JP5997237B2 - 間葉幹細胞及びその使用法 - Google Patents

Description

本発明は、間葉幹細胞に関する。特に本発明は、種々の組織及び器官における血管形成
の促進、自己免疫疾患の治療、アレルギー反応の治療、ガンの治療、炎症性疾患の治療、
及び回復の促進を含む間葉幹細胞の新規用途に関する。

間葉幹細胞（ＭＳＣｓ）は、骨芽細胞、筋細胞、軟骨細胞及び脂肪細胞を含む系統に容
易に分化可能な多能性幹細胞である（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。Ｍ
ＳＣｓの、筋肉（非特許文献４）、ニューロン様前駆体（非特許文献５、非特許文献６）
、心筋細胞（非特許文献７、非特許文献８）に、また場合によっては他の細胞種に分化す
る能力が、Ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究により示されている。さらに、ＭＳＣｓは、造血幹細胞
及び胚性幹細胞の増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）に有効な支持細胞層をもたらすと見られて
いる（非特許文献９、非特許文献１０）。ＭＳＣｓが、損傷した骨、軟骨、半月板（ｍｅ
ｎｉｓｃｕｓ）あるいは心筋の組織の修復あるいは再生に有用であり得ることが、種々の
動物モデルを用いた最近の研究で示されている（非特許文献１１、非特許文献１２、非特
許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５）。複数の研究者はＭＳＣｓを用い、骨形
成不全症（非特許文献１６）、パーキンソン症候群（非特許文献１７）、脊髄損傷（非特
許文献１８、非特許文献１９）、及び心疾患（非特許文献２０、非特許文献２１）を含む
動物疾患モデルへの移植に有望な結果を示した。重要なことには、骨形成不全症への臨床
試験（非特許文献２２、非特許文献２３）及び異種骨髄移植の促進移植（ｅｎｈａｎｃｅ
ｄ ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）（非特許文献２４、非特許文献２５）においても有望な結
果が報告されている。

ＭＳＣｓはその表面に主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩ抗原を発現するが、ＭＨ
ＣクラスＩＩは制限され（非特許文献２６、非特許文献２７）、またＢ７あるいはＣＤ４
０共刺激分子は発現しないが（非特許文献２８）、これはこれらの細胞が低免疫原性表現
型を持つことを示している（非特許文献２９）。ＭＳＣｓはまた、ＭＨＣ非依存性方法で
Ｔ細胞増殖反応を抑制する（非特許文献３０、非特許文献３１、非特許文献３２）。これ
らのＭＳＣｓの免疫学的性質は、その移植を強化し、移植後に同種異系細胞を認識し拒絶
する受容者の免疫システムの能力を制限することができる。ＭＳＣｓは、局所刺激下で適
切な細胞系に分化するための能力とともに、免疫反応を調節し、造血をサポートする因子
を生成するため、細胞移植研究にとって望ましい幹細胞である（非特許文献３３、非特許
文献３４）。

Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２８４，ｐｇ．１４３（１９９９） Ｈａｙｎｅｓｗｏｒｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ，Ｖｏｌ．１３，ｐｇ．６９（１９９２） Ｐｒｏｃｋｏｐ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２７６，ｐｇ．７１（１９９７） Ｗａｋｉｔａｎｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｓｃｌｅ Ｎｅｒｖｅ，Ｖｏｌ．１８，ｐｇ．１４１７（１９９５） Ｗｏｏｄｂｕｒｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．６９，ｐｇ．９０８（２００２） Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒａｍｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，Ｖｏｌ．１７１，ｐｇ．１０９（２００１） Ｔｏｍａ、ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１０５，ｐｇ．９３（２００２） Ｆａｋｕｄａ，Ａｒｔｉｆ．Ｏｒｇａｎｓ，Ｖｏｌ．２５，ｐｇ．１８７（２００１） Ｅａｖｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．９３８，ｐｇ．６３（２００１） Ｗａｇｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．９，ｐｇ．６０６（２００２） Ｄｅｋｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｏｒａｌ Ｉｍｐｌａｎｔｓ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．１４，ｐｇ．４８１（２００３） Ｗｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．７５，ｐｇ．６７９（２００３） Ｎｏｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，Ｖｏｌ．３，ｐｇ．１０００（２００２） Ｂａｌｌａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｕｐｐｌ．，Ｖｏｌ．３８，ｐｇ．２０（２００２） Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ Ｍｏｌ．Ｄｉｓ．，Ｖｏｌ．２７（２００２） Ｐｅｒｅｉｒａ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．９５，ｐｇ．１１４２（１９９８） Ｓｃｈｗａｒｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，Ｖｏｌ．１０，ｐｇ．２５３９（１９９９） Ｃｈｏｐｐ、ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ，Ｖｏｌ．１１，ｐｇ．３００１（２０００） Ｗｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．７２，ｐｇ．３９３（２００３） Ｔｏｍｉｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１００，ｐｇ．２４７（１９９９） Ｓｈａｋｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．，Ｖｏｌ．７３，ｐｇ．１９１９（２００２） Ｈｏｒｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．９７，ｐｇ．１２２７（２００１） Ｈｏｒｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．９９，ｐｇ．８９３２（２００２） Ｆｒａｓｓｏｎｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，ＳＡ００６（ａｂｓｔｒａｃｔ）（２００２） Ｋｏｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，Ｖｏｌ．１８，ｐｇ．３０７（２０００） Ｌｅ Ｂｌａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，Ｖｏｌ．３１，ｐｇ．８９０（２００３） Ｐｏｔｉａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１７１，ｐｇ．３４２６（２００３） Ｍａｊｕｍｄａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．１０，ｐｇ．２２８（２００３） Ｔｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．７５，ｐｇ．３８９（２００３） Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，Ｖｏｌ．３０，ｐｇ．４２（２００２) Ｄｅｖｉｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．，Ｖｏｌ．７，ｐｇ．５７６（２００１） ＤｉＮｉｃｏｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．９９，ｐｇ．３８３８（２００２） Ｍａｊｕｍｄａｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．９，ｐｇ．８４１（２０００） Ｈａｙｎｅｓｗｏｒｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１６６，ｐｇ．５８５（１９９６）

出願人は現在、樹状細胞（ＤＣ１及びＤＣ２）、エフェクターＴ細胞（Ｔｈ１及びＴｈ
２）、及びＮＫ細胞を含む単離された免疫細胞集団と間葉幹細胞との相互作用を調査した
。出願人は前記相互作用に基づいて、間葉幹細胞が、免疫反応プロセスのいくつかの段階
を規制し得る種々の因子の産生を調節し得ることを発見した。したがって、間葉幹細胞は
、免疫システムが関与する疾病、状態及び障害の治療に、あるいは、炎症又はアレルギー
反応を含む疾病、状態、障害の治療に用いられ得る。前記疾病、状態及び障害は、自己免
疫疾患、アレルギー、関節炎、炎症を起した創傷、円形脱毛症（はげ頭症）、歯肉炎及び
歯周炎（ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ）を含む歯周病、及び免疫反応が関与する他の疾病
、状態あるいは障害を含むがこれらに限定されない。

ＭＳＣｓの樹状細胞作用の調節を説明する図 ＭＳＣｓの樹状細胞作用の調節を説明する図 ＭＳＣｓの樹状細胞作用の調節を説明する図 ＭＳＣｓの炎症誘発性エフェクターＴ細胞作用の抑制を説明する図 ＭＳＣｓの炎症誘発性エフェクターＴ細胞作用の抑制を説明する図 ＭＳＣｓの炎症誘発性エフェクターＴ細胞作用の抑制を説明する図 ＭＳＣｓのＴｒｅｇ細胞集団数の増加及びＧＩＴＲ発現の増加の誘導を説明する図 ＭＳＣｓのＴｒｅｇ細胞集団数の増加及びＧＩＴＲ発現の増加の誘導を説明する図 ＭＳＣｓのＰＧＥ２の産生、及びＭＳＣ媒介免疫調節作用を無効にするＰＧＥ２の阻害を説明する図 ＭＳＣｓのＰＧＥ２の産生、及びＭＳＣ媒介免疫調節作用を無効にするＰＧＥ２の阻害を説明する図 ＭＳＣｓのＰＧＥ２の産生、及びＭＳＣ媒介免疫調節作用を無効にするＰＧＥ２の阻害を説明する図 ＭＳＣｓのＰＧＥ２の産生、及びＭＳＣ媒介免疫調節作用を無効にするＰＧＥ２の阻害を説明する図 同種異系ＰＢＭＣｓの存在下での構成的ＭＳＣサイトカイン分泌の増加を説明する図 ＭＳＣｓの用量依存的様式でのマイトジェン誘導Ｔ細胞増殖の抑制を説明する図 ＭＳＣ作用機序案の系統図

