JP6168529B2 - 多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法 - Google Patents
多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6168529B2 JP6168529B2 JP2015172946A JP2015172946A JP6168529B2 JP 6168529 B2 JP6168529 B2 JP 6168529B2 JP 2015172946 A JP2015172946 A JP 2015172946A JP 2015172946 A JP2015172946 A JP 2015172946A JP 6168529 B2 JP6168529 B2 JP 6168529B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- conjugate
- concentration
- measuring
- pad
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
Description
1.測定対象がCRPやDダイマーのような多価抗原である場合、抗体との結合点が複数あるため、一価抗原(抗原決定基が1つの抗原)に比べて、抗原抗体反応を介して容易にコンジュゲートと測定対象多価抗原との凝集体が生成する。
2.ラテックス凝集反応を利用するような溶液系での測定方法と異なり、イムノクロマト法では、上記の凝集体が毛細管現象により不溶性メンブレン担体中を展開し、測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体(捕捉抗体ということがある)が固定化された測定ラインに到達する必要がある。
3.そのため、生成する凝集体が大きくなるにつれて、イムノクロマトテストストリップを構成するサンプルパッド、コンジュゲートパッドまたは不溶性メンブレン担体の中を展開できる凝集体量(数)が低下し、その結果、捕捉抗体固定化部位でのサンドイッチ複合体(コンジュゲート、測定対象および捕捉抗体の複合体)が減少し測定シグナルが低下する。
4.上記の測定シグナルの低下を起こりにくくするためには、より多くの凝集体が展開し、測定ラインに到達できるように、凝集体の粒子サイズを小さくする方法が考えられる。
5.しかしながら、凝集体を小さくすると、相反して測定ラインのサンドイッチ複合体のシグナル自体は小さくなり、検出感度が低下するというイムノクロマト測定法に付随する問題点がある。
(i)金コロイドの粒子サイズを調節し、凝集体の粒子サイズを制御する。
(ii)界面活性剤の添加、pH、イオン強度などを調節することにより、抗原抗体反応を制御し、凝集体の粒子サイズを制御する。
(iii)不溶性メンブレン担体の孔径を調節することにより、凝集体の展開を制御する。
(iv)あらかじめ大きな凝集体を除去することにより、不溶性メンブレン担体中での展開を向上させる。
(v)金コロイドに結合する抗体分子数(量)を制御し、凝集体の粒子サイズを制御する。
本発明は以下の構成を有する。
[1]測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体の溶液と金コロイド溶液との混合液から得られる多価抗原測定用コンジュゲートであって、該混合液の該抗体濃度が、該抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の1/4〜1/2の抗体濃度であることを特徴とする多価抗原測定用コンジュゲート。
[2]以下の(1)および(2)を含む多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。
(1)前記[1]に記載のコンジュゲート
(2)測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体が固定化された不溶性メンブレン担体
[3]さらに以下の(3)〜(5)を含む前記[2]に記載の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。
(3)サンプルパッド
(4)サンプルパッドに接して配置され、前記[2](1)に記載のコンジュゲートを含有するコンジュゲートパッド
(5)吸収パッド
[4]測定対象である多価抗原が、CRPまたはD−ダイマーである前記[2]または[3]に記載の多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップ。
[5]前記[2]〜[4]のいずれかに記載のイムノクロマトテストストリップを用いて、試料中の測定対象である多価抗原を測定するイムノクロマト測定方法。
[6]以下の1)および2)の工程を含む多価抗原測定用コンジュゲートを製造する方法であって、1)の混合液の抗体濃度が、最大結合抗体濃度の1/4〜1/2の抗体濃度であることを特徴とする多価抗原測定用コンジュゲートの製造方法。
1)多価抗原に対するモノクローナル抗体溶液と金コロイド溶液との混合液を得る工程
2)該混合液からコンジュゲートを得る工程
