JP6145353B2 - Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブの血圧上昇抑制剤 - Google Patents

Description

本発明はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを有効成分として含有する血圧上昇抑制作用に関する。
本発明は、血圧上昇抑制機能性食品または食品素材、内服剤として、ヒト若しくはヒト以外の動物に与えられる医薬品（動物用治療薬も含む）用、飲食品用、および飼料用またはペットフードの組成物を意味する。

高血圧は生活習慣病の一つである。高血圧は原因が分かっている二次性高血圧と原因がわからない本態性高血圧の二つがあるが、日本における高血圧患者の約９０％が本態性高血圧である。血圧は、心拍出量と末梢血管抵抗その他さまざまな因子によって調節されており、なかでも、レニン・アンジオテンシン系は、血圧の制御に関して大きな役割を担っている。肝臓でアンジオテンシノーゲンが合成され、アンジオテンシノーゲンは腎臓で合成されるレニンによってアンジオテンシンＩに変換さる。さらにアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によってアンジオテンシンＩＩへと変換される。アンジオテンシンＩＩがアンジオテンシンＩＩ受容体に結合することで、血管平滑筋が収縮し、結果として血圧が上昇する。高血圧は自覚症状がないため、放置してしまうことが多く、動脈硬化、心臓病、脳卒中を引き起こすことがある。

前述の高血圧については、これを解消するための医療品が種々提案され、既に数多く市販されている。治療剤としては、腎臓でのナトリウムと水の再吸収を抑制し循環血液量を減少させて血圧を下げる利尿薬、交感神経のα受容体の血管収縮作用を遮断し血管を拡張させ血圧を下げるα遮断薬、交感神経のβ受容体の心臓収縮力強化や昇圧ホルモン産生などの作用を遮断して血圧を下げるβ遮断薬、カルシウムイオンの細胞内への取り込みを抑制し血管を拡張することで血圧を下げるカルシウム拮抗薬、強力な昇圧ホルモンであるアンジオテンシンＩＩの生産を減少させ、血圧を下げるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬、昇圧ホルモンであるアンジオテンシンＩＩが作用する受容体の働きを阻害することで血圧を下げるアンジオテンシンＩＩ受容体阻害薬（ＡＲＢ）が用いられるが、これら医療用合成製剤は、処方箋を必要とするため、簡易には入手できないばかりか、製剤の投与又は服用により種々の副作用を伴うことがある。従って、高血圧の治療に使用される抗高血圧剤として、入手が容易でかつ副作用ができるだけ少ない天然物起源のものが求められている。
天然物起源の高血圧の改善剤としては、ＡＣＥ阻害を示すノリ、カツオ、ワカメなどのペプチド、副交感神経を刺激し血管平滑筋が弛緩され血圧が降下作用を示す杜中葉抽出物、ノルアドレナリンの分泌を抑制し血圧降下作用を示すγ−アミノ酪酸を配合特定保健用食品が知られており、これらは特定保健用食品としての承認を得ている。

本発明の課題は、日常の食生活において容易に入手および摂取でき、血圧上昇を抑制することができる、副作用の少ない予防・改善用機能性食品又は食品素材や、飼料を提供することにある。

本発明者は、上述の目的を達成するために、ヒダカコンブの機能性成分とＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の機能性に着目し、鋭意研究を行った結果、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブ８０％ＥｔＯＨ抽出物に血圧上昇抑制作用があることを見出すに至った。

本発明は、このような知見に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明の血圧上昇抑制作用は、いずれも発酵ヒダカコンブを有効成分することを特徴とするものである。

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブに含まれる血圧上昇抑制作用を有する物質がいかなる化合物であるかについては、未だその詳細は不明であるが、発酵ヒダカコンブから８０％ＥｔＯＨ抽出により溶出させた成分が血圧上昇抑制作用を発揮することは実験的に確かめられている。したがって、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブは、そのまま本発明の血圧上昇抑制作用の構成成分とすることで予防・改善が発現する。

即ち本発明が提供するのは以下の通りである。

［１］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを有効成分として含有する。

［２］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを含有する組成物を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。

［３］［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなる機能性食品。

［４］［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなる食品素材。

［５］［１］または［２］に記載の血圧上昇抑制剤からなるペットフード。

［６］［１］または［２］に記載された血圧上昇抑制剤からなる飼料。

［７］［１］〜［４］に記載の血圧上昇抑制剤を含有する飲食用組成物。

［８］［１］〜［４］に記載の血圧上昇抑制剤を含有する医薬用組成物。

本発明の血圧上昇抑制剤、またはこれを含有する組成物は、体内でアンジオテンシンＩを、昇圧作用を持つアンジオテンシンＩＩに変換するＡＣＥの活性を抑制することから、血圧上昇抑制作用が期待できる。従って、血圧上昇抑制に有用である。さらに、食経験のある材料から本発明の剤または組成物を製造することが可能であるので、摂取しても安全である。

