JP6072854B2 - Ｃｄ３８を特異的に認識する抗体とシタラビンを含有する抗腫瘍性組合せ剤 - Google Patents

Description

本発明は、腫瘍性疾患の治療に治療上有用な、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体とシタラビンの組合せ剤に関する。

ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有する４５ｋＤのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ^＋から環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への転化を触媒することができるとともに、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースへ加水分解することができる二機能表面酵素である。ＣＤ３８は、多くの造血器腫瘍においてアップレギュレートされるので、これらの腫瘍と関連づけられてきた。

モノクローナル抗体３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９は、ＣＤ３８を特異的に認識するもので、ＰＣＴ出願ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されている。前記抗ＣＤ３８抗体は、アポトーシスの誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の３種の異なる細胞障害機構により、ＣＤ３８^＋細胞を死滅させることができる。また、これらの抗体は、間質細胞または間質由来のサイトカインが存在しなくても、ＣＤ３８^＋細胞のアポトーシスを直接誘導することができる。シタラビンは、化学療法で用いられる代謝拮抗薬である。それでもなお、依然として癌治療の新規の有効な医薬が必要とされている。

国際公開第２００８／０４７２４２号

今回、ヒト化抗ＣＤ３８抗体が、抗癌治療に治療上有用でありヒト化抗ＣＤ３８抗体のうちの１つの機構と同一または異なる機構を有する少なくとも１種の物質と組み合わせて投与されると、この抗体の効力が顕著に改善され得ることが見出され本発明に至った。本発明ではこの物質はシタラビンに限定される。

「抗体」という用語は、本明細書中、最も広義で用いられ、具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥなどの任意のアイソタイプのモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む。）、ポリクローナル抗体、多選択性抗体、キメラ抗体、ならびに抗体断片を包含する。典型的なＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合でつながった、２本の同一重鎖と２本の同一軽鎖で構成される。重鎖および軽鎖のそれぞれが、定常領域および可変領域を含有する。各可変領域は、抗原のエピトープを結合するのにまず必要となる、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「高頻度可変領域」と呼ばれるセグメントを３つ含有している。これらのセグメントは通常、Ｎ末端から順に付番されてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と示される。ＣＤＲ外の可変領域のうちより高度に保存される部分は、「フレームワーク領域」と呼ばれる。

本明細書に使用される場合、「Ｖ_Ｈ」または「ＶＨ」は、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を示し、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２断片の重鎖を含む。「Ｖ_Ｌ」または「ＶＬ」という表現は、抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を示し、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２断片の軽鎖を含む。

３８ＳＢ１３抗体は、配列番号５０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号３８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号：１、２、および３からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびに前記軽鎖は配列番号：４、５、および６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ１８抗体は、配列番号５２からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号：７、８、および９からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびに前記軽鎖は配列番号：１０、１１、および１２からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ１９抗体は、配列番号５４からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４２からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号：１３、１４、および１５からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびに前記軽鎖は配列番号：１６、１７、および１８からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ３０抗体は、配列番号５６からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４４からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号：１９、２０、および２１からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびに前記軽鎖は配列番号：２２、２３、および２４からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ３１抗体は、配列番号５８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４６からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号：２５、２６、および２７からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびに前記軽鎖は配列番号：２８、２９、および３０からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ３９抗体は、配列番号６０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号：３１、３２、および３３からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびに前記軽鎖は配列番号：３４、３５、および３６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９マウス抗ＣＤ３８抗体を産生するハイブリドーマ細胞株は、それぞれＰＴＡ−７６６７、ＰＴＡ−７６６９、ＰＴＡ−７６７０、ＰＴＡ−７６６６、ＰＴＡ−７６６８、およびＰＴＡ−７６７１の寄託番号で、２００６年６月２１日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９，ＵＳＡ）に寄託されている（ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されるとおり）。