該テストストリップは、通常、プラスチック製粘着シートのような固相支持体上に配列させる。該固相支持体を測定試料の毛管流を妨げない物質で構成することはもとより、接着剤の成分を測定試料の毛管流を妨げない物質とすることは明らかである。なお、抗体固定化メンブレンの機械的強度を上げ且つアッセイ中の水分の蒸発(乾燥)を防ぐ目的でポリエステルフィルムなどをラミネートすることも可能である。該テストストリップは、テストストリップの大きさや、測定試料の添加方法・位置、メンブレン上の抗体の固定化位置、シグナルの検出方法などを考慮した適当な容器(ハウジング)に格納・搭載して使用することができ、このように格納・搭載された状態を「デバイス」という。
コンジュゲートに由来するシグナルを測定する方法としては、公知の方法に従って行えばよく、例えば、吸光度あるいは反射光の強度を測定すればよい。
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
1.塩滴定法による抗CRPモノクローナル抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の決定
抗CRPモノクローナル抗体(受託番号FERM BP-11344のハイブリドーマが産生する抗体、以下単にFERM BP-11344抗体という)をpH6.0, 7.0, 8.0, 9.0の4条件の緩衝液(後記i)〜iv))にて希釈して、各pHについて、10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100μg/mLの抗体溶液を作製した。また、1 OD/mLの金コロイド(粒径40nm)溶液を0.2mol/L K2CO3を用いて、pH6.0, 7.0, 8.0, 9.0の4条件のpHに調整した。各pH条件において、金コロイド溶液450μLに対して各濃度の抗体溶液を50μL添加し、この混合液中の抗体濃度をもとに最大結合抗体濃度を求めた。撹拌後、それぞれの混合液に10%NaCl溶液100μLを添加し、室温で5分反応させた後、混合液の色調変化を目視で判定(写真撮影)し(図1)、抗体濃度を上げてもそれ以上色調変化が認められない状態を与える最小の抗体濃度を、最大結合抗体濃度とした。その結果、FERM BP-11344抗体の金コロイド(粒径40nm)への最大結合抗体濃度を3μg/mL、至適感作pHをpH7.0に決定した。
i) 2mmol/Lリン酸緩衝液(pH6.0)
ii) 2mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.0)
iii)2mmol/Lほう酸緩衝液(pH8.0)
iv)2mmol/Lほう酸緩衝液(pH9.0)
FERM BP-11344抗体と金コロイド(粒径40nm)とを、これらの混合液の抗体濃度が上記1で決定した最大結合抗体濃度(3μg/mL)及び最大結合抗体濃度の4/5、3/5、1/2、1/3、1/4、1/6の濃度になるように、混合してコンジュゲートを作製した。すなわち、1 OD/mLの金コロイド溶液(pH7.0)20mLに対し、上記の各濃度になるように2mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.0)で調製した抗体溶液を1mL添加し、室温で10分間撹拌した。これらの金コロイドと抗体との混合液それぞれに対し、10%ウシ血清アルブミン(BSA)水溶液を2mL添加し、さらに5分間撹拌後、10℃にて、10,000rpmで45分間遠心し、沈渣(コンジュゲート)を得た。得られた沈渣に、Conjugate Dilution Buffer(Scripps社製)を1.2mL添加しそれぞれのコンジュゲートを懸濁し各コンジュゲートの吸光度を531nm(使用した金コロイドの最大吸収波長)で測定した。(結果は図示せず)。
上記2の最大結合抗体濃度(3μg/mL)及び最大結合抗体濃度の4/5(2.4μg/mL)、3/5(1.8μg/mL)、1/2(1.5μg/mL)、1/3(1.0μg/mL)の濃度において作製した抗CRP抗体コンジュゲートを10mmol/Lリン酸緩衝液(10mmol/L PB、pH7.2)または0.3%オクチル硫酸ナトリウム(0.3%SOS-PB)、で希釈し1 OD/mLに調製した。これらのコンジュゲート溶液100μLに対して、コンジュゲートの希釈液と同一の希釈液300μLを粒度分布測定用ガラスキュベットに入れ、さらに30mg/LのCRP標準液(積水メディカル株式会社製、ナノピア用CRPキャリブレーターA )4μLを添加してボルテックスミキサーにて1〜2秒撹拌した後、粒度分布をダイナミック光散乱法により5分間測定した(装置:野崎産業株式会社、NICOMP C370)。混合液に添加した抗体濃度と反応開始5分後の凝集体の粒子径の関係を図2に示す。
希釈液にリン酸緩衝液(PB)を用いたときには、抗体濃度が最大結合抗体濃度(3μg/mL)の1/2の濃度よりも大きくなると凝集体の粒子径が急激に増大し100μm以上になるのに対し、最大結合抗体濃度の1/3〜1/2の濃度で調製したコンジュゲートでは、凝集体の粒子径が70μm〜80μmと小さな状態で維持された。また、0.3%オクチル硫酸ナトリウム−リン酸緩衝液(0.3%SOS-PB)の場合には、抗体濃度が最大結合抗体濃度(3μg/mL)の1/2より濃くなると凝集体の粒度(粒子径)が急激に増大し80μm以上になるのに対し、最大結合抗体濃度の1/3〜1/2の濃度の混合液から調製したコンジュゲートでは、凝集体の粒子径が60μm〜70μmと小さな状態で維持された。