本明細書の血圧上昇抑制剤は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを有効成分として含有するＡＣＥ害作用を有する剤および組成物である。上記の化合物の含有量は限定されないが、血圧上昇抑制作用を発揮できる範囲で含まれていれば良い。

本発明の飲食用組成物は、上記の血圧上昇抑制剤を含有する組成物であり、これらを一般的な食品に混合したものである。また、公知の食品として適当な担体や助剤などを使用してカプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態にしたものでもよい。ここに言う飲食用とは、例えば、一般食品、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品、ペットフードなどである。ここにいう一般食品とは、飲料、乳製品、発酵乳、乳酸菌飲料、加工乳、コーヒー飲料、ジュース、アイスクリーム、飴、ビスケット、ウェハース、ゼリー、スープ、麺類、を含むがそれに限定されるものではない。好ましくは飲料、乳製品、加工乳、発酵乳、乳酸菌飲料、ウェハース、ゼリーを含む。

本発明の医薬用組成物は、上記の血圧上昇抑制剤を含有する組成物であり、上記剤そのものであってもよいし、所望により医薬的に許容される担体を含有する組成物であってもよい。その用途は限定されず、例えば一般用医薬品（ＯＴＣ）など容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品などが挙げられる。医薬用組成物の形態は限定されず、例えば、丸薬剤、液剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル錠剤、トローチ剤、シロップ剤、ドライシロップ剤などである。好ましくはカプセル剤、液剤、エリクシル、錠剤、カシェ、座薬などとするほうが良い。また医薬的に許容される担体とは、経口、経腸、経皮、および皮下投与のために好適である任意の材料であり、例えば水、ゼラチン、アラビアガム、ラクトース、微結晶性セルロース、スターチ、ナトリウムスターチグリコレート、燐酸水素カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コロイド性二酸化ケイ素などが挙げられる。

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブならびに該組成物は、血圧上昇抑制剤の有効成分として配合されるが、血圧上昇抑制剤として製剤化する場合、剤形としては、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形を採用することができる。その際、保存や取り扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等のキャリヤ、保存料、その他任意の助剤を必要に応じて配合することができる。またその形態は限定されず、飲食用組成物、医薬用組成物を含む。これらの含有量は限定されないが、血圧上昇抑制作用に対して効果が発揮できる範囲で含まれていれば良い。

前記血圧上昇抑制剤は、ＡＣＥの活性を阻害してアンジオテンシンＩＩが生成されないようにする。

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを有効成分として含有する本発明の血圧上昇の予防・改善用機能性食品又は食品素材は、前記本発明の血圧上昇の予防・改善剤を飲食品原料の一部として用いたり、あるいは製造工程又は製造後に添加・配合することにより得ることができる。かかる機能性食品としては特に制限されるものではなく、調味類、ふりかけ類、菓子類、スナック類、麺類、魚肉練り製品、乳製品、飲料などを具体的に例示することができる。

実施例１
以下に本発明をより詳細に説明する為に実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

サンプルは５００μｍ程度に粉砕したヒダカコンブ粉末５ｇを１００ｍｌのｐＨ５．０の１／３０Ｍリン酸緩衝液に加え、ｐＨを５．０に調整後、５０ｍｇのセルラーゼを加え４５℃、１２０ｒｐｍで振とう処理を行った。１〜２日間処理した後に、ｐＨ６．８に調整し加圧加熱滅菌を行った。海藻酵素処理液にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を１ｍｌ植菌し、３７℃で静置培養した。４日間培養後凍結乾燥を行い、発酵ヒダカコンブ１ｇに１００ｍｌのエタノールを添加し、室温で３時間振とうしたものの上清をサンプルとした。

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブのＡＣＥ活性阻害作用に関する検討
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブのＡＣＥ活性への影響について、試験管内での酵素反応系を用いて検討した。蒸留水で希釈した各濃度のサンプル溶液１０μｌを添加し全量を１３０μｌ／反応ウェルとした。

本試験は（株）同仁化学研究所のＡＣＥ Ｋｉｔ−ＷＳＴを使用した。本試験の反応に用いた溶液（Ａ〜Ｃ液）は、以下のとおり調製した。Ａ液はキット付属のＳｕｂｓｔｒａｔｅ ｂｕｆｆｅｒである。Ｂ液はキット付属のＥｎｚｙｍｅ Ｂを２ｍｌの蒸留水で溶解し、溶解した酵素液１．５ｍｌをキット付属品のＥｎｚｙｍｅ Ａに加え溶解した。Ｃ液はキット付属のＥｎｚｙｍｅ Ｃを３ｍｌの蒸留水で溶解した。同じくキット付属のＣｏｅｎｚｙｍｅを３ｍｌの蒸留水で溶解した。溶解したＥｎｚｙｍｅ ＣとＣｏｅｎｚｙｍｅをそれぞれ２．８ｍｌずつキット付属のＩｎｄｉｃａｔｏｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎに添加した。

