JP5980499B2 - 豚人工授精用精液希釈保存物 - Google Patents
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しかしながら、豚精液は原精液のままでは数日程度しか精子活力が保たれず、それ以降は急激に活力が低下し、受胎率も低下する。また、牛に比べ精子濃度が低く、低温感作に極めて弱いという特徴が有り、保存が容易ではない。また母豚一頭当たりの精液注入量は希釈された精液で80〜100mL、精子数で30億〜50億必要とされることが一般的で、人工授精における前述の利点を生かしきれておらず、結果、利用する養豚農場はまだ半数程度である。
液状保存の場合、一般的には15℃前後の中温保存法が用いられている。この保存法は受胎率は良いが実用保存期間が3〜5日と短く、実質的には保存期間が3日間以内が推奨されている。また保存温度を5℃程度とした低温保存法は保存期間は伸びるものの、精子活性が弱く、受胎率が低下する傾向にある。
一方、凍結保存法は牛ではすでに一般的であるが、豚精子の場合、温感作に極めて弱いという特徴から技術的に牛のそれに比べて難しく、操作が煩雑になるため実用化が遅れている。
精液希釈保存用物の調整において、その成分を日本国の食品衛生法において、食品もしくは食品添加物として認可を受けているものに限った。このことにより製造時に原料としてそれらを実際に食品または食品添加物認可物から調達することで、従来より安全性を担保し、安価に安定的に製造することを可能にした。その成分は糖分としてブドウ糖、pH調整および浸透圧調整成分としてクエン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、EDTA2Na、塩化カリウム、精子運動性促進アミノ酸としてL−カルニチン、精子活性化促進としてカフェイン、また牛血清アルブミンの代替としてβデキストリンを選定した。
約37℃に暖めた精製水1Lにブドウ糖37g、クエン酸ナトリウム6g、炭酸水素ナトリウム1.25g、EDTA2Na0.65g、塩化カリウム0.96g、カフェイン0.23g、L−カルニチン酒石酸塩0.41g(L−カルニチンとして0.2g)、βシクロデキストリン0.5gを加え完全に溶解した。この後、抗生物質としてアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、セフチオフルナトリウムのうち、いずれか一つを選択し、必要量を添加した。以下これを「開発物」と呼ぶ。
デュロック種雄豚1頭から用手法により採精し、直ちに開発物希釈液で10倍希釈した。対照を設ける場合、雄個体差を考慮し、既存の精液希釈液(モデナ液等)をあらかじめ用法通り作成しておき、精液を半量ずつ分け、共に10倍程度となるようそれぞれを希釈した。また混合時、温度ショックを避けるため、精液と希釈液の温度差は2℃以内となるようにした。
希釈した精液を保存用のボトルまたはチューブに約80mLずつ分注し、15℃に調整した保存庫にいれ保存した。
一般に精子の評価は以下の通りである。
1.生存率を%で表示(概ね5%きざみ)。
2.運動性は+++、++、+、±、−の5段階で表示。
+++:極めて活発な前進運動を行うもの
++:活発な前進運動を行うもの
+:緩慢前進運動を行うもの
±:旋回又は振子運動を行うもの
−:運動しないもの
しかしながら本評価では直進性を評価するため上記+++の上位に++++を設けた。独立行政法人家畜改良センター茨城牧場がインターネット上(http://www.nlbc.go.jp/ibaraki/seishi.htm)に公開されている80+++の動画を基準として、これより明らかに直進性が高いと認められるものを ++++と評価し、さらにこれを数値化した。例えば「++++」は4、「+++」は3、「++」は2、「+」は1、「±」は0.5、「−」を0とした。
保存した希釈性液を6ないし7日目に顕微鏡下で観察し目視にて評価した。これを開発物では10回、対照の既存物は7回行った。結果の平均は以下の表1に示した。
開発物を用い人工授精を行い、その受胎を確認した。デュロック種雄豚から用手法により採精し、直ちに開発物希釈液で希釈した。希釈した精液を保存用のボトルに入れ、約15℃で保存した。これを用い発情が見られた母豚に2回ないし1回人工授精を行った。カテーテルは未経産および経産数が1回の母豚にはカテーテル先端が子宮体まで到達し、そこに精液を注入するタイプ、その他はカテーテル先端が子宮頸管に留まりそこに精液を注入するタイプを用いた。受胎はノンリターン法(再発情の有無)で判断した。
結果を以下の表2に示した。
開発物を用い精子数を通常より減らした条件で人工授精を行い、受胎を確認した。開発物を用い、デュロック種雄豚から用手法により採精し、直ちに開発物希釈液で1回あたりの注入精子数が約20億となるよう希釈した。精液ボトルにこれを入れ、約15℃で保存した。これを用い発情が見られた母豚に2回人工授精を行った。カテーテルはその先端が子宮頸管に留まりそこに精液を注入するタイプを用いた。受胎は超音波画像診断装置を用い胚の有無で判断した。
結果を以下の表3に示した。
Claims (6)
- L−カルニチン、ブドウ糖、クエン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、EDTA2Na、カフェイン、およびβシクロデキストリンを含んでなり、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを含まない、豚人工授精に用いる精液希釈保存用物。
- 希釈時にL−カルニチンの濃度が0.2〜1.0g/Lに調整される、請求項1に記載の精液希釈保存用物。
- 精子の保存性および/または運動性の向上のための、請求項1または2に記載の精液希釈保存用物。
- 13〜17℃で保存するための、請求項1または2に記載の精液希釈保存用物。
- 請求項1〜4のいずれか一項に記載の精液希釈保存用物を用いて、精液を希釈および/または保存する方法。
- 請求項5の方法で希釈および/または保存された精液を用いる、人工授精方法。
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