JP6202501B2 - 精子の選抜部構造及び同精子の選抜部構造を備えた精子スクリーニング装置並びに授精用精子液の調製方法 - Google Patents
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Description
(1)前記広幅の流路は、前記開口から上流側へ向けて狭窄するように構成したこと。
(2)前記貯留部に前記遡上路を複数連結させたこと。
次に、種々の流路パターンを有するチップ体を用いて構成した精子スクリーニング装置で行った精子のスクリーニングの試験について説明する。本試験はすなわち、授精用精子液の調製試験、より具体的には人工授精用精子液の調製試験でもある。
JAさがより購入した「辰之介(しんのすけ;黒毛和種)」の凍結精液を37℃で解凍後、遠心により、精漿(capacitationを抑える作用)と抗凍結剤などを除去した。
WHGオーシヤニツクジヨビアンET(ホルスタイン種)の凍結精液を所定の手順で解凍した。解凍精液200μLを1.5mL容チューブに分取して遠心(7分、2000rpm)し、上澄みを半分ほど捨て、約100μL残した状態とした。
11 狭隘遡上路
12 層状流路
13 スリット状開口部
20 貯留部
21 狭隘遡上路
22 層状流路
23 スリット状開口部
30 貯留部
31 狭隘遡上路
32 層状流路
33 スリット状開口部
42 チップ体
46 選抜前精子液貯留部
52 マイクロ流路
61 緩衝液供給路
62 合流部
63 遡上路
64 回収路
65 狭隘遡上路
66 層状流路
67 スリット状開口部
A 選抜部構造
B 選抜部構造
C 選抜部構造
D 精子スクリーニング装置
S 精子
Claims (16)
- 動物より採取された精子を含有する選抜前精子液を貯留する貯留部と、
貯留部に連通し貯留部方向へ緩衝液が層流として流れる緩衝液流路と、
貯留部から緩衝液流路中を精子が遡上するように貯留部に連通した遡上路とよりなる精子の選抜部構造において、
前記遡上路の下流部は、前記緩衝液の層流状態を維持しつつ緩流とする広幅の流路とし、この流路の下流端部を前記貯留部の壁面に臨ませて開口させたことを特徴とする精子の選抜部構造。 - 前記広幅の流路は、前記開口から上流側へ向けて狭窄するように構成したことを特徴とする請求項1に記載の精子の選抜部構造。
- 前記貯留部に前記遡上路を複数連結させたことを特徴とする請求項1又は2に記載の精子の選抜部構造。
- 動物より採取された精子を層流状の緩衝液中で所定区間遡上させ、遡上できた精子を捕集する請求項1〜3いずれか1項に記載の選抜部構造を備えた精子スクリーニング装置であって、
前記遡上路の上流端には、遡上できた精子を回収する回収路と、前記遡上路及び前記回収路を流下させる緩衝液を供給する緩衝液供給路とが接続されており、
前記緩衝液供給路より供給された緩衝液の一部を前記遡上路へ流下させる一方、前記緩衝液の残部を回収路へ流下させて回収流と成し、前記遡上できた精子をこの回収流に乗せて捕集することを特徴とする精子スクリーニング装置。 - 前記緩衝液供給路は、前記回収流が前記遡上できた精子の遡上能力を超える流速となる流量を供給可能な流路断面積としたことを特徴とする請求項4に記載の精子スクリーニング装置。
- 請求項4又は請求項5に記載の精子スクリーニング装置を用いた授精用精子液の調製方法であって、
前記選抜前精子液を前記貯留部に添加する精子添加工程と、
前記回収路には前記遡上できた精子の運動能力を上回る流速で、前記緩衝液流路には運動性を有するが回収を望まない精子が遡上できる限界の流速を上回り、且つ、良好な運動性を有する精子が遡上できる限界の流速を下回り、且つ、前記遡上路において層流となる流速で、前記緩衝液供給路から前記緩衝液流路と前記回収路とに緩衝液を流し、前記貯留部に添加した選抜前精子液中に含まれる精子に前記遡上路を遡上させる精子遡上工程と、
前記回収流によって捕集された遡上できた精子を回収して授精用精子液とする回収工程とを有する授精用精子液の調製方法。 - 前記選抜前精子液中に含まれる性染色体Xを備えた精子が受精能を獲得するタイミングを閾時間とし、同閾時間以前に前記精子添加工程を行って前記授精用精子液中に含まれる性染色体Yを備えた精子の割合を増加させ、又は、前記閾時間以降に前記精子添加工程を行って前記授精用精子液中に含まれる性染色体Xを備えた精子の割合を増加させる請求項6に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記精子添加工程を行う前に前記選抜前精子液を保存する精子保存工程にて、前記選抜前精子液中の精子のうち、性染色体Xを有する精子と性染色体Yを有する精子とのいずれか一方の性染色体を有する精子の運動能力を向上させることにより、前記精子遡上工程にて前記遡上路における前記いずれか一方の性染色体を有する精子の遡上を促進させて、前記回収工程にて得られる前記授精用精子液中に含まれた前記いずれか一方の性染色体を有する精子の割合を増加させることを特徴とする請求項6に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記精子添加工程を行う前に前記選抜前精子液を保存する精子保存工程にて、前記選抜前精子液中の精子のうち、性染色体Xを有する精子と性染色体Yを有する精子とのいずれか一方の性染色体を有する精子の運動能力を低下させることにより、前記精子遡上工程にて前記遡上路における前記いずれか一方の性染色体を有する精子の遡上を抑制して、前記回収工程にて得られる前記授精用精子液中に含まれたいずれか他方の性染色体を有する精子の割合を増加させることを特徴とする請求項6に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記精子添加工程を行う前に前記選抜前精子液を保存する精子保存工程の保存時間を長くして、前記授精用精子液中に含まれる性染色体Xを備えた精子の割合を増加させる請求項6に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記精子添加工程を行う前に前記選抜前精子液を保存する精子保存工程にて、前記選抜前精子液中にフェノキサジン化合物と電子受容物質を存在させて、前記授精用精子液中に含まれる性染色体Xを備えた精子の割合を増加させる請求項6に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記精子添加工程を行う前に前記選抜前精子液を保存する精子保存工程にて、前記選抜前精子液中にフェノキサジン化合物を存在させて、前記授精用精子液中に含まれる性染色体Yを備えた精子の割合を増加させる請求項6に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記電子受容物質は、フラビン類、フェナジン類、NAD(P)Hオキシドレダクターゼからなる群から選ばれる少なくともいずれか1つであることを特徴とする請求項11に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記精子保存工程にて、前記選抜前精子液中に、さらにヘキソース-6-リン酸を添加することを特徴とする請求項11〜13いずれか1項に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記ヘキソース-6-リン酸は、D-グルコース-6-リン酸、フルクトース-6-リン酸、マンノース-6-リン酸、ガラクトース-6-リン酸よりなる群から選ばれるいずれか1つ又は2つ以上の混合物であることを特徴とする請求項14に記載の授精用精子液の調製方法。
- 前記フェノキサジン化合物は、ブリリアントクレシルブルー、ナイルブルー、ベーシックブルー、メルドラブルーよりなる群から選ばれるいずれか1つ又は2つ以上の混合物であることを特徴とする請求項11〜15いずれか1項に記載の授精用精子液の調製方法。
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