プレート内でのＡＣＥ反応は、各濃度に希釈したサンプル１０μｌ、Ａ液１０μｌとＢ液１０μｌを混合し、３７℃で１時間プレインキュベーションした。次にＣ液１００μｌを加えて室温で１０分間インキュベーションすることで実施させた。その後、４５０ｎｍの吸光度を測定することでＡＣＥ活性阻害を評価した。コントロールは、サンプルの代わりに各サンプルと同等の８０％エタノールを添加した。各試験区には、Ｂ液の代わりにＡ液を添加したブランクを設定した。
阻害率は以下の計算式から求めた。阻害率＝１−（サンプルの吸光度−サンプルのブランクの吸光度）／（コントロールの吸光度−コントロールのブランクの吸光度）。コントロールを１００として溶媒と濃度に関連して、相対的のＡＣＥ阻害率を図１に示した。

ＡＣＥ阻害率をもとに５０％阻害濃度であるＩＣ_５０値を算出した。その結果を表１に表す。

表１からＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブにＡＣＥ活性阻害が認められた。なかでも最もＡＣＥ活性阻害が高かったのはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）を用いた発酵ヒダカコンブで、ＩＣ_５０は、６３μｇ／ｍｌであった。また発酵前のヒダカコンブ８０％エタノール抽出物におけるＩＣ_５０は、６９０μｇ／ｍｌであった。したがって、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブはＡＣＥ活性の阻害に有効であることが実証された。

Ｌ．ｃａｓｅｉを用いた発酵ヒダカコンブによる効果を示すグラフであり、コントロールを１００とする相対的ＡＣＥ阻害率を示した。 アンジオテンシンＩを負荷させたマウスに本発明の発酵ヒダカコンブ（２０００ｍｇ／ｋｇ）を投与したときの血圧上昇値を示す図である。 アンジオテンシンＩを負荷させたマウスに本発明の発酵ヒダカコンブ（１０００、２０００、４０００ｍｇ／ｋｇ）を投与したときの血圧上昇値を示す図である。 ＳＨＲに本発明の発酵ヒダカコンブを投与したときの血圧変化を示す図である。

実施例２
マウスに発酵ヒダカコンブを単回投与したときの血圧上昇抑制効果
条件：６週齢のｄｄＹマウス（雄性）を用い、１群８匹で単回投与を実施した。試料は発酵ヒダカコンブを２０００ｍｇ／ｋｇ体重となるように調製した。試料を経口投与し、投与３０分後にアンジオテンシンＩ（１５０μｇ／ｋｇ；和光純薬工業）を腹腔内に投与した。

試料の調製法は以下の通りである。Ｌ．ｃａｓｅｉを用いて４日間発酵させた発酵ヒダカコンブを凍結乾燥し、その乾燥粉末を８０％エタノールで振盪させながら３時間抽出した。その抽出液からエタノールを除去したものを蒸留水に溶解させ濃度を調整した。

血圧測定には、マウス・ラット用無加温型非観血式血圧計（ＢＬＯＯＤ ＰＲＥＳＳＵＲＥ ＭＯＮＩＴＯＲ ＦＯＲ ＭＩＣＥ＆ＲＡＴ Ｍｏｄｅｌ ＭＫ−２０００）を使用し、マウスの尾動脈収縮期血圧（ＳＢＰ）を測定した。マウスの尾部をカフで締め付け、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法によりＳＢＰを６回測定し、その平均値を求めた。アンジオテンシンＩ投与前後のＳＢＰの差から、血圧上昇値を求めた。

試料２０００ｍｇ／ｋｇ投与時において、発酵ヒダカコンブ投与群は蒸留水投与のコントロール群に対して有意（ｐ＜０．００１）にアンジオテンシンＩ負荷による血圧上昇を抑制した（図２）。また試料を０、１０００、２０００、４０００ｍｇ／ｋｇに調製し、同様に収縮期血圧上昇値を求めたところ、２０００、４０００ｍｇ／ｋｇにおいて有意（ｐ＜０．０５）に血圧上昇を抑制し、濃度依存性もみられた（図３）。

実施例３
高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）に発酵ヒダカコンブを連続投与したときの血圧変化
条件：６週齢のＳＨＲ（雄性）を用い、１群６匹で連続投与を実施した。飼料に５％の発酵ヒダカコンブを混ぜて自由摂取させ、３５日間飼育した。対照群、発酵ヒダカコンブ群とともに飼料には食塩を１％となるように添加した。今回調製した発酵ヒダカコンブを投与することにより、投与３５日目には有意（ｐ＜０．００１）に血圧上昇を抑制していることがわかった（図４）。

Claims (8)

1. Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。
2. Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属を用いた発酵ヒダカコンブを含有する組成物を有効成分として含有する血圧上昇抑制剤。
3. 請求項１又は請求項２に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用機能性食品。
4. 請求項１又は請求項２に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用食品素材。
5. 請求項１又は請求項２に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用ペットフード。
6. 請求項１又は請求項２に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用飼料。
7. 請求項１又は請求項２に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用飲食用組成物。
8. 請求項１又は請求項２に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用医薬用組成物。
   
   

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