1)コンジュゲートパッドの作製
上記2で調製した抗CRPモノクローナル抗体感作コンジュゲートを20 OD/mLとなるように、1.33%カゼイン、4%スクロース溶液(pH7.5)と混合して検出試薬を作製し、一定体積のグラスファイバー製パッド(日本ポール社、No.8964)に該パッド体積の1.2倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70℃、30分間加温することにより乾燥させ、コンジュゲートパッドとした。
ニトロセルロースメンブレン(ミリポア社、HF180)の短辺の一端に、1mg/mLに調製した抗CRPモノクローナル抗体(受託番号FERM BP-11345のハイブリドーマが産生する抗体、以下単にFERM BP-11345抗体という)及び2.5%スクロースを含む10mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.2)を、イムノクロマト用ディスペンサー「XYZ3050」(BIO DOT社)を用いて1μL/cmとなるよう設定し、ライン状に塗布した。ドライオーブン内で70℃、45分乾燥し、抗CRP抗体固定化メンブレンとした。
24mmol/L 塩化ナトリウム、0.5%スクロース及び30mmol/Lエチレンジアミンテトラ酢酸(EDTA)を含む20mmol/Lトリス塩酸緩衝液(pH7.2)を、一定体積に切断したグラスファイバー製パッド(Lydall社)に該パッド体積の1.15倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70℃、45分乾燥し、サンプルパッドとした。
プラスチック製粘着シート(a)に上記抗CRP抗体固定化メンブレン(b)を貼り、該メンブレンの展開上流部側に抗CRP抗体(c)を配置し、さらに3rd Pad(h)を装着した。次いで上記1)で作成したコンジュゲートパッド(d)を配置装着した。さらにこのコンジュゲートパッドに重なるように上記3)で作製したサンプルパッド(e)を配置装着し、反対側の端には吸収パッド(f)(Whatman社、740-E)を配置装着した。また、最後に抗体固定化メンブレンおよび吸収パッドを被覆するように上面にポリエステルフィルム(g)を配置装着しラミネートした。このように各構成要素を重ね合わせた構造物に切断してテストストリップを作製した。該テストストリップは、アッセイの際、プラスチック製の専用のハウジング(サンプル添加窓部及び検出窓部を有する、図3中図示せず)に格納・搭載し、イムノクロマトテストデバイスの形態にした。図3にテストストリップの模式構成図を示した。
上記の種々の抗体感作濃度において作製したイムノクロマトテストデバイスを用いて、CRPの測定範囲を検討した。ナノピア用CRPキャリブレーターA (積水メディカル株式会社製)を用いて、CRP濃度1.5,3.0,6.0,30.0,90.0,180.0,300.0mg/Lの抗原液を作製し、各濃度の抗原液を0.3%オクチル硫酸ナトリウム−10mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.2)で30倍に希釈した。希釈した抗原液120μLをテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、イムノクロマトリーダーICA-1000(浜松ホトニクス社)を用いて5分後のテストデバイスの検出窓部の反射光強度を測定した(図4)。その結果、最大結合抗体濃度の1/2より高い濃度で混合液を調製したコンジュゲートでは、抗原(CRP)濃度30.0mg/L位から測定シグナルがプラトーになったのに対し、最大結合抗体濃度の1/4〜1/2の濃度で混合液を調製したコンジュゲートでは、抗原(CRP)濃度300.0mg/Lまで測定シグナルが右肩上がりに増大した。また、最大結合抗体濃度の1/6の濃度で調製した標識体では、検出感度が著しく低下した。
実施例1で求めた最大結合抗体濃度(3μg/mL)またはその1/3の濃度の混合液で作製したコンジュゲートを用いたイムノクロマトデバイスを用い、CRPの測定範囲と凝集体の粒度との関係を検討した。
ナノピア用CRPキャリブレーターA (積水メディカル株式会社製)を用いて、CRP濃度0,1.5,3.0,6.0,30.0,90.0,180.0,300.0mg/Lの抗原液を作製し、各濃度の抗原液を10mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.2)で100倍に希釈した。希釈した抗原液120μLをテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、イムノクロマトリーダーICA-1000(浜松ホトニクス社)を用いて5分後のテストデバイスの検出窓部の反射光強度を測定した(図5−1)。
また、実施例1-3の方法と同様の方法で、CRP濃度0,3.0,30.0,300.0mg/Lの抗原液について、凝集体の粒度分布を測定した(図5−2)。
