JP5937642B2 - エストロゲン関連受容体モジュレーターとしての化合物、及びその使用 - Google Patents

Description

本発明は、エストロゲン関連受容体のモジュレーターとして機能する小型分子に関する。

近年、肥満症、糖尿病、異常脂血症、高血圧、及びアテローム動脈硬化症を含む代謝性疾患の発生増加が、全世界における主要死亡原因である心臓病の高リスクを招いている。治療に連結する保健コストは、先進国のみならず発展途上国においても、その保健システムに対し大きな負担を課している。したがって、これらの障害を治療及び／予防するための新規標的及び製剤の特定は高度の優先課題である。

１型糖尿病（インスリン依存性糖尿病、ＩＤＤＭ）、及び２型糖尿病（非インスリン依存性糖尿病、ＮＩＤＤＭ）は、共に、飢餓状態において、又は、経口グルコース耐性試験時グルコース投与後、血漿グルコースレベルが上昇すること（高血糖症）によって特徴づけられる。インスリンは、筋肉、肝臓、及び脂肪組織を含む、主要インスリン感受性組織におけるグルコース及び脂質代謝を刺激することによって、グルコース利用を調整するホルモンである。これらの組織におけるエネルギー代謝の不適切な調整が、２型糖尿病患者に見られるグルコースホメオスターシス変化の多くの原因となる。さらに、２型糖尿病患者は、高インスリン血症（血漿インスリン濃度の上昇）を抱えることが多い。インスリンの作用に対する抵抗を意味するインスリン抵抗は、２型糖尿病の病気発生の最初の役割を担う。

骨格筋及び肝臓は、共に、正常なグルコースホメオスターシスの維持を担当する、もっとも重要なインスリン反応性器官である。いくつかの研究では、ミトコンドリアの機能不全が、骨格筋のインスリン抵抗と密接に関連づけられている。ヒトのＩＩ型糖尿病の骨格筋では、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）遺伝子の発現レベルが低下する。ＩＩ型糖尿病患者において調整不良とされるＯＸＰＨＯＳ遺伝子は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体 ［ ］、コアクチベータ−１ ［ ］（ＰＧＣ−１α）の転写制御下にある。理論的には、ＰＧＣ−１αレベルの低下は、ＯＸＰＨＯＳ遺伝子の低下を誘発し、脂肪酸の酸化を下げ、したがって、骨格筋における脂質堆積の低下をもたらし、最終的には、インスリン抵抗及びＩＩ型糖尿病を招く。実際に、ＰＧＣ−１αの不均衡は、糖尿病の前段階に一般に見られる現象である。このことはさらに、ＰＧＣ−１αレベルの低下は、糖尿病誘発の重要因子であることを実証する。

エストロゲン関連受容体（ＥＲＲ）は、エストロゲン受容体αと密接に関連する、一種の核内ホルモン受容体である。ＥＲＲ及びそのコアクチベータの結合時、外因性リガンド及び内因性リガンドはそれに加わらない。すなわち、これらは、活発な、核内のオーファンホルモン受容体を構成的に構築すると考えられる。実験から、ＥＲＲは、３種の異なるサブタイプ、すなわち、ＥＲＲα、ＥＲＲβ、及びＥＲＲγを含むことが示されている（非特許文献１−４）。ＥＲＲβは、主に、生物体の成長に関連し、その発現は生後厳密に制御され、肝臓、胃、骨格筋、心臓、及び腎臓に少量の発現が見られる。ＥＲＲγの発現は、主に、脊髄及び中枢神経系に見られる。ＥＲＲαは、主に、代謝的に活性な組織又は器官、例えば、骨格筋、心臓、腎臓、及び脂肪組織に存在する（非特許文献１及び５）が、ＥＲＲα及びＰＧＣ−１（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−γ）コアクチベータ１）の相互作用は、ミトコンドリアの酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）遺伝子の転写を制御し、グルコース及び脂肪の物質及びエネルギー代謝を調整する（非特許文献６−９）。

ＯＸＰＨＯＳは、グルコース、脂肪などの物質代謝によるＡＴＰエネルギー生成において、もっとも重要なステップである。ＰＧＣ−１は、ＯＸＰＨＯＳの重要な調節因子であり、骨格筋及び褐色脂肪組織などの組織における熱発生、筋細胞における呼吸及びミトコンドリアの生体合成、及び、骨格筋筋線維の転位の際、重要な調節的役割を担う。さらにＰＧＣ−１は、多様な糖新生酵素をコードする遺伝子の発現を制御する（非特許文献１０−１２）。実験から、ＰＧＣ−１の低下は、グルコース及び脂肪などのエネルギー物質の代謝に影響を及ぼし、過度の血糖、及び、骨格筋における脂質堆積を引き起こし、最終的に、インスリン抵抗及びＩＩ型糖尿病を招く可能性のあることが示されている。

ＥＲＲαは、ＰＧＣ−１αの、直接下流の標的遺伝子である。ＥＲＲα及びＰＧＣ−１αの直接的相互作用は、ＯＸＰＨＯＳ及び脂肪酸オキシダーゼなどの遺伝子の転写を制御し、ＯＸＰＨＯＳのプロセスを調節する（非特許文献１３）。実験から、絶食、身体トレーニング、及び寒さなどの環境シグナルの刺激下では、ＰＧＣ−１αは、ＥＲＲαの発現を促進し、さらに、ＥＲＲαと結合し、ＥＲＲαの、それ自身の遺伝子プロモータの特異的結合部位との結合を誘発することによってＥＲＲαの転写を促すことが示されている。ＰＧＣ−１α及びＥＲＲαの相互作用はさらに、ＥＲＲαと、ＰＧＣ−１αの、他の下流遺伝子プロモータとの結合を増進し、且つ、これらの下流機能遺伝子（例えば、フォスフォエノールピルビン酸カルボキシナーゼ（ＰＥＰＣＫ）、中鎖アシルデヒドロゲナーゼ（ＭＣＡＤ）、及びピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４（ＰＤＫ４））の転写を促進し、したがって、ＯＸＰＨＯＳ及び脂肪酸酸化を効果的に制御し、脂肪酸及び糖の代謝を増進することが可能である（図１Ａ）（非特許文献６及び１４）。

したがって、小型分子化合物、特に、ＥＲＲα及びＰＧＣ−１αの機能を調節する、ＥＲＲα小型分子プロモータによれば、ＯＸＰＨＯＳ遺伝子の機能は効果的に改善され、脂肪酸の酸化は促進され、或いは、グルコースの利用は抑えられるので、これは、糖尿病、及び、それに関連する肥満症、高血糖、低い血糖耐性、インスリン抵抗、高脂血症、脂質障害、高い血液コレステロール、高濃度トリグリセリド、高コレステロール血症、低濃度高密度脂質タンパクコレステロール、高濃度低密度脂質タンパク、アテローム動脈硬化症及びその二次疾患、血管狭窄、下腹肥満、メタボリックシンドローム、及び脂肪肝を治療するための効果的方法として使用することが可能である。さらに、この小型分子プロモータＥＲＲαは、ＰＧＣ−１α遺伝子の発現を強化し、インスリン感受性を増大させることが可能である。したがって、これは、臨床作用を強化するために、他のインスリン増感因子又はインスリン分泌促進因子と共に使用することが可能である。

さらに、閉経後におけるエストロゲンレベルの低下は、骨損失の増加をもたらし、骨粗鬆症を招く。骨芽細胞におけるＥＲＲαの過剰発現はｂｏｎｅ ｎｏｄｕｌｅ形成を増すが、一方、アンチセンスによってその発現を抑えると、ｂｏｎｅ ｎｏｄｕｌｅ形成の低下が生じる。したがって、エストロゲン関連受容体（ＥＲＲα、β、及びγなど）の活性を強化する化合物は、骨密度再生において同化作用を及ぼす可能性がある。逆の視点から見ると、異常な骨増殖の結果である骨疾患に関しては、エストロゲン関連受容体（ＥＲＲα、β、及びγなど）と相互作用を持ち、その生物学的活性を下げる化合物は、骨成長を遅らせることによって、これらの疾患の治療において利益をもたらす可能性がある。

エストロゲン関連受容体アルファ、ベータ、及びガンマ（ＥＲＲα、ＥＲＲβ、及び、ＥＲＲγ）は、構成的に活性な、転写活動を示す、核内オーファンホルモン受容体と考えられているが、最近、フェノール系アシルヒドラゾン合成剤が、Ｃ−末端局在のリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）に対する結合によって、ＥＲＲβ及びＥＲＲγの選択的作用剤であり、その機能を活性化することが実証された。しかしながら、ＰＧＣ−１の機能を強化することによってインスリン抵抗を改善するとされる、決定的ＥＲＲα作用剤はまだ特定されていない。

Giguere, V., Nature, 1988, 331, 91-94 Hong, HJ. Biol. Chem. 1999, 274, 22618-22626 Heard, D. J. Mol. Endocrinol. 2000, 14, 382-392 Giguere, V.T. Trends. Endocrinol. Metab. 2002 13(5), 220-225 Sladek, R. Mol. Cell. Biol. 1997, 17, 5400-5409 Schreiber, S.N. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2004, 101, 6472-6477 Schreiber, S.N. J. Biol. Chem. 2003, 278, 9013-9018 Huss, J.M. J. Biol. Chem. 2002, 277, 40265-40274 Ichida, M.; Nemoto, S. J. Biol. Chem. 2002, 277, 50991-50995 Mootha, V.K. Nat. Genet. 2003, 34, 267-273 Patti, M.E. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2003, 100, 8466-8471 Puigserver, P. Endocr. Rev. 2003, 24, 78-90 Mootha, V.K. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2004, 101, 6570-6575 Willy, P.J.; et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2004, 101, 8912-8917

エストロゲン関連受容体モジュレーターを提供するのが本発明の目的である。

ある実施態様では、本発明は、式ＶＩＩＩを有する化合物、及び、その薬学的に受容可能な塩及び立体異性体を提供する：

上式において、
ｍは、０、１または２であり、
ｎは、０、１または２であり、
Ｒ₁及びＲ₇は、それぞれ独立に下記から選ばれ：
１） Ｈ；
２） ハロゲン；
３） ＯＨ；
４） （Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₁〜Ｃ₄アルキル；
５） （Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₃〜Ｃ₆シクロアルキル；
ここで、ａは０又は１であり、ｂは０又は１であり；
Ｒ₂は下記から選ばれ：
１） Ｈ；
２） Ｃ₁〜Ｃ₃アルキル；
３） Ｃ₃〜Ｃ₆シクロアルキル；
上記アルキルは、Ｒ₄から独立に選ばれる、０、１、又は１以上の置換基によって置換することが可能であり；
Ｒ₄は下記：
１） Ｈ；
２） Ｃ₃〜Ｃ₆ヘテロ環である。

本発明はさらに、上述の化合物、又はその薬学的に受容可能な塩、又はそのプロドラッグの内のいずれかを含む製薬組成物を提供する。この製薬組成物は、代謝疾患治療のための新規クラスの治療薬として使用することが可能である。

本発明は、エストロゲン関連受容体のモジュレーターとして機能する、上述の化合物及びその薬学的に受容可能な塩の、代謝疾患治療用新規クラスの治療薬としての使用に関する。

好ましくは、代謝疾患としては：（１）ＩＩ型糖尿病；（２）高血糖症；（３）グルコース耐性の低下；（４）インスリン抵抗；（５）肥満症；（６）高脂血症；（７）高トリグリセリド血症；（８）高コレステロール血症；（９）低レベルＨＤＬ；（１０）高レベルＬＤＬ；（１１）アテローム動脈硬化症；（１２）血管再狭窄；（１３）脂肪肝、が挙げられる。

本発明は、エストロゲン関連受容体（ＥＲＲα、β、及びγなど）の作用剤である、式Ｉによって表される化合物を提供する。本発明は、ＩＩ型糖尿病及び関連する高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、肥満症、及び脂肪肝などの代謝性疾患に悩む被験者、又はそれと診断される被験者を治療するための、本発明の化合物の使用に関する。

本発明は、ＥＲＲα、及び、その相互作用パートナーＰＧＣ−１αの機能に同調する化合物は、インスリン抵抗の程度を緩和し、糖尿患者におけるグルコースホメオスターシスを改善し、インスリン感受性を回復すると思量する。本発明は、これらの化合物は、血糖レベル、及び、糖尿病の血清マーカーであるヘモグロビンＡ１ｃのグルコシル化レベルを下げる可能性があると思量する。さらに、本発明は、ＥＲＲα作用剤は、組み合わせて使用されると、現存及び開発中のインスリン増感剤及びインスリン分泌促進剤の治療作用を強化する可能性があると思量する。

ＥＲＲαの活性に及ぼすＤＫ化合物の作用を示す模式図である。 ＥＲＲαによって駆動されるプロモータＰＧＣ−１αのレポーター遺伝子発現に及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。 経口的グルコース耐性に及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。 血中グルコースレベルに及ぼすＤＫ４５の作用（絶食無し）を示す模式図である。 インスリン耐性に及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。 血中インスリンレベルに及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。 血中脂肪酸レベルに及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。 血中コレステロールの全体レベルに及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。 血中トリグリセリドに及ぼすＤＫ４５の作用を示す模式図である。

本発明の関わる化合物は、そうしようと思えば、キラル中心、キラル軸、又はキラル面を有することも可能と考えられる。立体異性体、ラセミ体混合物、及び他の異性体も全て本発明に含まれる。本発明の関わる化合物は、互変異性体を有していてもよい。一つの互変異性体しか記載されていないが、本発明は、可能な全ての互変異性体を含む。

本発明では、「アルキル」及び「サブアルキル」という用語は、ある一定数の炭素原子を有する、分枝鎖又は直鎖のアルキル基を意味する。例えば、「Ｃ₁−Ｃ₈アルキル」における“Ｃ₁−Ｃ₈”は、１、２、３、４、５、６、７、又は８個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝鎖アルキル基と定義される。「Ｃ₁−Ｃ₈アルキル」としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル−、オクチルなどが挙げられる。「シクロアルキル」という用語は、ある一定数の炭素原子を有する、特異的な、単一飽和環を指す。例えば、「シクロアルキル」としては、シクロプロピル−、メチル−シクロプロピル−、２，２−ジメチル−シクロブチル−、２−エチル−シクロペンタジエニル−、シクロヘキシルなどが挙げられる。

「アルコキシ」は、環状アルキル又は非環状アルキル基の、ある一定数の炭素原子を、酸素原子を介して結合する置換基を意味する。

「ヘテロ環」とは、５−１０個の原子を含む芳香環又は非芳香環において、１〜４個の、Ｏ、Ｎ、Ｓなどのヘテロ原子を含む環状化合物である。「ヘテロ環」は、上述のヘテロの芳香環を含むが、さらに、ジヒドロ及びテトラヒドロ類縁体を含む。ヘテロ環としては、ただしこれらに限定されないが、下記：ベンジミダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾピラニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、ミソ−フェナントロリニル、フリル、イミダゾリル、ジヒドロインドリル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、フラン、イソベンゾフラニル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、チェンナイピリジル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、オキサゾリニル、イソキサゾルモルフォリニル、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、ピリジルテトラゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、１，４−アルキル−ジオキシニル、ヘキサアリドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピリジン−２−ケト、アルキルピロリジニル、モルフォリニル、チオモルフォリニル、ジヒドロ−ベンジミダゾリル、ジヒドロ−ベンゾフリル、ベンゾ−ジヒドロ−チエニル、ジヒドロ−ベンゾキサゾリル、ジヒドロ−フリル、ジヒドロ−ベンジミダゾリル、ジヒドロ−インドリル、ジヒドロ−イソキサゾリル、ジヒドロ−イソチアゾリル、ジヒドロ−オキサジアゾリル、ジヒドロ−オキサゾリル、ジヒドロ−ピラジニル、ジヒドロ−ピラゾリル、ヒジヒドロピリジル、ジヒドロ−ピリミジニル、ジヒドロ−ピロリル、ジヒドロフォレートキノリル、テトラゾリルジヒドロ、ジヒドロ−チアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロ−トリアゾリル、メチレンジオキシベンゾフェノンアシル及びそのＮ−酸化物などが挙げられる。ヘテロ環置換基の接続は、炭素原子又はヘテロ原子によって実現される。

一実施態様では、ヘテロ環は、ベンジミダゾリル、イミダゾリル、２−イミダゾリンケトン、インドール系、イソキノリニル、モルフォリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、アルキルピロール、２−ピペリジンケトン、２−ピリミジンケトン、２−ピロリドン、キノリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、チエニルなどとして選ばれる。

容易に理解可能であるように、本発明において使用されるハロゲン化物としては、フッ化物、塩素、フッ素、臭素、及びヨウ素が挙げられる。

ある実施態様では、Ｒ₄は、４〜７原子を含む単環を形成してもよいし、或いは、Ｒ₅及びＲ₆を接続するＮ原子を介して、各環が４〜７原子を含む二環を形成してもよい。この単環又は二環は、Ｎ、Ｏ、又はＳとして選ばれる１〜２個のヘテロ原子を含んでもよい。この単環又は二環は、Ｒ₅として選ばれる一つ以上の置換基によって置換することも可能である。形成されるヘテロ環としては、ただしこれらに限定されないが、下記のヘテロ環：

が挙げられる。

一実施態様では、Ｒ₁は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル、又はアルコキシとして選ばれる。

一実施態様では、Ｒ₂は、Ｈ、アルキル、又は、Ｒ₅によって置換されるアルキル基として選ばれる。

一実施態様では、ａは０であり、ｂは１である。別の実施態様では、ａは０であり、ｂは０である。

本発明は、式ＶＩＩＩを持つ化合物、さらに、その薬学的に受容可能な塩、又は式ＶＩＩＩの立体異性体の遊離形を含む。一実施態様では、本発明の特別実施例は、アミンのプロトン付加塩である。「遊離形」とは、酸と塩を形成しないアミンを意味する。「薬学的に受容可能な塩」とは、式ＶＩＩＩの全ての塩形状を含む。

本発明の「薬学的に受容可能な塩」とは、本発明の塩基性化合物と、通常の、非毒性の有機酸及び無機酸とによって形成される塩を意味する。このような酸としては、ただしこれらに限定されないが、下記：塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、レモン酸、アスコルビン酸、ｂａｓｈｉｎｇ ａｃｉｄ、マレイン酸、ヒドロキシ−マレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸１、ｐ−トルエンスルフォン酸、メタンスルフォン酸、エタンジスルフォン酸、シュウ酸、ヒドロキシエチルスルフォン酸、トリフルオロ酢酸などが挙げられる。

関連化合物が酸である場合、「薬学的に受容可能な塩」とは、本発明の酸性化合物と、通常の、非毒性の有機塩基又は無機塩基とによって形成される塩を意味する。酸性化合物と、無機の塩基とによって形成される塩としては、ただしこれらに限定されないが、下記：アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、マンガンサブ塩、カリウム、ナトリウム、亜鉛などが挙げられる。アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、及びナトリウム塩が好まれる。有機塩基としては、ただしこれらに限定されないが、下記：一級アミン、二級アミン、三級アミン塩、アミン置換体、すなわち、天然のアミン置換体、環状アミンなど、及び、塩基性イオン交換樹脂、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ'−ジベンジル−エチレンジアミン、ジエチルアミン、１，２ジエチルアミノアルコール、ジメチルアミノエタノール、アミノ−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルフォリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルコースアミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリンコバルトアミン、イソプロピルアミン、リシン、メチル−グルコサミン、モルフォリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、ペントキシフィリン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどが挙げられる。

関連化合物は、下記の方法を用いて調製することが可能である。注意すべきは、本合成スキームは、実施例のほんの輪郭しか述べていないことである。関連化合物は、より様々な置換基を有していてもよく、多の方法によって製造することが可能である。

このスキームに示されるように、化合物３は、下記の手順にしたがって合成した：ＰＰＡ（２．００ ｇ）に溶解した２−アミノピリジン（１．００ ｍｍｏｌ）及び適切なβ−ケトエステル（１．５０ ｍｍｏｌ）を、頻繁に攪拌しながら１３０℃で加熱した。４時間後、反応混合液を、氷浴中で冷却し、５％水酸化ナトリウム溶液によってｐＨ＞７となるように中和した。固体沈殿物をろ過によって収集し、水で洗浄し、再結晶させた。

本発明は、ＥＲＲの機能に同調する化合物、特に、ＥＲＲαの作用剤又は部分的作用剤を主題とする。ある化合物は、ＥＲＲαとＥＲＲβの両方の機能を機能的に刺激することが可能であり、ＥＲＲα／β二重作用剤と見なすことが可能である。ある化合物は、ＥＲＲαとＥＲＲγの両方の機能を機能的に刺激することが可能であり、ＥＲＲα／γ二重作用剤と見なすことが可能である。ある化合物は、ＥＲＲα、ＥＲＲβ、及びＥＲＲγ三者の機能を機能的に刺激することが可能であり、ＥＲＲα／β／γ汎用作用剤と見なすことが可能である。本発明はさらに、エストロゲン関連受容体によって仲介される、疾患、障害、又は病態に罹患するか、又はそれと診断される被験者の治療における、本発明の化合物の使用に関する。

本発明は、ＥＲＲα、及びその相互作用パートナーＰＧＣ−１αの機能に同調する化合物は、インスリン抵抗の程度を緩和し、糖尿病患者のグルコースホメオスターシスを改善し、インスリン感受性を取り戻すと思量する。本発明は、これらの化合物は、血糖値を下げ、糖尿病血清マーカーであるヘモグロビンＡ１ｃグリコシル化レベルを下げる可能性があると思量する。本発明は、ＩＩ型糖尿病の症状を抱える動物又は患者に投与するための、化合物又はその薬学的に受容可能な塩を含むキットを提供する。

一実施態様では、本発明は、ＩＩ型糖尿病の治療におけるＥＲＲモジュレーターの使用法を提供する。

別の実施態様では、本発明は、ＩＩ型糖尿病患者又は動物の治療における、式ＶＩＩＩによる化合物又はその薬学的に受容可能な塩の使用法を提供する。

別の実施態様では、本発明は、ＥＲＲに関連する疾患：（１）ＩＩ型糖尿病；（２）高血糖症；（３）グルコース耐性の低下；（４）インスリン抵抗；（５）肥満症；（６）高脂血症；（７）高トリグリセリド血症；（８）高コレステロール血症；（９）低レベルＨＤＬ；（１０）高レベルＬＤＬ；（１１）アテローム動脈硬化症；（１２）血管再狭窄；（１３）脂肪肝、を含む、ただしこれらに限定されないが、疾患の治療における、上述の化合物又はその薬学的に受容可能な塩の使用法を提供する。

別の実施態様では、本発明は、骨粗鬆症又は関連疾患の治療における、化合物又はその薬学的に受容可能な塩に関する。

別の実施態様では、本発明は、高血糖症、アテローム動脈硬化症、低レベルＨＤＬ、高レベルＬＤＬ、高脂血症、高トリグレセリド血症などの治療における、上述の化合物又はその薬学的に受容可能な塩の使用法を提供する。

本化合物は単独で使用してもよいが、コレステロール生合成阻害剤、特に、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えば、ロバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、リバスタチン、イタバスタチン、又はＺＤ−４５２２と共に投与されると有利である可能性がある。本化合物はさらに、他の脂質降下剤、例えば、コレステロール吸収阻害剤（例えば、スタノールエステル、ステロールグリコシド例えばチケシドなど、及び、アゼチジノン例えばエゼチミベなど）、ＡＣＡＴ阻害剤（例えば、アバシミベ）、ＣＥＴＰ阻害剤、ニアシン、胆汁酸捕捉剤、ミクロソームのトリグリセリド輸送阻害剤、及び胆汁酸の再吸収阻害剤などと組み合わせて使用すると有利である可能性がある。これらの併用治療はさらに、高コレステロール血症、アテローム動脈硬化症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高レベルＬＤＬ、低レベルＨＤＬなどから成る群から選ばれる、一つの以上の関連病態の治療又はコントロールにおいて有効である可能性がある。

本発明の別局面は、炎症性病態、すなわち、炎症性腸疾患、クローン病、及び潰瘍性大腸炎を含む病態を治療する方法であって、治療を要する患者に対し本発明の化合物の有効量を投与することによる方法を提供する。本発明によって治療が可能な、他の炎症性疾患としては、痛風、慢性関節リューマチ、変形関節症、多発性硬化症、喘息、ＡＲＤＳ、乾癬、脈管炎、虚血症／再潅流障害、凍傷、及び関連疾患、が挙げられる。

本明細書において定義される化合物は、下記の方法にしたがって後述の疾患を治療するだけでなく、下記に記載されない他の疾患についてもその治療のために使用することが可能である、すなわち：
（１）非インスリン依存性糖尿病（２型糖尿病）について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者を治療する方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；
（２）高血糖症について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者において治療又はコントロールする方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；
（３）肥満症について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者において治療又はコントロールする方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；
（４）高コレステロール血症について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者において治療又はコントロールする方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；
（５）高トリグリセリド血症について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者において治療又はコントロールする方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；
（６）低ＨＤＬコレステロール、高ＬＤＬコレステロール、高脂血症、高コレステロール血症、及び高トリグリセリド血症を含む一つ以上の脂質障害について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者において治療又はコントロールする方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；
（７）メタボリックシンドロームに関連する病的結果について、その治療を要するヒト又は他のほ乳類患者において、そのリスクを低減する方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法；及び、
（８）アテローム動脈硬化症について、その治療を要するか、アテローム動脈硬化症を発症する危険度を有するか、又はアテローム動脈硬化症の病的結果を招来する危険度を有するヒト又は他のほ乳類患者において、アテローム動脈硬化症を治療するか、発症リスクを下げるか、その開始を遅らせるか、及び／又は、その病的結果招来のリスクを低減する方法であって、該患者に対し、式ＶＩＩＩの化合物の治療有効量を投与することを含む方法、である。アテローム動脈硬化症の病的結果としては、例えば、狭心症、血管硬化筋無力症、心臓麻痺、発作などが挙げられる。

投与及び用量範囲
哺乳動物、特に、ヒトに対し、本発明の化合物の有効用量を供給するためには、適切なものであれば、いかなる投与ルートを採用してもよい。例えば、経口、直腸、局所、非経口、点眼、肺内、鼻腔などのルートを採用してよい。剤形としては、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁剤、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エロゾルなどが挙げられる。好ましくは、式ＶＩＩＩの化合物は経口的に投与される。

使用される活性成分の有効用量は、使用される特定化合物、投与方式、治療される病態、及び治療される病態の重度に応じて変動してよい。この用量は、当業者であれば、簡単に確認することが可能である。

糖尿病及び／又は高血糖、又は高トリグリセリド血症、又は、式ＶＩＩＩの化合物が適応とされる他の疾患を治療又はコントロールする場合、一般に、本発明の化合物が、動物の体重１キログラム当たり約０．１ミリグラムから約５００ミリグラムの各日用量において、１日１回用量として、又は、１日に２から４回の分割用量として、又は、持続的徐放剤形として投与する場合に満足すべき結果が得られる。多くの大型動物では、毎日の合計用量は、約０．１ミリグラムから約１５００ミリグラムであり、好ましくは約０．５ミリグラムから約１００ミリグラムである。７０ｋｇの成人ヒトの場合、各日の合計用量は、一般に、約１ミリグラムから約５００ミリグラムである。特に強力な化合物では、成人ヒト用の用量は、０．１ ｍｇまで低くあってもよい。投与処方は、この範囲内に調整してもよいし、或いは、最適の治療反応を実現するために、この範囲から外れるものであってもよい。

経口投与は、通常、錠剤を用いて実行される。錠剤における用量の例としては、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、及び２５０ｍｇがある。他の経口剤形（例えば、カプセル）も、同じ用量を持つことは可能である。

製剤組成物
本発明の別の局面は、式Ｉの化合物及び薬学的に受容可能な塩を含む製剤組成物を提供する。本発明の製剤組成物は、活性成分として、式ＶＩＩＩの化合物又は薬学的に受容可能な塩の外、薬学的に受容可能な担体、及び必要に応じて他の治療成分を含む。「薬学的に受容可能な塩」という用語は、無機塩基又は酸、及び有機塩基又は酸を含む、薬学的に受容可能な非毒性塩基又は酸から調製される塩を指す。製剤組成物はさらに、プロドラッグが投与されるのであれば、プロドラッグ、又は、その薬学的に受容可能な塩を含んでもよい。

本組成物は、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内、及び静脈内を含む）、点眼（眼科的）、肺内（鼻腔又は口腔吸引）、又は鼻腔投与のために好適な組成物を含むが、ある任意の症例についてもっとも適切なルートは、治療される病態の性質及び重度、及び活性成分の性質に依存する。本組成物は、単位剤形として提示されると好都合であり、製薬技術分野において周知のいずれの方法によって調製することも可能である。

実地の使用では、式ＶＩＩＩの化合物は、従来の製薬混合技術にしたがって製薬担体と緊密に合わせられた混合物における活性成分として併用することが可能である。担体は、投与、例えば、経口又は非経口投与（静脈内を含む）ための所望の調剤形に応じて広く様々な形態を取ることが可能である。経口剤形のために組成物を調製する場合、通常の製剤媒体であれば、いずれのものを用いてもよく、例えば、水、グリコール、油状物、アルコール、芳香剤、防腐剤、着色剤などを用いてもよく、経口液体調剤の場合、例えば、懸濁液、エリキシル剤、及び溶液であってもよく；或いは、担体は、澱粉、糖類、微細結晶セルロース、希釈剤、顆粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などであってもよく、経口固体製剤の場合、例えば、散剤、硬及び軟カプセル及び錠剤であってもよく、その場合、経口固体製剤の方が、液体製剤よりも好ましい。

投与が簡便であるために、錠剤及びカプセルは、もっとも有利な経口剤形を代表する。この場合、固体の製剤担体が採用されるのは当然である。要すれば、錠剤は、標準的な水性又は非水性技術によってコートされてもよい。このような組成物及び調剤は、少なくとも０．１パーセントの活性化合物を含んでいなければならない。これらの組成物における活性化合物のパーセントは、もちろん変動してよく、剤形単位の重量の約２パーセントから約６０パーセントの間にあると好都合である。このような治療的に有用な組成物における活性化合物の量は、実効用量が得られるように選ばれる。活性化合物はさらに、例えば、液体滴下物又はスプレイとして鼻腔内に投与することも可能である。

錠剤、丸剤、カプセルなどはさらに、結合剤、例えば、トラガカントゴム、アカシア、トウモロコシ澱粉、又はゼラチン；賦形剤、例えば、リン酸二カルシウム；崩壊剤、例えば、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ澱粉、アルギン酸；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム；及び、甘味剤、例えば、スクロース、ラクトース、又はサッカリンを含んでもよい。単位用量剤形がカプセルである場合、それは、上述のタイプの材料の外に、脂性油などの液性担体を含んでもよい。

外にも様々な物質が、コーティングとして、又は、剤形の物理的形態を変調するために、存在してもよい。例えば、錠剤は、シェラック、糖、又はその両方によってコートされてもよい。シロップ又はエリキシルは、活性成分の外に、甘味剤としてスクロースを、防腐剤としてメチル及びプロピルパラベンを、及び、チェリー又はオレンジ香料などの芳香剤を含んでもよい。

式ＶＩＩＩの化合物はさらに、非経口的に投与されてもよい。これらの活性化合物の溶液又は懸濁液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混ぜ合わされる水において調製することが可能である。分散液はさらに、グリセロール、液状ポリエチレングリコール、及び、油状物におけるそれらの混合物において調製することが可能である。通常の保存及び使用条件下では、これらの調剤は、微生物の増殖を阻止するために防腐剤を含む。

注入に好適な製剤剤形は、滅菌水溶液又は分散液、及び、滅菌注入液又は分散液の即席調剤のための滅菌散剤を含む。全ての場合において、剤形は、滅菌性であり、簡単にシリンジ注入が可能となる程度に流動的でなければならない。それは、製造及び保存条件下に安定であり、細菌及び真菌などの微生物の汚染性活動に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液状ポリエチレングリコール）、それらの適切な混合物、及び、植物油を含む、溶媒又は分散媒体であってもよい。

代謝産物−プロドラッグ
治療的に活性な代謝産物も、その場合、その代謝産物自体が、本発明の主張する特許範囲に納まるわけであり、本発明の化合物である。患者に対する投与時、又は、患者に対する投与後、特許請求化合物に変換される化合物である、プロドラッグもまた、本発明の化合物である。

併用治療
式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物が有用である疾患又は病態の治療又は寛解において、同様に有用であると考えられる他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。このような他の薬剤は、そのために一般的に使用されるルート及び量において、式Ｉの化合物と同時に又は継時的に投与されてもよい。式ＶＩＩＩの化合物が、一つ以上の他の薬剤と同時に使用される場合、そのような他の薬剤と式ＶＩＩＩの化合物を含む、単位剤形としての製剤組成物が好ましい。しかしながら、併用治療はさらに、式ＶＩＩＩの化合物と、一つ以上の他の薬剤とが、色々に重なり合うスケジュールにおいて投与される治療法を含む。さらに、一つ以上の他の活性成分と組み合わせて使用される場合、本発明の化合物、及び、該他の活性成分は、それぞれが単独に使用される場合よりも低い用量で使用されてもよい。したがって、本発明の製剤組成物は、式ＶＩＩＩの化合物の外に、一つ以上の他の活性成分を含む組成物を含む。

式ＶＩＩＩの化合物と組み合わせて、別々に、又は、同じ製剤組成物において投与されてもよい、その他の活性成分の例としては、ただしこれらに限定されないが、下記：
１） ＰＰＡＲガンマ作用剤及び部分的作用剤、グリタゾン及び非グリタゾンを含むもの（例えば、トログリタゾン、ピオグリタゾン、エングリタゾン、ＭＣＣ−５５５、ロシグリタゾン、バラグリタゾン、ネトグリタゾン、Ｔ−１３１、ＬＹ−３００５１２、及びＬＹ−８１８）；
２） ビグアニド、例えば、メトフォルミン、及びフェンフォルミン；
３） タンパク質チロシンフォスファターゼ−ＩＢ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤；
４） ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤；
５） インスリン又はインスリン様物質；
６） スルフォニルウレア、例えば、トルブタミド及びグリピジド、又は関連物質；
７） α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）；
８） 患者の脂質プロフィールを改善する介在因子、例えば、（ｉ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（ロバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、リバスタチン、イタバスタチン、ＺＤ−４５２２、及び他のスタチン類）、（ｉｉ）胆汁酸捕捉剤（コレスチラミン、コレスチポル、及び、架橋結合デキストランのジアルキルアミノアルキル誘導体）、（ｉｉｉ）ニコチニルアルコール、ニコチン酸、又はその塩、（ｉｖ）ＰＰＡＲα作用剤、例えば、フェノフィブリン酸誘導体（ゲムフィブロジル、クロフィブレート、フェノフィブレート、及びベンザフィブレート）、（ｖ）コレステロール吸収阻害剤、例えば、エゼチニベ、（ｖｉ）アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤、例えば、アバシミベ、（ｖｉｉ） ＣＥＴＰ阻害剤、及び（ｖｉｉｉ）フェノール系抗酸化剤、例えば、プロブコール；
９） ＰＰＡＲα／γ二重作用剤、例えば、ＫＲＰ−２９７、ムラグリタザル、テサグリタザル、ファルグリタザル、及びＪＴ−５０１；
１０） ＰＰＡＲδ作用剤、例えば、ＷＯ０９７／２８１４９に開示されるもの；
１１） 抗肥満化合物、例えば、フェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、フェンチラミン、スビトラミン、オルリスタット、ニューロペプチドＹ５阻害剤、Ｍｃ４ｒ作用剤、カンナビノイド受容体１（ＣＢ−１）作用剤／逆作用剤、及びベータ３アドレナリン受容体作用剤；
１２） 回腸胆汁酸運搬体阻害剤；
１３） 炎症状態において使用が意図される薬剤、例えば、アスピリン、非ステロイド抗炎症剤、グルココルチコイド、アズルフィジン、及び、シクロオキシゲナーゼ２選択的阻害剤；
１４） グルカゴン受容体拮抗剤；
１５） ＧＬＰ−１、及びその類縁体、例えば、エキセニチド；
１６） ＧＬＰ−１受容体作用剤、
が挙げられる。

上述の併用は、本発明の化合物と、他の一つの活性化合物との併用だけでなく、本発明の化合物と、他の二つ以上の活性化合物との併用も含む。非限定的例としては、式Ｉの化合物と、ビグアニド、スルフォニルウレア、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、他のＰＰＡＲ作用剤、ＰＴＰ−１Ｂ阻害剤、ＤＰ−ＩＶ阻害剤、及び抗肥満化合物から選ばれる、二つ以上の活性化合物との併用が挙げられる。

［実施例１］
８−メトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

塩化チオニルに溶解した化合物Ａ及び５％モル臭化ナトリウムの溶液を２４時間環流し、次に、残留塩化チオニルを減圧留去して化合物Ｂを得た。化合物Ｂを、０℃においてメタノールに滴下し、混合物を２４時間環流し、次いで溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルに移し、重炭酸ナトリウム飽和水溶液、及び塩水で洗浄した。次に、この溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、カラムクロマトグラフィーによって濃縮、精製して所望の化合物Ｃを得た。メタノールに溶解した化合物Ｃにヒドラジン（１．５当量）を加え、混合物を４時間環流し、次いで、室温に冷却し、ろ過して化合物Ｄを得た。

乾燥テトラヒドロフランに溶解した化合物Ｄの氷浴液に、トリフルオロ酢酸（１．０当量）を滴下し、続いて、ｔ−ブチル硝酸塩（３．０当量）を加え、この混合物を、同じ温度でさらに３０分攪拌し、次いで溶媒を除去して、粗製産物の化合物Ｅを得た。

乾燥トルエンに溶解した化合物Ｅの溶液を一晩環流し、次いで、トルエンを減圧留去した。残渣をテトラヒドロフランに溶解し、水酸化カリウム（５．０当量、１０Ｎ）を加えた。この反応混合物を室温で５時間攪拌し、ジクロロメタンと塩水の間で分配した。ジクロロメタン抽出物を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィーによって精製したところ化合物Ｇが得られた。

ポリリン酸に溶解した化合物Ｇ及びＨを１３０℃で４時間加熱し、次いで、室温に冷却した。水酸化ナトリウムによってｐＨを＞７に調整し、ジクロロメタンで抽出し、塩水で乾燥し、カラムクロマトグラフィーにて濃縮、精製して最終化合物ＤＫ３６（実施例１）を得た。

［実施例２］
８−メトキシ−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例３］
８−ヒドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例４］
８−エトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例５］
８−（アリルオキシ）−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例６］
８−イソプロポキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例７］
２−フェニル−８−プロポキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例８］
３−エチル８−メトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例９］
２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１０］
８−エチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１１］
８−メトキシ−２−ｐ−トリル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１２］
８−ヒドロキシ−２−ｐ−トリル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１３］
８−エトキシ−２−ｐ−トリル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１４］
２−（４−クロロフェニル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１５］
２−（４−クロロフェニル）−８−ヒドロキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１６］
２−（３−クロロフェニル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１７］
２−（４−クロロフェニル）−８−エトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１８］
２−（２−クロロフェニル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例１９］
８−エチル−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２０］
８−エトキシ−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２１］
８−ヒドロキシ−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２２］
６−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２３］
７−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２４］
８−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２５］
９−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２６］
８−（３−モルフォリノプロポキシ）−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２７］
８−クロロ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

合成ルートは、実施例１に示したものと同じである。

［実施例２８］
本実施例によって具体的に明らかにされるのは、本発明において言及される化合物（例えば、実施例１０の化合物、別名ＤＫ４５、８−エチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン）、及び、式ＶＩＩＩの核心構造を持つ他の化合物、例えば、実施例１の化合物、別名ＤＫ３６、８−メトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、及び、実施例６の化合物、別名ＤＫ４１、８−イソプロポキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンは、２９３ＦＴ細胞においてＥＲＲαによって変調されるリポーター遺伝子の発現を効果的に強化することが可能であり、したがって、これらの化合物は、ＥＲＲαの機能を効果的に強化することが可能であること、である。

本化合物の、ＥＲＲ及び他の核内ホルモン受容体に対する作用を調べるために、当該技術分野において公知の方法にしたがって、２９３ＦＴ細胞に、該受容体の発現ベクターを、適切なレポーター構築体と一緒にトランスフェクトした。適切なレポータ遺伝子構築体は、生化学及び分子生物学の分野の当業者には周知される。本発明の方法には、当該技術分野で公知の他のベクターも使用が可能である。

受容体リガンド結合ドメイン断片を含むＧＡＬ４融合体は、ヒトＥＲＲα、ヒトＥＲＲβ、及びマウスＥＲＲγリガンド結合ドメイン配列を、酵母ＧＡＬ４ ＤＮＡドメインのＣ−末端（アミノ酸１−１４７、アクセッションＸ８５９７６）に融合し、それぞれ、発現ベクターＧＡＬ−ｈＥＲＲα、ＧＡＬ−Ｌ−ｈＥＲＲβ、及びＧａｌ−ｍＥＲＲγを形成することによって構築した。ｐＧＡＬは、受容体配列を持たない、酵母ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインを含むコントロールである。ＣＭＶ−ＰＧＣ−１αは、ＰＧＣ−１α（アクセッション、ＮＭ．ｓｕｂ．−−００８９０４）から得られるＰＧＣ−１αコード配列を含み、発現する。

活性化アッセイ用の２９３ＦＴ細胞は、１０％樹脂木炭洗浄処理ウシ胎児血清を添加した、ダルベッコ改変イーグル培地において３７℃、５％ ＣＯ₂において育成した。トランスフェクションの１日前、細胞を、フェノールレッド非含有ＤＭＥＭ−ＦＢＳを用いて５０−８０％集密度となるように撒いた。細胞を、リポフェクションによって一過性にトランスフェクトした。ただし、ＤＮＡを細胞にトランスフェクトするには、本発明の精神から逸脱することなく他の方法を利用することも可能である。ルシフェラーゼレポーター構築体ＵＡＳｇｘ４−ＴＫ−Ｌｕｃ、及び、サイトメガロウィルス駆動発現ベクターｐ−ＧＡＬ、ＧＡＬ−ｈＥＲＲα、ＧＡＬ−Ｌ−ｈＥＲＲβ、又はＧａｌ−ｍＥＲＲγを、ＣＭＶ−ＰＧＣ−１αと共に加えた。０．０１％ＤＭＳＯを含む（コントロール）か、又は、漸増濃度のＤＫ化合物と共に０．０１％ＤＭＳＯを含む、フェノールレッド非含有ＤＭＥＭ−ＦＢＳによって、細胞を約２４時間処理した。

実施例１０の化合物、別名ＤＫ４５、８−エチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン）、及び、式ＶＩＩＩの核心構造を持つ他の化合物、例えば、実施例１の化合物、別名ＤＫ３６、８−メトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、及び、実施例６の化合物、別名ＤＫ４１、８−イソプロポキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンは、ＣＭＶ−ＰＧＣ−１αの存在下、レポーター構築体ＵＡＳｇｘ４−ＴＫ−Ｌｕｃに対するＧＡＬ−Ｌ−ｈＥＲＲαの活性を、用量独立的に強化する（図１）。これは、これらの化合物が、ＥＲＲαの活性を増大するように機能することを示した。
［実施例２９］

本実施例によって具体的に明らかにされるのは、本発明において言及される化合物、例えば、ＤＫ４５が、ＨｅＬａ細胞において、ＰＧＣ−１α−プロモータレポーター遺伝子、及びＰＤＫ４−プロモータレポーター遺伝子の発現を効果的に強化することが可能であること、である。

ＨｅＬａは、ｐＧＬ３−プロモータ（Ｐｒｏｍｅｇａ）誘導のｐＧＬ３−ＰＧＣ１αプロモータ、又はＰＤＫ４−Ｐｒｏｍｅｇａ、及び、ＥＲＲα用発現ベクターで一過性にトランスフェクトした。Ｒｅｎｉｌｌａ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ＰＲＬ−ＣＭＶ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、トランスフェクション効率のコントロールのために含めた。完全長のヒトＥＲＲαを、この発現ベクターｐＣＭＶにおいてクローンした。ｐＧＬ３−ＰＧＣ１αプロモータ、又はＰＤＫ４−Ｐｒｏｍｅｇａは、鋳型としてヒトのゲノムＤＮＡ、及び、ＰＧＣ１αの転写開始部位の２．６ｋｂｐ上流配列に基づくプライマーを用いるＰＣＲ反応から得られる挿入体をクローンすることによって生成した。

活性化アッセイ用のＨｅＬａ細胞は、１０％ウシ胎児血清を添加した、ダルベッコ改変イーグル培地において３７℃、５％ ＣＯ₂において育成した。トランスフェクションの１日前、細胞を、ＤＭＥＭ−ＦＢＳを用いて５０−８０％集密度となるように撒いた。細胞を、リポフェクションによって一過性にトランスフェクトした。ただし、ＤＮＡを細胞にトランスフェクトするには、本発明の精神から逸脱することなく他の方法を利用することも可能である。ルシフェラーゼレポーター構築体、ｐＧＬ３−ＰＧＣ１αプロモータ又はＰＤＫ４−Ｐｒｏｍｅｇａ、及び、サイトメガロウィルス駆動発現ベクターｐＣＭＶ又はｐＣＭＶ−ｈＥＲＲαを加えた。０．０１％ＤＭＳＯを含む（コントロール）か、又は、１０ ｕＭのＤＫ４５化合物と共に０．０１％ＤＭＳＯを含む、ＤＭＥＭ−ＦＢＳによって、細胞を約２４時間処理した。

化合物ＤＫ４５において、ＥＲＲαによる、ＰＧＣ−１αプロモータレポーター遺伝子、及びＰＤＫ４−プロモータレポーター遺伝子の強化が観察された（図２）。
［実施例３０］

本実施例によって具体的に明らかにされるのは、本発明において言及される化合物、例えば、ＤＫ４５が、高脂肪食餌マウスにおいて、グルコース耐性を効果的に強化することが可能であること、である。

７週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／Ｊ６マウスを、普通食餌、又は、６０％のカロリーをラードから得る高脂肪食餌で１０週間飼育した。化合物を種々の用量で２週間胃管を通じて投与した。４群の動物（ｎ＝５）に対し、ベヒクル、５ｍｇ／ｋｇ／日のロシグリタゾン、又は、５ｍｇ／ｋｇ／日のＤＫ４５を投与した。動物を５時間絶食させ、次いで経口的にグルコースを与えた。血液サンプルを、０、１５、３０、６０、及び１２０分時に抽出した。血液のグルコースレベルをモニター（Ａｃｃｕ−ｃｈｅｋ Ａｄｖａｎｔａｇｅ， Ｒｏｃｈｅ）で測定した。血液グルコースレベルの変化を時間に対してプロットし、曲線下面積を、上記種々の群について計算した。

陽性コントロールと比べると、５ｍｇ／ｋｇ／日で投与したロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日で投与したＤＫ４５は、経口グルコース耐性試験において曲線下面積を下げた。これは、ＥＲＲα作用剤であるＤＫ４５が、生体内でグルコース耐性を改善することを示す（図３）。さらに、非絶食処置も、５ｍｇ／ｋｇ／日におけるＤＫ４５が、血中グルコースレベルを下げることを示す。

さらに、インスリン抵抗試験を行った。動物を５時間絶食させ、次いでインスリンを注入した（０．７５ＩＵ／ｋｇ）。血液サンプルを、０、１５、３０、６０、及び１２０分時に抽出した。血液のグルコースレベルをモニター（Ａｃｃｕ−ｃｈｅｋ Ａｄｖａｎｔａｇｅ，Ｒｏｃｈｅ）で測定した。血液グルコースレベルの変化を時間に対してプロットし、曲線下面積を、上記種々の群について計算した。

陽性コントロールと比べると、５ｍｇ／ｋｇ／日で投与したロシグリタゾン、５ｍｇ／ｋｇ／日で投与したＤＫ４５は、インスリン抵抗試験において曲線下面積を下げた。これは、ＥＲＲα作用剤であるＤＫ４５が、生体内でインスリン感受性を強化することを示す（図５）。さらに、絶食処置及び非絶食処置における血中インスリンレベルも、５ｍｇ／ｋｇ／日におけるＤＫ４５が、非絶食処置においても血中グルコースレベルを下げることを示す。

さらに、５ｍｇ／ｋｇ／日におけるＤＫ４５は、非絶食処置の動物において、血清の遊離脂肪酸（図７）、コレステロール（図８）、及びトリグリセリド（図９）レベルを下げた。

Claims (5)

1. 下記の式ＶＩＩＩを有する化合物、又は、その薬学的に受容可能な塩、若しくはその立体異性体：
   

   

   上式において、
   ｍは、０、１、又は２であり、
   ｎは、１又は２であり、
   以下において、ａは０又は１であり、ｂは０又は１であり、
   Ｒ₁は、それぞれ独立に下記１）〜４）からなる群より選ばれ：
   １） ハロ；
   ２） ＯＨ；
   ３） （Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₁〜Ｃ₄アルキル；および、
   ４） （Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₃〜Ｃ₆シクロアルキル；
   ただし、Ｒ₁の１つがピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン環の８位であり；
   ｍが１または２の場合、Ｒ₇は、それぞれ独立に下記１）〜４）からなる群より選ばれ：
   １） ハロ；
   ２） ＯＨ；
   ３） （Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₁〜Ｃ₄アルキル（ここで、ａが０であって且つｂが１である場合、前記アルキルはＣ₃〜Ｃ₆ヘテロ環によって置換され）；及び、
   ４） （Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₃〜Ｃ₆シクロアルキル；
   ただし、Ｒ₇の１つがハロまたはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである場合、Ｒ₁の少なくとも1つは、ＯＨであるか、又は（Ｃ＝Ｏ）_aＯ_bＣ₁〜Ｃ₄アルキル（式中、ａは０であり且つｂは１である）であり；
   Ｒ₂は下記１）〜３）から選ばれ：
   １） Ｈ；
   ２） Ｃ₁〜Ｃ₃アルキル；
   ３） Ｃ₃〜Ｃ₆シクロアルキル；
   ここで、上記アルキルは各々、以下のＲ₄から独立に選ばれる、０、１、又は２以上の置換基によって置換することが可能であり、
   Ｒ₄は、下記１）〜２）からなる群から選ばれる：
   １） Ｈ；及び、
   ２） Ｃ₃〜Ｃ₆ヘテロ環。
2. 下記からなる群より選ばれる、化合物、又は、薬学的に受容可能なその塩、若しくはその立体異性体：
   下記式（ア）の、８−エチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ア）；
   下記式（イ）の、８−メトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （イ）；
   下記式（ウ）の、８−イソプロポキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ウ）；
   下記式（エ）の、８−ヒドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （エ）；
   下記式（オ）の、８−エトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （オ）；
   下記式（カ）の、８−（アリルオキシ）−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （カ）；
   下記式（キ）の、２−フェニル−８−プロポキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （キ）；
   下記式（ク）の、８−メトキシ−２−ｐ−トリル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ク）；
   下記式（ケ）の、８−ヒドロキシ−２−ｐ−トリル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ケ）；
   下記式（コ）の、８−エトキシ−２−ｐ−トリル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （コ）；
   下記式（サ）の、２−（４−クロロフェニル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （サ）；
   下記式（シ）の、２−（４−クロロフェニル）−８−ヒドロキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （シ）；
   下記式（ス）の、２−（３−クロロフェニル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ス）；
   下記式（セ）の、２−（４−クロロフェニル）−８−エトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （セ）；
   下記式（ソ）の、２−（２−クロロフェニル）−８−メトキシ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ソ）；
   下記式（タ）の、８−（３−モルフォリノプロポキシ）−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （タ）；
   下記式（チ）の、８−クロロ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （チ）；
   下記式（ツ）の、８−ヒドロキシ−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ツ）；
   下記式（テ）の、８−エトキシ−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （テ）；
   下記式（ト）の、８−エチル−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ト）；
   下記式（ナ）の、３−エチル−８−メトキシ−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ナ）；
   および、
   下記式（ニ）の、８−メトキシ−３−メチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
   

   

   （ニ）。
3. 請求項１若しくは２に記載の化合物、又は、薬学的に受容可能なその塩、若しくはその立体異性体と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、製剤組成物（ただし、代謝性疾患治療薬を除く）。
4. 下記式（ア）の、８−エチル−２−フェニル−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は、薬学的に受容可能なその塩、若しくはその立体異性体：
   

   

   （ア）。
5. 請求項４に記載の化合物、又は、薬学的に受容可能なその塩、若しくはその立体異性体と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、製剤組成物（ただし、代謝性疾患治療薬を除く）。
   

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