「ヒト化抗体」という用語は、本明細書に使用される場合、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体を示す。ヒト化の最終目標は、抗体の完全な抗原結合親和性および特異性を維持しながらも、ヒトに導入するために、マウス抗体などの異種抗体の免疫原性を低下させることである。ヒト化抗体、または他の哺乳類による非拒絶に適合した抗体は、表面置換（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲ移植などの複数の技法を用いて作製することができる。本明細書に使用される場合、表面置換技法とは、分子モデル化、統計解析、および突然変異導入の組み合わせを用いて抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変し、標的宿主の既知の抗体の表面に似せるものである。ＣＤＲ移植技法は、例えば、マウス抗体の相補性決定領域をヒトフレームワークドメイン中に置換することを含む（例えば、ＷＯ９２／２２６５３を参照）。ヒト化されたキメラ抗体は、好ましくは、定常領域、および対応するヒト抗体領域に実質的にまたはもっぱら由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変領域、およびヒト以外の哺乳動物に実質的にまたはもっぱら由来するＣＤＲを有する。

抗体の表面置換に対する戦略および方法、ならびに異種宿主内での抗体の免疫原性を低下させる他の方法は、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６３９，６４１に開示される（この全体が参照として本明細書に援用される。）。抗体は、その他様々な技法によりヒト化することができ、このような技法として以下が挙げられる：ＣＤＲ移植（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５３０，１０１；およびＥＰ５，５８５，０８９）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または表面置換（ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５６５，３３２）、ならびに柔軟な（ｆｌｅｘｉｂｌｅ）残基の同定（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４３８１）。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法をはじめとする、当分野で既知の様々な方法によって作製することが可能である。Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，４４４，８８７、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，７１６，１１１、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５４５，８０６、およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，８１４，３１８；ならびに国際特許出願公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１も参照（前記参照はこの全体が参照として本明細書に援用される。）。

本発明の薬学的組合せ剤の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８を認識してＣＤ３８^＋細胞をアポトーシス、ＡＤＣＣ、およびＣＤＣにより死滅させるヒト化抗体である。さらなる実施形態において、本発明のヒト化抗体は、間質細胞または間質由来のサイトカインが存在しなくても、アポトーシスにより前記ＣＤ３８^＋細胞を死滅させることができる。

このようなヒト化抗体の好適な実施形態とは、ヒト化３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、もしくは３８ＳＢ３９抗体、またはこのエピトープ結合断片である。

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９抗体のＣＤＲは、モデリングで同定され、この分子構造は予測されてきている。従って、１つの実施形態において、本発明は、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６および８１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを１つ以上含む、ヒト化抗体またはこのエピトープ結合断片を提供する。好適な実施形態において、３８ＳＢ１３のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１、２、および３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：４、５、および６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ１８のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：７、８、および９で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：１０、１１、および１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ１９のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１３、８１、および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：１６、１７、および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ３０のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１９、２０、および２１で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：２２、２３、および２４で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ３１のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：２５、２６、および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：２８、２９、および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ３９のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：３１、３２、および３３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：３４、３５、および３６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。

１つの実施形態において、本発明は、配列番号：６６および７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化抗体またはこの断片を提供する。好適な実施形態において、配列番号６６で表されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体が提供される。別の好適な実施形態において、配列番号７２で表されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体が提供される。

別の実施形態において、本発明は、配列番号：６２、６４、６８、および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化抗体またはこの断片を提供する。好適な実施形態において、配列番号：６２および６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体が提供される。別の好適な実施形態において、配列番号：６８および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体が提供される。

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９抗体のヒト化改変型はそれぞれが抗癌剤として特別に有利であることを示してきた。これらの調製、物性、および有益な薬理学的性質は、ＷＯ２００８／０４７２４２に記載される（これはこの全体が本明細書に参照として援用される。）。ヒトを治療するのに用いられる用量は、治療される被検体に特有の要因に依存するが、一般に、経口投与で１から１５０ｍｇ／ｋｇであるか、または静脈内投与で１から１５０ｍｇ／ｋｇである。

