JP6122181B2 - スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法 - Google Patents
スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6122181B2 JP6122181B2 JP2016116227A JP2016116227A JP6122181B2 JP 6122181 B2 JP6122181 B2 JP 6122181B2 JP 2016116227 A JP2016116227 A JP 2016116227A JP 2016116227 A JP2016116227 A JP 2016116227A JP 6122181 B2 JP6122181 B2 JP 6122181B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- olfactory receptor
- response
- sulfide compound
- receptor polypeptide
- test substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- -1 sulfide compound Chemical class 0.000 title claims description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 70
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims description 12
- 108050002069 Olfactory receptors Proteins 0.000 claims description 124
- 102000012547 Olfactory receptors Human genes 0.000 claims description 123
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 96
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 93
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 93
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 92
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 84
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 74
- 101000614009 Homo sapiens Olfactory receptor 4S2 Proteins 0.000 claims description 46
- 102100040567 Olfactory receptor 4S2 Human genes 0.000 claims description 46
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 claims description 17
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 11
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 9
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 3
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 claims description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- YWHLKYXPLRWGSE-UHFFFAOYSA-N Dimethyl trisulfide Chemical compound CSSSC YWHLKYXPLRWGSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- WQOXQRCZOLPYPM-UHFFFAOYSA-N dimethyl disulfide Chemical compound CSSC WQOXQRCZOLPYPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 84
- 235000019645 odor Nutrition 0.000 description 67
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 11
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 description 7
- VVGOCOMZRGWHPI-ARJAWSKDSA-N (z)-4-heptenal Chemical compound CC\C=C/CCC=O VVGOCOMZRGWHPI-ARJAWSKDSA-N 0.000 description 6
- RFFOTVCVTJUTAD-AOOOYVTPSA-N 1,4-cineole Chemical compound CC(C)[C@]12CC[C@](C)(CC1)O2 RFFOTVCVTJUTAD-AOOOYVTPSA-N 0.000 description 6
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 6
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 6
- RFFOTVCVTJUTAD-UHFFFAOYSA-N cineole Natural products C1CC2(C)CCC1(C(C)C)O2 RFFOTVCVTJUTAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 5
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 4
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 3
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 108010076010 Cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 description 2
- 108010083493 Cysteine lyase Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 2
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 2
- 102000015646 Receptor-transporting proteins Human genes 0.000 description 2
- 108050004949 Receptor-transporting proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 125000004369 butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000004368 propenyl group Chemical group C(=CC)* 0.000 description 2
