有する新しいＭＲＩ造影剤に対する必要性が提起された。器官（ｏｒｇａｎ）標的ＭＲＩ造影剤として使用するための新しいクラスのＭＲＩ造影剤を開発するために多大な努力が行われてきた。

肝（Ｌｉｖｅｒ）特異性ＭＲＩ造影剤は、２つのカテゴリーに分けられる：（ｉ）肝胆汁（ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ）特異性（または肝胆汁性）造影剤、（ｉｉ）細網内皮細胞（ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ）特異性（またはナノ粒子性）造影剤。前者（ｔｈｅｆｏｒｍｅｒ）クラスの造影剤は、機能的肝細胞によって吸収され、胆汁（ｂｉｌｅ）として排出され、それらの常磁性（ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ）性質は、肝及び胆ツリーの縦軸（ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ）弛緩時間（Ｔ１）の短縮をもたらす。このクラスの現在使用可能な造影剤は、Ｇｄ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ（Ｐｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標））及びＧｄ−ＢＯＰＴＡ（Ｍｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標））のようなＧｄ−キレートに基づく。注射時に、それらは、初期にＥＣＦＣＡｓ区画に分布（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅ）され、後続的に肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ）によって吸収される。一方、後者（ｔｈｅｌａｔｔｅｒ）クラスは、細網内皮系システムのクッパー（Ｋｕｐｆｆｅｒ）細胞を標的化し、そこで、造影剤の食作用（ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）が生じ、鉄（ｉｒｏｎ）イオンの効果によって、肝信号の強度が減少し、肝細胞特異性造影剤で典型的に観察される「白色（ｗｈｉｔｅ）」肝の代わりに、「黒色（ｂｌａｃｋ）」肝を示す。

本発明者は、最近、いくつかのＤＯ３Ａ−トラネキサメート（２ａ−２ｂ、チャート１）のガドリニウム錯体を合成し、それらが肝胆汁に特異的な性質を示すことを報告した（Ｇｕ、Ｓ．；Ｋｉｍ、Ｈ．Ｋ．；Ｌｅｅ、Ｇ．Ｈ．；Ｋａｎｇ、Ｂ．Ｓ．；Ｃｈａｎｇ、Ｙ．；Ｋｉｍ、Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１、５４、１４３．）。これらの観察と最近の多機能性（ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）造影剤を開発しようとする研究活動に動機を得て、本発明者は、新しいクラスの肝特異性造影剤として使用するために、いくつの追加的なＤＯ３Ａ−トラネキサメート（ｌｃ−１ｅ）とそれに対応するＧｄ−錯体（２ｃ−２ｅ）を製造した。また、本発明者は、肝特異性に対する構造活性相関（ＳＡＲ）分析を実施した。

したがって、本発明の主な目的は、化学式１の構造を有するＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記化合物を含む錯体リガンド（Ｌ）用組成物及び前記化合物をリガンドとして含むガドリニウム錯体を提供することにある。

本発明のさらに他の目的は、高い弛緩率と熱力学及び速度論的安定性及びｐＨ安定性を有するガドリニウム錯体を含有するＭＲＩ造影剤を提供することにある。

本発明の一様態によれば、本発明は、下記化学式１の構造を有するＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物を提供する：

前記化学式で、Ｒは、Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＮＨ（ＣＨ_２）_２ＮＨ_２である。

本発明の他の様態によれば、本発明は、下記工程を含む前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物（化学式で、Ｒ＝ＣＯＮＨ（ＣＨ_２）_２ＮＨ_２；化合物１ｃ）の製造方法を提供する：
ａ）トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートヒドロクロライド（ｔｒａｎｓ一４（ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅｅｔｈｙｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）にブロモアセチルブロマイド（ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）を添加して撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３を添加して撹拌し、ＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックエチルエステルコンジュゲートを作る工程；
ｃ）前記ＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックエチルエステルコンジュゲートに１、２−ジアミノエタンを添加する工程；
ｄ）前記混合物を低圧で溶媒をすべて除去した後、メタノールを入れてとかした後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；
ｅ）前記クロマトグラフィーから得た物質にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌグループを脱保護させる工程；及び
ｆ）前記物質を真空状態で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物を得る工程。

本発明の他の様態によれば、本発明は、下記工程を含む前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物（化学式で、Ｒ＝ＮＨ_２；化合物１ｄ）の製造方法を提供する：
ａ）トランス−１、４−ジアミンシクロヘキサン（ｔｒａｎｓ-ｌ、４-ｄｉａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）に二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｄｉ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）を添加して撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にブロモアセチルブロマイド（ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）を添加して撹拌する工程；
ｃ）前記混合物にＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３を添加して撹拌し、ＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックアミンコンジュゲートを作る工程；
ｄ）前記混合物を真空で溶媒をすべて除去した後、メタノールを入れてとかした後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；
ｅ）前記クロマトグラフィーから得た物質にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌグループを脱保護させる工程；及び
ｆ）前記真空状態で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサミックアミン化合物を得る工程。

本発明の他の様態によれば、本発明は、下記工程を含む前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物（化学式でＲ＝Ｈ；化合物１ｅ）の製造方法を提供する：
ａ）アミノメチルシクロヘキサン（（ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）にブロモアセチルブロマイド（ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）を添加して撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３を添加して撹拌し、ＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックコンジュゲートを作る工程；
ｃ）前記混合物を低圧で溶媒をすべて除去した後、メタノールを入れてとかした後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；
ｄ）前記クロマトグラフィーから得た物質にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌグループを脱保護させる工程；及び
ｅ）真空状態で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物を得る工程。

本発明の他の様態によれば、本発明は、前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物を含む錯体リガンド（Ｌ）用組成物を提供する。

本発明の一様態によれば、本発明は、前記ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物をリガンド（Ｌ）として含み、前記リガンドに配位結合する金属原子を含む錯体を提供する。
本発明において、前記金属原子は、ガドリニウム（Ｇｄ）であることを特徴とする。
また、前記リガンドに配位結合する金属原子を含む錯体は、［Ｇｄ（Ｌ）（Ｈ_２Ｏ）］の化学式を有することを特徴とする。

本発明の金属原子を含む錯体は、上述したように、合成されたＤＯ３Ａ−トラネキサム酸またはそのエステル化合物（１ｃ−１ｅ化合物）を利用して製造する。それぞれの１ｃ〜１ｅ化合物と、ＧｄＣｌ_３・６Ｈ_２Ｏ（ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｈｅｘａｈｙｄｒａｔｅ）を反応させて、ガドリニウム錯体を製造する。