シトシンアラビノシド即ちシタラビンまたはａｒａＣ（商品名：Ａｒａｃｙｔｉｎ（登録商標））は、代謝拮抗薬である（１β−アラビノフラノシルシトシン）。シタラビンは速やかにシトシンアラビノシドトリホスファートに変換され、これが細胞周期がＳ期（ＤＮＡ合成）にあるＤＮＡを損傷させる。急速に分裂している細胞は、有糸分裂のためにＤＮＡ複製を必要とし、このため最も影響を受ける。シタラビンは、ＤＮＡ合成に必要な酵素、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、およびヌクレオチドレダクターゼも阻害する。シタラビンは、体内で速やかに脱アミノ化して不活性なウラシル誘導体になるため、連続静脈点滴で投与されることが多い。

本発明の１つの態様は、抗ＣＤ３８抗体を少なくともシタラビンと組み合わせて含む薬学的組成物である。完成品の活性は用いられる用量に依存するため、用いる用量を減らして毒性現象を減らしながらも活性を上げることが可能である。本発明による組合せ剤での効力の改善は、治療的相乗作用の決定により説明することができる。研究の最良な作用剤を単独で、この最大耐量でまたは毒性が動物種に及ばないかぎりの試験したこの最大用量で用いた場合よりも、ある組合せ剤の方が治療上優れているならば、この組合せ剤は治療的相乗作用を示している。

この効力は、例えば、ｌｏｇ_１０細胞死滅により定量することが可能であり、ｌｏｇ_１０細胞死滅は以下の式によって求められる：
ｌｏｇ_１０細胞死滅＝Ｔ−Ｃ（日数）／３．３２×Ｔ_ｄ
式中、Ｔ−Ｃは腫瘍増殖の遅延を表し、腫瘍があらかじめ定めた値（例えば、１ｇ）に達するまでの日数の、治療群についての中央値（Ｔ）および対照群についての中央値（Ｃ）であり、Ｔ_ｄは、対照動物で腫瘍体積が２倍になるのに必要な日数を表す［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，４０：２６６０−２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：３−５１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９７９）］。ｌｏｇ_１０細胞死滅が０．７以上であれば、この完成品は活性であると判断される。ｌｏｇ_１０細胞死滅が２．８より大きければ、この完成品は非常に活性が高いと判断される。

各構成要素が概してそれぞれの最大耐量を超えない用量で存在している組合せ剤において、組合せ剤のｌｏｇ_１０細胞死滅が、最良な構成要素を単独で、この最大耐量でまたは試験したこの最大用量で用いた場合のｌｏｇ_１０細胞死滅の値よりも高い場合、この組合せ剤は治療的相乗作用を示していることになる。

組合せ剤の固形腫瘍に対する効力は、以下の様式で実験的に求めることができる：
０日目、実験に供される動物（一般にマウス）に、腫瘍断片３０から６０ｍｇを両側に皮下移植する。腫瘍を持たされた動物を、この腫瘍の大きさに関して無作為に割り振って様々な治療と対照に供する。移植後、腫瘍があらかじめ定めた大きさに到達したら、腫瘍の種類に依存して、化学療法を開始し、動物を毎日観察する。治療中、それぞれの動物群の重さを、重さの減少が最大になり、続いて重さが完全に回復するまで、毎日測定する。次いで、試験終了まで、動物群の重さを週に１回か２回測定する。

腫瘍は、約２ｇに達するか動物が死亡する（腫瘍が２ｇに達する前にそうなってしまった場合）まで、腫瘍が２倍になる時間に依存して、週に１回から５回測定する。動物を、安楽死即ち死後直ちに死体解剖する。

抗腫瘍活性は、記録した異なるパラメータに応じて求められる。

ｈｕ３８ＳＢ１９およびシタラビンをこれらの最適用量で用いた組合せ剤で得られる結果は、本明細書で以下、実施例として示される。

従って、本発明は、本発明による組合せ剤を含有する薬学的組成物にも関する。

組合せ剤を構成する構成要素は、この組合せ剤の最大効力が得られるように、同時に、半同時に、別々に、または時間的に間を空けて、投与することができる。それぞれの投与について、継続期間を急速投与から連続かん流まで変化させることが可能である。

結果として、本発明の目的について、組合せ剤は構成要素の物理的結合により得られるものに排他的に限定されるのではなく、個別投与を許容するものも含まれ、個別投与は同時または時間的に間を空けることが可能である。