その結果、最大結合抗体濃度(3μg/mL)の混合液で調製したコンジュゲートを用いたテストデバイスでは、CRP濃度0〜30.0mg/Lにおいて、反射吸光度はCRP濃度に比例して増加し、30.0mg/L以上の濃度でプラトーになった。このとき、凝集体の粒度は反射吸光度と同様、0〜30.0mg/Lで約70〜100nmとなり、30.0mg/L以上の濃度でも約100nmのままであった。一方、最大結合抗体濃度の1/3の濃度の混合液で調製したコンジュゲートを用いたテストデバイスでは、反射吸光度はCRP濃度0〜300.0mg/Lまで濃度に比例して増加した。このとき、凝集体の粒度は69nmから74nmまでわずかに大きくなっただけであった。
1.塩滴定法による抗D-ダイマーモノクローナル抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の決定
(1)抗D-ダイマーモノクローナル抗体
バトロキソビン処理フィブリノゲンを免疫原としてKohlerとMilsteinの方法[Nature、第256巻495頁(1975年)参照]に準じ、前記抗原で免疫したマウスの脾臓細胞と同種のミエローマ細胞(骨髄腫細胞)とを細胞融合して当該抗体を産生するハイブリドーマを作製し、そのなかから、D−ダイマーに反応性の高いクローン#672101を選択した。以下、クローン#672101の産生する抗体を単に#672101抗体という。
(2)上記で得られた#672101抗体を以下pH6.0, 7.0, 8.0, 9.0の4条件の緩衝液(後記i)〜iv))にて希釈して、各pHについて、10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100μg/mLの抗体溶液を作製した。また、1 OD/mLの金コロイド(粒径40nm)溶液を0.2mol/L K2CO3を用いて、pH6.0, 7.0, 8.0, 9.0の4条件のpHに調製した。各pH条件において、金コロイド溶液450μLに対して、各濃度の抗体溶液を50μL添加し、この混合液中の抗体濃度をもとに最大結合抗体濃度を求めた。撹拌後、それぞれの混合溶液に10%NaCl溶液100μLを添加し、室温で5分反応させた後、混合液の色調変化を目視で判定(写真撮影)し(図6)、抗体濃度を上げてもそれ以上色調変化が認められない状態を与える最小の抗体濃度を、最大結合抗体濃度とした。その結果、#672101抗体の金コロイド(粒径40nm)への最大結合抗体濃度を3μg/mL、至適感作pHをpH8.0に決定した。
i) 2mmol/Lリン酸緩衝液(pH6.0)
ii) 2mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.0)
iii) 2mmol/Lほう酸緩衝液(pH8.0)
iv) 2mmol/Lほう酸緩衝液(pH9.0)
#672101抗体を上記1で決定した最大結合抗体濃度(3μg/mL)及び最大結合抗体濃度の1/3の濃度になるように金コロイド(粒径40nm)と混合して、コンジュゲートを作製した。すなわち、1 OD/mLの金コロイド溶液(pH8.0)20mLに対し、上記の各濃度になるように2mmol/Lほう酸緩衝液(pH8.0)で調製した抗体溶液を1mL添加し、室温で10分間撹拌した。
これらの金コロイドと抗体との混合液それぞれに対し、10%ウシ血清アルブミン(BSA)水溶液を2mL添加し、さらに5分間撹拌後、10℃にて、10,000rpmで45分間遠心し、沈渣(コンジュゲート)を得た。得られた沈渣に、Conjugate Dilution Buffer(Scripps社製)を1.2mL添加しそれぞれのコンジュゲートを懸濁し各コンジュゲートの吸光度を531nm(使用した金コロイドの最大吸収波長)で測定した(結果は図示せず)。
1)コンジュゲートパッドの作製
上記2で調製した抗D-ダイマーモノクローナル抗体感作コンジュゲートを20 OD/mLとなるように、1.33%カゼイン、4%スクロース溶液(pH7.5)と混合して検出試薬を作製し、一定体積のグラスファイバー製パッド(日本ポール社、No.8964)に該パッド体積の1.2倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70℃、30分間加温することにより乾燥させ、コンジュゲートパッドとした。
ニトロセルロースメンブレン(ミリポア社、HF180)の短辺の一端に、1mg/mLに調製した抗D-ダイマーモノクローナル抗体( murine MAb against human D-dimer FDP fragment, clone DD3B6、American Diagnosticainc.社製)及び2.5%スクロースを含む10mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.2)を、イムノクロマト用ディスペンサー「XYZ3050」(BIO DOT社)を用いて1μL/cmとなるよう設定し、ライン状に塗布した。ドライオーブン内で70℃、45分乾燥し、抗D-ダイマー抗体固定化メンブレンとした。
24mmol/L 塩化ナトリウム、0.5%スクロース及び30mmol/Lエチレンジアミンテトラ酢酸(EDTA)を含む20mmol/Lトリス塩酸緩衝液(pH7.2)を、一定体積に切断したグラスファイバー製パッド(Lydall社)に該パッド体積の1.15倍容量滲みこませた。ドライオーブン内で70℃、45分乾燥し、サンプルパッドとした。