本発明の一様態によれば、前記錯体を有効成分として含有する磁気共鳴映像（ＭＲＩ）造影剤を提供する。
本発明において、前記造影剤は、ＥＣＦ（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒｆｌｕｉｄ）造影剤機能を有することを特徴とする。本発明の実施例では、５個の錯体（２ａ−２ｅ）に対して構造活性相関性分析を実施した結果、ただ２ａのみが肝特異性を示した。２ｂ及び２ｃが肝で強い向上を示したにもかかわらず、肝特異性造影剤と呼ばれる程度の胆汁排出が観察されなかった。残りは、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）のような通常のＥＣＦ造影剤と非常に類似した行動をした。また、本願の新規シリーズは、生体内で使用されるのに何らの毒性を有しなかった。

本発明において、前記造影剤は、高い弛緩率、向上した熱力学及び速度論的安定性、及びｐＨ安定性を有することを特徴とする。本発明の実施例を通じて、本願シリーズがｐＨ３〜１１の広い範囲にわたって高い速度論的安定性を示すことを証明した。

具体的に、本発明の実施例では、シリーズのＤＯ３Ａ−トラネキサメート（ｔｒａｎｅｘａｍａｔｅｓ）コンジュゲート（１ｃ−１ｅ）及び肝特異性ＭＲＩ造影剤として使用されるためのそれらのＧｄ錯体（２ｃ−２ｅ）を合成した。すべてのこれら錯体は、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）のような構造的に関連する臨床的造影剤に匹敵する熱力学的（ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃ）及び速度論的（ｋｉｎｅｔｉｃ）安全性を示した。また、それらのＲ_１弛緩率（ｒｅｌａｘｉｖｉｔｉｅｓ）は、３．６８〜４．８４ｍＭ−１ｓ−１範囲であって、商業的造影剤に匹敵した。２ａ−２ｅとしてのマウス生体内（Ｉｎｖｉｖｏ）ＭＲイメージは、２ａのみが肝（ｌｉｖｅｒ）特異性を示すことが分かる。２ｂ及び２ｃが肝（ｌｉｖｅｒ）で強い増強（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）を示したにもかかわらず、肝特異性造影剤と言える程度の胆汁（ｂｉｌｅ）排出は観察されない。残りは、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）のような一般的なＥＣＦ造影剤と非常に類似した態度を示した。これら新規シリーズは、生体内（ｉｎｖｉｖｏ）で使用されるのに毒性を有しなかった。

前述したように、新しいシリーズの肝特異性ＭＲＩ造影剤に対する調査は、２ａがＨＳＡ標的だけでなく、ある程度の肝特異性を示すＧｄ錯体の速度論的不活性（ｉｎｅｒｔ）生体適合性キレートとして作用するという本発明者の先行発見に基づくものである。新しいシリーズのＤＯ３Ａ−トラネキサメートコンジュゲートは、２ｃ−２ｅを含み、それらの合成は、典型的に２ａの合成に基づいく少しの変形から製造された。すなわち、前記合成は、初期にＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３トラネキサメートコンジュゲートの形成から始まって、引き続いてＴＦＡによってｔｅｒｔ−ブチル基を脱保護してシリーズ１を形成し、ガドリニウムクロライドで錯体化した後、シリーズ２を収得した（図１〜図３参照）。それらの合成は、マイクロ分析及び多様な分光（ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ）技術によって確認された。

以上説明したように、本発明の新しいシリーズのＤＯ３Ａトラネキサメートコンジュゲート（１ｃ−１ｅ）とそれらのＧｄ錯体（２ｃ−２ｅ）が、肝特異性ＭＲＩ造影剤として使用されるために製造された。すべてのこれら錯体は、熱力学的及び速度論的安定性を示し、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）のような構造的に関連する臨床的造影剤に匹敵するＲ１弛緩率を示した。５個の錯体（２ａ−２ｅ）に対して構造活性相関性分析を実施した結果、ただ２ａのみが肝特異性を示した。２ｂ及び２ｃが肝で強い向上を示したにもかかわらず、肝特異性造影剤と呼ばれる程度の胆汁排出が観察されなかった。残りは、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）のような通常のＥＣＦ造影剤と非常に類似した行動をした。新規シリーズは、生体内で使用されるのに何らの毒性を有しなかった。

図１は、本発明によるＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（１ｃ）及びそのガドリニウム錯体（２ｃ）の合成模式図を示したものである。
図２は、本発明によるＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（１ｄ）及びそのガドリニウム錯体（２ｄ）の合成模式図を示したものである。
図３は、本発明によるＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（１ｅ）及びそのガドリニウム錯体（２ｅ）の合成模式図を示したものである。
図４は、多様なＭＲＩ造影剤に対する時間に対する関数としてＲ_１Ｐ（ｔ）／Ｒ_１Ｐ（０）の進化（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）を示す。
図５（Ａ）は、造影剤の注射後５分後のＩＣＲマウスの冠状面（ｃｏｒｏｎａｌ）及び軸面（ａｘｉａｌ）Ｔ１−加重（ｗｅｉｇｈｔｅｄ）イメージを示す。Ｋ、腎臓；Ａ、腹部大動脈。
図５（Ｂ）は、造影剤の注射後１ｈ後の冠状面及び軸面Ｔ１−加重イメージを示す。Ｈ、心臓；Ｌ、肝；Ｂ、膀胱；Ｇ、胆嚢。
図６は、Ｇｄ−ＤＯＴＡ及び２ｂ−２ｅによって得られた正常結膜線維芽細胞の相対的細胞毒性（％）を示す。標準偏差（±ＳＤ）は、三重分析（ｎ＝３）で得られた。
図７ａ〜図７ｃは、リガンドに対するＧｄ^３＋の結合熱力学のＩＴＣ決定を示す。結合等温は、Ｇｄ^３＋／１ａ−１ｅのモル比の関数として積分熱（ｈｅａｔｓ）のプロットに該当する。実線は、数学的に決定された１セットのサイトモデル内でデータの最上フィットカーブに該当し、各リガンドに１分子（Ｇｄ^３＋）結合を示す。解離定数（Ｋ_ｄ）、結合定数（Ｋ_ａ）、リガンド当たりの結合されたＧｄ^３＋数（Ｎ）、及び連合エンタルピー変化（ΔＨ）は、データ分析で得られた。解離及び結合定数は、リガンド（１ａ−１ｅ）に比較した相対的安定性を決定するのに重要な接近方法である。
図８は、肝及び腎臓に対する多様な造影剤によって得られたＣＮＲプロファイルを示す。
図９は、互いに異なるｐＨ条件の下でインキュベーション時間の関数としてＰＢＳで２（［Ｇｄ］＝１．０ｍＭ）に対するＲ_１の進化（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）を示す。

以下、実施例を通じて本発明をより詳しく説明する。これら実施例は、ただ本発明を例示するためのもので、本発明の範囲がこれら実施例によって制限されるものと解釈されない。

本実施例で、すべての反応は、標準Ｓｃｈｌｅｎｋ技術を利用して二窒素（ｄｉｎｉｔｒｏｇｅｎ）の環境の下で実施した。溶媒は、標準手続を利用して精製されて乾燥した。１、４、７、１０−テトラアザシクロドデカン（ＤＯＴＡ）は、Ｓｔｒｅｍ（Ｕ．Ｓ．）から購入し、トランス−４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸（トラネキサム酸）及びトランス−１，４−ジアミノシクロヘキサンは、Ａｌｄｒｉｃｈで購入し、アミノメチルシクロヘキサンは、ＴＣＩで購入した。すべての他の商業的試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈで購入し、他の表示がない限り、受けたものをそのまま使用した。脱イオン水（ＤＩｗａｔｅｒ）は、すべての実験に使用された。１Ｈ実験は、ＫＢＳＩにあるＢｒｕｋｅｒＡｄｖａｎｃｅ４００または５００ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ上で実施した。化学的シフト（Ｃｈｅｍｉｃａｌｓｈｉｆｔｓ）は、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する比較値としてδ値で与えられた。カップリング定数は、Ｈｚで示し、ＦＡＢマススペクトルは、ＪＭＳ−７００ｍｏｄｅｌ（Ｊｅｏｌ，Ｊａｐａｎ）ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを利用して得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦマススペクトルは、ＶｏｙａｇｅｒＤＥ−ＳＴＲ（Ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｕ．Ｓ．）を利用して得た。成分（ｅｌｅｍｅｎｔａｌ）分析は、ＫＮＵのＣｅｎｔｅｒｆｏｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓで実施された。

実施例１．リガンド（Ｌｉｇａｎｄ）合成：
１）１ａ及び１ｂの合成
１ａ及び１ｂは、従来文献（Ｇｕ，Ｓ．；Ｋｉｍ，Ｈ．Ｋ．；Ｌｅｅ，Ｇ．Ｈ．；Ｋａｎｇ，Ｂ．Ｓ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．；Ｋｉｍ，Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，１４３）によって製造された。

２）１ｃの合成
従来文献の方法（Ｇｕ，Ｓ．；Ｋｉｍ，Ｈ．Ｋ．；Ｌｅｅ，Ｇ．Ｈ．；Ｋａｎｇ，Ｂ．Ｓ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．；Ｋｉｍ，Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，１４３）によって製造されたＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックエチルエステルコンジュゲート（６．８ｍｍｏｌ）（ｃｆ，Ｒ＝ＣＯ_２Ｅｔ，Ｃｈａｒｔ１）をニット（ｎｅａｔ）１，２−ジアミノエタン（２．３ｍＬ，３３．８ｍｍｏｌ）に添加した。前記混合物を室温（ＲＴ）で７２ｈの間に撹拌した後、クロロホルムを添加して水で抽出した（３０ｍＬ×３ｔｉｍｅｓ）。有機（ｏｒｇａｎｉｃ）抽出物をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、蒸発させて、粗（ｃｒｕｄｅ）産物を得、それをシリカ状のクロマトグラフィー（ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎＣＨ_２Ｃｌ_２ｔｏ１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ_２Ｃｌ_２、Ｒ_ｆ＝０．６（ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２＝２：８））によってさらに精製し、黄色固体を得た。これをジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロアセト酢酸を添加し、ｔｅｒｔ−ブチル基を脱保護させた。前記混合物を一晩中室温で撹拌し、溶媒を真空の下に除去し、オイル状残基（ｏｉｌｙｒｅｓｉｄｕｅ）のみを残して、これを水に吸収させた。アセトンを添加して、生成物を白色固体で沈殿させ、これを数回アセトンで洗浄し、真空の下に乾燥させた：収率：０．３６ｇ（９２％）。１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝３．８２（ｓ，４Ｈ，−ＮＣＨ_２ＣＯ_２−），３．６２（２Ｈ，−ＮＣＨ_２ＣＯ_２−），３．６７（ｓ，２Ｈ，−ＣＨ_２ＣＯＮ），３．４４（ｍ，１０Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ−ＮＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ−ｉｎｔｈｅｒｉｎｇ（８Ｈ）＆-ＣＯＮＨＣＨ_２−（２Ｈ）），３．０８（ｄ，２Ｈ，−ＣＯＮＨＣＨ−２Ｃ−），２．２４／１．５２（ｍ，２Ｈ，−ＣＯＮＨ），１．８５／１．４１（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ_２−，ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ），１．０３（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ_２−，ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）。Ａｎａｌ．ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２６Ｈ_４７Ｎ_７Ｏ_８・２Ｈ_２Ｏ：Ｃ，５０．２３；Ｈ，８．２７；Ｎ，１５．７７．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５０．６６；Ｈ，８．２４；Ｎ，１６．０１．ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（ｍ／ｚ）：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２６Ｈ_４７Ｎ_７Ｏ_８：５８５．３５，Ｆｏｕｎｄ：５８６．７４（［ＭＨ］＋），６０８．７０（［ＭＮａ］＋）。

