JP6229365B2 - コロニーカウント装置、コロニーカウント方法、およびコロニーカウントプログラム - Google Patents

Description

本件は、コロニーカウント装置、コロニーカウント方法、およびコロニーカウントプログラムに関する。

菌は小さくて直接見ることが困難であるため、菌を培養することによってコロニーを生成することが行われている。特許文献１は、輪郭線上の各点における接線に対する法線を引き、その交点が集中する箇所からコロニーを数える技術を開示している。

特開平９−１４０３９７号公報

しかしながら、特許文献１では、引くべき法線の数が多くなり、処理時間がかかる。

１つの側面では、本発明は、簡易にコロニーをカウントすることができるコロニーカウント装置、コロニーカウント方法、およびコロニーカウントプログラムを提供することを目的とする。

１つの態様では、コロニーカウント装置は、培養された菌の画像を取得する画像取得部と、前記菌の画像において、輝度ピークを検出するピーク検出部と、前記ピーク検出部が検出した輝度ピークの数に基づいてコロニーをカウントするカウント部と、を備え、前記カウント部は、複数の輝度ピークの周辺の輝度分布から各輝度ピーク周辺の輝度勾配を算出し、当該輝度勾配において輝度値の低い方から輝度値の高い方に直線を引いた場合に各輝度ピークから当該直線の交点までに輝度値の変化が所定のしきい値を超える部分をまたぐか否かを判定し、またがないと判定した場合に、当該複数の輝度ピークを１つの輝度ピークとしてカウントする。

簡易にコロニーをカウントすることができる。

（ａ）および（ｂ）はコロニーを説明するための図である。 （ａ）はレシチナーゼ反応を説明するための図であり、（ｂ）は光沢を説明するための図である。 （ａ）は実施例１に係るコロニーカウント装置のハードウェア構成を説明するためのブロック図であり、（ｂ）はコロニーカウントプログラムの実行によって実現される各機能のブロック図である。 コロニーカウント装置によって実行されるフローチャートの一例を説明するための図である。 （ａ）〜（ｃ）は輝度ピークの検出の詳細を表す図である。 式（２）および式（３）の範囲を表す図である。 輝度ピークを検出する際に実行されるフローチャートの１例である。 １つのコロニーに複数の光沢が現れる例を表す図である。 実施例２に係るコロニーカウントプログラムの実行によって実現される各機能のブロック図である。 実施例２に係るコロニーカウント装置によって実行されるフローチャートの一例を説明するための図である。 （ａ）および（ｂ）は中心方向について説明するための図である。 （ａ）〜（ｅ）は輝度分布を説明するための図である。 輝度ピークが同一コロニーにあるか否かを検出する際に実行されるフローチャートの１例である。

実施例の説明に先立って、菌の検査の概略について説明する。飲食店や食料品メーカーでは、菌の量の検査が行われている。菌は小さくて直接見ることができないため、図１（ａ）を参照して、例えば、検査対象の食品を希釈したうえ培地上に塗り、数日間培養を行う。その結果、図１（ｂ）を参照して、菌が増殖して目に見える大きさのコロニーが生成される。コロニーをカウントすることによって、菌の量の検査を行うことができる。しかしながら、コロニーを目視でカウントする方法は非効率である。そこで、より簡易にコロニーをカウントする技術が望まれる。

例えば、装置を用いてコロニーを自動で検出する方法が挙げられる。培養後の菌の画像を取得し、輪郭の形状を用いて、つながっているコロニーを分離する技術を用いることができる。この技術は、輪郭線の垂線を伸ばした場合に、それらが交わる場合にその中心の個数を求めるという手法である。しかしながら、この技術では、３つ以上のコロニーがつながっているような場合にうまく分離できないという問題がある。

特に黄色ブドウ球菌などの菌は、培養するとコロニーの周りが半透明に白濁するレシチナーゼ反応という現象が発生する。図２（ａ）は、レシチナーゼ反応を説明するための模式図である。図２（ａ）を参照して、レシチナーゼ反応が生じると、コロニー１の周りに半透明の白濁領域２が現れる。レシチナーゼ反応が進んで白濁領域２が広がると、複数のコロニー１間で白濁領域２が重なってしまう。この場合、輪郭線に基づいてコロニーをカウントするのは困難である。

これに対して、図２（ｂ）を参照して、黄色ブドウ球菌などのリパーゼ陽性菌あるいは、表面が円滑なＳ（Ｓｍｏｏｔｈ）型の菌のコロニーでは、コロニー１に真珠様の光沢３が現れる。そこで、光沢３を検出し、光沢３をカウントすることによってコロニーをカウントすることができる。以下の実施例では、光沢に着目し、簡易にコロニーをカウントすることができるコロニーカウント装置、コロニーカウント方法、およびコロニーカウントプログラムについて説明する。

図３（ａ）は、実施例１に係るコロニーカウント装置１００のハードウェア構成を説明するためのブロック図である。図３（ａ）を参照して、コロニーカウント装置１００は、ＣＰＵ１０１、ＲＡＭ１０２、記憶装置１０３、表示装置１０４、画像センサ１０５、光源１０６等を備える。

ＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）１０１は、中央演算処理装置である。ＣＰＵ１０１は、１以上のコアを含む。ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）１０２は、ＣＰＵ１０１が実行するプログラム、ＣＰＵ１０１が処理するデータなどを一時的に記憶する揮発性メモリである。記憶装置１０３は、不揮発性記憶装置である。記憶装置１０３として、例えば、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）、フラッシュメモリなどのソリッド・ステート・ドライブ（ＳＳＤ）、ハードディスクドライブに駆動されるハードディスクなどを用いることができる。記憶装置１０３は、コロニーカウントプログラムなどを記憶している。

表示装置１０４は、液晶ディスプレイ、エレクトロルミネッセンスパネルなどであり、画像センサ１０５が取得した画像、コロニーのカウントの結果などを表示する。画像センサ１０５は、培養された菌の画像を取得できるものであれば特に限定されるものではなく、一例としてＣＭＯＳ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ｍｅｔａｌ Ｏｘｉｄｅ Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ）カメラなどである。光源１０６は、培養された菌に対して光を照射する装置である。

なお、画像センサ１０５は、一例として、シャーレ上で卵黄加マンニット食塩寒天培地等の培地で培養処理を行った後の画像を取得する。シャーレの位置は、予め決められているものとする。例えば、撮影中の画像に解析範囲の円形を重畳表示して、人がおおざっぱな位置合わせを行う方法等がある。また、画像を解析して、ハフ変換などの既存手法を用いてシャーレの円形を抽出する方法等も考えられる。

記憶装置１０３に記憶されているコロニーカウントプログラムは、実行可能にＲＡＭ１０２に展開される。ＣＰＵ１０１は、ＲＡＭ１０２に展開されたコロニーカウントプログラムを実行する。それにより、コロニーカウント装置１００によるコロニーカウント処理が実行される。コロニーカウント処理は、コロニーをカウントする処理である。

図３（ｂ）は、コロニーカウントプログラムの実行によって実現される各機能のブロック図である。コロニーカウントプログラムの実行によって、コロニーカウント装置１００には、画像取得部１０、ピーク点検出部２０、および菌検出部３０が実現される。

続いて、コロニーカウント装置１００の動作について説明する。図４は、コロニーカウント装置１００によって実行されるフローチャートの一例を説明するための図である。図４を参照して、画像取得部１０は、画像センサ１０５から菌の画像を取得する（ステップＳ１）。次に、ピーク点検出部２０は、ステップＳ１で取得した画像から、光沢の候補として輝度ピークを検出することによって光沢を検出する（ステップＳ２）。次に、菌検出部３０は、ステップＳ２で検出された光沢をカウントすることで、コロニーをカウントする（ステップＳ３）。以上の処理の実行によって、コロニーをカウントすることができる。

次に、光沢の検出の詳細について説明する。光沢は、周りと比べて輝度が高くなっている箇所である。そこで、本実施例では、輝度ピークを検出することによって、光沢を検出する。図５（ａ）〜図５（ｃ）は、輝度ピークの検出の詳細を表す図である。図５（ａ）を参照して、ピーク点検出部２０は、画像センサ１０５から取得した画像をスキャンすることによって、当該画像における輝度の分布を取得する。図５（ｂ）は、あるコロニー１を含む領域の拡大図である。図５（ｃ）は、図５（ｂ）のコロニー１の光沢３の周辺の拡大図である。図５（ｃ）を参照して、光沢３においては周囲と比較して輝度が高くなることから、輝度ピークを検出することによって光沢３を検出することができる。例えば、所定の画素（１つの画素でもよく、３×３等の複数の画素の平均としてもよい）が、その周辺の画素と比較してしきい値以上に高い場合に、当該所定の画素の部分を輝度ピークとして検出することができる。

まず、画像センサ１０５が取得した画像において、座標位置（ｘ，ｙ）の画素の輝度をｐ（ｘ，ｙ）とした場合、輝度Ｐ（ｘ，ｙ）を中心画素の輝度とする。中心画素の輝度Ｐ（ｘ，ｙ）として、輝度ｐ（ｘ，ｙ）そのものを用いても構わないが、複数の画素の平均を用いても構わない。例えば、上下左右１ピクセル（合計９ピクセル）の平均を求める場合は、下記式（１）に従って中心画素の輝度Ｐ（ｘ，ｙ）を求めることができる。

次にその周辺の画素（例えば、１０×１０の領域内画素、中心付近を除く）の輝度がすべて、中心画素の輝度Ｐ（ｘ，ｙ）より低く、かつ一定距離以上離れた位置の画素値が中心画素の輝度よりしきい値以上低い場合にその部分を輝度のピークとして検出する。具体的には、下記式（２）および下記式（３）が成立する場合に、中心画素が輝度のピークとして検出される。なお、「ｒ１」、「ｒ２」は範囲を表わし、ｒ１＜ｒ２の関係が成立する。また、「ｔ」はしきい値を表す。図６は、下記式（２）および下記式（３）の範囲を表す図である。

上記式では、四角形の範囲を抽出しているが、他の範囲でも構わない。例えば円形の場合は、式は以下のようになる。
ｐ（ａ，ｂ）≦Ｐ（ｘ，ｙ） ａ，ｂは（ａ−ｘ）^２＋（ｂ−ｙ）^２≦ｒ１^２を満たす範囲。
ｐ（ｃ，ｄ）≦Ｐ（ｘ，ｙ）−ｔ ｃ，ｄは（ｒ１^２≦（ｘ−ｃ）^２＋（ｙ−ｄ）^２≦ｒ２^２を満たす範囲。

図７は、輝度ピークを検出する際に実行されるフローチャートの１例である。図７を参照して、ピーク点検出部２０は、現在位置（ｘ，ｙ）を設定する（ステップＳ１１）。次に、ピーク点検出部２０は、現在位置の周辺の画素値の平均値を求める（ステップＳ１２）。次に、ピーク点検出部２０は、現在位置の周辺の画素で、ステップＳ１２で求めた平均値以上の画素があるか判定する（ステップＳ１３）。

ステップＳ１３で「Ｎｏ」と判定された場合、ピーク点検出部２０は、現在位置の一定距離離れた位置の画素で、（ステップＳ１２で求めた平均値−しきい値）以上の画素があるか判定する（ステップＳ１４）。ステップＳ１４で「Ｎｏ」と判定された場合、ピーク点検出部２０は、現在位置（ｘ，ｙ）を輝度のピークとして設定する（ステップＳ１５）。次に、ピーク点検出部２０は、現在位置をｘ軸プラス方向（例えば右）に移動させる（ステップＳ１６）。現在位置が既に右端であれば、ｙ軸マイナスの列（例えば下）の左端に現在位置を移動させる。次に、ピーク点検出部２０は、画像の全ての座標について輝度ピークの検出処理が終了したか否かを判定する（ステップＳ１７）。ステップＳ１７で「Ｎｏ」と判定された場合、ステップＳ１２から再度実行される。

図５のフローチャートの実行によって、全ての座標に関して輝度ピークの検出を行うことができる。なお、ステップＳ１３またはステップＳ１４で「Ｙｅｓ」と判定された場合、ステップＳ１７が実行される。

本実施例によれば、取得した画像において輝度ピークを検出するだけでコロニーをカウントすることができるため、簡易にコロニーをカウントすることができる。また、レシチナーゼ反応が生じても各コロニーに光沢が現れるため、高い精度でコロニーをカウントすることができる。

黄色ブドウ球菌などの球菌には、真珠様の光沢が現れるが、図８を参照して、１つのコロニー１に複数の光沢３が現れる場合がある。そこで、実施例２においては、複数の光沢が現れているコロニーを検出し、重複する光沢の数を差し引くことによって、コロニーのカウント精度を向上させる。

図９は、実施例２に係るコロニーカウントプログラムの実行によって実現される各機能のブロック図である。コロニーカウントプログラムの実行によって、コロニーカウント装置１００には、画像取得部１０、ピーク点検出部２０、菌検出部３０、近接ピーク点検出部４０、ピーク点方向検出部５０、ピーク点方向交差検出部６０、点間変化検出部７０、および同一コロニー判定部８０が実現される。

図１０は、実施例２に係るコロニーカウント装置１００によって実行されるフローチャートの一例を説明するための図である。図１０を参照して、画像取得部１０は、画像センサ１０５から菌の画像を取得する（ステップＳ２１）。次に、ピーク点検出部２０は、ステップＳ２１で取得した画像から、光沢の候補として輝度ピークを検出することによって光沢を検出する（ステップＳ２２）。次に、同一コロニー判定部８０は、近接ピーク点検出部４０、ピーク点方向検出部５０、ピーク点方向交差検出部６０および点間変化検出部７０の処理結果に応じて、輝度ピークが同一コロニーにあるか否かを判定する（ステップＳ２３）。次に、菌検出部３０は、ステップＳ２２で検出された輝度ピークの数から、ステップＳ２３で検出された重複分を差し引くことによって、コロニーをカウントする（ステップＳ２４）。以上の処理の実行によって、高い精度でコロニーをカウントすることができる。

続いて、図１０のステップＳ２３の処理の詳細について説明する。ステップＳ２３では、輝度ピークが複数検出された場合に、それらが同一のコロニーであるかどうかの判定を行う。同一のコロニーかどうかの判定は、例えば、二つの輝度ピーク間の距離および向き、ならびに画素により行うことができる。

（１）コロニーの中心方向の検出
まず、近接ピーク点検出部４０は、互いの距離がしきい値以下となる複数の輝度ピークを検出する。ピーク点方向検出部５０は、これらの輝度ピークから見た、コロニーの中心方向を検出する。コロニーの周りの輝度は、コロニー内の輝度より低いため、光沢周辺において輝度が低い方向から高い方向を求めることで中心方向を検出することができる。すなわち、輝度勾配を求めることによって、中心方向を検出することができる。図１１（ａ）は、各光沢３における輝度勾配を表す図である。輝度勾配の検出方法として、以下のような方法が考えられる。まず、図１１（ｂ）を参照して、輝度ピークについて、その周辺の画素情報を取得し、上側、下側、右側、左側の指定サイズの領域について、その輝度の平均を検出する。それぞれをＡｕ，Ａｄ，Ａｒ，Ａｌとすると、輝度の勾配方向（勾配角度θ）は、下記式（４）で表すことができる。

Ａｒは、例えば、下記式（５）に従って算出することができる。

ここで、ｒ１は、中心から平均を求める内側の線までの距離、ｒ２は、中心から平均を求める外側までの距離となる。領域のサイズが不変である場合は分母を省略しても構わない。

（２）輝度のピークをつなぐ線の交差判定
ピーク点方向交差検出部６０は、中心方向が交差する点を求める。この交差する点は、中心方向上の直線の交点により求めることができる。輝度ピークの位置をそれぞれ（ｘ１，ｙ１）、（ｘ２，ｙ２）とし、勾配をそれぞれａ１，ａ２とした場合、二つの頂点の交点は、下記式（６）および下記式（７）で求めることができる。

同一コロニー判定部８０は、この交点と（ｘ１，ｙ１）、（ｘ２，ｙ２）との距離を求め、その距離があらかじめ指定したしきい値以下の場合、この２つの輝度のピークが同一コロニー上にある可能性があると判定する。すなわち、同一コロニー判定部８０は、複数の輝度ピークが所定のしきい値以下となるように近接している場合に、それらの輝度ピークが同一のコロニー内のものであると判定する。なお、図１２（ａ）の例では、中心方向が交差する交点と輝度ピークとの距離が大きくなるため、検出された複数の輝度ピークは同一のコロニー内のものであると判定されない。

（３）直線上の輝度変化の抽出
例えば、図１２（ｂ）のように複数の輝度ピークが同一コロニー内に現れる場合、図１２（ｄ）のように一方の輝度ピークから中心方向の交点への輝度の変化、および当該交点から他方の輝度ピークへの輝度の変化は小さくなる。これに対して、図１２（ｃ）のように輝度ピークが異なるコロニーに現れる場合、図１２（ｅ）のように一方の輝度ピークから中心方向の交点への輝度の変化、および当該交点から他方の輝度ピークへの輝度の変化は、コロニーの境界付近で大きくなる。そこで、一方の輝度ピークから中心方向の交点への輝度の変化、および当該交点から他方の輝度ピークへの輝度の変化において、所定のしきい値を超える部分が無ければ、それらの輝度ピークは同一のコロニー内に現れているものと判定することができる。

まず、点間変化検出部７０は、（ｘ１，ｙ１）→（ｘ，ｙ）→（ｘ２，ｙ２）において、交点（ｘ，ｙ）で折れ曲がっている直線を算出する。座標位置を下記式（８）および下記式（９）で表した場合の輝度変化を求める。なお、ｔは０≦ｔ≦１の範囲の値を持つ媒介変数であり、下記式（８）は０≦ｔ≦０．５の範囲でｔが０→０．５まで変化した場合に座標値が（ｘ１，ｙ１）→（ｘ，ｙ）まで変動する際の座標値（ｘ´，ｙ´）を求める場合の式であり、下記式（９）は０．５≦ｔ≦１の範囲でｔが０．５→１まで変化した場合に座標値が（ｘ１，ｙ１）→（ｘ，ｙ）まで変動する際の座標値（ｘ´，ｙ´）を求める場合の式である。

この場合、輝度ピークをつなぐ線の輝度の関数は、下記式（１０）のように表すことができる。なお、下記式（１０）において、ｔは、０≦ｔ≦１である。また、ｖ（ｔ）は位置ｔにおける輝度値である。この場合、下記式（１１）に従って、輝度の分散を求めることができる。このｖバーはｖ（ｔ）の平均値である。式（１１）は積分を用いているが、式（１２）のように離散的な値の和として分散を計算しても構わない。ここで、ｍは計算する点の個数であり、１０など固定の値を指定する。この分散の値があらかじめ決められたしきい値より小さい場合、同一のコロニー上にあると判定することができる。

同一コロニーにあるかどうかの判定は、条件によってはより簡略化した方法を用いることも考えられる。たとえば、（３）の輝度変化の条件を使わずに（２）のの処理までで判定することも考えられる。また（１）（２）の処理を使用せずに、二つの輝度のピークをつないだ直線上の（３）の輝度変化を用いることも考えられる。

図１３は、輝度ピークが同一コロニーにあるか否かを検出する際に実行されるフローチャートの１例である。図１３を参照して、近接ピーク点検出部４０は、距離が近い（しきい値以下の）輝度ピークを２つ選択する（ステップＳ３１）。次に、ピーク点方向検出部５０は、各輝度ピークの上下左右の画素の輝度平均を求め、輝度勾配（中心方向）を求める（ステップＳ３２）。

次に、ピーク点方向交差検出部６０は、２つの輝度勾配の交点を求め、それぞれの距離を求める（ステップＳ３３）。点間変化検出部７０は、交点が２つの輝度のピークに対してしきい値以上離れているか否かを判定する（ステップＳ３４）。ステップＳ３４で「Ｎｏ」と判定された場合、点間変化検出部７０は、交線上の輝度変化を求める（ステップＳ３５）。

次に、同一コロニー判定部８０は、輝度変化がしきい値以下であるか否かを判定する（ステップＳ３６）。ステップＳ３６で「Ｙｅｓ」と判定された場合、同一コロニー判定部８０は、２つの輝度のピークは同一コロニーにあると判定する（ステップＳ３７）。ステップＳ３６で「Ｎｏ」と判定された場合、同一コロニー判定部８０は、２つの輝度のピークは同一コロニーにないと判定する（ステップＳ３８）。ステップＳ３４で「Ｙｅｓ」と判定された場合、ステップＳ３８が実行される。ステップＳ３７またはステップＳ３８の実行後、同一コロニー判定部８０は、全ての輝度ピークを判定したか否かを判定する（ステップＳ３９）。ステップＳ３９で「Ｎｏ」と判定された場合、ステップＳ３１が再度実行される。ステップＳ３９で「Ｙｅｓ」と判定された場合、フローチャートの実行が終了する。

本実施例によれば、同一コロニー内に複数の光沢が現れる場合に、重複分をカウントから除外することができる。それにより、コロニーのカウント精度が向上する。具体的には、互いの距離がしきい値以下の２つの輝度ピークから中心方向に直線を引いた場合に、当該直線の交点と２つの輝度ピークとの距離がしきい値以下であれば、当該２つの輝度ピークは同一コロニー内にあると判定する。この場合、コロニーのカウント精度が向上する。また、当該２つの輝度ピークと当該交点とを結ぶ直線において、輝度変化が大きい場合に、当該２つの輝度ピークが異なるコロニー内にあると判定し、輝度変化が小さい場合に、当該２つの輝度ピークは同一コロニー内にあると判定する。この場合にも、コロニーのカウント精度が向上する。

なお、コロニーカウントプログラムの実行によって実現される各部は、専用の回路などによって構成されていてもよい。

実施例１においては、菌検出部３０が、コロニーをカウントするカウント部として機能する。実施例２においては、近接ピーク点検出部４０、ピーク点方向検出部５０、ピーク点方向交差検出部６０、点間変化検出部７０、同一コロニー判定部８０および菌検出部３０が、コロニーをカウントするカウント部として機能する。

以上、本発明の実施例について詳述したが、本発明は係る特定の実施例に限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された本発明の要旨の範囲内において、種々の変形・変更が可能である。

１０ 画像取得部
２０ ピーク点検出部
３０ 菌検出部
４０ 近接ピーク点検出部
５０ ピーク点方向検出部
６０ ピーク点方向交差検出部
７０ 点間変化検出部
８０ 同一コロニー判定部
１００ コロニーカウント装置

Claims (5)

1. 培養された菌の画像を取得する画像取得部と、
   前記菌の画像において、輝度ピークを検出するピーク検出部と、
   前記ピーク検出部が検出した輝度ピークの数に基づいてコロニーをカウントするカウント部と、を備え、
   前記カウント部は、複数の輝度ピークの周辺の輝度分布から各輝度ピーク周辺の輝度勾配を算出し、当該輝度勾配において輝度値の低い方から輝度値の高い方に直線を引いた場合に各輝度ピークから当該直線の交点までに輝度値の変化が所定のしきい値を超える部分をまたぐか否かを判定し、またがないと判定した場合に、当該複数の輝度ピークを１つの輝度ピークとしてカウントすることを特徴とするコロニーカウント装置。
2. 前記複数の輝度ピークの距離は、所定のしきい値以下であることを特徴とする請求項１記載のコロニーカウント装置。
3. 前記菌は、黄色ブドウ球菌であることを特徴とする請求項１または２に記載のコロニーカウント装置。
4. 培養された菌の画像を取得し、
   前記菌の画像において、輝度ピークを検出し、
   検出された輝度ピークの数に基づいてコロニーをカウントし、
   前記カウントの際に、複数の輝度ピークの周辺の輝度分布から各輝度ピーク周辺の輝度勾配を算出し、当該輝度勾配において輝度値の低い方から輝度値の高い方に直線を引いた場合に各輝度ピークから当該直線の交点までに輝度値の変化が所定のしきい値を超える部分をまたぐか否かを判定し、またがないと判定した場合に、当該複数の輝度ピークを１つの輝度ピークとしてカウントすることを特徴とするコロニーカウント方法。
5. コンピュータに、
   培養された菌の画像を取得するステップと、
   前記菌の画像において、輝度ピークを検出するステップと、
   検出された輝度ピークの数に基づいてコロニーをカウントするステップと、を実行させ、
   前記カウントするステップにおいて、複数の輝度ピークの周辺の輝度分布から各輝度ピーク周辺の輝度勾配を算出し、当該輝度勾配において輝度値の低い方から輝度値の高い方に直線を引いた場合に各輝度ピークから当該直線の交点までに輝度値の変化が所定のしきい値を超える部分をまたぐか否かを判定し、またがないと判定した場合に、当該複数の輝度ピークを１つの輝度ピークとしてカウントすることを特徴とするコロニーカウントプログラム。

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