プラスチック製粘着シート(i)に上記抗D-ダイマー抗体固定化メンブレン(j)を貼り、該メンブレンの展開上流部側に抗D-ダイマー抗体(k)の塗布部を配置し、さら3rd Pad (m)を装着した。次いで上記1)で作製したコンジュゲートパッド(l)を配置装着した。さらにこのコンジュゲートパッドに重なるように上記3)で作製したサンプルパッド(n)を配置装着し、反対側の端には吸収パッド(p)(Whatman社、740-E)を配置装着した。また、最後に抗体固定化メンブレンおよび吸収パッドを被覆するように上面にポリエステルフィルム(q)を配置装着しラミネートした。このように各構成要素を重ね合わせた構造物に切断してテストストリップを作製した。該テストストリップは、アッセイの際、プラスチック製の専用のハウジング(サンプル添加窓部及び検出窓部を有する、図7中図示せず)に格納・搭載し、イムノクロマトテストデバイスの形態にした。図7にテストストリップの模式構成図を示した。
上記の2種類の抗体感作濃度において作製したイムノクロマトテストデバイスを用いて、D-ダイマーの測定範囲を検討した。ナノピア用D-ダイマーキャリブレーター(積水メディカル株式会社製、60μg/mL)を市販ヒトプール血漿にて希釈した。希釈後のD-ダイマー濃度をナノピアD-ダイマー(積水メディカル株式会社製)を用いて測定したところ、各抗原液の濃度は0.4, 1.1, 5.3, 10.0, 15.3, 19.4μg/mLであった。
各濃度の抗原液120μLをテストデバイスのサンプルパッド窓部に添加し、イムノクロマトリーダーICA-1000(浜松ホトニクス社)を用いて10分後のテストデバイスの検出窓部の反射光強度を測定した(図8)。その結果、最大結合抗体濃度の混合液で調製したコンジュゲートでは、抗原(D-ダイマー)濃度5.3μg/mL位から測定シグナルがプラトーになったのに対し、最大結合抗体濃度の1/3の濃度の混合液で調製したコンジュゲートでは、15.3μg/mLまで測定シグナルが右肩上がりに増大し、明らかに測定範囲が広がることが判った。
(b)抗CRP抗体固定化メンブレン
(c)抗CRP抗体
(d)コンジュゲートパッド
(e)サンプルパッド
(f)吸収パッド
(g)ポリエステルフィルム
(h)3rd Pad
(i)プラスチック製粘着シート
(j)抗D-ダイマー抗体固定化メンブレン
(k)抗D-ダイマー抗体
(l)コンジュゲートパッド
(m)3rd Pad
(n)サンプルパッド
(p)吸収パッド
(q)ポリエステルフィルム
FERM BP-11345
(1)FERM BP-11344(#08202産生ハイブリドーマ)
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6(郵便番号305-8566)
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成21年11月26日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
FERM BP-11344
(2)FERM BP-11345(#08203産生ハイブリドーマ)
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6(郵便番号305-8566)
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成21年11月26日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
FERM BP-11345
Claims (1)
- 測定対象である多価抗原に対するモノクローナル抗体が金コロイドに固定化されている多価抗原測定用コンジュゲートであって、
前記モノクローナル抗体の金コロイドへの最大結合抗体濃度の1/3〜1/2の抗体濃度の、モノクローナル抗体溶液と金コロイド溶液との混合液から調整したものであり、
さらに、以下の条件を満たす多価抗原測定用コンジュゲート;
条件;
10mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.2)中で生じる多価抗原とコンジュゲートとの凝集体の粒子径が70μm〜80μmである。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015172946A JP6168529B2 (ja) | 2010-03-31 | 2015-09-02 | 多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010084121 | 2010-03-31 | ||
JP2010084121 | 2010-03-31 | ||
JP2015172946A JP6168529B2 (ja) | 2010-03-31 | 2015-09-02 | 多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012509454A Division JP5877150B2 (ja) | 2010-03-31 | 2011-03-28 | 多価抗原測定用コンジュゲートを製造する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016028241A JP2016028241A (ja) | 2016-02-25 |