３）１ｄの合成
従来文献の方法（Ｌｅｅ，Ｄ．Ｗ．；Ｈａ，Ｈ．Ｊ．ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＣｏｍｍｕｎ２００７，３７，７３７Ｒｏｔｈ，Ｇ．Ｊ．；Ｈｅｃｋｅｌ，Ａ．；Ｃｏｌｂａｔｚｋｙ，Ｆ．；Ｈａｎｄｓｃｈｕｈ，Ｓ．；Ｋｌｅｙ，Ｊ．；Ｌｅｈｍａｎｎ−Ｌｉｎｔｚ，Ｔ．；Ｌｏｔｚ，Ｒ．；Ｔｏｎｔｓｃｈ−Ｇｒｕｎｔ，Ｕ．；Ｗａｌｔｅｒ，Ｒ．；Ｈｉｌｂｅｒｇ，Ｆ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，５２，４４６６）によってトランス−１，４−シクロヘキサンから製造されたクロロホルム（１００ｍＬ）中のトランス−［４−（２−クロロアセチルアミノ）シクロヘキシル］カルバミックｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．０ｇ，３．４ｍｍｏｌ）溶液にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３（１．６ｇ，３．１ｍｍｏｌ）を添加した。前記混合物を室温で２４ｈの間に撹拌し、すべての固体を濾過で除去し、濾過液を真空の下に蒸発させて、黄色オイル状残基を残した。引き続いて、シリカ状のカラムクロマトグラフィー（ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ：ＣＨ_２Ｃｌ_２ｔｏ１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ_２Ｃｌ_２，Ｒ_ｆ＝０．４（ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２＝１：９））を実施して、黄白色（ｏｆｆ−ｗｈｉｔｅ）固体を得た。これをジクロロメタンに再溶解させ、過量のＴＦＡを添加した。一晩中撹拌を継続した後、メタノールを添加して白色固体を沈殿させ、常用法でさらに精製した。収率：０．６２ｇ（８７％）。１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝３．７２（ｍ，１０Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ−ＮＣＨ_２ＣＯ_２−（８Ｈ），−ＣＯＮＨＣＨ−＆Ｈ_２ＮＣＨ−（２Ｈ）），３．４０／３．２１（ｍ，１６Ｈ，−ＮＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ−），２．０６／１／５５／１．３８（ｍ，８Ｈ，−ＣＨ_２−，ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）。Ａｎａｌ．ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_４０Ｎ_６Ｏ_７・２ＣＦ_３ＣＯＯＨ・２Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３９．００；Ｈ，６．２９；Ｎ，１０．５０．ＦｏｕｎｄＣ，３９．１３；Ｈ，６．０５；Ｎ，９．３５．ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（ｍ／ｚ）：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_４０Ｎ_６Ｏ_７：５００．３０，Ｆｏｕｎｄ：５０１．３３［ＭＨ］＋，５２３．３３［ＭＮａ］＋。

４）１ｅの合成
従来文献の方法（Ｃｈｏ，Ｓ．Ｄ．；Ｓｏｎｇ，Ｓ．Ｙ．；Ｋｉｍ，Ｋ．Ｈ．；Ｚｈａｏ，Ｂ．Ｘ．；Ａｈｎ，Ｃ．；Ｊｏｏ，Ｗ．Ｈ．；Ｙｏｏｎ，Ｙ．Ｊ．；Ｆａｌｃｋ，Ｊ．Ｒ．；Ｓｈｉｎ，Ｄ．Ｓ．ＢＫｏｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓ℃．２００４，２５，４１５）によって製造されたアセトニトリル（３０ｍＬ）中の２−クロロ−Ｎ−シクロヘキシルメチルアセトアミド（１．２ｇ，６．４ｍｍｏｌ）溶液にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３（３．０ｇ，５．８ｍｍｏｌ）を添加した。前記溶液を室温で２４ｈの間に撹拌した。固体不純物を濾過によって除去し、濾過液を真空の下に蒸発させて、オイル状残基を得た。引き続いて、シリカ状のカラムクロマトグラフィー（ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ：ＣＨ_２Ｃｌ_２ｔｏ１０％ＭｅＯＨ−ＣＨ_２Ｃｌ_２，Ｒ_ｆ＝０．４（ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２＝１：９））を実施し、減圧の下に蒸発させて、黄白色の固体を得た。前記１ｄの製造に記述した通り、ＴＦＡによる脱保護を実施し、黄白色の固体を生成物として得た。収率：２．４ｇ（８２％）。１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝３．７４／３．５７（ｍ，８Ｈ，−ＮＣＨ_２ＣＯ_２−），３．３０（ｍ，１０Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｅｄ-ＮＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ−（８Ｈ）＆-ＣＯＮＨＣＨ_２−（２Ｈ）），３．１０（ｍ，８Ｈ，−ＮＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ−），１．９８／１．４４／１．２７（ｍ，４Ｈ，−ＣＨ_２−，ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ），１．８８（ｍ，１Ｈ，−ＮＨＣＨ_２ＣＨ−）。Ａｎａｌ．ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_３９Ｎ_５Ｏ_７・３ＣＦ_３ＣＯＯＨ・３Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３８．１４；Ｈ，５．４９；Ｎ，７．９４．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３７．８３；Ｈ，５．７６；Ｎ，８．４４．ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（ｍ／ｚ）：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_３９Ｎ_５Ｏ_７，：４８５．２８，Ｆｏｕｎｄ：４８６．４２（［ＭＨ］＋），５０８．４４（［ＭＮａ］＋）。

実施例２．Ｇｄ錯体（ｃｏｍｐｌｅｘ）の合成：
１）２ａ及び２ｂの合成
２ａ及び２ｂは、従来文献（Ｇｕ，Ｓ．；Ｋｉｍ，Ｈ．Ｋ．；Ｌｅｅ，Ｇ．Ｈ．；Ｋａｎｇ，Ｂ．Ｓ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．；Ｋｉｍ，Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，１４３）によって製造された。

２）２ｃの合成
水中（５０ｍＬ）１ｃ（１．０ｇ，１．７ｍｍｏｌ）溶液にガドリニウムクロライド（０．６４ｇ，１．７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５０℃で４８ｈの間に撹拌した。ｐＨは、周期的にチェックして１ＮＮａＯＨを使用し、７．０〜７．５に調整した。前記反応混合物を真空の下に乾燥させて、オイル状残基を残し、これを水に吸収させた。前記溶液にアセトンを添加して、白色の固体を沈殿させ、濾過によって分離させ、アセトンで洗浄し、真空の下に乾燥させた。その生成物は、吸湿性（ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ）のアイボリー色の固体として得た。収率：０．７５ｇ（８６％）。Ａｎａｌ．ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２６Ｈ_４４ＧｄＮ_７Ｏ_８・２ＣＦ_３ＣＯＯＨ・８Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３２．４０；Ｈ，５．６２；Ｎ，８．８２．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３１．９９；Ｈ，５．２２；Ｎ，９．００．ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２６Ｈ_４５ＧｄＮ_７Ｏ_８，７４１．２６（［ＭＨ-Ｈ_２Ｏ］＋）。Ｆｏｕｎｄ：７４１．２５６７；ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２６Ｈ_４４ＧｄＮ_７Ｏ_８Ｎａ，７６３．２４（［ＭＮａ-Ｈ２Ｏ］＋）。Ｆｏｕｎｄ：７６３．２３９７。

３）２ｄの合成
標題化合物は、１ｃを１ｄに代替したことを除いて、前記製造方法と同一に製造された。その生成物は、吸湿性の黄白色の固体として得た。収率：１．１５ｇ（８８％）。Ａｎａｌ．ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_３７ＧｄＮ_６Ｏ_７・２ＣＦ_３ＣＯＯＨ・５Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３２．１０；Ｈ，５．０８；Ｎ，８．６４．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３１．５５；Ｈ，５．０９；Ｎ，９．０６．ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２２Ｈ_３８ＧｄＮ_６Ｏ_７，６５６．２１（［ＭＨ-Ｈ２Ｏ］＋）。Ｆｏｕｎｄ：６５６．２０４５；ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２６Ｈ_４４ＧｄＮ_７Ｏ_８Ｎａ，６７８．１９（［ＭＮａ-Ｈ２Ｏ］＋）。Ｆｏｕｎｄ：６７８．１８６７。

４）２ｅの合成
標題化合物は、１ｃを１ｅに代替したことを除いて、前記製造方法と同一に製造された。その生成物は、吸湿性の黄白色の固体として得た。収率：０．７５ｇ（８６％）。Ａｎａｌ．ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２３Ｈ_３８ＧｄＮ_５Ｏ_７・４Ｈ_２Ｏ：Ｃ，３８．０６；Ｈ，６．３９；Ｎ，９．６５．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，３８．５９；Ｈ，６．０９；Ｎ，９．６９。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍ／ｚ）：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_２３Ｈ_３９ＧｄＮ_５Ｏ_７，６５５．２１（［ＭＨ-Ｈ_２Ｏ］＋）。Ｆｏｕｎｄ：６５５．２０９３。

実施例３．弛緩率（Ｒｅｌａｘｉｖｉｔｙ）の測定
Ｔ１測定は、１．５Ｔ（６４ＭＨｚ）で変動逆転時間（ＴＩ）で逆転回収法（ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｒｅｃｏｖｅｒｙｍｅｔｈｏｄ）を利用して実施した。ＭＲイメージは、５０〜１７５０ｍｓ範囲の３５個互いに異なるＴＩ値として得た。Ｔ１弛緩時間は、各ＴＩ値で測定された信号強度の非線形最小二乗法（ｎｏｎｌｉｎｅａｒｌｅａｓｔ−ｓｑｕａｒｅｓｆｉｔ）から得た。Ｔ２ＣＰＭＧ（Ｃａｒｒ−Ｐｕｒｃｅｌｌ−Ｍｅｉｂｏｏｎ−Ｇｉｌｌ）パルスシーケンス測定のために、多重スピン−エコー測定に適応された。３４個のイメージを１０〜１９００ｍｓ範囲の３４個互いに異なるエコー時間（ＴＥ）値として得た。Ｔ２弛緩時間は、各エコー時間で多重スピン−エコー測定のための平均（ｍｅａｎ）ピクセル値の非線形最小二乗法から得た。次に、弛緩率（Ｒ_１及びＲ_２）をｍＭ当たり弛緩時間の逆数で計算した。決定された弛緩時間（Ｔ１及びＴ２）と弛緩率（Ｒ_１及びＲ_２）を最終的にイメージプロセッシングして、弛緩時間マップと弛緩率をそれぞれ得た。

２ａ−２ｅは、Ｇｄ−ＤＯＴＡ（Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標））及びＧｄ−ＢＴ−ＤＯ３Ａ（Ｇａｄｏｖｉｓｔ（登録商標））のような臨床的に利用可能なＭＲＩ造影剤に匹敵するか、これらより良好なＰＢＳでのＲ_１弛緩率を示した（表１）。シリーズ中で比較したとき、Ｒ_１’ｓの観察に値する差異は発見されなかった。測定は、それらがどんな血液−プール（ｂｌｏｏｄ−ｐｏｏｌ）効果を示すかどうかを調べるために、２つの互いに異なる媒体、ＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）及びＨＳＡのＰＢＳ溶液で実施した。ＰＢＳでのＲ_１’ｓに比べてＨＳＡでＲ_１のどんな有意的な増加が観察され、これは、本願の新規シリーズとＨＳＡとの間に少しの相互作用があることを示す。

実施例４．金属交換速度論（ＴｒａｎｓｍｅｔａｌａｔｉｏｎＫｉｎｅｔｉｃｓ）
この実験は、従来文献の方法（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｓ．Ｅｌｓｔ，Ｌ．Ｖ．；Ｃｏｐｏｉｘ，Ｆ．；Ｍｕｌｌｅｒ，Ｒ．Ｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅｒａｄｉｏｌｏｇｙ２００１，３６，１１５）によって用意した。それは、２．５ｍｍｏｌ／Ｌガドリニウム錯体及び２．５ｍｍｏｌ／ＬＺｎＣｌ_２を含有する緩衝溶液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ，ｐＨ７．４）の水プロトン縦軸弛緩率（Ｒ_１Ｐ）の進化（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）の測定に基づく。次に、１０μＬのＺｎＣｌ_２２５０ｍｍｏｌ／Ｌ溶液を１ｎｋの常磁性（ｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ）錯体緩衝溶液に添加した。その混合物を強く撹拌し、３００μＬを取って、弛緩測定（ｒｅｌａｘｏｍｅｔｒｉｃ）の研究に使用した。Ｇｄ−ＤＯＴＡ、Ｇｄ−ＢＯＰＴＡ、Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、及びＧｄ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡに対して実施した対照群研究は、ＺｎＣｌ_２の存在の下に得られたものと同一の結果を示した。観察された弛緩率Ｒ_１＝（１／Ｔ１）から水プロトン弛緩の半磁性（ｄｉａｍａｇｎｅｔｉｃ）寄与を控除した後、Ｒ_１Ｐ弛緩率を得た。測定は、室温で３Ｔｗｈｏｌｅｂｏｄｙｓｙｓｔｅｍ（ＭａｇｎｅｔｏｍＴｉｍＴｒｉｏ，Ｓｉｍｅｎｓ，ＫｏｒｅａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌ＆ＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ）上で実施した。

図４は、多様なＭＲＩ造影剤に対する時間に対する関数としてＲ_１Ｐ（ｔ）／Ｒ_１Ｐ（０）の進化（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）を示す。

正常の常磁性縦軸弛緩率Ｒ_１Ｐ（ｔ）／Ｒ_１Ｐ（０）の評価は、本シリーズ２ａ−２ｅ及び比較目的のＤｏｔａｒｅｍ（登録商標）、Ｐｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標）、Ｍｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標）、Ｏｍｎｉｓｃａｎ（登録商標）で観察された（図４）。試験に使用された錯体は、進化パターンによって２つのグループに分けられる：（ｉ）巨大環（ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ）キレートを採用するもの、（ｉｉ）非環（ａｃｙｃｌｉｃ）キレートを有するもの。本シリーズは、巨大環リングを採用し、非常に高い速度論的非活性（ｉｎｅｒｔｎｅｓｓ）を有する確率が高いため、７２ｈの間に初期測定中に９０％以上の常磁性弛緩率を維持した。しかし、対照的に、後者グループに属するものは、顕著に減少した弛緩率が観察された。例えば、Ｐｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標）及びＭｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標）は、勾配（ｓｌｏｐｅ）が非常に急激で、同一の測定期間中にわずか５０％の初期弛緩率を維持した。

実施例５．等温滴定カロリメーター（Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｔｉｔｒａｔｉｏｎｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ：ＩＴＣ）
リガンド溶液に対する常磁性金属イオンＧｄ^３＋の結合等温（ｂｉｎｄｉｎｇｉｓｏｔｈｅｒｍｓ）を定量するために、ＶＰ−ＩＴＣｉｓｏｔｈｅｒｍａｌｔｉｔｒａｔｉｏｎｍｉｃｒｏｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ（Ｍｉｃｒｏｃａｌ，ＵＳＡ）でＩＴＣ実験を実施した。データ収集、分析及びプロッティング（ｐｌｏｔｔｉｎｇ）Ｍｉｃｒｏｃａｌで供給されたｓｏｆｔｗａｒｅｐａｃｋａｇｅＯｒｉｇｉｎ、ｖｅｒｓｉｏｎ８．０の助けで実施した。試料セル（ｃｅｌｌ）は、１．４３ｍＬの体積を有する。そこに１ａ−１ｅリガンド（０．２ｍＭ）の水性緩衝溶液で満たした。Ｇｄ^３＋（１．０ｍＭ）の水性緩衝溶液を３００μＬ連続撹拌された（３００ｒｐｍ）シリンジーに入れ、１０μＬ分液（ａｌｉｑｕｏｔｓ）でセル内に注射し、３分間隔で２０ｓにわたって伝達した。データポイントは、毎２ｓごとに収集した。測定は、２５℃で実施した。すべての滴定（ｔｉｔｒａｔｉｏｎｓ）は、３回実施して、データの一貫性と溶液の安定性を確保した。これら滴定等温（ｔｉｔｒａｔｉｏｎｉｓｏｔｈｅｒｍｓ）を積分し、各注射時にエンタルピー（ｅｎｔｈａｌｐｙ）変化を求めた。２つの数学的に互いに異なるセットのサイトモデルに良好にフィッティングするために、等温を分析した。カロリー測定分析を通じて、結合定数（Ｋ_ａ）、エンタルピー変化（ΔＨ）、及び結合の化学量論（Ｎ）を含むパラメータを計算した。次に、自由エネルギー（ΔＧ）及びエントロピー（ΔＳ）の変化を次の錯体化（ｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎ）等式を利用して決定した：Ｍｎ＋＋ｎＬ⇔ＭＬｎ：ΔＧ＝−ＲＴ・ｌｎＫ_ａ＝ΔＨ−ＴΔＳ、前記式で、Ｒは、普遍的（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）ガス定数であり、Ｔは、ケルビン（Ｋｅｌｖｉｎ）温度である。

本シリーズは、等温滴定カロリーメーターによって測定したとき、４次数（ｏｒｄｅｒ）の高い形成定数（Ｋ_ａ）を有する点から、本シリーズの高い熱力学的安定性に留意する必要がある（表２及び図７参照）。シリーズ内で比較したとき、１ｂは、未知の理由で、Ｇｄ^３＋イオンに対する最高選好度（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を示す。図７は、リガンドに対するＧｄ^３＋の結合熱力学のＩＴＣ決定を示す。結合等温は、Ｇｄ^３＋／１ａ−１ｅのモル比の関数として積分熱（ｈｅａｔｓ）のプロットに該当する。実線は、数学的に決定された１セットのサイトモデル内でデータの最上−フィットカーブに該当し、各リガンドに１分子（Ｇｄ^３＋）結合を示す。解離定数（Ｋｄ）、結合定数（Ｋａ）、リガンド当たり結合されたＧｄ^３＋数（Ｎ）、及び連合エンタルピー変化（ΔＨ）は、データ分析で得られた。解離及び結合定数は、リガンド（１ａ−１ｅ）に比較した相対的安定性を決定するのに重要な接近方法である。

実施例６．生体内（Ｉｎｖｉｖｏ）ＭＲ実験
生体内（ｉｎｖｉｖｏ）研究は、慶北大学校動物研究委員会の規則に従って実施した。２９〜３１ｇ体重の６週齢雄性ＩＣＲマウスを生体内研究に使用した。マウス（ｎ＝３）を酸素中に１．５％イソプルランで麻酔した。測定は、尾静脈を通じた２ａ−２ｅの注射前後に実施した。各注射当たり造影剤の量は、次の通りである：ＭＲイメージのために、０．１ｍｍｏｌのＧｄ／ｋｇ。各測定後に、マウスを麻酔から覚めさせた後、飼料及び食べ物の自由接近が可能なケージに入れた。これら測定中に、動物は、暖かいウォーターブランケットを利用して約３７℃に維持させた。ＭＲイメージは、手作り小型動物ＲＦコイルが装着された１．５ＴＭＲｕｎｉｔ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）で撮影した。前記コイルは、５０ｍｍの内径を有するレシーバータイプであった。スピンエコー（ＳＥ）のイメージングパラメータは、次の通りである：繰り返し時間（ＴＲ）＝３００ｍｓｅｃ；エコー時間（ＴＥ）＝１３ｍｓｅｃ；８ｍｍフィールドのビュー（ＦＯＶ）；１９２×１２８マトリックスサイズ１．２ｍｍスライス厚さの収得個数（ＮＥＸ）＝８。ＭＲイメージは、注射後に２４ｈの間に得た。向上した対照度（ｃｏｎｔｒａｓｔ）を有する解剖学的位置は、ポストコントラスト（ｐｏｓｔｃｏｎｔｒａｓｔ）ＭＲイメージ上で肝（ｌｉｖｅｒ）、胆管（ｂｉｌｅｄｕｃｔ）、及び腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）に対して同定された。定量的測定のために、特定関心領域（ＲＯＩ）での信号強度をＡｄｖａｎｔａｇｅＷｉｎｄｏｗｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧＥｍｅｄｉｃａｌ，Ｕ．Ｓ．）を利用して測定した。ＣＮＲは、次の等式（１）を利用して計算した。下記式で、ＳＮＲは、信号−対−ノイズの比率である。

