JP6023996B2 - コラーゲン線維からなるコラーゲン人工皮膚およびそれを用いた紫外線ダメージの評価方法 - Google Patents
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Factor)値やUV-Aに起因する紫外線防御指数であるPA(Protection
grade of UV-A)値がある。この評価法は日本化粧品工業連合会が定め国際的にも広く使用されている(非特許文献1)が、これらの方法は被験者を用いた方法であり被験者の遺伝的、年齢的あるいは体調などなど個人差に起因する差が評価の妥当性に影響を与えることから、遺伝的な特徴も踏まえたサンクリーン剤などの正確な評価を行うには必ずしも好適な方法とは言えない。
I部
セトステアリルアルコール*1 2.205
ポリオキシエチレンヒマシ油(4O E.O.)*2 0.63
セトステアリル硫酸ナトリウム*3 0.315
オレイン酸デシル 15.0
パラメトキシケイ皮酸2−エチルヘキシル 3.0
4-tert-ブチル-4’-メトキシジベンゾイルメタン 0.5
パラオキシ安息香酸プロピル 0.1
注:Emulgate F =*1+*2+*3:3.15%
II部
精製水 53.57
フェニルベンズイミダゾールスルホン酸 2.78
水酸化ナトリウム水溶液(45%) 0.9
パラオキシ安息香酸メチル 0.3
エデト酸二ナトリウム 0.1
III部
精製水 20.0
カルボキシビニルポリマー 0.3
水酸化ナトリウム水溶液(45%) 0.3
I部
ラノリン 5.0
サリチル酸ホモメンチル 8.0
ワセリン 2.5
ステアリン酸 4.0
パラオキシ安息香酸プロピル 0.05
II部
パラオキシ安息香酸メチル 0.10
エデト酸二ナトリウム 0.05
プロピレングリコール 5.0
トリエタノールアミン 1.0
精製水 74.3
J/m2、310nmでは3.03×105 J/m2、254nmでは4.65×104 J/m2となる。
mol/lの硫酸銅水溶液42mlに9.49 mol/lの水酸化ナトリウム水溶液80mlを加えて撹拌し、ビューレット試薬を調整した。コラーゲン抽出液1,000μlに、作製したこのビューレット試薬500μlを加えて撹拌し、10分間放置した。分光光度計を用いて310nmの吸光度を測定し、コラーゲン抽出液中の総タンパク量を算出した。なお、総タンパク量の定量化には、異なるコラーゲン標準液(0.01〜0.1%)を使用した。
ブタ真皮由来ペプシン可溶化コラーゲン水溶液をリン酸緩衝生理食塩水で中和後、37℃で加温し、コラーゲン線維を再構成させた。次いで、緩やかに撹拌後、ユーメラニン(東洋インキ製造(株)製)を所定量加えて撹拌した。得られた線維分散体を内径50mmの定量濾紙(ADVANTEC製)にブフナーロートを用いて堆積させ、シート状になったコラーゲン線維を凍結乾燥し、コラーゲン人工皮膚を得た。こうして得た人工皮膚の表面を走査型電子顕微鏡で観察した結果を図面1に示す。その結果、3次元状の細かな線維構造が観察され、スポンジのような構造からなっていることがわかった。
人種による相違を想定して、ユーメラニンを所定量添加したコラーゲン人工皮膚を用いた。その他は、実施例1と同様である。
ユーメラニンの添加量を増量した、コラーゲン人工皮膚を用いた他は、実施例1と同様にしたところ日焼け止めクリームの効果が見え難くなった。
年齢による相違を想定して、異なる濃度のグリオキサール溶液を用いて糖化架橋させたコラーゲン人工皮膚を用いた。その他は、実施例1と同様である。
糖化架橋の条件を変えて、コラーゲン人工皮膚を用いた。その他は、実施例1と同様である。
実施例1と同じコラーゲン人工皮膚を用いた。浴びる紫外線量の違いを考慮して、紫外線の照射時間を変化させた。その他は、実施例1と同様である。
ウシ胎児皮膚組織より、剃刀、メスを用いて毛および表皮を除去し、組織片を準備した。その他は、実施例1と同様である。
ウシ胎児皮膚組織より、剃刀、メスを用いて毛および表皮を除去し、組織片を準備した。さらに、その組織片を0.1mM〜30mMのグリオキサール水溶液に浸漬し、37℃で24時間反応させて糖化架橋させた。その他は、実施例1と同様である。
ヒト表皮細胞をプラスチックインターセル中のコラーゲンゲル上で培養した。浸漬培養工程の後、気液界面で培養することにより、正常な角化過程を経て、ヒト皮膚と同等の角層を持つ三次元培養皮膚の再生表皮が形成された。その他は、実施例1と同様である。
甲殻類(ベニズワイガニ)の殻から抽出精製した高純度のアミノ多糖類キチンを原料として微細繊維状のシート状の不織布を作製した。その他は、実施例1と同様である。
Claims (4)
- 可溶化コラーゲンを再構成して得たコラーゲン線維に対して、ユーメラニンを0.01%〜70%(コラーゲン線維とユーメラミンの総和を100%として)添加した後に不織布状多元構造体にしてなるコラーゲン人工皮膚。
- 可溶化コラーゲンを再構成して得たコラーゲン線維に対して、ユーメラニンを0.01%〜70%(コラーゲン線維とユーメラミンの総和を100%として)添加した後に不織布状多元構造体にしてなるコラーゲン人工皮膚を、0.005mM〜30mMの糖類の水溶液に浸漬した後、32.0℃〜40.0℃で反応させて糖化架橋させる、コラーゲン人工皮膚の製造方法。
- 請求項1に記載のコラーゲン人工皮膚を用いることを特徴とする紫外線ダメージの評価方法。
- 紫外線照射前後のコラーゲン人工皮膚の酢酸水溶液抽出液中の末端アミノ基濃度や総タンパク量の差により紫外線による障害の程度を評価する請求項3に記載の紫外線ダメージの評価方法。
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