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N skatole Chemical compound C1=CC=C2C(C)=CNC2=C1 ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YYNJYMYRHBOARL-UHFFFAOYSA-N 7-methoxyquinoxalin-5-amine Chemical compound N1=CC=NC2=CC(OC)=CC(N)=C21 YYNJYMYRHBOARL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Natural products CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- NVLPQIPTCCLBEU-UHFFFAOYSA-N allyl methyl sulphide Natural products CSCC=C NVLPQIPTCCLBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003373 anti-fouling effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002781 deodorant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001877 deodorizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001706 olfactory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000196 olfactory nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 229940074386 skatole Drugs 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 125000001973 tert-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/06—Quantitative determination
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
- G01N33/5038—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving detection of metabolites per se
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
-
- F—MECHANICAL ENGINEERING; LIGHTING; HEATING; WEAPONS; BLASTING
- F01—MACHINES OR ENGINES IN GENERAL; ENGINE PLANTS IN GENERAL; STEAM ENGINES
- F01N—GAS-FLOW SILENCERS OR EXHAUST APPARATUS FOR MACHINES OR ENGINES IN GENERAL; GAS-FLOW SILENCERS OR EXHAUST APPARATUS FOR INTERNAL COMBUSTION ENGINES
- F01N2560/00—Exhaust systems with means for detecting or measuring exhaust gas components or characteristics
- F01N2560/02—Exhaust systems with means for detecting or measuring exhaust gas components or characteristics the means being an exhaust gas sensor
- F01N2560/027—Exhaust systems with means for detecting or measuring exhaust gas components or characteristics the means being an exhaust gas sensor for measuring or detecting SOx
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
本発明は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法に関する。
排水口や生ごみなどの廃棄物から発生する揮発性硫黄化合物は、低濃度でも人々に不快感を与える悪臭成分である。これらの揮発性硫黄化合物は、汚水や廃棄物などに含まれるシステインやメチオニンといった含硫黄アミノ酸もしくはそれらを含むタンパク質が、細菌がもつメチオニンリアーゼやシステインリアーゼなどの代謝酵素の作用で分解を受けることにより発生する。例えば、不快臭の原因となる揮発性硫黄化合物のうち、メチルメルカプタンは、メチオニンからメチオニンリアーゼの作用によって生成され、硫化水素は、システインからシステインリアーゼの作用によって生成される。さらにメチルメルカプタンや硫化水素からは、ジメチルスルフィド、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィドなどのスルフィド化合物が酵素的あるいは酸化的に生成され、これらも悪臭の原因となる。
特許文献１には、排水口等の洗浄、殺菌、防汚、消臭用の組成物に、消臭剤又は芳香剤として香料成分を添加することが開示されている。特許文献２には、特定の香料成分により、メチオニンからメチルメルカプタンを生成する酵素、又はシステインから硫化水素を生成する酵素の作用を阻害し、廃棄物や排水口等から発生する揮発性硫黄化合物による悪臭を抑制することが開示されている。
ヒト等の哺乳動物においては、匂いは、鼻腔上部の嗅上皮に存在する嗅神経細胞上の嗅覚受容体に匂い分子が結合し、それに対する受容体の応答が中枢神経系へと伝達されることにより認識されている。ヒトの場合、嗅覚受容体は約４００個存在することが報告されており、これらをコードする遺伝子はヒトの全遺伝子の約２％にあたる。一般的に、嗅覚受容体と匂い分子は複数対複数の組み合わせで対応付けられている。すなわち、個々の嗅覚受容体は構造の類似した複数の匂い分子を異なる親和性で受容し、一方で、個々の匂い分子は複数の嗅覚受容体によって受容される。さらに、ある嗅覚受容体を活性化する匂い分子が、別の嗅覚受容体の活性化を阻害するアンタゴニストとして働くことも報告されている。これら複数の嗅覚受容体の応答の組み合わせが、個々の匂いの認識をもたらしている。
したがって、同じ匂い分子が存在する場合でも、同時に他の匂い分子が存在すると、当該他の匂い分子によって受容体応答が阻害され、最終的に認識される匂いが全く異なることがある。このような仕組みを嗅覚受容体のアンタゴニズムと呼ぶ。この受容体アンタゴニズムによる匂いの抑制は、香水や芳香剤等の別の匂いを付加することによる消臭と異なり、特定の悪臭の認識を特異的に失くしてしまうことができ、また芳香剤の匂いによる不快感が生じることもないという利点を有している。
嗅覚受容体アンタゴニズムの考え方に基づき、嗅覚受容体の活性を指標として悪臭抑制物質を同定する方法がこれまでにいくつか開示されている。例えば、特許文献３〜４には、ヘキサン酸やスカトール等の悪臭を抑制する物質を、それらの悪臭物質に特異的に応答する嗅覚受容体の活性を指標として探索することが開示されている。特許文献５には、特定のカルボン酸に応答する嗅覚受容体の活性を指標として、汗臭を抑制する物質を探索することが開示されている。特許文献６には、イソ吉草酸やその等価体の存在下で嗅覚受容体をコードするポリペプチドの活性を測定することで、当該ポリペプチドの機能を調節する薬剤を同定する方法が開示されている。特許文献７には、嗅覚受容体をコードするポリペプチドに特異的に結合する化合物を同定することにより、嗅覚の感覚に関連する化合物について化学物質のライブラリーをスクリーニングする方法が開示されている。
しかしながら、嗅覚受容体アンタゴニズムに基づいて、上記廃棄物や排水口等から発生する揮発性硫黄化合物の悪臭を抑える技術については、これまで報告がない。
排水口や生ごみなどの廃棄物からは、細菌による腐敗に伴い様々な揮発性硫黄化合物が発生し、悪臭の原因となる。その悪臭の主な原因物質の１種が、ジメチルスルフィド、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィドなどのスルフィド化合物である。したがって、これらのスルフィド化合物の臭いの制御が求められている。
本発明者は、排水口や生ごみなどの廃棄物からの悪臭の原因物質であるスルフィド化合物に特異的に応答する嗅覚受容体を新たに同定することに成功した。また本発明者は、当該嗅覚受容体又はそれと同様の機能を有するポリペプチドの応答を指標とすることにより、嗅覚受容体アンタゴニズムによってスルフィド化合物の臭いを抑制することができる物質の評価及び／又は選択が可能であることを見出した。
したがって、本発明は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価及び／又は選択方法であって、以下：
ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及びスルフィド化合物を添加すること；及び、
該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；
を含む方法を提供する。
ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及びスルフィド化合物を添加すること；及び、
該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること；
を含む方法を提供する。
本発明によれば、嗅覚受容体アンタゴニズムによりスルフィド化合物の臭いを選択的に消臭することができる物質を、効率よく探索することができる。
本明細書において、「嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制」とは、目的の臭い分子と他の分子をともに適用することにより、当該他の分子によって目的の臭い分子に対する受容体応答を阻害し、結果的に個体に認識される臭いを抑制する手段である。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制は、同様に他の分子を用いる手段であっても、芳香剤による消臭のように、目的の臭いを香料の香気によって隠蔽する手段とは区別される。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制の一例は、アンタゴニスト（拮抗剤）等の嗅覚受容体の応答を阻害する物質を使用するケースである。特定の臭いをもたらす臭い分子の受容体にその応答を阻害する物質を適用すれば、当該受容体の当該臭い分子に対する応答が抑制されるため、最終的に個体に知覚される臭いを抑制することができる。
本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体又はそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチドとは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、匂い分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。
本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の同一性は、リップマン−パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５−４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ−Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ ｓｉｚｅ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。
本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。
本明細書において、「スルフィド化合物」とは、下記式（I）で表される化合物をいう。
R1−[S]n−R2 (I)
R1−[S]n−R2 (I)
上記式（I）中、Ｒ1とＲ2は、同一又は異なって、炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示す。該炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソペンチル、tert-ペンチル、及びヘキシルが挙げられる。該炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルケニル基の例としては、ビニル、プロペニル、アリル、ブテニル、及びメチルブテニルが挙げられる。好ましくは、該Ｒ1とＲ2は、同一又は異なって、炭素数１〜４の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示し、該炭素数１〜４の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ビニル、プロペニル、アリル、及びブテニルが挙げられる。より好ましくは、該Ｒ1とＲ2は、同一又は異なって、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルであり、なお好ましくは、Ｒ1とＲ2はメチルである。
上記式（I）中、ｎは、１〜５の整数を示し、好ましくは１〜３の整数を示し、より好ましくは２又は３を示す。
好ましくは、「スルフィド化合物」は、式（I）で表される構造を有する揮発性物質である。より好ましい「スルフィド化合物」の例としては、ジメチルスルフィド（ＤＭＳ）、ジメチルジスルフィド（ＤＭＤＳ）、ジメチルトリスルフィド（ＤＭＴＳ）、アリルメチルスルフィド、トリメチルスルフィドなどを挙げることができ、さらに好ましい例としては、ＤＭＤＳ及びＤＭＴＳが挙げられる。
本発明により抑制される「スルフィド化合物の臭い」とは、上述した「スルフィド化合物」により生じる臭いであり、好ましくは、ＤＭＤＳ又はＤＭＴＳにより生じる臭いである。代表的には、本発明により抑制される「スルフィド化合物の臭い」とは、腐敗した生ごみ、汚水、又は排水口から発せられる悪臭であり得る。
図１〜２に示すとおり、本発明者は、多くの嗅覚受容体の中から、スルフィド化合物に対して特異的に応答する嗅覚受容体としてＯＲ４Ｓ２を同定した。ＯＲ４Ｓ２は、各種スルフィド化合物に対して濃度依存的に応答する。したがって、ＯＲ４Ｓ２又はこれと同様の機能を有するポリペプチドの応答を抑制する物質は、嗅覚受容体アンタゴニズムに基づいて、スルフィド化合物の臭いの認識に変化を生じさせ、結果として、スルフィド化合物の臭いを選択的に抑制することができる。
したがって、本発明は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価及び／又は選択方法を提供する。当該方法は、ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及びスルフィド化合物を添加すること；及び、該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、を含む。測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質が同定される。同定された試験物質は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤として選択される。
上記本発明の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏで行われる方法であり得る。本発明の方法においては、上記スルフィド化合物に応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質と該スルフィド化合物とが添加される。
本発明の方法に使用される試験物質は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤として使用することを所望する物質であれば、特に制限されない。試験物質は、天然に存在する物質であっても、化学的若しくは生物学的方法等で人工的に合成した物質であってもよく、又は化合物であっても、組成物若しくは混合物であってもよい。
本発明の方法に使用される嗅覚受容体ポリペプチドは、ＯＲ４Ｓ２、及びこれらとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種である。
ＯＲ４Ｓ２は、ヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体である。ＯＲ４Ｓ２は、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：１１６５１７３２４として登録されている。ＯＲ４Ｓ２は、配列番号１で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。
ＯＲ４Ｓ２とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドとしては、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ上記スルフィド化合物に応答性を有するポリペプチドが挙げられる。
本発明の方法において使用される嗅覚受容体ポリペプチドは、上述した嗅覚受容体ポリペプチドから選択される少なくとも１種であればよいが、いずれか２種以上の組み合わせであってもよい。好ましくは、ＯＲ４Ｓ２が使用される。
本発明の方法において、上記嗅覚受容体ポリペプチドは、上記スルフィド化合物に対する応答性を失わない限り、任意の形態で使用され得る。例えば、当該嗅覚受容体ポリペプチドは、生体から単離された嗅覚受容器若しくは嗅細胞等の、当該嗅覚受容体ポリペプチドを天然に発現する組織や細胞、又はそれらの培養物；当該嗅覚受容体ポリペプチドを担持した嗅細胞の膜；当該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞又はその培養物；当該嗅覚受容体ポリペプチドを有する当該組換え細胞の膜；当該嗅覚受容体ポリペプチドを有する人工脂質二重膜、などの形態で使用され得る。これらの形態は全て、本発明で使用される嗅覚受容体ポリペプチドの範囲に含まれる。
好ましい態様において、上記嗅覚受容体ポリペプチドは、哺乳動物の嗅細胞等の上記嗅覚受容体ポリペプチドを天然に発現する細胞、又は当該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞、あるいはそれらの培養物であり得る。好ましい例としては、上記嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換えヒト細胞が挙げられる。当該組換え細胞は、当該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子を組み込んだベクターを用いて細胞を形質転換することで作製することができる。
好適には、嗅覚受容体ポリペプチドの細胞膜発現を促進するために、当該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子とともに、ＲＴＰ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）をコードする遺伝子を細胞に導入する。好ましくは、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を、当該嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子とともに細胞に導入する。ＲＴＰ１Ｓの例としては、ヒトＲＴＰ１Ｓが挙げられる。ヒトＲＴＰ１Ｓは、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：５０２３４９１７として登録されている、配列番号３で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされた、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。
本発明の方法によれば、上記嗅覚受容体ポリペプチドへの試験物質及び上記スルフィド化合物の添加に続いて、該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が測定される。測定は、嗅覚受容体の応答を測定する方法として当該分野で知られている任意の方法、例えば、細胞内ｃＡＭＰ量測定等によって行えばよい。例えば、嗅覚受容体は、匂い分子によって活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させることが知られている（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。したがって、匂い分子添加後の細胞内ｃＡＭＰ量を指標にすることで、上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定することができる。ｃＡＭＰ量を測定する方法としては、ＥＬＩＳＡ法やレポータージーンアッセイ等が挙げられる。上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定する他の方法としては、カルシウムイメージング法が挙げられる。さらに別の方法としては、電気生理学的手法による測定が挙げられる。電気生理学的測定では、例えば、上記嗅覚受容体ポリペプチドを他のイオンチャネルとともに共発現させた細胞（アフリカツメガエル卵母細胞等）を作製し、該細胞上のイオンチャネルの活動をパッチクランプ法や二電極膜電位固定法などで測定することにより、該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定する。
さらに、測定された上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答に基づいて、上記スルフィド化合物への応答に対して試験物質が及ぼす作用を評価すれば、当該応答を抑制する試験物質を同定することができる。試験物質による作用の評価は、試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチドの該スルフィド化合物に対する応答を、対照群における該スルフィド化合物に対する応答と比較することによって行うことができる。対照群としては、異なる濃度の試験物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド、試験物質を添加しなかった該嗅覚受容体ポリペプチド、対照物質を添加した該嗅覚受容体ポリペプチド、試験物質を添加する前の該嗅覚受容体ポリペプチド、該嗅覚受容体ポリペプチドが発現していない細胞、などを挙げることができる。
例えば、上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答に対して試験物質が及ぼす作用は、より高濃度の試験物質添加群とより低濃度の試験物質添加群との間、試験物質添加群と非添加群との間、試験物質添加群と対照物質添加群との間、又は試験物質添加前後で、上記スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を比較することによって評価することができる。試験物質添加により、又はより高濃度の試験物質の添加により該嗅覚受容体ポリペプチドの応答が抑制される場合、当該試験物質を、該嗅覚受容体ポリペプチドの該スルフィド化合物に対する応答を抑制する物質として同定することができる。
試験物質添加群における応答が、対照群よりも抑制されていた場合、試験物質を、上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記スルフィド化合物に対する応答を抑制する物質として同定することができる。例えば、上記の手順で測定された試験物質添加群における上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して好ましくは６０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは２５％以下に抑制されていれば、当該試験物質を、上記スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定することができる。あるいは、上記の手順で測定された試験物質添加群における上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答が、対照群と比較して統計学的に有意に抑制されていれば、当該試験物質を、上記スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定することができる。
上記の手順で同定された試験物質は、スルフィド化合物に対する嗅覚受容体の応答を抑制することによって、個体によるスルフィド化合物の臭いの認識を抑制することができる物質である。したがって、上記手順で同定された試験物質は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤として選択することができる。本発明の方法によってスルフィド化合物の臭いの抑制剤として選択された物質は、スルフィド化合物に対する嗅覚受容体の応答抑制によって、スルフィド化合物の臭いを抑制することができる。
したがって、一実施形態において、本発明の方法によって選択された物質は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤の有効成分であり得る。あるいは、本発明の方法によって選択された物質は、スルフィド化合物の臭いを抑制するための化合物又は組成物に、スルフィド化合物の臭いを抑制するための有効成分として含有され得る。またあるいは、本発明の方法によって選択された物質は、スルフィド化合物の臭いの抑制剤の製造のため、又はスルフィド化合物の臭いを抑制するための化合物若しくは組成物の製造のために使用することができる。
本発明の例示的実施形態として、さらに以下の物質、製造方法、用途あるいは方法を本明細書に開示する。ただし、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
〔１〕スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価及び／又は選択方法であって、以下：
ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及びスルフィド化合物を添加すること；及び、
該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む方法。
ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに、試験物質及びスルフィド化合物を添加すること；及び、
該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む方法。
〔２〕好ましくは、上記スルフィド化合物が、下記式（I）：
R1−[S]n−R2 (I)
（式中、Ｒ1とＲ2は、同一又は異なって、炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示し、ｎは１〜５の整数を示す）
で表される化合物である、〔１〕記載の方法。
R1−[S]n−R2 (I)
（式中、Ｒ1とＲ2は、同一又は異なって、炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示し、ｎは１〜５の整数を示す）
で表される化合物である、〔１〕記載の方法。
〔３〕上記Ｒ1とＲ2が、
好ましくは、同一又は異なって、炭素数１〜４の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示し、
より好ましくは、同一又は異なって、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルを示し、
さらに好ましくは、Ｒ1とＲ2はメチルを示す、
〔２〕記載の方法。
好ましくは、同一又は異なって、炭素数１〜４の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示し、
より好ましくは、同一又は異なって、メチル、エチル、プロピル又はイソプロピルを示し、
さらに好ましくは、Ｒ1とＲ2はメチルを示す、
〔２〕記載の方法。
〔４〕上記ｎが、好ましくは１〜３の整数を示し、より好ましくは２又は３を示す、〔２〕又は〔３〕記載の方法。
〔５〕好ましくは、上記スルフィド化合物が、ジメチルスルフィド、ジメチルジスルフィド又はジメチルトリスルフィドである、〔１〕〜〔４〕のいずれか１項記載の方法。
〔６〕好ましくは、上記スルフィド化合物の臭いが、腐敗した生ごみ、汚水、又は排水口から発せられる悪臭である、〔１〕〜〔５〕のいずれか１項記載の方法。
〔７〕好ましくは、上記ＯＲ４Ｓ２が配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である、〔１〕〜〔６〕のいずれか１項記載の方法。
〔８〕好ましくは、上記ＯＲ４Ｓ２とアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列と、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上、なお好ましくは９８％以上、なおより好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ上記スルフィド化合物に応答性を有するポリペプチドである、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項記載の方法。
〔９〕好ましくは、測定された応答に基づいて該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を同定することをさらに含む、〔１〕〜〔８〕のいずれか１項記載の方法。
〔１０〕上記〔１〕〜〔８〕のいずれか１項記載の方法であって、
好ましくは、対照群における上記スルフィド化合物に対する応答を測定することをさらに含み、かつ該対照群が、以下：
上記試験物質を添加しなかった上記嗅覚受容体ポリペプチド；
対照物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチド；
上記試験物質添加前の上記嗅覚受容体ポリペプチド；又は
上記嗅覚受容体ポリペプチドが発現していない細胞、
である、方法。
好ましくは、対照群における上記スルフィド化合物に対する応答を測定することをさらに含み、かつ該対照群が、以下：
上記試験物質を添加しなかった上記嗅覚受容体ポリペプチド；
対照物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチド；
上記試験物質添加前の上記嗅覚受容体ポリペプチド；又は
上記嗅覚受容体ポリペプチドが発現していない細胞、
である、方法。
〔１１〕上記〔１０〕記載の方法であって、好ましくは、
上記試験物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記スルフィド化合物に対する応答が、上記対照群における該スルフィド化合物に対する応答と比べて統計学的に有意に抑制されていた場合に、該試験物質を該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定すること、
をさらに含む、方法。
上記試験物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記スルフィド化合物に対する応答が、上記対照群における該スルフィド化合物に対する応答と比べて統計学的に有意に抑制されていた場合に、該試験物質を該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定すること、
をさらに含む、方法。
〔１２〕上記〔１０〕記載の方法であって、好ましくは、
上記試験物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記スルフィド化合物に対する応答が、上記対照群における該スルフィド化合物に対する応答に対して好ましくは６０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは２５％以下に抑制されていた場合に、該試験物質を該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定すること、
をさらに含む、方法。
上記試験物質を添加した上記嗅覚受容体ポリペプチドの上記スルフィド化合物に対する応答が、上記対照群における該スルフィド化合物に対する応答に対して好ましくは６０％以下、より好ましくは５０％以下、さらに好ましくは２５％以下に抑制されていた場合に、該試験物質を該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定すること、
をさらに含む、方法。
〔１３〕好ましくは、上記スルフィド化合物に対する上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する試験物質を、スルフィド化合物の臭いの抑制剤として選択することをさらに含む、〔１〕〜〔１２〕のいずれか１項記載の方法。
〔１４〕好ましくは、上記ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドが、該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞上に発現されている、〔１〕〜〔１３〕のいずれか１項記載の方法。
〔１５〕上記〔１４〕記載の方法であって、上記組換え細胞が、
好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子と、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子とを導入された細胞であり、
より好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子と、ヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子とを導入された細胞である、
方法。
好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子と、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子とを導入された細胞であり、
より好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子と、ヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子とを導入された細胞である、
方法。
〔１６〕好ましくは、上記ＯＲ４Ｓ２及びこれとアミノ酸配列において少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドとして、上記〔１４〕又は〔１５〕記載の組換え細胞又はその培養物が使用される、〔１〕〜〔１３〕のいずれか１項記載の方法。
〔１７〕好ましくは、上記嗅覚受容体ポリペプチドの応答の測定が、ＥＬＩＳＡ若しくはレポータージーンアッセイによる細胞内ｃＡＭＰ量測定、カルシウムイメージングによる測定、又は電気生理学的測定である、〔１〕〜〔１６〕のいずれか１項記載の方法。
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
本実施例で用いた臭い化合物及び試験物質を下記表１に示す。
実施例１ スルフィド化合物に応答する嗅覚受容体の同定
（１）ヒト嗅覚受容体遺伝子のクローニング
ヒト嗅覚受容体はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲ法によりクローニングした。ＰＣＲ法により増幅した各遺伝子をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組み込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトへと組換えた。
（１）ヒト嗅覚受容体遺伝子のクローニング
ヒト嗅覚受容体はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲ法によりクローニングした。ＰＣＲ法により増幅した各遺伝子をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組み込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトへと組換えた。
（２）ｐＭＥ１８Ｓ−ヒトＲＴＰ１Ｓベクターの作製
ＲＴＰ１Ｓ（配列番号４）をコードするＲＴＰ１Ｓ遺伝子（配列番号３）を、ｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組み込んだ。
ＲＴＰ１Ｓ（配列番号４）をコードするＲＴＰ１Ｓ遺伝子（配列番号３）を、ｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組み込んだ。
（３）嗅覚受容体発現細胞の作製
４２８種のヒト嗅覚受容体のいずれか１種を発現させたＨＥＫ２９３細胞を作製した。表２に示す組成の反応液を調製しクリーンベンチ内で１５分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞（３×１０5細胞／ｃｍ2）を９０μＬずつ各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ2を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。対照として用いるために、嗅覚受容体を発現させない条件の細胞（Ｍｏｃｋ）も用意し、同様に実験に用いた。
４２８種のヒト嗅覚受容体のいずれか１種を発現させたＨＥＫ２９３細胞を作製した。表２に示す組成の反応液を調製しクリーンベンチ内で１５分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞（３×１０5細胞／ｃｍ2）を９０μＬずつ各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ2を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。対照として用いるために、嗅覚受容体を発現させない条件の細胞（Ｍｏｃｋ）も用意し、同様に実験に用いた。
（４）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本研究での匂い応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本研究での匂い応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
上記（３）で作製した培養物から、培地を取り除き、ＤＭＥＭ（Ｎａｃａｌａｉ）で調製したスルフィド化合物を含む溶液を７５μＬ添加した。スルフィド化合物は、ジメチルジスルフィド（ＤＭＤＳ）又はジメチルトリスルフィド（ＤＭＴＳ）１００μＭとした。細胞をＣＯ2インキュベータ内で３時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼの活性測定には、Ｄｕａｌ−ＧｌｏTMｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、製品の操作マニュアルに従って測定を行った。各種刺激条件について、ホタルルシフェラーゼ由来の発光値をウミシイタケルシフェラーゼ由来の発光値で除した値ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃを算出した。スルフィド化合物刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来のｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃを、スルフィド化合物刺激を行わない細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃで割った値をｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅとして算出し、応答強度の指標とした。
（５）結果
４２８種類の嗅覚受容体についてＤＭＤＳ又はＤＭＴＳに対する応答を測定した結果、嗅覚受容体ＯＲ４Ｓ２が、ＤＭＤＳ及びＤＭＴＳの両方に対して特異的な応答を示すことが明らかになった（図１）。ＯＲ４Ｓ２のＤＭＤＳ及びＤＭＴＳに対する応答は濃度依存的であった（図２）。またＯＲ４Ｓ２は、１ｍＭと３ｍＭの濃度のジメチルスルフィド（ＤＭＳ）に対しても応答した（図３）。一方で、ＯＲ４Ｓ２は、同じく揮発性硫黄化合物であるメチルメルカプタン３ｍＭに対しては応答しなかった（図４）。したがって、ＯＲ４Ｓ２は、様々なスルフィド化合物に対して応答性をもつスルフィド化合物受容体である。またＯＲ４Ｓ２は、これまでスルフィド化合物に応答することが見出されていない、新規のスルフィド化合物受容体である。
４２８種類の嗅覚受容体についてＤＭＤＳ又はＤＭＴＳに対する応答を測定した結果、嗅覚受容体ＯＲ４Ｓ２が、ＤＭＤＳ及びＤＭＴＳの両方に対して特異的な応答を示すことが明らかになった（図１）。ＯＲ４Ｓ２のＤＭＤＳ及びＤＭＴＳに対する応答は濃度依存的であった（図２）。またＯＲ４Ｓ２は、１ｍＭと３ｍＭの濃度のジメチルスルフィド（ＤＭＳ）に対しても応答した（図３）。一方で、ＯＲ４Ｓ２は、同じく揮発性硫黄化合物であるメチルメルカプタン３ｍＭに対しては応答しなかった（図４）。したがって、ＯＲ４Ｓ２は、様々なスルフィド化合物に対して応答性をもつスルフィド化合物受容体である。またＯＲ４Ｓ２は、これまでスルフィド化合物に応答することが見出されていない、新規のスルフィド化合物受容体である。
実施例２ 嗅覚受容体応答に基づくスルフィド化合物の臭いの抑制剤の探索
（１）ルシフェラーゼアッセイ
実施例１（１）〜（３）と同様の手順で、ＯＲ４Ｓ２（配列番号２）を発現させたＨＥＫ２９３細胞を作製した。実施例１（４）の手順に従って、ルシフェラーゼレポータージーンアッセイにより、試験物質存在下及び非存在下での嗅覚受容体のＤＭＤＳに対する応答（ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値）を測定した。ＤＭＤＳ単独刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｘ）、ＤＭＤＳ刺激を行わなかった細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）、ＤＭＤＳと試験物質との共刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｚ）を求め、以下の計算式により、試験物質存在下での受容体のＤＭＤＳ応答強度（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％））を求めた。
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）＝（Ｚ−Ｙ）／（Ｘ−Ｙ）×１００
独立した実験を３回行い、各回の実験の平均値を求めた。培養物へのＤＭＤＳの添加濃度は１ｍＭとし、試験物質の添加濃度は０〜３０００μＭの範囲で変更した。
（１）ルシフェラーゼアッセイ
実施例１（１）〜（３）と同様の手順で、ＯＲ４Ｓ２（配列番号２）を発現させたＨＥＫ２９３細胞を作製した。実施例１（４）の手順に従って、ルシフェラーゼレポータージーンアッセイにより、試験物質存在下及び非存在下での嗅覚受容体のＤＭＤＳに対する応答（ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値）を測定した。ＤＭＤＳ単独刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｘ）、ＤＭＤＳ刺激を行わなかった細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）、ＤＭＤＳと試験物質との共刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｚ）を求め、以下の計算式により、試験物質存在下での受容体のＤＭＤＳ応答強度（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％））を求めた。
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）＝（Ｚ−Ｙ）／（Ｘ−Ｙ）×１００