ＣＮＲ＝ＳＮＲ_ｐｏｓｔ−ＳＮＲ_ｐｒｅ（１）

図５（Ａ）は、造影剤の注射後５分後のＩＣＲマウスの冠状面（ｃｏｒｏｎａｌ）及び軸面（ａｘｉａｌ）Ｔ１−加重（ｗｅｉｇｈｔｅｄ）イメージを示す。Ｋ、腎臓；Ａ、腹部大動脈。図５（Ｂ）は、造影剤の注射後１ｈ後の冠状面及び軸面Ｔ１−加重イメージを示す。Ｈ、心臓；Ｌ、肝；Ｂ、膀胱；Ｇ、胆嚢。

図８は、肝及び腎臓に対する多様な造影剤によって得られたＣＮＲプロファイルを示す。
心臓及び腹部大動脈（ａｂｄｏｍｉｎａｌａｏｒｔａ）の両方で強い信号向上（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）が２ａ−２ｅで５分内に観察された（図５Ａ）。５個のうち、初めて３個（２ａ−２ｃ）は、初期１時間の間に肝で向上を示すという点から、典型的な肝特異性造影剤であるＰｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標）及びＭｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標）に匹敵した。しかし、Ｐｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標）及びＭｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標）に比較してみれば、ただ２ａだけが胆汁（ｂｉｌｅ）を通じて排出されるという点から、真正な肝特異性造影剤に分類され得る（図５Ｂ）。たとえ、２ｅも、また、胆汁−排出を示すが、肝特異性造影剤と命名するには信号向上が非常に弱い。２ｅの信号強度は、典型的ＥＣＦ造影剤であるＧａｄｏｖｉｓｔ（登録商標）のように弱い（図５Ａ）。たとえ、２ｄが、腎臓及び腹部大動脈の両方で初期に強い向上を示すが、Ｇａｄｏｖｉｓｔ（登録商標）のように１時間以内に排出がほぼ完了するという点から、ＥＣＦ造影剤に分類され得る。２ｂ及び２ｃに対しても、肝での強い向上が発見されるが（図５Ａ及び図８）、胆汁−排出は観察されない。２ｂ及び２ｃで観察されるそのような異常態度を説明するために、２つの仮定が設定され得る：有機アニオン輸送ポリペプチド（ＯＡＴＰ）を通じて肝細胞に入った後、細胞の細管膜に存在する輸送分子である多剤耐性タンパク質２（ＭＲＰ２）が２ｂ及び２ｃを輸送（ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）する能力がないかまたはＭＲＰ３または双方向ＯＡＴＰを通じた２ｂ及び２ｃの洞様血管（ｓｉｎｕｓｏｉｄｓ）への復帰（ｒｅｔｕｒｎ）のためである。

典型的な肝特異性造影剤であるＰｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標）及びＭｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標）の場合、受動的拡散が正常肝細胞の基底側膜上に存在するＯＡＴＰ１を通じて起きるということに注意する必要がある。引き続いて、胆汁への排出がＭＲＰ２の作用によって起きる。Ｐｒｉｍｏｖｉｓｔ（登録商標）及びＭｕｌｔｉｈａｎｃｅ（登録商標）で親脂質性エトキシベンジルの存在がすべてのこのようなプロセスで重要な役目をすると信じられる。このような点から、２ａで親脂質性シクロヘキシル部分の存在が類似の役目をすることができる。このような問題は、追加的な研究が必要である。

実施例７．細胞生存率（Ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ）測定
正常結膜線維芽細胞を使用した。細胞を熱−不活性化されたＦＣＳ（１０％）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍＬ）、及びゲンタマイシン（２００ｍｇ／ｍＬ）（すべてＧｉｂｃｏ（登録商標）で購入）が補充されたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）で維持した。培地は、毎２日ごとに交替し、細胞を９６−ウェルプレート（１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ／２００μＬ）に分注した。多様なＧｄ（III）濃度（５０〜５００μＭ）の造影剤を培養無血清培地に添加し、２４ｈの間にインキュベートした。次に、ＣＣＫ−８（１０μＬ）を各ウェルに添加して細胞生存率を評価した。溶液は、３７℃で４ｈ後に除去した。マイクロプレートリーダー（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅ，ＵＳＡＢｉｏ−ｒａｄ５５０Ｒｅａｄｅｒ）を使用して４５０ｎｍでのＯ．Ｄ．（ＯｐｔｉｃａｌＤｅｎｓｉｔｙ）値を読み出して、細胞生存率／毒性を決定した。

図６は、Ｇｄ−ＤＯＴＡ及び２ｂ−２ｅによって得られた正常結膜線維芽細胞の相対的細胞毒性（％）を示す。標準偏差（±ＳＤ）は、三重分析（ｎ＝３）で得られた。

２ｂ−２ｅの細胞生存率は、Ｄｏｔａｒｅｍ（登録商標）に匹敵する（図６）。すなわち、２４ｈの間にインキュベートしたとき、何らの細胞増殖及び生存率に影響がなかった。ＭＲイメージで強度向上を得るのに必要な濃度範囲でどんな細胞毒性も示さないという点から、本シリーズ内にほとんど差異が発見されなかった。

実施例８．多様なｐＨ領域での速度論的（Ｋｉｎｅｔｉｃ）安定性
安定性は、室温でインキュベーション時間に対する関数として多様なｐＨ条件（ｐＨ：１，３，５，７，９及び１１）でＰＢＳで２（［Ｇｄ］＝１．０ｍＭ）に対する水プロトン弛緩率（Ｒ_１）の進化（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）で与えられた。測定は、１．５Ｔｗｈｏｌｅｂｏｄｙｓｙｓｔｅｍ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ，ＵＳＡ）上に実施した。

図９は、互いに異なるｐＨ条件の下でインキュベーション時間の関数としてＰＢＳで２（［Ｇｄ］＝１．０ｍＭ）に対するＲ_１の進化（Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）を示す。

本シリーズは、ｐＨ３〜１１の広い範囲にわたって高い速度論的安定性を示した（図９）。２ａは、ｐＨ１でも充分に安定していることが分かる。

実施例９．Ｈ _２Ｏで加水分解に対する安定性
造影剤１００ｍｇを蒸留水１０ｍＬにとかした後、５０℃で７２時間放置した。その後、ＨＰＬＣを使用して１９７ｎｍでＯ．Ｄ．（ＯｐｔｉｃａｌＤｅｎｓｉｔｙ）値を読み出して物質の安定性を決定した。また、分解産物の正確な同定のために、各ｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅでの物質をＬＣＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙを利用して確認した。

下記表３は、２ａ化合物の７２時間後の加水分解安全性を示す表である。２ａは、Ｈ_２Ｏで７２時間放置した結果、２ｂ（Ｇｄ−ａｃｉｄ）で加水分解が起き、安定性が劣った。２ａ化合物は、ｔｒａｎｓ及びｃｉｓの２つの異性体が存在することを確認した。

下記表４は、２ｂ化合物の７２時間後の加水分解安全性を示す表である。２ｂは、Ｈ_２Ｏで７２時間放置した結果、ｕｎｋｎｏｗｎｉｍｐｕｒｉｔｙが増加した。２ｂ化合物は、ｔｒａｎｓ及びｃｉｓの２つの異性体が存在することを確認した。

下記表５は、２ｃ化合物の７２時間後の加水分解安全性を示した表である。２ｃは、Ｈ_２Ｏで７２時間放置した結果、ｕｎｋｎｏｗｎｉｍｐｕｒｉｔｙが微量増加したが、比較的安定したものと現われた。２ｃ化合物は、ｔｒａｎｓ及びｃｉｓの２つの異性体が存在することを確認した。

下記表６は、２ｄ化合物の７２時間後の加水分解安全性を示した表である。２ｄは、Ｈ_２Ｏで７２時間放置した結果、ｕｎｋｎｏｗｎｉｍｐｕｒｉｔｙが微量増加したが、比較的安定したものと現われた。

下記表７は、２ｅ化合物の７２時間後の加水分解安全性を示した表である。２ｅは、Ｈ_２Ｏで７２時間放置した結果、ｕｎｋｎｏｗｎｉｍｐｕｒｉｔｙが微量増加したが、比較的安定したものと現われた。

Claims

下記化学式１の構造を有するＤＯ３Ａ−トラネキサム酸（tranexamic acid）化合物：
前記化学式でＲは、Ｈ、ＮＨ_２またはＣＯＮＨ（ＣＨ_２）_２ＮＨ_２である。
ＲがＮＨ _２である場合のｎは０であり、ＲがＨ又はＣＯＮＨ（ＣＨ _２） _２ＮＨ _２である場合のｎは１である。
下記工程を含む請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物（化学式で、ｎ＝１且つＲ＝ＣＯＮＨ（ＣＨ_２）_２ＮＨ_２；化合物１ｃ）の製造方法：
ａ）トランス−４（アミノメチル）シクロヘキサンエチルカルボキシレートヒドロクロライド（ｔｒａｎｓ一４（ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅｅｔｈｙｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）にブロモアセチルブロマイド（ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）を添加して撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３を添加して撹拌し、ＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３-トラネキサミックエチルエステルコンジュゲートを作る工程；
ｃ）前記ＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックエチルエステルコンジュゲートに１、２−ジアミノエタンを添加する工程；
ｄ）前記混合物を低圧で溶媒をすべて除去した後、メタノールを入れてとかした後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；
ｅ）前記クロマトグラフィーから得た物質にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔｂｕｔｙｌグループを脱保護させる工程；及び
ｆ）前記物質を真空状態で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物を得る工程。
下記工程を含む請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物（化学式でｎ＝０且つＲ＝ＮＨ_２；化合物１ｄ）の製造方法：
ａ）トランス−１，４−ジアミンシクロヘキサン（ｔｒａｎｓ−１，４−ｄｉａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）に二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｄｉ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｃａｒｂｏｎａｔｅ）を添加して撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にブロモアセチルブロマイド（ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）を添加して撹拌する工程；
ｃ）前記混合物にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３を添加して撹拌し、ＤＯ３Ａ（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックアミンコンジュゲートを作る工程；
前記混合物を真空で溶媒をすべて除去した後、メタノールを入れてとかした後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；
ｅ）前記クロマトグラフィーから得た物質にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌグループを脱保護させる工程；及び
ｆ）前記真空状態で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物を得る工程。
下記工程を含む請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物（化学式でｎ＝１且つＲ＝Ｈ；化合物１ｅ）の製造方法：
ａ）アミノメチルシクロヘキサン（（ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ）ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）にブロモアセチルブロマイド（ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）を添加して撹拌する工程；
ｂ）前記混合物にＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３を添加して撹拌し、ＤＯ３Ａ−（^ｔＢｕＯ）_３−トラネキサミックコンジュゲートを作る工程；
ｃ）前記混合物を低圧で溶媒をすべて除去した後、メタノールを入れてとかした後、シリカゲルクロマトグラフィーを行う工程；
ｄ）前記クロマトグラフィーから得た物質にＴＦＡを添加し、ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌグループを脱保護させる工程；及び
ｅ）真空状態で乾燥し、ＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物を得る工程。
請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物を含む錯体リガンド（Ｌ）用組成物。
請求項１に記載のＤＯ３Ａ−トラネキサム酸化合物をリガンド（Ｌ）として含み、前記リガンドに配位結合する金属原子を含む錯体。
前記金属原子は、ガドリニウム（Ｇｄ）であることを特徴とする請求項６に記載の錯体。
請求項６または７に記載の錯体を有効成分として含む磁気共鳴映像（ＭＲＩ）造影剤。
前記造影剤は、ＥＣＦ（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕａｒｆｌｕｉｄ）造影剤機能を有することを特徴とする請求項８に記載の磁気共鳴映像（ＭＲＩ）造影剤。
前記造影剤は、向上した熱力学及び速度論的安定性及びｐＨ安定性を有することを特徴とする請求項８に記載の磁気共鳴映像（ＭＲＩ）造影剤。