JP6216399B2 - セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 - Google Patents
セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6216399B2 JP6216399B2 JP2016032772A JP2016032772A JP6216399B2 JP 6216399 B2 JP6216399 B2 JP 6216399B2 JP 2016032772 A JP2016032772 A JP 2016032772A JP 2016032772 A JP2016032772 A JP 2016032772A JP 6216399 B2 JP6216399 B2 JP 6216399B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bacillus
- protein
- detergent
- gene
- cellulase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
図1Aは不活性化されたbglC遺伝子を含むバチルス宿主細胞を構築するために使用される戦略示す。
他に断らない限り、本明細書で用いられる技術及び科学上の用語は、本発明が関係する分野の当業者により通常理解されるものと同様の意味を持つ。例えば、Singleton及びSainsburyの「微生物学及び分子生物学辞典」(Dictionary of Microbiology and Molecular Biology)第2版、John Wiley and Sons, NY (1994); 及びHale及びMarhamの 「Harper Collins 生物学辞典」(The Harper Collins Dictionary of Biology), Harper Perennial, NY (1991)は当業者に、本明細書で使用される多くの用語についての一般的辞書を提供する。本明細書に記載の方法及び材料と同様の又は同等の方法及び材料は本発明の実施のために使用されるが、好ましい方法及び材料が本明細書に記載される。したがって、以下に定義される用語は明細書を全体として参照することによってより的確に規定される。また、本明細書で用いる単数形冠詞(a an)及び定冠詞(the)は、文意より明らかに他の意味に解される場合を除き、その複数の場合を含む。したがって、例えば、単数形の「宿主細胞」(a host cell)は「宿主細胞」の複数形を含む。同様に、単数形「遺伝子」(a gene)はその様な候補因子の複数形を含み、定冠詞を付した細胞(the cell)を言う場合、一以上の細胞及び当業者に知られている同等物についても言及するものとする。これらはその他の事象について言う場合も同様に適用されるものとする。
上で示した様に、本発明は低減した(例えば、検出されない)レベルのセルラーゼを生成するバチルス種宿主細胞を提供する。一般的に、本発明のバチルス種宿主細胞は通常同等の野生型バチルス種宿主細胞のセルラーゼの約50%未満(例えば、約40%未満、約%30未満、約20%未満、又は約10%未満)を生成する。ある実施の態様においては、本発明の細胞は同等のバチルス種宿主細胞のセルラーゼの約5%未満を生成する。ある特に好ましい実施の態様においては、セルラーゼは検出されない(すなわち、バチルス種宿主細胞はセルラーゼを含まないバチルス種宿主細胞である)。セルラーゼ活性は、例えば、セルラーゼ含有LP寒天プレートをコンゴ赤(例えば、Wolf 他、「微生物学」(Microbiol.), 141:281-290 [1995];及び Carder, Anal. 「バイオ化学」(Biochem.), 153:75-9 [1986]を参照)で染色する、及び/又は以下に更に詳細に記載する様に粘度アッセイによるなどの好適な任意の方法により評価することを意図している。
バチルス リチェニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス レンツス (Bacillus lentus)、バチルス スブチリス (Bacillus subtilis)、バチルス アミロリケファシエンス(Bacillus amylloliquefaciens)、バチルス ブレビス(Bacillus brevis)、バチルス ステアロテルモフィルス(Bacillus stearothermophilus)、バチルス アルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、バチルス コアグランス(Bacillus coagulans)、バチルス シルクランス(Bacillus circulans)、バチルス プミルス (Bacillus pumilus)、バチルス ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)、バチルス クラウシ(Bacillus clausii)、又はバチルス メガテリウム(Bacillus megaterium)。
スブチリシン(例えば、細胞外アルカリ性 セリン プロテアーゼ)は特に関心の対象となる。任意の好適なスブチリシンは本発明で用いることができる(例えば、Siezen, Protein Sci.、6:501 -523 [1997]; Bryan,Biochim. Biophys、Acta, 1543:203-222 [2000]; Maurer, Curr. Op, Biotechnol., 2004 15:330-334 [2004];及びGupta, Appl. Microbiol. Biotechnol., 59:15-32 [2002]を参照)。ある実施の態様においては、関心の対象であるスブチリシンはIUMBM酵素命名法によるEC 3.4.4.16として表される活性を持つ。
ある実施の態様においては、宿主細胞がタンパク質組成物及び洗濯洗剤を生成するために使用され、ある好ましい実施の態様においては洗剤は少なくとも一つのセルロース系ポリマーを含む。
以下の実施例は本発明が如何に発明されまた本発明を如何に使用するかの完全な開示及び記述を提供するが、これは発明者が発明と考えているものの範囲を限定することを意図するものでもなく、また以下の実験は実施された実験の全て又は唯一のものであることを示すことを意図しているものでもない。用いられる数字(例えば、量、温度など)に関して出来るだけ正確なものにする様に務めているがある実験上の誤り及び誤差は避けることはできないことは了解すべきである。断らない限り、部分は重量部分であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧又はそれに近いものである。
bglC遺伝子の欠失のための全体の戦略を図1A−Bの略図に表わす。簡潔に言えば、bglC遺伝子の側面に位置する上流及び下流DNAはPCRにより増幅されそしてベクター中で結紮された。挿入は制限エンドグルカナーゼによる消化により開かれ、そしてloxP部位が側面に位置するスペクチノマイシンカセットが結紮された。結果のプラスミドは制限エンドグルカナーゼによる消化により線状にされそしてバチルスに形質転換された。導入された抗菌性マーカー(スペクチノマイシン)による選択により、関心の対象となる遺伝子の置換は二重クロスオーバーにより達成された。bglCの場合、コード領域は、側面に位置するloxP部位を認識するCreリコンビナーゼを用いてループを作る(loop out)スペクチノマイシン耐性遺伝子により置換された。
粘度アッセイ
細胞はスブチリシン生成に適した50 mLの成長培地を含む250 mlバッフルフラスコで成長させた(Christianson他、Anal. Biochem., 223:119-129 [1994]; 及びHsia他、Anal. Biochem., 242:221-227 [1996]を参照)。媒体は8時間培養した5mL培養物の50μLを植菌され、40時間37℃、250 RPMで振動させ成長させた。宿主 A (-bglC)、宿主 B (-bglC), 宿主 C (-bglS) 及び宿主 D (-bglS)の培養物を48時間成長させた。
プロテアーゼを生成するbglC::スペクチノマイシン株の構築