さらに、間葉幹細胞は、新たな血管の形成を促進することで血管形成を促進する血管内
皮増殖因子、すなわちＶＥＧＦを産生するように抹消血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を刺激す
ると考えられる。

さらに、間葉幹細胞は、癌抑制及びウイルス感染に対する免疫力を高めるインターフェ
ロン−ベータ（ＩＮＦ−β）を産生するように樹状細胞（ＤＣｓ）を刺激すると考えられ
る。

本発明の一態様にしたがって、動物の自己免疫疾患を治療する方法が提供される。この
方法は、動物の自己免疫疾患を治療するのに有効な量で、間葉幹細胞を動物に投与するこ
とを含む。

本発明のこの態様の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、間葉
幹細胞が自己免疫疾患を抑制する最低一つのメカニズムは、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞
）及び／又は樹状細胞（ＤＣ）からインターロイキン１０（ＩＬ−１０）を放出すること
によると考えられる。

本発明にしたがって治療され得る自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リ
ウマチ、ブドウ膜炎、自己免疫性甲状腺疾患、炎症性大腸炎、自己免疫リンパ増殖症候群
（ＡＬＰＳ）、脱髄疾患、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性胃炎（ＡＩＧ）、及び自己免
疫性糸球体疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ）を
含むがこれらに限定されない。しかしながら、本発明の範囲がここに開示された特定の自
己免疫疾患の治療に限定されないことは、理解されるべきである。

一実施例において、間葉幹細胞が投与される動物は、哺乳類である。哺乳類は、ヒト及
び非ヒト霊長類を含む霊長類であり得る。

通常、間葉幹細胞（ＭＳＣ）療法は、例えば以下の手順に基づく：ＭＳＣ含有組織の収
集、ＭＳＣｓの単離及び増殖、及び生化学的操作あるいは遺伝子操作を伴った、あるいは
伴わない、動物へのＭＳＣｓの投与。

投与される間葉幹細胞は、均一組成物か、あるいはＭＳＣｓに富んだ混合細胞集団であ
り得る。均一間葉幹細胞組成物は、接着性の骨髄細胞あるいは骨膜細胞を培養することで
得られ得る。また間葉幹細胞組成物は、接着性の骨髄細胞あるいは骨膜細胞を培養するこ
とで得られ得る。また間葉幹細胞は、固有のモノクローナル抗体で同定される特異的細胞
表面マーカーにより同定され得る。間葉幹細胞に富む細胞集団の獲得方法は、例えば、米
国特許５４８６３５９号に開示されている。間葉幹細胞の代替資源は、血、皮膚、臍帯血
、筋肉、脂肪、骨、及び軟骨膜を含むがこれらに限定されない。

間葉幹細胞は、種々の方法で投与することができる。間葉幹細胞は、静脈内、動脈内、
あるいは腹腔内投与等により、全身に投与することができる。

間葉幹細胞は、自己、同種異系、異種を含む多種多様な資源から得られ得る。

間葉幹細胞は、自己免疫疾患を投与するのに有効な量で動物に投与される。間葉幹細胞
は、約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｋｇ、好ましくは約１
×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量で、投与され得る。投
与される間葉幹細胞の量は、年齢、体重、患者の性別、治療される自己免疫疾患、及びそ
の範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、薬学的許容担体と併せて投与され得る。例えば、間葉幹細胞は、注入用
の薬学的許容液状媒体中の細胞懸濁液として投与され得る。

本発明の他の形態にしたがって、動物の炎症反応の治療法が提供される。この方法は、
動物における炎症反応を治療するのに有効な量で、間葉幹細胞を動物に投与することを含
む。

本発明のこの態様の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、間葉
幹細胞がＴ細胞の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）への成熟を促進し、それにより炎症反応を制
御すると考えられる。また、間葉幹細胞がＴヘルパー１細胞（Ｔｈ１細胞）を抑制し、そ
れにより、例えば乾癬に関連するもの等の特定の炎症反応におけるインターフェロンγ（
ＩＮＦ−γ）の発現を減少させるとも考えられる。

一実施例において、治療され得る炎症反応は、乾癬に関連するものである。

他の実施例において、間葉幹細胞は、間葉幹細胞が脳内の小膠細胞（ミクログリア）及
び又は星状細胞に接触して炎症を緩和するように、動物に投与され得る。これにより、間
葉幹細胞は、アルツハイマー病、パーキンソン病、脳梗塞あるいは脳細胞損傷等の疾病あ
るいは障害において、活性化膠細胞（活性化グリア細胞）により引き起こされる神経変性
を抑制する。

また、他の実施例において、間葉幹細胞は、間葉幹細胞が皮膚の表皮中のケラチン生成
細胞及びランゲルハンス細胞に接触して乾癬、慢性皮膚炎及び接触性皮膚炎に起こり得る
炎症を緩和するように、動物に投与され得る。この実施例は如何なる理論上の推論にも限
定されるべきではないが、間葉幹細胞が表皮のケラチン生成細胞及びランゲルハンス細胞
に接触し、Ｔ細胞レセプター及びサイトカイン分泌プロファイルを変更して、腫瘍壊死因
子アルファ（ＴＮＦ−α）の発現が減少し、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）集団が増加す
ると考えられる。

さらなる実施例において、間葉幹細胞は、変形性関節炎、関節リウマチ及びウェブサイ
トｗｗｗ．ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ／ｄｉｓｅａｓｅｓに掲
載されている他の関節疾患を含むがこれらに限定されない関節炎及び関節炎様状態におい
て起こる、骨中の炎症を緩和させるために用いられ得る。この実施例の範囲は如何なる理
論上の推論にも限定されると意図されないが、間葉幹細胞が関節液中の記憶Ｔ細胞による
インターロイキン−１７分泌を抑制し得ると考えられる。

他の実施例において、間葉幹細胞は、炎症性大腸炎及び慢性肝炎において、それぞれ消
化管及び肝臓における炎症を緩和するために用いられ得る。本発明のこの態様の範囲は如
何なる理論上の推論にも限定されるとは意図されないが、間葉幹細胞がインターロイキン
−１０（ＩＬ−１０）の分泌の増加と制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）の発生を促進すると
考えられる。

他の実施例において、間葉幹細胞は、敗血症及び、火傷、外科処置、移植を含む外傷（
ｔｒａｕｍａ）等の病態における、過度の好中球活性化及びマクロファージ活性化を抑制
するために用いられ得る。この実施例の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべき
ではないが、間葉幹細胞がＩＬ−１０等の抑制性サイトカインの分泌を促進し、またマク
ロファージ遊走阻止因子を抑制すると考えられる。

他の実施例において、間葉幹細胞は、角膜、水晶体、色素上皮、網膜を含む目、脳、脊
髄、妊娠子宮、及び胎盤、卵巣、精巣、副腎皮質、肝臓、及び毛包（ｈａｉｒ ｆｏｌｌ
ｉｃｌｅｓ）等の免疫学的特権部位における炎症を抑えるために用いられ得る。この実施
例の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、間葉幹細胞がＩＬ−１
０等の抑制性サイトカインの分泌及びＴｒｅｇ細胞の発生を促進すると考えられる。

また他の実施例において、間葉幹細胞は、透析及び又は糸球体腎炎の間の末期腎不全（
ＥＳＲＤ）感染を調節するために用いられ得る。この実施例の範囲は如何なる理論上の推
論にも限定されるべきではないが、間葉幹細胞が、糸球体構造形成を促進する血管内皮増
殖因子、すなわちＶＥＧＦを発現するように抹消血単核細胞を誘導すると考えられる。

さらなる実施例において、間葉幹細胞は、インフルエンザ、Ｃ型肝炎、単純ヘルペスウ
イルス、ワクシニアウイルス感染、及びエプスタイン・バーウイルス等のウイルス感染を
抑えるために用いられ得る。この実施例の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべ
きではないが、間葉幹細胞がインターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−β）の分泌を促進する
と考えられる。

また他の実施例において、間葉幹細胞は、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）感
染及びヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）感染等の寄生虫感染を抑えるために
用いられ得る。この実施例の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが
、間葉幹細胞がＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞による反応を調節し、それによりβ細胞によ
る免疫グロブリンＥの産生の増加を促進すると考えられる。

しかしながら、本発明のこの態様の範囲が、如何なる特定の炎症反応の治療にも限定さ
れるべきではないことは理解されるべきである。

間葉幹細胞は、前述のとおり、ヒト及び非ヒト霊長類を含む動物に投与され得る。

また間葉幹細胞は、前述のとおり、全身に投与され得る。あるいは、変形性関節症又は
関節リウマチの場合には、間葉幹細胞は関節炎部位に直接投与され得る。

間葉幹細胞は、動物における炎症反応を治療するのに有効な量で投与される。間葉幹細
胞は、約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｋｇ、好ましくは約
１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量で、投与され得る。
投与されるべき間葉幹細胞の正確な投与量は、年齢、体重、患者の性別、治療される炎症
反応、及びその範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、前述のとおり、薬学的許容担体と併せて投与され得る。

本発明のまた別の態様にしたがって、動物の癌の治療法が提供される。前記方法は、動
物の癌を治療するのに有効な量の間葉幹細胞を動物に投与することを含む。

本発明のこの態様の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、間葉
幹細胞が樹状細胞と相互作用し、ＩＦＮ−β分泌をもたらし、腫瘍抑制因子として働くと
考えられる。治療され得る癌は、肝細胞癌、子宮頸癌、膵臓癌、前立腺癌、線維肉腫、髄
芽腫、及び星状細胞腫を含むがこれらに限定されない。しかしながら、本発明の範囲が如
何なる特定の癌にも限定されるべきではないことは理解されるべきである。

動物は、前述のとおり、ヒト及び非ヒト霊長類を含む哺乳類であり得る。

間葉幹細胞は、動物における癌を治療するのに有効な量で動物に投与される。通常、間
葉幹細胞は、約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｋｇ、好まし
くは約１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量で、投与され
る。投与されるべき間葉幹細胞の正確な量は、年齢、体重、患者の性別、治療される癌の
タイプ、及びその範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、前述のとおり、薬学的許容担体と併せて投与され、また全身に投与され
得る。あるいは、間葉幹細胞は治療される癌に直接投与され得る。

本発明のさらなる別の態様にしたがって、動物のアレルギー性疾患の治療法が提供され
る。この方法は、動物のアレルギー性疾患を治療するのに有効な量で間葉幹細胞を動物に
投与することを含む。

本発明のこの態様の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、間葉
幹細胞が、急性アレルギー反応の後に投与された場合、肥満細胞の活性化及び脱顆粒の抑
制をもたらすと考えられる。また、間葉幹細胞は、好塩基球活性化を下方制御し、またＴ
ＮＦ−α等のサイトカイン、インターロイキン−８及び単球走化性タンパク質、あるいは
ＭＣＰ−１等のケモカイン、ロイコトリエン等の脂質メディエータを抑制し、またヒスタ
ミン、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、カテプシン等の主要メディエータを抑制すると考
えられる。

治療され得るアレルギー性疾患は、ぜんそく、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、
及び接触性皮膚炎を含むがこれらに限定されない。しかしながら、本発明の範囲が如何な
る特定のアレルギー疾患にも限定されるべきでないことは、理解されるべきである。

間葉幹細胞は、動物のアレルギー疾患を治療するのに有効な量で動物に投与される。動
物は哺乳類であり得る。哺乳類は、ヒト及び非ヒト霊長類を含む霊長類であり得る。通常
、間葉幹細胞は、約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｋｇ、好
ましくは約１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量で、投与
される。正確な投与量は、年齢、体重、患者の性別、治療されるアレルギー疾患、及びそ
の範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、前述のとおり、薬学的許容担体と併せて投与され得る。間葉幹細胞は、
例えば静脈内投与あるいは動脈内投与等により、全身に投与され得る。

本発明のさらなる態様にしたがって、動物における創傷治癒を促進する方法が提供され
る。この方法は、動物における創傷治癒を促進するのに有効な量の間葉幹細胞を動物に投
与することを含む。

本発明の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、前述のとおり、
間葉幹細胞がＴｒｅｇ細胞及び樹状細胞にインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）を放出
させると考えられる。ＩＬ−１０は、創傷における炎症を抑制あるいは調節し、それによ
り創傷の治癒を促進する。

さらに、間葉幹細胞は、他の細胞タイプにより分泌因子を誘導することで、創傷治癒及
び骨折治癒を促進し得る。例えば、間葉幹細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）による
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）媒介性放出、及び
成長ホルモン、インスリン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、インスリン様成長
因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ−３）、及びエンドセリン−１のＰＧＥ２−媒介性放
出を誘導し得る。

間葉幹細胞は、動物の創傷治癒を促進するのに有効な量で動物に投与される。動物は哺
乳類であり得る。また哺乳類は、ヒト及び非ヒト霊長類を含む霊長類であり得る。通常、
間葉幹細胞は、約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｋｇ、好ま
しくは約１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量で、投与さ
れる。投与されるべき間葉幹細胞の正確な量は、年齢、体重、患者の性別、及び治療され
る創傷の範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、前述のとおり、薬学的許容担体と併せて投与され得る。間葉幹細胞は、
前述のとおり、全身に投与され得る。あるいは、間葉幹細胞は、例えば間葉幹細胞を包含
する包袋あるいは貯蔵容器の流体のように、直接創傷に投与され得る。

本発明のまた別の態様にしたがって、動物の線維症を治療あるいは予防する方法が提供
される。この方法は、動物の線維症を治療あるいは予防するのに有効な量の間葉幹細胞を
動物に投与することを含む。

間葉幹細胞は、肝硬変、末期腎不全に関連する腎臓の線維症、及び肺の線維症を含むが
これらに限定されない任意のタイプの動物の線維症を治療あるいは予防するために、動物
に投与され得る。本発明の範囲が如何なる特定のタイプの線維症にも限定されるべきでな
いことは理解されるべきである。

間葉幹細胞は、動物の線維症を治療あるいは予防するのに有効な量で動物に投与される
。動物は哺乳類であり得る。また哺乳類は、ヒト及び非ヒト霊長類を含む霊長類であり得
る。通常、間葉幹細胞は、約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／
ｋｇ、好ましくは約１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量
で、投与される。投与されるべき間葉幹細胞の正確な量は、年齢、体重、患者の性別、及
び治療あるいは予防される線維症の範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、前述のとおり、薬学的許容担体と併せて投与され得る。間葉幹細胞は、
前述のとおり、全身に投与され得る。

本発明の他の目的は、動物の組織あるいは器官における血管形成を促進することである
。ここで前記組織あるいは器官は、血管形成を必要としているものである。

したがって、本発明のさらなる態様にしたがって、動物の器官あるいは組織における血
管形成を促進する方法が提供される。この方法は、動物の器官あるいは組織における血管
形成を促進するのに有効な量の間葉幹細胞を動物に投与することを含む。

血管形成は、既存の微小血管床からの新規血管の形成である。

血管形成の誘導は、冠状動脈機能不全及び末梢動脈機能不全の治療に用いられ得る。し
たがって、冠状動脈疾患、虚血性心疾患、及び末梢動脈疾患の治療への非侵襲性の治癒的
方法となり得る。血管形成は、心臓以外の組織及び器官における疾病及び障害の治療に、
また心臓以外の器官の発達及び又は維持に関与し得る。血管形成は、内部及び外部の創傷
、及び皮膚潰瘍の治療に関与し得る。また血管形成は、肺着床、及び胎盤成長、及び胎児
血管系の発達に関与する。また血管形成は、軟骨吸収と骨形成の結びつけに極めて重要で
あり、また的確な成長板形態形成に極めて重要である。

さらに、血管形成は、肝臓等の高代謝器官の十分な形成及び維持に必要であり、ここで
密集した血管網が、十分な栄養と気体の輸送を提供するために必要である。

間葉幹細胞は、様々な方法で血管形成を必要とする組織あるいは器官に投与することが
できる。間葉幹細胞は、静脈内、動脈内あるいは腹腔内投与等により、全身に投与され得
る。あるいは間葉幹細胞は、例えば血管形成を必要とする組織あるいは器官に直接注入す
ることにより、血管形成を必要とする組織あるいは器官に直接投与され得る。

間葉幹細胞は、自己、同種異系、異種を含む多種多様な資源から得られ得る。

本発明の範囲は如何なる理論上の推論にも限定されるべきではないが、間葉幹細胞が、
動物に投与された場合、新規血管の形成を促進する血管内皮増殖因子、すなわちＶＥＧＦ
を産生するように末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を刺激すると考えられる。

一実施例において、動物は哺乳類である。哺乳類は、ヒト及び非ヒト霊長類を含む霊長
類であり得る。

本発明にしたがって、間葉幹細胞は、血管形成を通して軽減、治療、あるいは予防する
ことができる任意の疾病あるいは障害の治療、軽減あるいは予防に用いられ得る。したが
って、例えば間葉幹細胞は、四肢、すなわち腕、脚部、手、足、及び頸部あるいは種々の
器官におけるものを含む動脈閉塞を治療するために、動物に投与され得る。例えば間葉幹
細胞は、脳に分布する動脈の動脈閉塞を治療し、それにより脳梗塞を治療あるいは予防す
るために用いられ得る。また、間葉幹細胞は、胎児期及び出生後の角膜の血管の治療に用
いられ得る。また糸球体構造形成をもたらすために用いられ得る。他の実施例において、
間葉幹細胞は、内部及び外部双方の創傷の治療に、また糖尿病及び鎌状赤血球貧血等の疾
病により引き起こされる皮膚潰瘍を含むがこれらに限定されない、足、手、脚部あるいは
腕に見られる皮膚潰瘍の治療に用いられ得る。

さらに、血管形成は胚着床及び胎盤形成に関与するため、間葉幹細胞は、胚着床を促進
するために、また流産を予防するために用いられ得る。

さらに、間葉幹細胞は、生まれる前の動物における血管系の発達を促進するために、ヒ
トを含む生まれる前の動物に投与され得る。

他の実施例において、間葉幹細胞は、軟骨吸収及び骨形成を促進するために、また的確
な成長板形態形成を促進するために、生後あるいは生前の動物に投与され得る。

間葉幹細胞は、動物の血管形成を促進するのに有効な量で投与される。間葉幹細胞は、
約１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約１×１０^７ｃｅｌｌｓ／ｋｇ、好ましくは約１×１
０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇから約５×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｋｇの量で、投与され得る。投与さ
れるべき間葉幹細胞の量は、年齢、体重、患者の性別、治療、軽減、あるいは予防される
疾病あるいは障害、及びその範囲と重症度を含む、種々の因子に依存する。

間葉幹細胞は、薬学的許容担体と併せて投与され得る。例えば、間葉幹細胞は、注入用
の薬学的許容液状媒体中の細胞懸濁液として投与され得る。注入は、局所的、すなわち血
管形成を必要とする組織あるいは器官に直接であっても、あるいは全身的であってもよい
。

間葉幹細胞は、治療因子をエンコードする一つあるいはそれ以上のポリヌクレオチドで
遺伝子組み換えされ得る。ポリヌクレオチドは、適切な発現媒体（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｖｅｈｉｃｌｅｓ）によって間葉幹細胞に送達され得る。間葉幹細胞を遺伝子組み換え
するために用いられ得る発現媒体は、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター
及びアデノ随伴ウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。

治療因子をエンコードする適切なポリヌクレオチドの選択は、治療される疾病あるいは
障害、及びその範囲と重傷度を含む、種々の因子に依存する。治療因子をエンコードする
ポリヌクレオチド、及び適切な発現媒体は、米国特許６３５５２３９号にさらに開示され
ている。

間葉幹細胞が、上述の治療に用いられた場合、増殖因子、サイトカイン、抗炎症剤等の
薬剤、及び樹状細胞等の間葉幹細胞以外の細胞を含むがこれらに限定されない、この分野
における通常の知識を有する者に知られた他の治療因子と併せて用いられ得ること、及び
、必要に応じて、ヒアルロン酸等の細胞用可溶性担体とともに、あるいはコラーゲン、ゼ
ラチン、あるいは他の生体適合性ポリマー等の固形物と併せて投与され得ることは理解さ
れるべきである。

ここに開示された方法が、多数の方法で、またこの分野においてよく知られた種々の変
更及び置換を伴って実施され得ることは理解されるべきである。また、細胞タイプ間の作
用機構あるいは相互作用について説明する任意の理論が本発明を任意の方法に制限すると
解釈されるべきではなく、本発明の方法をより十分に理解することができるように提示さ
れていると認識され得る。

本発明は、図面に関して開示される。ここで、
図１ ＭＳＣｓの樹状細胞作用の調節
（Ａ）ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ１１ｃに対する抗体を用いた成熟単球ＤＣ１細胞のフロー
サイトメトリー分析、及びＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ１２３（ＩＬ−３レセプター）に対する
抗体を用いた形質細胞様（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ）ＤＣ２細胞のフローサイトメトリ
ー分析。（−−−（破線））：アイソタイプ コントロール；（＿＿＿（実線））：ＦＩ
ＴＣ／ＰＥ結合抗体。（Ｂ）ＭＳＣｓは、それぞれ活性化したＤＣ１及びＤＣ２からのＴ
ＮＦ−α分泌を抑制し（第一ｙ軸）、ＩＬ−１０分泌を増加させる（第二ｙ軸）。（Ｃ）
成熟ＤＣ１細胞とともに培養したＭＳＣｓは、ＭＳＣあるいはＤＣ単独の場合と比較して
、Ｔ細胞によるＩＦＮ−γ分泌（第一ｙ軸）を抑制し、またＩＬ−４レベルを増加させる
（第二ｙ軸）。ＭＳＣｓの存在下での炎症誘発性ＩＦＮ−γの産生の減少、及び抗炎症性
ＩＬ−４の産生の増加は、抗炎症性表現型に関してのＴ細胞集団の変動を示唆した。

図２ ＭＳＣｓの炎症誘発性エフェクターＴ細胞作用の抑制
（Ａ）ＦＩＴＣ結合ＣＤ４抗体（ｘ軸）及びＰＥ結合ＣＤ２５抗体（ｙ軸）を用いた、
ＰＢＭＣｓあるいは、ＭＳＣ＋ＰＢＭＣ培養（ＭＳＣ＋ＰＢＭＣ）における非接着性画分
の染色によるＴＲｅｇ細胞数（％）のフローサイトメトリー分析。ゲートは、バックグラ
ウンドとしてのアイソタイプ コントロール抗体に基づいて設定された。グラフは、５つ
の独立した実験の代表である。（Ｂ）細胞培養上清中で、ＭＳＣｓの存在下で発生したＴ
Ｈ１細胞は減少したレベルのＩＦＮ−γを分泌し（第一ｙ軸）、またＭＳＣｓの存在下で
発生したＴＨ２細胞は増加した量のＩＬ−４を分泌した（第二ｙ軸）。（Ｃ）ＭＳＣｓは
、２４ウェルプレート中で０、２４、あるいは４８時間培養された精製ＮＫ細胞からのＩ
ＦＮ−γ分泌を抑制する。示されたデータは、一つの実験における平均値±ＳＤサイトカ
イン分泌であり、また３つの独立した実験の代表である。

図３ ＭＳＣｓのＴｒｅｇ細胞集団数の増加及びＧＩＴＲ発現の増加の誘導
（Ａ）ＰＲＭＣあるいはＭＳＣ＋ＰＢＭＣ（ＭＳＣのＰＢＭＣに対する比 １：１０）
培養（３日間さらなる刺激もなく培養された）由来のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞集
団は、２ステップ磁気分離法を用いて単離された。これらの細胞は、（さらなる増殖を阻
止するために）放射線照射され、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における刺激因子として用
いられた。ここで応答物質（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）は、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ
）の存在下（２．５ｍｇ／ｍｌ）での同種異系ＰＢＭＣｓ（刺激因子の応答物質に対する
比 １：１００）であった。細胞は４８時間培養され、その後３Ｈチミジンが添加され、
２４時間後に組み込まれた放射能がカウントされた。結果は、ＭＳＣｓの存在下で発生し
たＴｒｅｇ集団（レーン３）が、ＭＳＣｓの不在下で発生したＴｒｅｇ細胞（レーン２）
と機能上類似していることを示した。（Ｂ）ＰＢＭＣｓは、ＭＳＣｓの不在下（上段プロ
ット）あるいは存在下（下段プロット）（ＭＳＣのＰＢＭＣに対する比 １：１０）で、
３日間培養され、その後非接着性画分が回収され、ＦＩＴＣ標識ＧＩＴＲ及びＰＥ標識Ｃ
Ｄ４を用いて免疫染色された。結果は、ＭＳＣｓの存在下で培養された細胞のＧＩＴＲ発
現において、２倍を超える増加を示す。

図４ ＭＳＣｓのＰＧＥ２の産生、及びＭＳＣ媒介免疫調節作用を無効にするＰＧＥ２
の阻害
（Ａ）種々の濃度の、ＰＧＥ２阻害剤であるＮＳ−３９８あるいはインドメタシン（Ｉ
ｎｄｏｍｅｔｈ．）の存在下あるいは不在下で培養されたＭＳＣｓから得られた培養上清
におけるＰＧＥ２分泌（平均値±ＳＤ）。阻害剤濃度はμＭであり、提示されたデータは
２４時間培養後に得られた値である。（Ｂ）リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを用いたＭＳＣｓ
及びＰＢＭＣｓにおけるＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２発現。ＭＳＣｓは、ＰＢＭＣｓと比較
してはるかに高いレベルのＣＯＸ−２を発現し、ＭＳＣｓがＰＢＭＣｓの存在下で培養さ
れた場合には、ＭＳＣｓのＣＯＸ−２発現の３倍以上の増加であった。３つの独立した実
験のうちの１つからの代表データが示される。ＭＳＣ＋ＰＢＭＣ培養はトランスウェルチ
ャンバープレートに設置され、ここでＭＳＣｓは下部チャンバーに播種され、ＰＢＭＣｓ
は上部チャンバーに播種された。（Ｃ）ＰＧＥ２阻害剤インドメタシン（Ｉｎｄ．）ある
いはＮＳ−３９８の存在が、コントロールと比較して、活性化ＤＣｓからのＴＮＦ−α分
泌と、ＴＨ１細胞からのＩＦＮ−γ分泌を増加させた。データは、ＭＳＣｓ及びＰＧＥ２
阻害剤の不在化で発生した培養からの％変化として計算された。（Ｄ）ＭＳＣ−ＰＢＭＣ
共培養（１：１０）でのＰＧＥ２阻害剤インドメタシン（Ｉｎｄｏ）及びＮＳ−３９８の
存在は、ＰＨＡ処理したＰＢＭＣｓに対するＭＳＣ媒介抗増殖促進作用を無効にする。示
されたデータは、一つの実験からのものであり、また３つの独立した実験の代表である。

図５ 同種異系ＰＢＭＣｓの存在下での構成的ＭＳＣサイトカイン分泌の増加
予め特性の示されたヒトＭＳＣｓを用いて、ＰＢＭＣｓの存在下（ＭＳＣのＰＢＭＣに
対する比 １：１０）（斜線バー）あるいは不在下（白抜きバー）で２４時間培養したＭ
ＳＣｓの培養上清における、サイトカインＩＬ−６及びＶＥＧＦ、脂質メディエータＰＧ
Ｅ２、及びマトリクスメタロプロテイナーゼ１（ｐｒｏ−ＭＭＰ−１）のレベルが分析さ
れた。ＭＳＣｓはＩＬ−６、ＶＥＧＦ、及びＰＧＥ２を構成的に産生し、これらの因子の
レベルはＰＢＭＣｓとの共培養により増加した。これにより、ＭＳＣｓが炎症設定におけ
る免疫機能の調節に関与し得ることを示す。

図６ ＭＳＣｓの用量依存的様式でのマイトジェン誘導Ｔ細胞増殖の抑制
増加数の同種異系ＰＢＭＣｓが、ＰＨＡの存在下（２．５ｍｇ／ｍｌ）あるいは不在下
で、９６ウェルプレートに播種された定数のＭＳＣｓ（２０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）
とともにインキュベートされ、３Ｈチミジン取り込みが（カウント数／分、すなわちｃｐ
ｍで）測定された。ＭＳＣｓの存在下で、ＰＨＡで処理したＰＢＭＣｓの増殖の用量依存
的抑制があった。３つの独立した実験の１つからの代表的な結果が示される。類似の結果
は、ＬｅＢｌａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．５７
，ｐｇ．１１（２００３）により報告された。

図７ ＭＳＣ作用機序案の系統図
ＭＳＣｓは、先天性（ＤＣｓ経路 ２から４；及びＮＫ経路 ６）及び適応的（Ｔ経路
１及び５、及びＢ経路 ７）免疫システムの双方からの細胞に作用することで、その免
疫調節作用を調節する。侵入病原体に対する反応で、未成熟ＤＣｓは潜在的入口部位に移
動し、成熟して、（抗原特異的及び副刺激シグナルで）保護（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）エ
フェクターＴ細胞（細胞媒介ＴＨ１免疫あるいは体液性ＴＨ２免疫）となるためのｎａｉ
ｖｅＴ細胞を用意（ｐｒｉｍｅ）する能力を獲得する。ＭＳＣ−ＤＣ相互作用の間に、Ｍ
ＳＣｓは、直接細胞間接触で、あるいは分泌された因子を介して、細胞媒介反応（経路２
）を開始するＤＣｓの能力を制限することによって、あるいは体液性反応（経路４）を開
始する能力を促進することによって、免疫反応の結果を変更し得る。また、成熟エフェク
ターＴ細胞が存在する場合は、ＭＳＣｓは、ＴＨ１（経路１）反応のバランスをＴＨ２反
応（経路５）の方へ、またおそらくＩｇＥ産生Ｂ細胞活性の増加（経路７）、ＧｖＨＤ及
び自己免疫疾患症状の抑制について望ましい結果の方へ傾けるために、互いに相互作用し
得る。ＭＳＣｓは、ＴＲｅｇ集団の発生の増加（経路３）をもたらす能力において、体制
表現型をもたらし、また局所微小環境におけるバイスタンダー（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）炎
症を弱めることで受容者ホストを救済し得る。破線（−−−）は、提案されたメカニズム
を表す。

本発明は、以下の実施例に関して開示される。しかしながら、本発明の範囲はそれらに
よって限定されるべきでないことは理解されるべきである。

（実施例１）
材料及び方法
ヒトＭＳＣｓの培養
Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２８４，ｐｇ．１４３
（１９９９）により開示されたように、ヒトＭＳＣｓを培養した。つまり、Ｐｏｉｅｔｉ
ｃｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｄｉｖ ｏｆ Ｃａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓによるインフォームドコセントの後に、匿名提供者の腸骨稜から骨髄サンプルを回収
した。ＭＳＣｓを、１％抗生物質−抗真菌（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔ
ｉｃ）溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）と、１
０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ，ＪＲＨ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、ｌｅｎｅｘａ、Ｋａｎｓ
ａｓ）とを含有する、完全ダルベッコ変法イーグル培地（ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｄｕｌｂｅ
ｃｃｏ‘ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）−低グルコース（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）中で培養
した。ＭＳＣｓは接着性の単層として増殖し、トリプシン／ＥＤＴＡ（０．０５％トリプ
シンを３７℃で３分間）を用いて分離した。用いた全てのＭＳＣｓが多分化能について予
め明らかにされており、また間葉系に分化（軟骨、脂質生成、及び骨形成）する能力を保
持していた（Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２８４，ｐ
ｇ．１４３（１９９９））。

樹状細胞の単離
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を、Ｐｏｉｅｔｉｃｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｄ
ｉｖ ｏｆ Ｃａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍ
Ｄ）から獲得した。単球系の樹状細胞（ＤＣｓ）の前駆体（ＣＤ１ｃ＋）を、Ｄｚｉｏｎ
ｅｋ、ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６５，ｐｇ．６０３７（２００
０）にしたがった２ステップ磁気分離法を用いて、ＰＢＭＣｓからポジティブセレクショ
ンした。つまり、ＣＤ１ｃ発現Ｂ細胞が磁気ビーズを用いてＣＤ１９＋細胞を磁気的に除
去され、その後、ビオチン標識ＣＤ１ｃ（ＢＤＣＡ１＋）及び抗ビオチン抗体を用いてＢ
細胞除去画分を標識し、それらを、メーカーの使用説明書（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）にしたがって磁気カラムを利用して非標
識細胞画分から分離した。形質細胞様系統のＤＣｓの前駆体が、陽性に標識される抗体で
コートされた細胞（ＢＤＣＡ２＋）の免疫−磁気ソーティングにより、ＰＢＭＣｓから単
離された（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）
。

ＭＳＣ−ＤＣ培養
大部分の実験において、等数のヒトＭＳＣｓ及びＤＣｓを、種々の期間培養し、細胞培
養上清を回収し、さらなる実験まで−８０℃で保存した。選択した実験では、ＭＳＣｓを
成熟ＤＣ１あるいはＤＣ２細胞とともに（１：１ ＭＳＣ：ＤＣの比）３日間培養し、続
いて混合培養（ＭＳＣｓとＤＣｓ）を、増殖を阻止するために放射線照射した。続いて、
抗体精製、ｎａｉｖｅ、同種異系Ｔ細胞（ＣＤ４＋、ＣＤ４５ＲＡ＋）を放射線照射ＭＳ
Ｃｓ／ＤＣｓに添加し、さらに６日間培養した。その後、非接着性細胞画分（精製Ｔ細胞
）を培養液から回収し、２回洗浄し、さらに２４時間ＰＨＡで再刺激した。その後、細胞
培養上清を収集し、ＥＬＩＳＡにより分泌されたＩＦＮ−γ及びＩＬ−４について分析し
た。

ＮＫ細胞の単離
ＮＫ細胞の精製集団を、一次試薬としてのビオチン結合モノクローナル抗体（抗ＣＤ３
、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３６及び抗ＩｇＥ抗体）と、二次標識試薬としてのマイクロ
ビーズに結合した抗ビオチンモノクローナル抗体との混合物で磁気的に標識した非ＮＫ細
胞を除去することで、獲得した。磁気標識された非ＮＫ細胞は、磁気領域中のＭＡＣＳ（
Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）カラムに保
持され、一方ＮＫ細胞は、通過して回収された。

Ｔｒｅｇ細胞集団の単離
Ｔｒｅｇ細胞集団を、２ステップ単離法を用いて単離した。第一に、非ＣＤ４＋Ｔ細胞
を、ビオチン標識抗体と抗ビオチンマイクロビーズの混合物で間接的磁気的に標識した。
続いて標識した細胞を、ＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕ
ｒｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）での分離により除去した。次に、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞
を、ＣＤ２５マイクロビーズで直接標識し、濃縮前ＣＤ４＋Ｔ細胞画分からポジティブセ
レクションにより単離した。磁気的に標識したＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞をカラム上に保
持し、磁気領域からのカラムの除去の後に溶出した。

ＭＳＣｓの存在下で発生したＣＤ４＋ＣＤ２５＋集団の増加が実際に抑制されたか否か
を測定するために、２ステップ磁気単離法を用いて、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴＲｅｇ細胞集
団をＰＢＭＣあるいはＭＳＣ＋ＰＢＭＣ（ＭＳＣのＰＢＭＣに対する比 １：１０）培養
（３日間さらなる刺激もなく培養された）から単離した。これらの細胞を、さらなる増殖
を阻止するために放射線照射し、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における刺激因子として用
いた。ここで応答物質は、ＰＨＡの存在下（２．５μｇ／ｍｌ）での同種異系ＰＢＭＣｓ
（刺激因子の応答物質に対する比 １：１００）であった。４８時間の培養を実施し、そ
の後３Ｈチミジンを添加して、２４時間後に組み込まれた放射能をカウントした。

ＰＢＭＣｓをＭＳＣｓの不在下あるいは存在下（ＭＳＣのＰＢＭＣに対する比 １：１
０）で培養し、その後、非接着性画分を収集し、ＦＩＴＣ標識グルココルチコイド誘導Ｔ
ＮＦレセプター、すなわちＧＩＴＲ、及びＰＥ標識ＣＤ４を用いて免疫染色した。

ＴＨ１／ＴＨ２細胞の発生
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を、単球を除去するために、３７℃で４５分間２×１０
６ｃｅｌｌｓ／ｍｌで播種した。非接着性画分を、ＭＳＣｓの存在下あるいは不在下で、
ＴＨ１（ＩＬ−２（４ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）＋抗ＩＬ−４（１μｇ
／ｍｌ））あるいはＴＨ２（ＩＬ−２（４ｎｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−４（４ｎｇ／ｍｌ）＋抗
ＩＦＮ−γ（１μｇ／ｍｌ））条件下、プレート固定抗ＣＤ３（５μｇ／ｍｌ）抗体、及
び抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ）抗体の存在下で３日間インキュベートした。細胞を洗浄し
、その後２４時間あるいは４８時間、ＰＨＡ（２．５μｇ／ｍｌ）で再刺激した。その後
、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ
）で、培養上清中のＩＦＮ−γ及びＩＬ−４のレベルを測定した。

ＭＳＣｓの培養上清中のＶＥＧＦ、ＰＧＥ２、及びｐｒｏ−ＭＭＰ−１のレベルの分析
予め特定されたヒトＭＳＣｓを用いて、ＰＢＭＣｓの存在下（ＭＳＣのＰＢＭＣに対す
る比 １：１０）あるいは不在下で２４時間培養したＭＳＣｓの培養上清中で、インター
ロイキン−６（ＩＬ−６）、ＶＥＧＦ、脂質メディエータ プロスタグランジンＥ２（Ｐ
ＧＥ２）、及びマトリクスメタロプロテイナーゼ１（ｐｒｏ−ＭＭＰ−１）のレベルを分
析した。

ＰＢＭＣｓの増殖
精製ＰＢＭＣｓを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ，Ｏｓｌｏ
，Ｎｏｒｗａｙ）での遠心分離ロイコパック（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｉｎｇ ｌｅｕｋｏｐ
ａｃｋ）（Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）により処理
した。分離した細胞を、マイトジェンＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．
Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）の存在下、ＭＳＣｓの存在下（定着するように、ＰＢＭ
Ｃ添加の３から４時間前に播種した）あるいは不在下で、４８時間培養した（トリプリケ
イト（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅｓ）で）。選択した実験においては、ＰＢＭＣｓを、ＰＧＥ
２阻害剤インドメタシン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓ
ｓｏｕｒｉ）あるいはＮＳ−９３８（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ａｎｎ Ａｒ
ｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）を含有する培地中に再懸濁した。（３Ｈ）−チミジンを添加
し（２００μｌの培養液中に２０μｌ）、さらなる２４時間の培養の後に自動収集器を用
いて細胞を収集した。ＭＳＣｓあるいはＰＧＥ２阻害剤の作用効果を、ＰＨＡの存在下の
コントロール反応（１００％）の割合として計算した。

量的ＲＴ−ＰＣＲ
細胞ペレットからの全ＲＮＡを、市販のキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，Ｃ
ａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて、またメーカーの使用説明書にしたがって、処理した。混
入ゲノムＤＮＡを、ＤＮＡフリーキット（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ）を
用いて除去した。０．５μＭ濃度のプライマーとともにＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ ＳＹＢＲ
Ｇｒｅｅｎ ＲＴ−ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒ
ｎｉａ）を用いて、ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｐｔｉｃｏｎ検出システム（Ｓｏｕｔｈ
Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で量的ＲＴ−ＰＣＲを実施した
。種々の条件下で培養された細胞における発現レベルの相対的変化を、内在コントロール
としてのβアクチンを用いて、Ｃｔ値（交点）の違いにより算出した。ＣＯＸ−１及びＣ
ＯＸ−２の特異的プライマーの配列は、ＣＯＸ−１：５’−ＣＣＧ ＧＡＴ ＧＣＣ Ａ
ＧＴ ＣＡＧ ＧＡＴ ＧＡＴ Ｇ−３’（フォワード）、５’−ＣＴＡ ＧＡＣ ＡＧ
Ｃ ＣＡＧ ＡＴＧ ＣＴＧ ＡＣＡ Ｇ−３’（リバース）；ＣＯＸ−２：５’−ＡＴ
Ｃ ＴＡＣ ＣＣＴ ＣＣＴ ＣＡＡ ＧＴＣ ＣＣ−３’（フォワード）、５’−ＴＡ
Ｃ ＣＡＧ ＡＡＧ ＧＧＣ ＡＧＧ ＡＴＡ ＣＡＧ−３’（リバース）である。

増加数の同種異系ＰＢＭＣｓを、ＰＨＡの存在下（２．５μｇ／ｍｌ）で、９６ウェル
プレートに播種した定数のＭＳＣｓ（２０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）とともに７２時間
インキュベートし、３Ｈチミジン取り込み（カウント数／分、すなわちｃｐｍで）を測定
した。

ＰＢＭＣｓとＭＳＣｓは、ＭＳＣ：ＰＢＭＣが１：１、１：３、１：１０、１：３０、
及び１：８１の割合で培養した。

結果
本研究において、ヒトＭＳＣｓと、樹状細胞（ＤＣ１及びＤＣ２）、エフェクターＴ細
胞（ＴＨ１及びＴＨ２）、及びＮＫ細胞を含む、単離された免疫細胞集団との相互作用を
調査した。ＭＳＣｓと各免疫細胞タイプとの相互作用は、ＭＳＣｓが免疫反応プロセスの
複数の段階を調節し得ることを示す特異的な結果であった。ＭＳＣ免疫調節作用を調節し
、またＭＳＣ免疫調節作用の原因となり得る分泌因子の産生が評価され、プロスタグラン
ジン合成が関与することが示された。

骨髄（ＤＣ１）前駆樹状細胞及び形質細胞様（ＤＣ２）前駆樹状細胞を、それぞれＢＤ
ＣＡ１＋細胞及びＢＤＣＡ２＋細胞の免疫−磁気ソーティングにより単離し、ＤＣ１細胞
についてはＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４（それぞれ１×１０３ＩＵ／ｍｌ、及び１×１０３
ＩＵ／ｍｌ）とともに、ＤＣ２細胞についてはＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍｌ）とともにイン
キュベートすることで成熟させた。フローサイトメトリーを用いて、ＤＣ１細胞はＨＬＡ
−ＤＲ＋及びＣＤ１１ｃ＋であり、一方ＤＣ２細胞はＨＬＡ−ＤＲ＋及びＣＤ１２３＋で
あった（図１Ａ）。炎症性因子である細菌性リポ多糖（ＬＰＳ，１ｎｇ／ｍｌ）の存在下
で、ＤＣ１細胞は中程度のレベルのＴＮＦ−αを産生したが、ＭＳＣｓが存在した場合（
１：１及び１：１０の比で調査された）には、ＴＮＦ−α分泌の５０％以上の減少があっ
た（図１Ｂ）。他方では、ＤＣ２細胞はＬＰＳの存在下でＩＬ−１０を産生し、そのレベ
ルはＭＳＣ：ＤＣ２共培養（１：１）で２倍以上増加した（図１Ｂ）。したがって、ＭＳ
Ｃｓは、培養中の活性化されたＤＣｓのサイトカインプロファイルを、より寛容原生表現
型に変更した。さらに、活性化したＤＣｓは、ＭＳＣｓとともに培養された場合に、ＩＦ
Ｎ−γを減少させ、またｎａｉｖｅＣＤ４＋Ｔ細胞により分泌されたＩＬ−４レベルを増
加させることができ（図１Ｃ）、これは前炎症性Ｔ細胞表現型から抗炎症性Ｔ細胞表現型
へのＭＳＣ媒介変化を示す。

ＩＬ−１０分泌の増加が制御性細胞の発生に関与するため（Ｋｉｎｇｓｌｅｙ，ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６８，ｐｇ．１０８０（２０００））、Ｔ制
御性細胞（ＴＲｅｇ）を、ＰＢＭＣｓ及びＭＳＣｓの共培養中で、フローサイトメトリー
により定量した。ＰＢＭＣｓのＭＳＣｓとの３から５日間の培養により、抗ＣＤ４抗体及
び抗ＣＤ２５抗体でのＰＢＭＣｓの染色により測定されたＴＲｅｇ細胞数の増加があり（
図２Ａ）、さらにＭＳＣ誘導寛容原生反応を支持した。ＭＳＣｓの存在下で発生したＣＤ
４＋ＣＤ２５＋ＴＲｅｇ細胞集団は、増加したレベルのグルココルチコイド誘導ＴＮＦレ
セプター（ＧＩＴＲ）、ＴＲｅｇ細胞集団上に発現する細胞表面レセプターを発現し、ま
た同種異系Ｔ細胞増殖を抑制した（図３Ａ、３Ｂ）ことから、実際抑制的であった。次に
、Ｔ細胞分化に作用する直接の能力に関して、ＭＳＣｓを調査した。抗体選別精製Ｔ細胞
（ＣＤ４＋Ｔｈ細胞）を用いて、ＩＦＮ−γ産生ＴＨ１細胞及びＩＬ−４産生ＴＨ２細胞
を、ＭＳＣｓの存在下あるいは不在下で発生させた。分化の間にＭＳＣｓが存在すると、
ＴＨ１細胞によるＩＦＮ−γ分泌が減少し、ＴＨ２細胞によるＩＬ−４分泌が増加した（
図２Ｂ）。Ｔｈ細胞がエフェクターＴＨ１タイプあるいはＴＨ２タイプに分化した後（３
日）に、ＭＳＣｓが培養に添加された場合は、ＩＦＮ−γあるいはＩＬ−４のレベルの著
しい変化は見られなかった（不図示）。これらの実験は、ＭＳＣｓがエフェクターＴ細胞
分化に直接作用し、Ｔ細胞サイトカイン分泌を体液性表現型に変化させることができるこ
とを示す。

同様に、ＭＳＣｓを精製ＮＫ細胞（ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ３６−）
と比率１：１で異なる期間（０から４８時間）培養すると、培養上清中でのＩＦＮ−γ分
泌の減少があった（図２Ｃ）。したがって、これはＭＳＣｓがＮＫ細胞作用をも調節する
ことができることを示す。

過去の研究は、ＭＳＣｓが水溶性因子によりＴ細胞作用を調節することを示している（
ＬｅＢｌａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，Ｖｏｌ．３１，ｐｇ．８９
０（２００３）；Ｔｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．７
５，ｐｇ．３８９（２００３））。ＭＳＣｓが、ＩＬ−６、プロスタグランジンＥ２、Ｖ
ＥＧＦ、及びｐｒｏＭＭＰ−１を含む複数の因子を構成的に分泌し、ＰＢＭＣｓを含む培
養によりそれぞれのレベルが増加したことが観察された（図５）。ＤＣｓによる、ＴＮＦ
−α産生の抑制、及びＩＬ−１０産生の増加をもたらすＭＳＣ生成因子を調査するために
、プロスタグランジンＥ２の潜在的役割を調査したが、活性化ＤＣｓによるＴＮＦ−γ産
生を抑制することが認められた（Ｖａｓｓｉｌｉｏｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２２３，ｐｇ．１２０（２００３））。ＭＳＣ培養（０．５×１０
６ｃｅｌｌｓ／ｍｌの２４時間培養）の条件培地は、おおよそ１０００ｐｇ／ｍｌのＰＧ
Ｅ２を含有していた（図４Ａ）。培養上清中に、ＰＧＥ２分泌の既知の誘導因子、例えば
ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γあるいはＩＬ−１βの存在は検出できなかったが（不図示）、こ
れはＭＳＣｓによるＰＧＥ２の構成的分泌を示す。ｈＭＳＣｓによるＰＧＥ２分泌は、Ｐ
ＧＥ２産生の既知の阻害剤、ＮＳ−３９８（５μＭ）及びインドメタシン（４μＭ）の存
在下で、６０から９０％抑制された（図４Ａ）。ＰＧＥ２分泌の放出が、構成的活性シク
ロオキシゲナーゼ酵素１（ＣＯＸ−１）及び誘導性シクロオキシゲナーゼ酵素２（ＣＯＸ
−２）の酵素活性の結果として起こるため（Ｈａｒｒｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ
Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２３，ｐｇ．１４４（２００２））、ＭＳＣｓ及びＰＢＭ
ＣｓにおけるＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２のｍＲＮＡ発現を、トランスウェル培養システム
を用いて分析した。ＭＳＣｓは、ＰＢＭＣｓと比較してはるかに高いレベルのＣＯＸ−２
を発現し、ＭＳＣｓとＰＢＭＣｓの２４時間の共培養（ＭＳＣのＰＢＭＣに対する比 １
：１０）の場合には、発現レベルは３倍以上増加した（図４Ｂ）。ＣＯＸ−１レベルのわ
ずかな変化が見られ、これはＭＳＣ−ＰＢＭＣ共培養によるＰＧＥ２分泌の増加（図５）
が、ＣＯＸ−２の上向き調節により調節されることを示す。ＤＣｓ及びＴ細胞に対するＭ
ＳＣの免疫調節効果がＰＧＥ２によって調節されたか否かを調査するために、ＰＧＥ２阻
害剤ＮＳ−３９８あるいはインドメタシンの存在下で、ＭＳＣｓを活性化樹状細胞（ＤＣ
１）あるいはＴＨ１細胞とともに培養した。ＮＳ−３９８あるいはインドメタシンの存在
が、ＤＣ１ｓによるＴＮＦ−α分泌と、ＴＨ１細胞からのＩＦＮ−γ分泌をそれぞれ増加
させたが（図４Ｃ）、これは免疫細胞タイプに対するＭＳＣの作用が、分泌されたＰＧＥ
２により調節され得ることを示す。最近の研究が、ＭＳＣｓが様々な刺激で誘導されるＴ
細胞増殖を抑制することを示した（Ｄｅｎｉｃｏｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏ
ｌ．９９，ｐｇ．３８３８（２００２）；ＬｅＢｌａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．５７，ｐｇ．１１（２００３））。ＭＳＣｓがマイトジ
ェン誘導Ｔ細胞増殖を用量依存的様式で抑制することが観察され（図６）、ＰＧＥ２阻害
剤ＮＳ−３９８（５μＭ）あるいはインドメタシン（４μＭ）が存在した場合には、ＭＳ
Ｃ含有培養液中のＰＨＡ処理ＰＢＭＣｓによる３Ｈチミジン取り込みが、阻害剤を含まな
いコントロールと比べて、７０％以上増加した（図４Ｄ）。

要約すると、ＭＳＣの他の免疫細胞タイプとの相互作用のモデル（図７）が提案される
。成熟Ｔ細胞が存在する場合には、ＭＳＣｓは、それらと直接相互作用して、前炎症性Ｉ
ＦＮ−γ産生を抑制し（経路１）、制御性Ｔ細胞表現型を促進し（経路３）、また抗炎症
性ＴＨ２細胞を促進する（経路５）。さらに、ＭＳＣｓは、ＰＧＥ２を分泌し、前炎症性
ＤＣ１細胞を抑制し（経路２）、また抗炎症性ＤＣ２細胞（経路４）あるいは制御性ＤＣ
ｓ（経路３）を促進することで、ＤＣｓを介したＴ細胞免疫反応の結果を変えることがで
きる。ＴＨ２免疫への変化は言い換えると、Ｂ細胞活性の、ＩｇＥ／ＩｇＧ１サブタイプ
抗体の発生の増加（経路７）への変化を示す。ＭＳＣｓは、そのＮＫ細胞からのＩＦＮ−
γ分泌を抑制する能力により、ＮＫ細胞作用を調節し得る（経路６）。このＭＳＣのモデ
ル：免疫細胞相互作用は、複数の他の研究所で行われた実験と一致する（ＬｅＢｌａｎｃ
，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，Ｖｏｌ．３１，ｐｇ．８９０（２００３）
；Ｔｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．７５，ｐｇ．３８
９（２００３）；ＤｉＮｉｃｏｌａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，Ｖｏｌ．９９，ｐｇ．
３８３８（２００２））。提案されたメカニズムについてのさらなる調査が進行中であり
、現在はＭＳＣ投与のｉｎ ｖｉｖｏ効果を調査するために、動物研究が必要である。

公開された特許出願、保管登録番号、及びデータベース登録番号を含む、全ての特許、
文献は、各特許、文献、保管登録番号、及びデータベース登録番号が明確に、また個別に
参照として組み込まれているように、同じ範囲で参照としてここに組み込まれている。

しかしながら、本発明の範囲は、上述の特定の実施例に限定されるべきでないことは理
解されるべきである。本発明は、特に開示されている以外の様式で実施され得るが、これ
も添付の請求の範囲の範囲内である。

Claims (7)

1. 動物の炎症性大腸炎を治療するための、単離された、同種異系の、遺伝子操作されていないヒトの間葉幹細胞を含む、医薬製剤であって、当該ヒトの間葉幹細胞は細胞表面マーカーＣＤ２９、ＣＤ５４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０２、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１６６およびＭＨＣ１を発現している、前記医薬製剤。
2. 前記動物が、哺乳類であることを特徴とする、請求項１記載の医薬製剤。
3. 前記哺乳類が、ヒトであることを特徴とする、請求項２記載の医薬製剤。
4. 動物の炎症反応を治療するための、単離された、同種異系の、遺伝子操作されていないヒトの間葉幹細胞を含む医薬製剤であって、ここで炎症反応の治療が、炎症性大腸炎における消化管における炎症を軽減することを含み、当該ヒトの間葉幹細胞は細胞表面マーカーＣＤ２９、ＣＤ５４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０２、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１６６およびＭＨＣ１を発現している、前記医薬製剤。
5. 前記単離された、同種異系の、遺伝子操作されていないヒトの間葉幹細胞が、腸の炎症を制限又は軽減する、請求項４記載の医薬製剤。
6. 前記動物が、哺乳類であることを特徴とする、請求項４記載の医薬製剤。
7. 前記哺乳類が、ヒトであることを特徴とする、請求項６記載の医薬製剤。

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