本発明による組成物は、好ましくは非経口（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）で投与することができる組成物である。しかしながら、本発明による組成物は、局所領域治療（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｒｅｇｉｏｎａｌ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）の場合は、経口、皮下、または腹腔内投与されてもよい。

非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与用組成物は、一般に、医薬的に許容される滅菌溶液または懸濁液であり、溶液または懸濁液は必要に応じて使用時に場合により調製することができる。非水溶液または懸濁液の調製には、天然の植物油（オリーブ油、ゴマ油など）または石油または注射用有機エステル（オレイン酸エチルなど）を用いることができる。滅菌水溶液は、完成品の水溶液からなるものが可能である。水溶液のｐＨが適切に調節されており、この水溶液が、例えば十分な量の塩化ナトリウムまたはグルコースで、等浸透圧になっていれば、これは静脈内投与に適している。滅菌は、加熱により、または組成物に悪影響を及ぼさない任意の他の手段により、行うことができる。組合せ剤は、リポソームの形またはシクロデキストリンもしくはポリエチレングリコールなどのキャリアと会合した形を取ることもできる。

経口、皮下、または腹腔内投与用組成物は、好ましくは、水性懸濁液または水溶液である。

本発明による組合せ剤において、この組合せ剤の構成要素の使用は同時、別々、または時間的に間を空けることができ、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の量はこの組合せ剤の１０から９０重量％を占めることが特に有利であり、この含有量は、関連する物質の性質、得ようとする効力、および治療しようとする癌の性質によって変えることが可能である。

本発明による組合せ剤は、複数の種類の癌の治療に特に有用であり、このような癌として以下が挙げられる（が、これらに限定されない）：膀胱、乳房、結腸、頭頸部、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頸部、甲状腺、および皮膚のもの、ならびに扁平上皮癌をはじめとするカルシノーマおよび腺癌；多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ性（またはリンパ様）白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えばバーキットリンパ腫）をはじめとするリンパ球系列の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性（骨髄または骨髄球性）白血病、ならびに前骨髄球性白血病をはじめとする骨髄球系列の造血器腫瘍；線維肉腫、骨肉腫、および横紋筋肉腫をはじめとする間葉系起源の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、およびシュワン細胞腫をはじめとする中枢神経系および末梢神経系の腫瘍；ならびに黒色腫、奇形癌腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、および精上皮腫をはじめとするその他の腫瘍、さらには今後ＣＤ３８が発現することが確認されたその他の癌。抗ＣＤ３８抗体は独特の作用機構を有しているので、本発明による組合せ剤は、一般的に用いられる抗癌剤が効かない白血病、リンパ腫、および癌を治療するのに主に役立つ。

従って、本発明は、癌の治療用医薬の製造のための上記組合せ剤の使用も包含する。

実施例：
この実施例では、腫瘍増殖阻害について本発明の抗ＣＤ３８抗体／シタラビン組合せ剤の有効性をｉｎ ｖｉｖｏで実証した。

選択した腫瘍モデルは、移植性ヒトＴ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）細胞株、ＤＮＤ−４１をＳＣＩＤマウスに移植したものであった。

Ｈｕ３８ＳＢ１９を、Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋を含まないリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）に配合した。腫瘍移植後１８、２１、２４、２７日目に、Ｈｕ３８ＳＢ１９を静脈内投与した。

Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ（マウスでの徐放投与に適したシタラビン誘導体）を、エタノールが３％、ポリソルベート８０が１％、水が９６％の中に配合し、腫瘍移植後１８、２１、２４、２７日目に、皮下投与した。

実験結果を表１にまとめる。

腫瘍が２倍になる時間＝３．４日。

以下の評価項目を用いた：
・≧２０％体重減少または≧１０％薬物死を誘導する投薬量では毒性であるとした、
・Ｉｏｇ１０細胞死滅＝（Ｔ−Ｃ）／［３．３２×（腫瘍が２倍になる日数）］を見積もることにより抗腫瘍効力を求めた
（Ｔは、処置したマウスで７５０ｍｇに達するまでの時間の中央値を意味し、Ｃは対照マウスで同じ大きさに達するまでの時間の中央値（２６．９日）を意味する；無再発生存個体はこれらの計算から排除し別々に集計する。）。ｌｏｇ細胞死滅＜０．７では抗腫瘍活性はないものとした。ｌｏｇ細胞死滅≧２．８では治療が非常に活性が高いとした
・無再発生存個体（ＴＦＳ）：研究の全期間（最後の処置から１００日後以降）について触診限界（６３ｍｇ）未満の完全回復に相当する。

・治療的相乗作用：ある組合せ剤が研究の最良の薬剤単独よりも活性が高い（少なくとも１のｌｏｇ細胞死滅の差）ならばこの組合せ剤は治療的相乗作用を有する。

Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ単独の場合の毒性は、９６．３ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で観測され、治療マウス６匹中６匹が薬物関連死をとげた。Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃの無毒の最高用量（ＨＮＴＤ）は５８．０ｍｇ／ｋｇ／注射であった（注射量合計＝２３２．０ｍｇ／ｋｇ）。５８．０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量は、ｌｏｇ_１０細胞死滅が５．４および１６０日目で３／６がＴＦＳと、活性が高いことがわかった。３６．０ｍｇ／ｋｇ／注射（注射量合計＝１４４．０ｍｇ／ｋｇ）未満の用量でも、ｌｏｇ_１０細胞死滅が４．３と活性が高いことがわかった。最小用量の２２．３ｍｇ／ｋｇ／注射も活性で２．０のｌｏｇ_１０細胞死滅であった。

ｈｕ３８ＳＢ１９に関して、完成品は、４０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で耐容性がよかった。毒性は観測されず、このことは抗体がマウスＣＤ３８との交差反応性を欠如していることで説明できる。ｌｏｇ_１０細胞死滅は０．５であり、ｈｕ３８ＤＢ１９がこの条件下では活性ではなかったことを示している。

Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃを９６．３ｍｇ／ｋｇ／注射、およびｈｕ３８ＳＢ１９を４０ｍｇ／ｋｇ／注射で組み合わせると毒性であり、治療マウス６匹中５匹が薬物関連死をとげた、即ち同じ用量でのＰａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ単独で観測された結果と非常に類似していた。５８．０ｍｇ／ｋｇ／注射のＰａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃに４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９を合わせた用量がＨＮＴＤであると判断された。際立ったことに、この用量では、マウス６匹中５匹が研究の終了時（１６０日目）までＴＦＳのままであった。Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃを３６．０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量に減らしてｈｕ３８ＳＢ１９を４０ｍｇ／ｋｇ／注射で組み合わせると８．１のｌｏｇ_１０細胞死滅および３／６がＴＦＳという結果を示し、Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ単独の等毒性用量の場合の４．３のｌｏｇ_１０細胞死滅およびＴＦＳなしと比較して、活性が高いと判断された。２．７のｌｏｇ_１０細胞死滅という抗腫瘍活性が組合せ剤の最小用量で記録された（Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ単独の等毒性用量の場合の２．０のｌｏｇ_１０細胞死滅と比較して）。本発明者らは、この組合せ剤が、この研究の最良の薬剤、Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ単独と比較して、治療的相乗作用を示していると結論づける。

腫瘍が２倍になる時間＝３．４日。治療開始時の腫瘍の大きさの中央値＝１２４から１３６ｍｇ。対照腫瘍が中央値で７５０ｍｇに達するまでの時間＝２６．９日。ＢＷＣ＝体重変化、Ｔ−Ｃ＝腫瘍増殖の遅延、ＨＤＴ＝試験した最高用量、ＨＮＴＤ＝無毒性の最高用量、ＴＦＳ＝無再発生存個体、ＩＶ＝静脈内、ＳＣ＝皮下。配合：ｈｕ３８ＳＢ１９＝Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋を含まないリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）、Ｐａｌｍｏ Ａｒａ−Ｃ＝エタノールが３％、ポリソルベート８０が１％、水が９６％。

Claims (18)

1. ＣＤ３８を特異的に認識する抗体および少なくともシタラビンとを含む癌治療のための薬学的組合せ剤であって、前記癌はＣＤ３８を発現し、前記抗体が、アポトーシス、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によりＣＤ３８⁺細胞を死滅させることができ、
   前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、
   （ｉ）前記重鎖が配列番号：１、２および３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号：４、５、６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
   （ｉｉ）前記重鎖が配列番号７、８および９で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１０、１１および１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
   （ｉｉｉ）前記重鎖が配列番号１３、８１および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
   （ｖｉ）前記重鎖が配列番号１９、２０および２１で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２２、２３および２４で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
   （ｖ）前記重鎖が配列番号２５、２６および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２８、２９および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、または
   （ｖｉ）前記重鎖が配列番号３１、３２および３３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号３４、３５および３６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、薬学的組合せ剤。
2. 前記抗体が、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１に記載の薬学的組合せ剤。
3. 前記重鎖が配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号：６２および６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の組合せ剤。
4. 前記重鎖が配列番号７２で表されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号：６８および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の組合せ剤。
5. ＣＤ３８を発現する癌が造血器癌である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ剤。
6. 前記造血器癌が、多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ性白血病、急性および慢性リンパ様白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫；急性および慢性骨髄性白血病、ならびに前骨髄球性白血病からなる群より選択される、請求項５に記載の組合せ剤。
7. ＣＤ３８を発現する癌の治療用医薬を製造するための請求項１に記載の薬学的組合せ剤の使用。
8. 抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項７に記載の使用。
9. 前記重鎖が配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号：６２および６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７または８に記載の使用。
10. 前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号７２で表されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が配列番号：６８および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７〜９のいずれか一項に記載の使用。
11. ＣＤ３８を特異的に認識する抗体および少なくともシタラビンを含む、ＣＤ３８を発現する癌の治療のための薬学的組合せ剤であって、前記抗体が
    配列番号６２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；および
    配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖からなる抗体である、薬学的組合せ剤。
12. 癌の治療において同時または別々に使用するための、請求項１１に記載の薬学的組合せ剤。
13. 癌の治療において、成分を同時に使用するための、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の使用。
14. 癌の治療において、成分を別々に使用するための、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の使用。
15. 前記ＣＤ３８を発現する癌が造血器癌である、請求項７〜１０および１３〜１４のいずれか一項に記載の使用。
16. 前記造血器癌が、多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ性白血病、急性および慢性リンパ様白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫；急性および慢性骨髄性白血病、ならびに前骨髄球性白血病からなる群より選択される、請求項１５に記載の使用。
17. 少なくともシタラビンと組み合わせた癌治療のための医薬の製造のためのＣＤ３８を特
    異的に認識する抗体の使用であって、前記癌はＣＤ３８を発現し、そして前記抗体が、アポトーシス、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によりＣＤ３８ ⁺ 細胞を死滅させることができ、
    前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、
    （ｉ）前記重鎖が配列番号：１、２および３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号：４、５、６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｉｉ）前記重鎖が配列番号７、８および９で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１０、１１および１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｉｉｉ）前記重鎖が配列番号１３、８１および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｖｉ）前記重鎖が配列番号１９、２０および２１で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２２、２３および２４で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｖ）前記重鎖が配列番号２５、２６および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２８、２９および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、または
    （ｖｉ）前記重鎖が配列番号３１、３２および３３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号３４、３５および３６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、使用。
18. ＣＤ３８を特異的に認識する抗体を含む、少なくともシタラビンと組み合わせた癌治療のための薬学的組成物であって、前記癌はＣＤ３８を発現し、前記抗体が、アポトーシス、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によりＣＤ３８ ⁺ 細胞を死滅させることができ、
    前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、
    （ｉ）前記重鎖が配列番号：１、２および３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号：４、５、６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｉｉ）前記重鎖が配列番号７、８および９で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１０、１１および１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｉｉｉ）前記重鎖が配列番号１３、８１および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｖｉ）前記重鎖が配列番号１９、２０および２１で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２２、２３および２４で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、
    （ｖ）前記重鎖が配列番号２５、２６および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号２８、２９および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、または
    （ｖｉ）前記重鎖が配列番号３１、３２および３３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号３４、３５および３６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、薬学的組成物。