以下の株がこの実験で使用された:スブチリシン プロテアーゼを生成するバチルス スブチリス株及び挿入によりbgICが不活性化された同じ株である。
Claims (1)
- セルラーゼを含まない洗濯洗剤の製造方法であって、
前記製造方法は、
(1)分泌された洗剤添加タンパク質の生成のために適した条件下で培地及び組み換えバチルス(Bacillus)種宿主細胞を含む細胞の培養物を維持すること、ここで、前記組み換えバチルス種宿主細胞は不活性化されたbglC遺伝子を含み、前記バチルス種宿主細胞がバチルス スブチリス(Bacillus subtilis)細胞であり、前記細胞は分泌された洗剤添加タンパク質の生成のための組み換え核酸を更に含む、
(2)前記培地から前記分泌された洗剤添加タンパク質を回収すること、
(3)前記分泌された洗剤添加タンパク質を洗濯洗剤と組み合わせること、及び
(4)更に、少なくとも一つのセルロース系ポリマーを添加することを含む、
製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US84998206P | 2006-10-06 | 2006-10-06 | |
US60/849,982 | 2006-10-06 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009531400A Division JP5932205B2 (ja) | 2006-10-06 | 2007-09-26 | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016165269A JP2016165269A (ja) | 2016-09-15 |
JP6216399B2 true JP6216399B2 (ja) | 2017-10-18 |
Family
ID=39185845
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009531400A Active JP5932205B2 (ja) | 2006-10-06 | 2007-09-26 | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 |
JP2016032772A Active JP6216399B2 (ja) | 2006-10-06 | 2016-02-24 | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009531400A Active JP5932205B2 (ja) | 2006-10-06 | 2007-09-26 | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8383567B2 (ja) |
EP (1) | EP2069494B1 (ja) |
JP (2) | JP5932205B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0718226B1 (ja) |
CA (1) | CA2665521C (ja) |
DK (1) | DK2069494T3 (ja) |
MX (1) | MX2009003467A (ja) |
WO (1) | WO2008045214A2 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5932205B2 (ja) * | 2006-10-06 | 2016-06-08 | ダニスコ・ユーエス・インク、ジェネンコー・ディビジョン | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 |
US11447782B2 (en) | 2016-03-04 | 2022-09-20 | Danisco Us Inc. | Engineered ribosomal promoters for protein production in microorganisms |
WO2019089898A1 (en) | 2017-11-02 | 2019-05-09 | Danisco Us Inc | Freezing point depressed solid matrix compositions for melt granulation of enzymes |
CN113881618B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-10-03 | 长江大学 | 一种分泌乳酪蛋白的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法和应用 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5013657A (en) * | 1988-04-12 | 1991-05-07 | Bryan Philip N | Subtilisin mutations |
EP2075338A3 (en) * | 1990-12-10 | 2010-03-03 | Genencor International, Inc. | Improved saccharification of cellulose by cloning and amplification of the ß -glucosidase gene of trichoderma reesei |
EP0628625B1 (en) * | 1993-06-07 | 1999-05-06 | The Procter & Gamble Company | Protease compatible with lipase in dry, concentrated bleach compositions |
EP0877787A1 (en) * | 1995-12-29 | 1998-11-18 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising immobilized enzymes |
DE19615776A1 (de) * | 1996-04-20 | 1997-10-23 | Henkel Kgaa | Löslichkeitsverbessertes Enzymgranulat |
US6723550B1 (en) * | 1997-07-15 | 2004-04-20 | Genencor International, Inc. | Proteases from gram-positive organisms |
US6323007B1 (en) * | 1998-09-18 | 2001-11-27 | Novozymes A/S | 2,6-β-D-fructan hydrolase enzyme and processes for using the enzyme |
US6608018B1 (en) * | 1999-03-29 | 2003-08-19 | Novozymes A/S | Polypeptides having branching enzyme activity and nucleic acids encoding same |
US6617143B1 (en) * | 1999-10-20 | 2003-09-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucanotransferase activity and nucleic acids encoding same |
US6511835B1 (en) * | 2000-04-14 | 2003-01-28 | Novozymes, A/S | Nucleic acids encoding polypeptides having haloperoxidase activity |
US6410292B1 (en) * | 2000-04-14 | 2002-06-25 | Novozymes A/S | Nucleic acids encoding polypeptides having haloperoxidase activity |
AU2001246404A1 (en) * | 2000-04-14 | 2001-10-30 | Novozymes A/S | Polypeptides having haloperoxidase activity |
AU2001246407A1 (en) * | 2000-04-14 | 2001-10-30 | Maxygen, Inc. | Nucleic acids encoding polypeptides having haloperoxidase activity |
US6509181B1 (en) * | 2000-04-14 | 2003-01-21 | Novozymes, A/S | Polypeptides having haloperoxide activity |
US6511371B2 (en) * | 2000-10-02 | 2003-01-28 | Novozymes, A/S | Nucleic acids encoding polypeptides having proteolytic activity |
US7056721B2 (en) * | 2001-12-18 | 2006-06-06 | Genencor International, Inc. | EGVI endoglucanase and nucleic acids encoding the same |
US7005289B2 (en) * | 2001-12-18 | 2006-02-28 | Genencor International, Inc. | BGL5 β-glucosidase and nucleic acids encoding the same |
US7407788B2 (en) * | 2002-11-21 | 2008-08-05 | Danisco A/S, Genencor Division | BGL7 beta-glucosidase and nucleic acids encoding the same |
JP5932205B2 (ja) * | 2006-10-06 | 2016-06-08 | ダニスコ・ユーエス・インク、ジェネンコー・ディビジョン | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 |
-
2007
- 2007-09-26 JP JP2009531400A patent/JP5932205B2/ja active Active
- 2007-09-26 WO PCT/US2007/020851 patent/WO2008045214A2/en active Application Filing
- 2007-09-26 CA CA2665521A patent/CA2665521C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-09-26 MX MX2009003467A patent/MX2009003467A/es active IP Right Grant
- 2007-09-26 EP EP07838934.3A patent/EP2069494B1/en not_active Not-in-force
- 2007-09-26 BR BRPI0718226-0A patent/BRPI0718226B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-09-26 DK DK07838934.3T patent/DK2069494T3/da active
- 2007-09-26 US US12/443,241 patent/US8383567B2/en active Active
-
2016
- 2016-02-24 JP JP2016032772A patent/JP6216399B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2008045214A2 (en) | 2008-04-17 |
CN102016028A (zh) | 2011-04-13 |
MX2009003467A (es) | 2009-04-14 |
BRPI0718226A2 (pt) | 2013-11-12 |
JP2010521134A (ja) | 2010-06-24 |
CA2665521C (en) | 2016-10-18 |
JP2016165269A (ja) | 2016-09-15 |
EP2069494B1 (en) | 2015-11-18 |
US20110098207A1 (en) | 2011-04-28 |
US8383567B2 (en) | 2013-02-26 |
JP5932205B2 (ja) | 2016-06-08 |
DK2069494T3 (da) | 2016-02-15 |
CA2665521A1 (en) | 2008-04-17 |
BRPI0718226B1 (pt) | 2020-10-27 |
EP2069494A2 (en) | 2009-06-17 |
WO2008045214A3 (en) | 2008-07-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20240182914A1 (en) | Compositions and methods for increased protein production in bacillus licheniformis | |
JP6216399B2 (ja) | セルラーゼを含まない酵素組成物及びこれを生成するための宿主細胞 | |
CN113366108A (zh) | 新颖启动子序列及其增强芽孢杆菌属细胞蛋白生产的方法 | |
EP3735478B1 (en) | Mutant and genetically modified bacillus cells and methods thereof for increased protein production | |
KR20180117166A (ko) | 미생물에서의 단백질 생산을 위한 유전자 조작 리보솜 프로모터 | |
CN112074530A (zh) | 包含粘度降低表型的丝状真菌菌株 | |
EP4090738A1 (en) | Compositions and methods for enhanced protein production in bacillus licheniformis | |
JP5294666B2 (ja) | 組換え微生物 | |
AU2010308865B2 (en) | Modified promoter | |
KR102588719B1 (ko) | 향상된 단백질 발현 | |
CN102016028B (zh) | 无纤维素酶的酶组合物及用于生产其的宿主细胞 | |
KR100411238B1 (ko) | 외래 단백질을 안정하게 발현하는 바실러스 속 미생물 | |
CN112654704A (zh) | 包含蛋白质生产率提高表型的突变和遗传修饰的丝状真菌菌株及其方法 | |
CN113785056A (zh) | 改善蛋白酶表达的手段和方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161220 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170306 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A132 Effective date: 20170509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170809 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170829 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170922 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6216399 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |