JP5936067B2 - 抗p2x7受容体抗体およびその断片 - Google Patents
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Description
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、DNEPMG、RNHDMG、SGYAMA、GMYNMS、PASNMS、GSYAMA、GAYAMS、DGYNMS、TYDMAW、QEYGMG、ARYPMA、SSYAMA、AKYPMV、SSYAMS、DNVEMS、およびPMKDMGから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR2は、SIADSGNHTYYADSVKG、AISGSGGSTYYADSVKG、TILSDGSRTYYADSVKG、SINATGGRTYYADSVKG、SITASGYRTYYADSVKG、TISTSGSSTYYADSVKG、TINGSGLATYYADSVKG、SITANGNSTYYADSVKG、SIAAAGSRTYYADSVKG、SITPSGDKTYYADSVKG、SIDGGGLQTYYADSVKG、TIDGNGLITYYADSVKG、SIGPGGARTYYADSVKG、TITSDGLRTYYADSVKG、SIGSKGEDTYYADSVKG、AISGSGGSTYYANSVKG、AISGSGGGTYYADSVKG、SIGTKGEYTYYADSVKG、SIGSKGEYTYYADSVKG、およびAISGSGGGTYYANSVKGから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR3は、KQRGLNRYRAQFDY、EPKPMDTEFDY、KIKTFRNHSVQFDY、KFNGFSHRQYNFDY、KQGQISNFPRFDY、KVRFATSKSINFDY、KCSSCTSLNANFDY、KASYSRPYNFQFDY、KQRSISIRPMFDY、KVRSMSYAHFDFDY、KASAPKYFRFDY、KLQRYDRYTLNFDY、KPWRVYSYDRFDY、KVHTFANRSLNFDY、QTVNVPEPAFAY、およびEPSHFDRPFDYから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、(P/R)(N/M)(H/K)DMGから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR2は、AISGSGG(S/G)TYYA(D/N)SVKGから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR3は、EP(K/S)(P/H)(M/F)D(T/R)(E/P)FDYから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR3は、配列:EP(K/S)(P/H)(M/F)D(T/R)(E/P)FDYを有し、
FR4は、配列:(W/R/P/G/C)(G/S/F)(Q/P/C)GT(L/Q)VTV(S/L)(S/E)を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、配列:(P/R)(N/M)(H/K)DMGを有し、
CDR2は、配列:AISGSGG(S/G)TYYA(D/N)SVKGを有し、
CDR3は、配列:EP(K/S)(P/H)(M/F)D(T/R)(E/P)FDYを有し、
FR4は、配列:(W/R/P/G/C)(G/S/F)(Q/P/C)GT(L/Q)VTV(S/L)(S/E)を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、配列:(P/R)(N/M)(H/K)DMGを有し、
CDR2は、配列:AISGSGG(S/G)TYYA(D/N)SVKGを有し、
CDR3は、配列:EP(K/S)(P/H)(M/F)D(T/R)(E/P)FDYを有し、
FR1は、配列:EVQLLE(S/P)GGGLVQPGGSLRLSCAASG(Y/F/V)(R/T/N)(I/F/V)を有し、
FR2は、配列:W(V/A)RQAPGKGLEW(V/A)Sを有し、
FR3は、配列:RFTISRDNS(R/K)NTLYLQMNS(L/M)RAEDTAVYYCAを有し、
FR4は、配列:(W/R/P/G/C)(G/S/F)(Q/P/C)GT(L/Q)VTV(S/L)(S/E)を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、配列:PMKDMGを有し、
CDR2は、配列:AISGSGGGTYYADSVKGを有し、
CDR3は、配列:EPKPMDTEFDYを有し、
FR1は、配列:EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFを有し、
FR2は、配列:WVRQAPGKGLEWVSを有し、
FR3は、配列:RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAを有し、
FR4は、配列:PSPGTLVTVLE、WGQGTLVTVSS、WGQGTLVTVLS、RSPGTLVTVSS、PSPGTQVTVSS、PSPGTLVTVSS、RSQGTLVTVSS、WSQGTLVTVSS、RGQGTLVTVSS、RFQGTLVTVSS、WSPGTLVTVSS、GSPGTLVTVSS、WGPGTLVTVSS、RGPGTLVTVSS、CGPGTLVTVSS、RSCGTLVTVSS、またはRSPGTLVTVLEを有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、(R/P/D)(N/M)(H/K/V)(D/E)M(G/S)から成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR2は、(A/S)I(S/G)(G/S/T)(S/K)G(G/E)(S/G/D/Y)TYYA(D/N)SVKGから成る群から選択される配列を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR3は、(E/Q)(P/T)(K/S/V)(P/H/N)(M/F/V)(D/P)(T/R/E)(E/P)(A1)F(A/D)Yから成る群から選択される配列を有し、
A1は、(E/P)およびFの間にアミノ酸がないことまたはアラニンを指す。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR3は、配列:(E/Q)(P/T)(K/S/V)(P/H/N)(M/F/V)(D/P)(T/R/E)(E/P)(A1)F(A/D)Yを有し、
FR4は、配列:(W/R/P/G/C)(G/S/F)(Q/C/P)GT(L/Q)VTV(S/L)(S/E)を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、配列:(R/P/D)(N/M)(H/K/V)(D/E)M(G/S)を有し、
CDR2は、配列:(A/S)I(S/G)(G/S/T)(S/K)G(G/E)(S/G/D/Y)TYYA(D/N)SVKGを有し、
CDR3は、配列:(E/Q)(P/T)(K/S/V)(P/H/N)(M/F/V)(D/P)(T/R/E)(E/P)(A1)F(A/D)Yを有し、
A1は、(E/P)およびFの間にアミノ酸がないことまたはアラニンを指し、
FR4は、配列:(W/R/P/G/C)(G/S/F)(Q/C/P)GT(L/Q)VTV(S/L)(S/E)を有する。
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、配列:(R/P/D)(N/M)(H/K/V)(D/E)M(G/S)を有し、
CDR2は、配列:(A/S)I(S/G)(G/S/T)(S/K)G(G/E)(S/G/D/Y)TYYA(D/N)SVKGを有し、
CDR3は、配列:(E/Q)(P/T)(K/S/V)(P/H/N)(M/F/V)(D/P)(T/R/E)(E/P)(A1)F(A/D)Yを有し、
A1は、(E/P)およびFの間にアミノ酸がないことまたはアラニンを指し、
FR1は、配列:EVQLLE(S/P)GGGLVQPGGSLRLSCAASG(Y/F/V)(R/T/N)(I/F/V)を有し、
FR2は、配列:WVRQAPGKGLEWVSを有し、
FR3は、配列:RFTISRDNSKNTLYLQMNS(L/M)RAEDTAVYYCAを有し、
FR4は、配列:(W/R/P/G/C)(G/S/F)(Q/C/P)GT(L/Q)VTV(S/L)(S/E)を有する。
-1つまたは複数の抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、Fab、dab、scFv、二重特異性抗体、三重特異性抗体、融合タンパク質、コンジュゲート、または医薬組成物の形態で治療用組成物を保持する容器、
-使用のための指示を有する標識または添付文書を含む。
-1つまたは複数の抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、Fab、dab、scFv、二重特異性抗体、三重特異性抗体、融合タンパク質、またはコンジュゲートの形態で診断用組成物を保持する容器、
-使用のための指示を有する標識または添付文書を含む。
(実施例1)
生細胞上の非機能的受容体への結合についてのdABリードの同定
目的:ここで記載する実験は、E200ペプチドに結合する抗原結合部位を見つけることであった。
最初に、Biacoreによって測定されるようにuM KDの範囲の結合親和性でE200ペプチドに結合し、その後、それらの表面上に非機能的P2X7受容体標的を発現する生癌細胞にフローサイトメトリーによって検出可能に結合した多くの第1世代のリードを同定し、単離した。ペプチド抗原E200に対してスクリーニングしたDomantisファージディスプレイライブラリーから生成された単一ドメイン抗体は、Biacore結合分析を使用して、約1uMのKDを示した。前に得られたリードクローンは、それらの結合特性において多様性を示した。フローサイトメトリーによって生PC3ヒト前立腺癌細胞上で試験した場合、3つのリードdAb、PEP2-2、PEP2-4、およびPEP2-5が、最も高い親和性を示した。さらなるスクリーニングは、HRPを有する標識抗Myc抗体を追加するMycタグを用いて標識した、選んだdAbと共に、正常ヒト組織およびヒト癌組織をインキュベートする標準的な免疫組織化学的検査の使用を伴った。ジアミノベンゾアート(DAB)を追加し、十分な洗浄工程を終えた後に残るあらゆるHRPと反応させた。PEP2-4およびPEP2-5は、ヒト前立腺および皮膚などのような正常組織ではなく腫瘍組織に中程度に結合したが、PEP2-2は、最初のスクリーニングにおいて組織に対してわずかに有効な結合しか示さなかったdAbリードの例となった。
dAb-FcフォーマットにおけるdAbリードの活性の決定
目的:ここで記載する実験は、dAb-Fcとしてリードdabをフォーマットすることを通してE200ペプチドに結合する抗原結合部位の親和性を改善することであった。
dAbリードをスクリーニングするためのコンホメーションエピトープの決定
目的:ここで記載する実験は、E200ペプチドに結合し、またコンホメーションエピトープにも結合するdAbを見つけるために、適切なコンホメーションエピトープを決定することであった。
リードdAbの親和性成熟のためのさらなる構築物の決定
目的:親和性成熟研究において使用することができる構築物の生成。
様々な高親和性結合剤の生成
目的:非機能的P2X7受容体に対して高い親和性を有する抗原結合部位の生成。
VHD EVQLLEPGGGLVQPGGSLRLSCAASGVNVSHDSMTWVRQAPGKGLEWVSAIRGPNGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASGARHADTERPPSQQTMPFWGQGTLVTVSS
を有する。
抗体の親和性成熟の系図を図21中に示す。Biacoreによって改善された結合の例を、図22中にクローンPEP2-2-3Fcの形態で示す。チャネルを10RU E200ペプチドを用いてコートし、その後、図に関して昇順で100pm、250pm、500pm、および1nM PEP2-2-3をロードした。曲線のあてはめにより、130pMのKDを明らかにする。E200に対する非フォーマットdAb PEP2-2-3についての対応する値は、7nMであり、1uMから300pMまで増加したPEP2-2などのような親dabからの増加と比較して、dAb-Fcとしてフォーマットされた場合に高親和性dabについての結合のより中程度の増加を示す。
今後の実験
目的:抗原への直接的な結合に関与する残基およびCDRがより有効にパッキングされるのを可能にする残基のさらなる標的NNSスクリーニングを通してリードdabの親和性をさらに増強すること。Fcを修飾することによって抗原結合部位の安定性および溶解度を改善すること。細胞死滅の効率を改善すること。
Claims (6)
- 一般式:
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4によって定義され、
FR1、FR2、FR3、およびFR4は、それぞれ、フレームワーク領域であり、
CDR1、CDR2、およびCDR3は、それぞれ、相補性決定領域であり、
CDR1は、配列: RNHDMG(配列番号7)を有し、
CDR2は、配列: AISGSGGSTYYANSVKG(配列番号53)を有し、
CDR3は、配列:EPKPMDTEFDY(配列番号9)を有する、
P2X 7 受容体に結合するための単一ドメイン抗体。 - 式中、
FR1は、配列:EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTF(配列番号203)を有し、
FR2は、配列:WVRQAPGKGLEWVS(配列番号145)を有し、
FR3は、配列:RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA(配列番号148)を有し、
FR4は、RSPGTLVTVSS(配列番号155)、PSPGTQVTVSS(配列番号156)、またはPSPGTLVTVSS(配列番号157)を有する、請求項1に記載のP2X 7 受容体に結合するための単一ドメイン抗体。 - 式中、FR4は、配列: RSPGTLVTVSS(配列番号155)を有する、請求項2に記載のP2X 7 受容体に結合するための単一ドメイン抗体。
- 請求項1から3のいずれか一項に記載の単一ドメイン抗体を含む、免疫グロブリン可変ドメイン、Fab、二重特異性抗体、三重特異性抗体、scFv、融合タンパク質、またはコンジュゲート。
- 請求項1から3のいずれか一項に記載の単一ドメイン抗体、あるいは、請求項4に記載の免疫グロブリン可変ドメイン、Fab、二重特異性抗体、三重特異性抗体、scFv、融合タンパク質、またはコンジュゲートをコードする核酸。
- 非機能的P2X 7 受容体の発現と関連する癌または状態もしくは疾患の治療のための医薬の製造における、請求項1から3のいずれか一項に記載の単一ドメイン抗体、あるいは、請求項4に記載の免疫グロブリン可変ドメイン、Fab、二重特異性抗体、三重特異性抗体、scFv、融合タンパク質、またはコンジュゲートの使用。
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