独立した実験を３回行い、各回の実験の平均値を求めた。培養物へのＤＭＤＳの添加濃度は１ｍＭとし、試験物質の添加濃度は０〜３０００μＭの範囲で変更した。
ＤＭＴＳ応答については、ＤＭＴＳ単独刺激に対するｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｘ’）を、ＤＭＴＳ刺激を行わなかった細胞のｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除した値（Ｘ’／Ｙ）をＤＭＴＳ応答値（Ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ）として算出した。このＤＭＴＳ応答に対する試験物質の効果を比較するために、ＤＭＴＳと試験物質との共刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｚ’）を同様に刺激を行わなかった細胞のｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除して（Ｚ’／Ｙ）を算出し、Ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅとした。独立した実験を３回行い、各回の実験の平均値を求めた。培養物へのＤＭＴＳの添加濃度は３００μＭ、試験物質の添加濃度は１００μＭとした。
結果を図５及び図６に示す。ｃｉｓ−４−ヘプテナール及び１，４−シネオールは、いずれも濃度依存的にＯＲ４Ｓ２のＤＭＤＳ応答を抑制した。またこれら２つの化合物はいずれも、ＯＲ４Ｓ２のＤＭＴＳ応答も抑制した。これらの結果から、上記２つの化合物が、ＯＲ４Ｓ２アンタゴニストであることが明らかにされた。
実施例３ ＯＲ４Ｓ２アンタゴニストによるスルフィド化合物の臭いの抑制能
実施例２で同定したＯＲ４Ｓ２アンタゴニストであるｃｉｓ−４−ヘプテナール、及び１，４−シネオールによるスルフィド化合物の臭いの抑制効果を、官能試験により確認した。
実施例２で同定したＯＲ４Ｓ２アンタゴニストであるｃｉｓ−４−ヘプテナール、及び１，４−シネオールによるスルフィド化合物の臭いの抑制効果を、官能試験により確認した。
ＤＭＤＳ、ｃｉｓ−４−ヘプテナール、又は１，４−シネオールについては、ミネラルオイルの０．１％（ｖ／ｖ）溶液を調製した。ＤＭＴＳについては、ミネラルオイルの０．０１％（ｖ／ｖ）溶液を調製した。２０ｍＬ容のガラス瓶（マルエム、Ｎｏ．６）に２つの綿球を入れ、１つの綿球にはＤＭＤＳ又はＤＭＴＳの溶液３０μＬを、もう１つの綿球には上記ＯＲ４Ｓ２アンタゴニストのいずれかの溶液３０μＬを染み込ませた。上記綿球を入れたガラス瓶は、蓋をして３７℃で１時間静置した後、試験サンプルとして官能試験に用いた。基準サンプルとしてＤＭＤＳ又はＤＭＴＳの溶液を含む綿球のみを入れたガラス瓶を、対象サンプルとしてミネラルオイル（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を含む綿球のみを入れたガラス瓶を準備した。
官能試験は、ＤＭＤＳに関しては１０名、ＤＭＴＳに関しては１１名の評価者により単盲式にて行った。試験は、食後１時間半以上を経過した１４時以降から開始した。匂いの拡散を防ぐため、試験は基本的にドラフト付近で行った。スルフィド化合物の臭いへの順応の影響を排除するため、試験中には適宜、ＤＭＤＳ又はＤＭＴＳ臭の認知強度を確認させ、必要であれば休憩をとった。評価者を二群に分け、一方の群はｃｉｓ−４−ヘプテナール、次いで１，４−シネオールの順序で、他方の群は１、４−シネオール、次いでｃｉｓ−４−ヘプテナールの順序で、ＤＭＤＳ又はＤＭＴＳ臭の抑制効果を評価した。試験サンプルは３名の評価者による評価後に新しいものと交換した。
試験サンプルの臭い評価では、各評価者に、次の５段階の基準「ＤＭＤＳ（又はＤＭＴＳ）の臭いが、１：わからない、２：感知できる、３：楽にわかる、４：強く感じる、５：耐えられないほど強く感じる」を設定し、ＤＭＤＳ（又はＤＭＴＳ）単独での臭い強度を３としたときの各試験サンプルのＤＭＤＳ（又はＤＭＴＳ）臭の強度を１．０から０．５刻みで５．０までの９段階で評価させた。各評価者による評価結果の平均値を求めた。
試験サンプルの臭い評価では、各評価者に、次の５段階の基準「ＤＭＤＳ（又はＤＭＴＳ）の臭いが、１：わからない、２：感知できる、３：楽にわかる、４：強く感じる、５：耐えられないほど強く感じる」を設定し、ＤＭＤＳ（又はＤＭＴＳ）単独での臭い強度を３としたときの各試験サンプルのＤＭＤＳ（又はＤＭＴＳ）臭の強度を１．０から０．５刻みで５．０までの９段階で評価させた。各評価者による評価結果の平均値を求めた。
官能試験の結果を図７に示す。ＯＲ４Ｓ２アンタゴニストであるｃｉｓ−４−ヘプテナール及び１，４−シネオールは、いずれもＤＭＤＳ及びＤＭＴＳの臭い強度を抑制した。以上の結果から、ＯＲ４Ｓ２アンタゴニストにより、ＤＭＤＳやＤＭＴＳなどのスルフィド化合物の臭いが抑制されること、したがって、ＯＲ４Ｓ２の応答に基づいてスルフィド化合物の臭いの抑制剤を効率よく探索することができることが明らかにされた。
Claims (7)
- スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価及び／又は選択方法であって、以下：
試験物質及びスルフィド化合物を、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるＯＲ４Ｓ２、及び配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、かつ該スルフィド化合物に応答性を有するポリペプチドからなる群より選択される少なくとも１種の嗅覚受容体ポリペプチドに添加すること；及び、
該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を測定すること、
を含む方法。 - 前記スルフィド化合物が、下記式（I）：
R1−[S]n−R2 (I)
（式中、Ｒ1とＲ2は、同一又は異なって、炭素数１〜６の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基を示し、ｎは１〜５の整数を示す）
で表される化合物である、請求項１記載の方法。 - 前記Ｒ1とＲ2が、同一又は異なって、炭素数１〜４の直鎖又は分枝鎖のアルキル又はアルケニル基であり、ｎは１〜３の整数である、請求項２記載の方法。
- 前記嗅覚受容体ポリペプチドが、該嗅覚受容体ポリペプチドを発現するように遺伝的に操作された組換え細胞上に発現されている、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
- 前記試験物質を添加しなかった前記嗅覚受容体ポリペプチドの前記スルフィド化合物に対する応答を測定することをさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
- 前記試験物質を添加した前記嗅覚受容体ポリペプチドの前記スルフィド化合物に対する応答が、該試験物質を添加しなかった該嗅覚受容体ポリペプチドの該スルフィド化合物に対する応答よりも抑制されていたときに、該試験物質を、該スルフィド化合物に対する該嗅覚受容体ポリペプチドの応答を抑制する物質として同定することをさらに含む、請求項５記載の方法。
- 前記嗅覚受容体ポリペプチドの応答の測定が、ＥＬＩＳＡ若しくはレポータージーンアッセイによる細胞内ｃＡＭＰ量測定、カルシウムイメージングによる測定、又は電気生理学的測定である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US15/737,079 US10585087B2 (en) | 2015-06-17 | 2016-06-16 | Method for evaluating and selecting agent for suppressing odors of sulfide compounds |
| EP16811685.3A EP3312289B1 (en) | 2015-06-17 | 2016-06-16 | Method for evaluating and selecting agent for suppressing odors of sulfide compounds |
| PCT/JP2016/067894 WO2016204211A1 (ja) | 2015-06-17 | 2016-06-16 | スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015121916 | 2015-06-17 | ||
| JP2015121916 | 2015-06-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017006122A JP2017006122A (ja) | 2017-01-12 |
| JP2017006122A5 JP2017006122A5 (ja) | 2017-02-16 |
| JP6122181B2 true JP6122181B2 (ja) | 2017-04-26 |
Family
ID=57760389
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016116227A Active JP6122181B2 (ja) | 2015-06-17 | 2016-06-10 | スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10585087B2 (ja) |
| EP (1) | EP3312289B1 (ja) |
| JP (1) | JP6122181B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022270481A1 (ja) | 2021-06-22 | 2022-12-29 | 花王株式会社 | 嗅覚受容体の発現方法及び応答測定方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019131789A1 (ja) | 2017-12-27 | 2019-07-04 | 高砂香料工業株式会社 | 加齢臭抑制素材のスクリーニング方法 |
| JP7197298B2 (ja) | 2018-07-17 | 2022-12-27 | 花王株式会社 | メチルメルカプタン臭抑制剤の評価及び／又は選択方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1299528A4 (en) | 2000-03-13 | 2005-10-05 | Senomyx Inc | Human olfactory receptors and genes coding for them |
| JP5006540B2 (ja) | 2004-12-27 | 2012-08-22 | ライオン株式会社 | 水徐溶性組成物、及びそれを用いた洗浄方法 |
| AU2006222265B2 (en) | 2005-03-03 | 2012-07-05 | Chemcom S.A. | Natural ligand of G protein coupled receptor RCC356 and uses thereof |
| JP5329852B2 (ja) | 2008-06-25 | 2013-10-30 | 花王株式会社 | 廃棄物や排水口等から発生する悪臭を抑制する方法 |
| JP5697383B2 (ja) * | 2010-09-03 | 2015-04-08 | 花王株式会社 | 悪臭抑制剤の探索方法 |
| WO2012029922A1 (ja) * | 2010-09-03 | 2012-03-08 | 花王株式会社 | 悪臭抑制剤の探索方法、悪臭抑制剤、及び悪臭抑制方法 |
| US8637259B1 (en) | 2011-02-09 | 2014-01-28 | Chemcom S.A. | Methods of identifying modulators of olfactory receptors involved in the perception of sweat carboxylic acids |
| JP5593271B2 (ja) * | 2011-06-06 | 2014-09-17 | 花王株式会社 | 悪臭抑制剤の探索方法 |
| JP2016523546A (ja) * | 2013-06-29 | 2016-08-12 | フイルメニツヒ ソシエテ アノニムＦｉｒｍｅｎｉｃｈ Ｓａ | 匂い物質および香り受容体を特定、単離および使用する方法 |
| JP6588715B2 (ja) * | 2014-04-14 | 2019-10-09 | 花王株式会社 | 尿臭抑制剤の探索方法 |
-
2016
- 2016-06-10 JP JP2016116227A patent/JP6122181B2/ja active Active
- 2016-06-16 EP EP16811685.3A patent/EP3312289B1/en active Active
- 2016-06-16 US US15/737,079 patent/US10585087B2/en active Active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022270481A1 (ja) | 2021-06-22 | 2022-12-29 | 花王株式会社 | 嗅覚受容体の発現方法及び応答測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2017006122A (ja) | 2017-01-12 |
| EP3312289B1 (en) | 2020-02-19 |
| EP3312289A4 (en) | 2018-12-12 |
| US10585087B2 (en) | 2020-03-10 |
| EP3312289A1 (en) | 2018-04-25 |
| US20180180600A1 (en) | 2018-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6588715B2 (ja) | 尿臭抑制剤の探索方法 | |
| WO2016204211A1 (ja) | スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法 | |
| JP6114439B2 (ja) | 匂い抑制物質の選択方法 | |
| US9526680B2 (en) | Method for searching for malodor control agent, malodor control agent, and malodor control method | |
| JP5593271B2 (ja) | 悪臭抑制剤の探索方法 | |
| WO2018142961A1 (ja) | 匂い制御物質の選択方法 | |
| WO2019131789A1 (ja) | 加齢臭抑制素材のスクリーニング方法 | |
| JP6122181B2 (ja) | スルフィド化合物の臭いの抑制剤の評価又は選択方法 | |
| WO2016194788A1 (ja) | 匂い抑制物質の選択方法 | |
| JP6422665B2 (ja) | 腋臭抑制剤の探索方法 | |
| JP6371336B2 (ja) | ポリスルフィド化合物の臭いの抑制剤 | |
| JP2015202076A (ja) | 生乾き臭抑制剤の探索方法 | |
| JP6276555B2 (ja) | フラネオールによるにおいの抑制剤の探索方法 | |
| JP6061955B2 (ja) | ピラジン誘導体による臭気の抑制剤の探索方法 | |
| JP7197298B2 (ja) | メチルメルカプタン臭抑制剤の評価及び／又は選択方法 | |
| JP7152399B2 (ja) | 悪臭中和剤を同定するための方法 | |
| JP7214486B2 (ja) | 猫尿臭抑制剤の探索方法 | |
| JP7383453B2 (ja) | インドール臭抑制剤の選択方法 | |
| JP6395426B2 (ja) | アクリル酸ブチル臭抑制剤の探索方法 | |
| WO2016204212A1 (ja) | ポリスルフィド化合物の臭いの抑制剤 | |
| JP2023174085A (ja) | アンモニア臭の抑制剤の探索方法 | |
| JP2022083535A (ja) | インドール臭抑制剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161206 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161206 |
|
| A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20161206 |
|
| A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20161221 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170110 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170206 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170328 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170330 |
|
| R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 6122181 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |