JP5978658B2 - 生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸の総濃度を測定する方法 - Google Patents
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Description
生体としては、特に限定されず、例えば、ヒト、動物(イヌ、ネコ、ブタ、ウシなど)が挙げられる。好ましくはヒト、より好ましくは有機溶媒を取り扱うヒトである。本発明の方法は、有機溶媒を取り扱うヒトの特殊健康診断に好適に用いられる。
この工程では、(a)(1)の工程で得た反応液に存在する安息香酸またはメチル安息香酸の量を評価するために、D−アミノ酸およびD−アミノ酸オキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させるか、または(b)(1)の工程で得た反応液に存在するグリシンの量を評価するために、S−アデノシル−L−メチオニン(SAM)、グリシン−N−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる。
D−アミノ酸オキシダーゼ(EC1.4.3.3)は、補因子としてフラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)を含むペルオキシソーム酵素の一つであり、D−アミノ酸をイミノ酸に変換し、同時にアンモニアと過酸化水素を合成する。D−アミノ酸オキシダーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、動物臓器から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されず、例えば、D−アミノ酸オキシダーゼ(MPバイオメディカル社)、D−アミノ酸オキシダーゼ(シグマアルドリッチ社)が挙げられる。
グリシン−N−メチルトランスフェラーゼ(EC2.1.1.20)は、S−アデノシルメチオニン(SAM)のメチル基をグリシンに転移してサルコシンとアデノシルホモシテインを合成する。グリシン−N−メチルトランスフェラーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、動物臓器(ウサギ肝、ラット肝など)由来のものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されず、例えば、Recombinant human GNMT Glycine N-methyltransferase (aa 1-295), His-tagged(Acris Antibodies GmbH社)が挙げられる。
過酸化水素の濃度を特定する方法としては、特に限定されず、公知の液状試薬を用いた方法を採用することができる。例えば、4−アミノアンチピリン(4−AA)および/またはN−エチル−N−(3−スルホプロピル)−m−アニシジン(ADPS)を基質とするペルオキシダーゼを用いた酵素発色法、過酸化水素による鉄イオンの酸化に伴う色素の呈色反応を利用する方法が挙げられる。
表1に記載の処方により試薬R1およびR2を準備する。ヒトから採取した尿の一定量に、試薬R1を表1に記載のS/R比に従って添加し、十分反応させた後、試薬R2を表1に記載のS/R比に従って添加する。
表2に記載の処方により試薬R1およびR2を準備する。ヒトから採取した尿の一定量に、試薬R1を表2に記載のS/R比に従って添加し、十分反応させた後、試薬R2を表2に記載のS/R比に従って添加する。
Claims (1)
- 有機溶剤を取り扱うヒトの特殊健康診断で採取された生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸の総濃度を測定する方法であって、
(1)生体から採取された生体試料の一定量に、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素を作用させる工程、
(2)(1)の工程で得た反応液に、
(a)D−アミノ酸およびD−アミノ酸オキシダーゼ、または
(b)S−アデノシル−L−メチオニン、グリシン−N−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを
混合し、過酸化水素を発生させる工程、および
(3)(2)の工程で発生した過酸化水素の濃度を特定する工程
を含む、方法。
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