JP6168529B2 true JP6168529B2 (ja) | 2017-07-26 |
Family
ID=44762554
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012509454A Active JP5877150B2 (ja) | 2010-03-31 | 2011-03-28 | 多価抗原測定用コンジュゲートを製造する方法 |
JP2015172946A Active JP6168529B2 (ja) | 2010-03-31 | 2015-09-02 | 多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012509454A Active JP5877150B2 (ja) | 2010-03-31 | 2011-03-28 | 多価抗原測定用コンジュゲートを製造する方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JP5877150B2 (ja) |
WO (1) | WO2011125606A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105358981B (zh) * | 2013-07-25 | 2018-10-16 | 古河电气工业株式会社 | 免疫层析用试验片、用于其的展开液及使用其的免疫层析法 |
WO2015025968A1 (ja) * | 2013-08-23 | 2015-02-26 | 株式会社ビーエル | マイコプラズマ・ニューモニエの免疫学的検出法およびキット |
CN104165989A (zh) * | 2014-07-10 | 2014-11-26 | 长春理工大学 | 一种检测羊肚菌菌丝的胶体金免疫试纸条 |
CN104730245B (zh) * | 2014-11-28 | 2016-09-28 | 威海纽普生物技术有限公司 | D二聚体检测试剂盒及检测方法 |
JP6143818B2 (ja) | 2015-06-01 | 2017-06-07 | 田中貴金属工業株式会社 | マイコプラズマ・ニューモニエ検出用免疫クロマト分析装置 |
US20190064160A1 (en) * | 2016-08-09 | 2019-02-28 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic detection kit |
JP6371808B2 (ja) * | 2016-08-09 | 2018-08-08 | 積水メディカル株式会社 | イムノクロマトグラフィー検出キット |
JP6736437B2 (ja) * | 2016-09-20 | 2020-08-05 | 積水メディカル株式会社 | イムノクロマトグラフィー検出キット |
CN108680743A (zh) * | 2018-05-11 | 2018-10-19 | 合肥安为康医学检验有限公司 | 一种快速检测甲型流感病毒的方法 |
JP6426872B1 (ja) * | 2018-08-02 | 2018-11-21 | 積水メディカル株式会社 | イムノクロマト用試験片及びイムノクロマト検出キット |
US20220011306A1 (en) * | 2018-11-19 | 2022-01-13 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic test strip and immunochromatographic detection kit |
JP2020148580A (ja) * | 2019-03-13 | 2020-09-17 | 東ソー株式会社 | 添加剤によるdダイマー測定での偽高値の抑制 |
EP4083625A4 (en) * | 2019-12-25 | 2024-01-03 | Fujirebio Kk | IMMUNOCHROMATOGRAPHIC STRIP, IMMUNOCHROMATOGRAPHIC APPARATUS, IMMUNOCHROMATOGRAPHIC KIT AND METHOD FOR DETECTING A TEST SUBSTANCE |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06130062A (ja) * | 1992-10-13 | 1994-05-13 | Godo Shiyusei Kk | ブロッキング処理を要しない、金コロイドを用いる免疫学的分析方法、およびこれに用いる分析用ストリップ |
JP4651868B2 (ja) * | 2001-03-28 | 2011-03-16 | 株式会社ジーシー | 唾液の前処理用キット及びこれを用いた唾液の前処理方法 |
JP2003344408A (ja) * | 2002-05-27 | 2003-12-03 | Denka Seiken Co Ltd | フロースルーアッセイ方法、キット及び装置 |
JP4377602B2 (ja) * | 2003-03-26 | 2009-12-02 | デンカ生研株式会社 | 金コロイドと抗体の結合体を製造する方法 |
JP2007033378A (ja) * | 2005-07-29 | 2007-02-08 | Denka Seiken Co Ltd | 標識試薬の感度調整方法 |
CN102077091B (zh) * | 2008-06-30 | 2016-08-17 | 积水医疗株式会社 | 用于结合测定的多孔性固相和使用所述多孔性固相的结合测定法 |
JP5191291B2 (ja) * | 2008-07-04 | 2013-05-08 | 和光純薬工業株式会社 | 便検体中ヘモグロビンの測定方法及び測定試薬キット |
-
2011
- 2011-03-28 JP JP2012509454A patent/JP5877150B2/ja active Active
- 2011-03-28 WO PCT/JP2011/057621 patent/WO2011125606A1/ja active Application Filing
-
2015
- 2015-09-02 JP JP2015172946A patent/JP6168529B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2011125606A1 (ja) | 2011-10-13 |
JP5877150B2 (ja) | 2016-03-02 |
JPWO2011125606A1 (ja) | 2013-07-08 |
JP2016028241A (ja) | 2016-02-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6168529B2 (ja) | 多価抗原測定用コンジュゲート、これを用いた多価抗原測定用イムノクロマトテストストリップおよびイムノクロマト測定方法 | |
JP6247741B2 (ja) | 検体不添加サンプルを操作不適サンプルと判定できるイムノクロマトグラフィーに基づく検出方法及びこれに用いるテストストリップ | |
JP5798720B2 (ja) | ヒトc反応性タンパク質(crp)測定用イムノクロマト試薬 | |
JP5753942B2 (ja) | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 | |
JP6084759B1 (ja) | 免疫学的検出方法及びこれに用いるテストストリップ | |
JP6103776B2 (ja) | ヘマトクリット値の測定方法 | |
JPWO2020085289A1 (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
JP5955843B2 (ja) | 免疫学的測定方法に用いられるコンジュゲート | |
JP2020020724A (ja) | イムノクロマト用試験片及びイムノクロマト検出キット | |
WO2020067233A1 (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
WO2013147308A1 (ja) | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 | |
JP6464308B1 (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
EP3885767B1 (en) | Test piece for immunochromatography and immunochromatographic detection kit | |
JP2020052028A (ja) | イムノクロマト用試験片 | |
JP2022046827A (ja) | イムノクロマト用試験片及びイムノクロマト検出キット | |
CN110780066A (zh) | 用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱 | |
JP2017026591A (ja) | 免疫学的検出方法 | |
JP7137168B2 (ja) | イムノクロマト用試験片 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20160714 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160720 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160829 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170111 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170309 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20170509 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170531 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170620 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6168529 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |